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白茅根中两种主要酚酸类成分的含量比较



全 文 :72 • 实验研究 • January 2012, Vol.10, No.2 Guide of China Medicine
白茅根中两种主要酚酸类成分的含量比较
熊科元 陈石生 刘荣华* 任 刚 邵 峰 黄慧莲
(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西 南昌 330004)
【摘要】目的 比较不同产地白茅根中 2 种主要酚酸类成分(香草酸、对羟基肉桂酸)的含量。方法 采用 Agilent 1260 系列高效液相色谱
仪,Kromasil 100-5 C18 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相为乙腈 -1% 甲酸溶液(15 ∶ 85),等度洗脱;流速 1mL/min;检测波长
281nm;柱温 30℃。结果 香草酸和对羟基肉桂酸均得到很好的分离,其线性范围分别为:0.1271~16.2750μg/mL,0.04736~3.03135μg/mL,
方法的回收率在 97.82%~100.12%,RSD 均小于 3.0%。香草酸的平均含量为 54.85μg/g,含量最高的产地是湖北武汉(127.10μg/g),其次为
福建邵武(76.72μg/g),四川安岳含量最低(8.23 μg/g);对羟基肉桂酸的平均含量为 28.86μg/g,含量最高的产地是河北石家庄(55.87μg/g),
其次为河南郑州(45.94μg/g),江西湾里含量最低(10.24 μg/g)。结论 不同产地的白茅根中这 2 种酚酸类成分含量存在明显差异。该方法简
便快速,分离效果好,灵敏度高,重现性好,可为白茅根质量控制提供参考。
【关键词】白茅根;香草酸;对羟基肉桂酸;含量测定
中图分类号:R282.710.5 文献标识码:A 文章编号:1671-8194(2012)02-0072-02
白茅根为禾本科植物白茅Imperata cylindrica Beauv.var.major
(Nees)C.E.Hubb.的干燥根茎,性寒,味甘,归肺、胃、膀胱经,具
有凉血止血、清热利尿之功效,用于血热吐血,尿血,热病烦渴,湿
热黄疸,水肿尿少,热淋涩痛等症[1]。临床上常将白茅根用于治疗肾
小球肾炎[2,3]。肾小球肾炎是一种常见的以肾小球损害为主的免疫反应
性炎症疾病。其发病机制与氧自由基[4]、免疫复合物沉积有关[5],在
肾炎发病过程中自由基增多[6],从而导致组织脂质过氧化,使肾组织
受损[7];当补体过度激活时,产生膜攻击复合物,激活致炎因子及纤
维化因子,从而使肾炎症状加重 [8]。药理研究表明,白茅根中主要
酚酸类成分香草酸与对羟基肉桂酸均有较强的抗氧化活性和抗补体
作用[9-11]。然而,迄今为止未见白茅根中这2种成分含量的报道。本文
通过对11个不同产地白茅根中香草酸和对羟基肉桂酸的同步测定,建
立了快速、稳定的HPLC方法,并对不同产地的白茅根进行了含量比
较,为白茅根的质量评价及合理开发利用提供了依据。
1 仪器与试药
Agilent1260系列高效液相色谱仪(G1314B紫外检测器);十万分
之一电子分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)。
香草酸和对羟基肉桂酸对照品自制,经HPLC面积归一法检测
纯度均大于98%;乙腈(色谱纯,Tedia,USA),水为双蒸水(自
制),其余试剂均为分析纯。
11批白茅根药材分别采自河南、福建、河北、湖北、广东、江
西、安徽、四川八个省份,并经本文通讯作者刘荣华教授鉴定确认为
白茅Imperata cylindrica Beauv. Var. major(Nees) C. E. Hubb.的根茎,
凭证标本存于江西中医学标本馆。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
Kromasil 100-5 C18色谱柱(250mm × 4.6mm,5μm);流动相
为乙腈-1%甲酸溶液(15∶85);检测波长281nm;柱温30℃;流速
1.0mL/min;进样量20μL。对照品与样品色谱图见图1。
2.2 对照品溶液的配制
精密称定香草酸12.62mg、对羟基肉桂酸4.85mg,置于50mL棕色
容量瓶中,加甲醇溶解并定容,得香草酸浓度为252.4μg/mL、对羟
基肉桂酸浓度为97.0μg/mL的混合对照品溶液。
2.3 供试品溶液的配制
白茅根药材60℃恒温干燥,粉碎成粉末,过60目筛。精密称取白
茅根粉末1.0g,置100mL具塞锥形瓶中,加入甲醇溶液50mL,超声提
取30min,放冷,加入甲醇溶液补足质量,经0.45 μm微孔滤膜滤过,
得供试品溶液。
2.4 标准曲线绘制
分别精密吸取2.2项下配制的混合对照品溶液1μL、2μL、4μL、
8μL、16μL、32μL、64 μL置2mL量瓶中,用甲醇定容至2mL。按2.1
项下色谱条件进样测定,以色谱峰面积(Y)为纵坐标,浓度(X)为
横坐标,进行线性回归,得香草酸和对羟基肉桂酸的回归方程分别为
Y=30.075X+19.751,r=0.9997;Y=167.23X+2.7402,r=0.9998,线性范围
为0.1271~16.2750μg/mL、0.04736~3.0313μg/mL。
