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粘鱼须威灵仙棉团铁线莲对非特异性免疫的影响比较



全 文 :[2] 徐淑云,卞如濂,陈修. 药理实验方法学[M]. 3 版. 北
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[3] 叶应妩,王毓三,审子瑜,等. 全国临床检验操作规程
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粘鱼须威灵仙棉团铁线莲对非特异性免疫的影响比较*
石强
(德州学院药品研究开发中心,山东德州 253023)
[摘 要] 目的 比较粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对非特异性免疫的影响,为粘鱼须能否作为威灵仙入药提供科
学依据。方法 选择小鼠碳粒廓清法和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞法进行比较 3 种药物。结果 粘鱼须、威灵仙、棉团
铁线莲均能抑制小鼠单核巨噬细胞和腹腔巨噬细胞的吞噬作用,降低机体非特异性免疫反应能力。结论 粘鱼须可以
作为祛风湿药威灵仙使用。
[关键词] 粘鱼须;威灵仙;棉团铁线莲;免疫,非特异性;吞噬作用
[中图分类号] R285. 5;R965 [文献标识码] A [文章编号] 1004 - 0781(2011)07 - 0872 - 03
Comparative Study Between Effects of Smilax sieboldii Miq.,Clematis chinensis Osbeck.
and C. hexapetala Pall. on Non-specific Immunity
SHI Qiang(Drug Research and Development Center of Dezhou University ,Shandong Province,Dezhou 253023,
China)
ABSTRACT Objective To compare the effects of Smilax sieboldii Miq.,Clematis chinensis Osbeck. and C. hexapetala
Pall. on non-specific immunity,and further determine the feasibility of Smilax sieboldii Miq. to be used as drug. Methods
The carbon granules clearance test in mice and chicken red blood cell phagocytosis test were carried out to compare the effects.
Results All of Smilax sieboldii Miq.,Clematis chinensis Osbeck. and C. hexapetala Pall. inhibited the phagocytic function
of monocyte-macrophage and abdominal cavity macrophage in mice,and reduced non-specific immune function. Conclusion
Smilax sieboldii Miq. can be used equivalently as Clematis chinensis Osbeck. for the treatment of rheumatism.
KEY WORDS Smilax sieboldii Miq.;Clematis chinensis Osbeck.;C. hexapetala Pall. ;Immunity,non-specific;
Phagocytosis
威灵仙是中医临床常用祛风湿药物,用于治疗风
寒湿痹、关节不利、四肢麻木,并有治疗骨鲠病症之功
效[1]。威灵仙在全国应用的品种很多,据调查有四科
十多种[2]。《中华人民共和国药典》(2005 年版)收载
威灵仙系毛茛科铁线莲属植物威灵仙(Clematis
chinensis Osbeck.)、棉团铁线莲(C. hexapetala Pall.)、
东北铁线莲(C. manshurica Rupr.)的干燥根及根茎。
而我国北方诸省长期以百合科植物粘鱼须(又名华东
菝葜 Smilax sieboldii Miq.)的干燥根及根茎作为威灵
仙使用[3]。毛茛科铁线莲属植物和粘鱼须作为威灵
仙入药均有本草依据[4],但科属不同,药理作用是否
[收稿日期] 2010 -11 -22 [修回日期] 2010 -12 -29
[基金项目] * 山东省卫生科技发展计划课题 (基金编
号:1990032)
[作者简介] 石强 (1957 -) ,男,山东禹城人,副教授,学
士,研究方向:祛风湿中药药理,清热解毒中药药理,中药新药
研制,缓释、控释制剂研制。电话:0534 - 2643252,E-mail:
shiqiangdzxy@ 126. com。
一致,笔者未见报道。笔者研究证实,粘鱼须、威灵仙、
棉团铁线莲三药具有相似的镇痛、抗炎、抑制 T 细胞
功能,抑制小鼠细胞免疫的作用,对体液免疫无明显影
响[5]。根据现代医学的观点,风湿病属于变态反应性
疾病,祛风湿与影响机体的免疫功能有关。因此,笔者
从影响非特异性免疫功能方面再对粘鱼须、威灵仙、棉
团铁线莲进行比较,为粘鱼须能否作为威灵仙入药提
供科学依据。
1 材料与方法
1. 1 药材的来源与鉴定 粘鱼须(Smilax sieboldii
Miq.)采自青岛市崂山,威灵仙(Clematis chinensis
Osbeck.)采自江苏省江浦县,棉团铁线莲 (C.
hexapetala Pall.)购自德州市药材站。以上药材经山
东省德州市药品检验所鉴定为正品,阴干备用。
1. 2 药材水煎液的制备 称取粘鱼须、威灵仙、棉团
铁线莲干燥粉末各 100 g,用水煎醇沉法制得提取液,
浓缩至 100 mL 得质量分数为 100%水煎液备用。取
·278· Herald of Medicine Vol. 30 No. 7 July 2011
100%粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲水煎液各 50 mL,分
别加入纯化水 50 mL,混匀得质量分数为 50%水煎液
备用[6]。
1. 3 药品与仪器 氢化可的松注射液(秦皇岛制药
有限公司生产,批号:040615) ,地塞米松磷酸钠注射
液(山东瑞阳制药有限公司生产,批号:050203)。
Olympus双目显微镜(日本生产) ,752 型紫外分光光
度计(上海精密科学仪器有限公司生产)。印度墨汁、
鸡红细胞悬液(由济南市卫生防疫站提供)。
1. 4 实验动物 昆明种小鼠,普通级,健康,体质量
18 ~ 22 g,山东中医药大学实验动物中心提供。
1. 5 实验方法
1. 5. 1 小鼠碳粒廓清实验 参照文献[7]。取小鼠
80 只,雌雄兼用,随机分成 8 组,每组 10 只。其中 6
组灌胃给予受试药物,阳性对照组灌胃给予氢化可的
松溶液,空白对照组灌胃给予 0. 9%氯化钠溶液。剂
量见表 1,qd,连续 7 d (氢化可的松组连续 5 d)。末
次给 药 后 次 日,每 鼠 尾 静 脉 注 射 印 度 墨 汁
0. 05 mL·(10 g)-1。注射后 1 min(t1)和 5 min(t5) ,
用吸管分别从眼眶静脉丛取血 20 μL,溶于 0. 1%碳酸
钠溶液2 mL中摇匀,在 680 nm 波长下比色,测定吸光
度(A值) ,分别用 A1和 A5表示 1 和 5 min 所取血样的
A值,计算 K 值。K = lg(A1 /A5)/ (t5 - t1) ,然后把小
鼠脱臼致死,取肝和脾脏分别称质量,求 α 值。α =体
质量 /(肝质量 +脾质量)× K。
1. 5. 2 对腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验 参照文
献[7]。取小鼠 80只,雌雄兼用,随机分成8组,每组 10
只。其中 6组灌胃给予受试药物,阳性对照组灌胃给予
地塞米松,空白对照组灌胃给予 0. 9%氯化钠溶液。剂
量见表2,qd,连续7 d (地塞米松组连续5 d)。给药第3
天,每只鼠腹腔注射 0. 5%淀粉 0. 9%氯化钠溶液(腹腔
巨噬细胞诱导剂)0. 5 mL。末次给药的当日每鼠腹腔注
射 2%鸡红细胞悬液1 mL,处死小鼠,经腹膜注入0. 9%
氯化钠溶液 2 mL,转动鼠板1 min,吸出腹腔洗液 1 mL,
滴于载玻片上,37 ℃温孵30 min,用0. 9%氯化钠溶液冲
去未贴壁细胞,甲醇固定,姬-瑞氏混合液染色。镜下计
数 100个巨噬细胞,按下式计算吞噬百分率和吞噬指
数。吞噬百分率(%)=吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数 /
100个巨噬细胞 × 100%。吞噬指数 =被吞噬的鸡红细
胞总数 / 100个巨噬细胞。
1. 6 统计学方法 采用 SPSS13. 0 软件统计,数据以
均数 ±标准差(x ± s)表示,组间比较用单因素方差分
析,以 P < 0. 05 为差异有统计学意义。
2 结果
2. 1 小鼠碳粒廓清的影响 结果见表 1。由表 1 可
知,粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲大剂量组的 K 值和 α
值均低于空白对照组,均差异有统计学意义(P < 0. 05
或P < 0. 01) ;3 种药物的小剂量组与空白对照组比较,
差异无统计学意义,但也呈现出降低 K 值和 α值的趋
势,提示 3 种药物有相似的降低 K 值和 α 值的作用。
3 种药物相应剂量组间比较差异无统计学意义(P >
0. 05)。
2. 2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的实验 结
果见表 2。由表 2 可知,粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲 2
个剂量组的吞噬百分率和吞噬指数均低于空白对照
组,均差异有统计学意义(均 P < 0. 01) ,提示三种药有
相似的降低吞噬百分率和吞噬指数的作用。三种药相
应剂量组间比较差异无统计学意义(P > 0. 05)。
表 1 粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对小鼠单核巨噬细胞吞噬能力的影响
Tab. 1 The effects of Smilax sieboldii Miq.,Clematis chinensis Osbeck. and C. hexapetela Pall on mononuclear macrophage