2.5 精密度试验
取同一混合对照品溶液,重复进样6次,计算香草酸和对羟基肉桂
酸峰面积的RSD(n=6)分别为1.2%和1.6%,表明本法精密度良好。
2.6 重现性试验
称取同一批样品6份,按照2.3项下方法制备供试品溶液,按2.1项
下方法进行测定,香草酸和对羟基肉桂酸峰面积的RSD分别为2.1%和
2.4%,表明方法重现性良好。
2.7 稳定性试验
取同一批样品溶液,分别在0、2、4、8、16、24h按2.1项下方法
进行测定,香草酸和对羟基肉桂酸峰面积的RSD分别为3.3%和5.4%。
结果表明,供试品溶液在24 h内基本稳定。
2.8 加样回收试验
精密称取1.0 g已知含量的白茅根粉末9份,分别加入适量混合对
照品溶液,按2.3项下方法操作,配制成低、中、高三水平的供试品溶
液,按2.1项下方法进行测定。计算得香草酸的平均回收率为99.39%;
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.30860363)
*通讯作者:E-mail:rhliu@163.com
图1 白茅根的HPLC图
A.对照品,B.样品;1.香草酸,2.对羟基肉桂酸
A B
DOI:10.15912/j.cnki.gocm.2012.02.028
• 实验研究 • 732012 年 1 月第 10 卷 第 2 期 中 国 医 药 指 南
对羟基肉桂酸的平均回收率为98.70%。结果见表1。
表1 香草酸和对羟基肉桂酸的回收率(n=3)
成分
样品量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均回收
率(%)
香草酸 46.13 36.90 82.88 99.58
46.13 47.20 93.39 100.12 99.39
46.13 55.40 100.68 98.47
对羟基肉桂酸 55.87 44.70 99.60 97.82
55.87 55.80 111.39 99.51 98.70
55.87 67.10 122.14 98.77
2.9 样品含量测定
按2.3项下方法分别制备11个不同产地白茅根供试品溶液各三份。
按以上色谱条件进行测定,采用外标法计算香草酸和对羟基肉桂酸的
含量,结果见表2。
表2 不同产地白茅根中香草酸和对羟基肉桂酸的含量测定结果
(μg/g,n=3)
样品产地 香草酸 对羟基肉桂酸
河南郑州 35.99 45.94
福建邵武 76.72 40.50
河北石家庄 46.13 55.87
湖北武汉 127.10 19.99
广东广州 57.60 19.12
江西湾里 66.08 10.24
江西宁都 35.16 15.27
安徽砀山 26.18 40.89
四川安岳 8.23 18.50
江西九江 83.54 26.39
江西崇仁 40.65 24.80
平均含量 54.85 28.86
3 讨 论
比较了乙腈-甲酸水、乙腈-醋酸水溶液系统和乙腈-磷酸水溶液系
统,结果表明乙腈-1%甲酸水为流动相洗脱时,所测成分色谱峰分离度
较好,且分析时间最短。采用VWD检测器考察了不同波长下香草酸及
对羟基肉桂酸的峰形及峰面积,结果表明,波长为281 nm时,香草酸及
对羟基肉桂酸的紫外吸收较强,因此,选择281 nm作为检测波长。
对11个产地的白茅根进行香草酸及对羟基肉桂酸的含量测定,香
草酸的平均含量为54.85μg/g,其中含量最高的药材产地是湖北武汉
(127.10μg/g),最低的药材产地是四川安岳(8.23μg/g);对羟基
肉桂酸的平均含量为28.86μg/g,含量最高的药材产地是河北石家庄
(55.87μg/g),含量最低的产地是江西湾里(10.24μg/g)。各地区
白茅根中香草酸及对羟基肉桂酸的含量差异均较大,地理分布及各地
气候条件等因素可能是造成含量差异的主要原因。该方法简便快速,
分离效果好,灵敏度高,重现性好,可为白茅根质量控制提供参考。
参考文献
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林蛙油对X线辐射损伤大鼠外周血及丙二醛含量的影响
张 建1 吕士杰2 杨 帆2 孙鹏飞2 徐俊杰2 沈 楠2 曲保忠2*
(1 93062部队卫生队,吉林 吉林 132102;2 吉林医药学院,吉林 吉林 132013)
【摘要】目的 探讨长白山林蛙油对 X 射线照射大鼠外周血及丙二醛(MDA)含量的影响。方法 复制 X 射线辐射大鼠模型,用林蛙油复
方冲剂进行干预,观察各组大鼠外周血及丙二醛含量的变化。结果 照射后大鼠的白细胞、红细胞数的减少均较空白对照组明显降低(P
< 0.05);林蛙油组与单纯照射组比较外周血计数均明显升高(P < 0.05);与空白对照组、单纯照射组比较大鼠血清 MDA 含量无显著差异(P
> 0.05)。结论 林蛙油对 X 射线的损伤具有一定的保护作用。
【关键词】X 射线照射;林蛙油;外周血;丙二醛
中图分类号:R-33 文献标识码:B 文章编号:1671-8194(2012)02-0073-03
随着放射技术在临床诊疗、能源开发、工农业等领域中的广泛应
用,人们接触X射线的机会日益增多,X射线辐射对机体损伤的可能
性也随之增加。电离辐射可以引起机体多种组织和器官的损伤,甚至
诱发细胞突变、癌变、致死等严重后果。近年来研究表明林蛙油对电
基金项目:吉林省教育厅十一五科学技术研究重点资助项目
(吉教科合字[2010]第250号)
*通讯作者