phagocytosis of mice x ± s
组别 药物 剂量 /(g·kg -1) 小鼠 /只 K值 α值
粘鱼须
小剂量组 50%粘鱼须水煎液 10 10 0. 068 ± 0. 020 6. 703 ± 0. 912
大剂量组 100%粘鱼须水煎液 20 10 0. 060 ± 0. 011* 1 6. 621 ± 0. 705* 1
威灵仙
小剂量组 50%威灵仙水煎液 10 10 0. 062 ± 0. 026 7. 426 ± 0. 716
大剂量组 100%威灵仙水煎液 20 10 0. 047 ± 0. 013* 2 6. 422 ± 0. 461* 2
棉团铁线莲
小剂量组 50%棉团铁线莲水煎液 10 10 0. 069 ± 0. 030 6. 997 ± 0. 522
大剂量组 100%棉团铁线莲水煎液 20 10 0. 059 ± 0. 013* 1 6. 695 ± 0. 539* 1
阳性对照组 氢化可的松 0. 066 10 0. 031 ± 0. 006* 2 5. 591 ± 0. 834* 2
空白对照组 0. 9%氯化钠溶液 … 10 0. 075 ± 0. 018 7. 434 ± 0. 812
与空白对照组比较,* 1 P < 0. 05,* 2 P < 0. 01
Compared with the blank control group,* 1 P < 0. 05,* 2 P < 0. 01
·378·医药导报 2011 年 7 月第 30 卷第 7 期
表 2 粘鱼须、威灵仙、棉团铁线莲对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力的影响
Tab. 2 The effects of Smilax sieboldii Miq.,Clematis chinensis Osbeck. and C. hexapetela Pall on peritoneal macrophage
phagocytosis of mice x ± s
组别 药物 剂量 /(g·kg -1) 小鼠 /只 吞噬百分率 /% 吞噬指数
粘鱼须
小剂量组 50%粘鱼须水煎液 10 10 18. 2 ± 8. 3* 1 0. 29 ± 0. 14* 1
大剂量组 100%粘鱼须水煎液 20 10 15. 4 ± 6. 8* 1 0. 26 ± 0. 16* 1
威灵仙
小剂量组 50%威灵仙水煎液 10 10 15. 7 ± 4. 2* 1 0. 30 ± 0. 14* 1
大剂量组 100%威灵仙水煎液 20 10 14. 5 ± 2. 5* 1 0. 25 ± 0. 09* 1
棉团铁线莲
小剂量组 50%棉团铁线莲水煎液 10 10 22. 1 ± 8. 6* 1 0. 33 ± 0. 13* 1
大剂量组 100%棉团铁线莲水煎液 20 10 15. 1 ± 3. 2* 1 0. 25 ± 0. 13* 1
阳性对照组 地塞米松 0. 040 10 11. 4 ± 3. 3* 1 0. 11 ± 0. 03* 1
空白对照组 0. 9%氯化钠溶液 … 10 32. 3 ± 6. 5 0. 47 ± 0. 07
与空白对照组比较* 1 P < 0. 01
Compared with the blank control group,* 1 P < 0. 01
3 讨论
巨噬细胞是机体免疫系统中对抗原最先产生反应
的细胞之一,在对抗原的摄取、处理、传递以及免疫的
启动和调节控制方面都起重要作用。
把定量的印度墨汁静脉注入小鼠血液循环后,迅速
被单核巨噬细胞所清除,主要被定居在肝和脾脏的巨噬
细胞所吞噬。在一定范围内,颗粒的清除速率与颗粒剂
量呈指数函数关系,即吞噬速度与血中颗粒浓度呈正
比,而与已吞噬的颗粒量成反比。如以不同时间测得的
血中颗粒浓度之对数值为纵坐标,时间为横坐标作图,
则两者呈直线关系。此直线斜率即为 K,因动物肝、脾重
量可影响 K值,故再可计算校正的 α值。通过 K值和 α
值即可反映出药物对单核巨噬细胞吞噬功能的影响。
根据本研究结果,笔者认为:粘鱼须、威灵仙、棉团
铁线莲都能降低碳粒 K 值和 α 值,降低腹腔巨噬细胞
对鸡红细胞的吞噬百分率和吞噬指数,并且三种药相
应剂量组间比较差异无统计学意义,提示三种药具有
相似的降低小鼠单核巨噬细胞和腹腔巨噬细胞吞噬能
力,抑制机体非特异性免疫的作用。
根据药效学研究结果,笔者认为:粘鱼须与威灵
仙、棉团铁线莲有相似的镇痛、抗炎、细胞免疫和非特
异性免疫抑制作用,故粘鱼须可以作为祛风湿药威灵
仙使用;至于粘鱼须免疫抑制作用的有效成分为何物,
以及粘鱼须与毛茛科铁线莲属植物威灵仙、棉团铁线
莲的药动学和临床疗效有何差异,则有待于进一步的
药理研究和临床观察。
[DOI] 10. 3870 /yydb. 2011. 07. 012
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·478· Herald of Medicine Vol. 30 No. 7 July 2011