全 文 ：性关系。
对上述标准系列中浓度为 8 μg/ml的溶液进行了 5次重复
测定 , 进样量为 10 μl/次 ,结果 RSD为 1.2%。
2.7　样品测定 准确称取不同品种甘草样品各 3份 , 按照 “ 2.3”
项下方法制备供试品溶液 ,并按上述色谱条件进行测定 , 计算样
品中甘草苷的含量。测定结果见表 1。
表 1　不同品种甘草中甘草苷的测定结果 %
甘草品种 甘草苷含量 RSD
胀果甘草 0.96 1.17
黄甘草 1.05 0.48
光果甘草 2.01 0.85
乌拉尔甘草 3.14 1.15
粗毛甘草 1.85 0.95
　　n=3
2.8　稳定性实验 取乌拉尔甘草试品溶液 , 在 12 h内每隔 2 h进
样 1次 ,以峰面积计算RSD为 1.27%,表明样品溶液在 12h内基
本稳定。
2.9　回收率实验 为了考察方法的可靠性 , 作了加标回收率实
验 , 准确称取 0.2g左右黄甘草样品 3份 , 分别添加不同量的甘
草苷对照品 , 按照 “ 2.3”项下方法制备加标样品溶液 , 按规定的
色谱条件进行测定 , 测定结果显示 , 方法的平均回收率为 98.4%,
RSD=0.82%。结果表明此测定方法具有较好的准确度。
3　讨论
甘草苷是甘草中主要活性成分 ,本文用反相高效液相色谱法
对新疆不同品种甘草中甘草苷的含量进行了测定 , 并对样品中
甘草苷的提取方法及色谱条件进行了研究。甘草苷含量的高低
可以判断甘草药材质量的优劣。上述研究结果表明 ,甘草中甘草
苷的含量与品种及其生长环境有较大关系 ,其中乌拉尔甘草中甘
草苷的含量最高 ,其次为光果甘草 , 胀果甘草中甘草苷的含量最
低。测定方法操作简便 、分析快捷 、结果重复性好。此实验结果
为进一步开发利用新疆丰富的甘草资源提供了有益的参考依据。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:59.
[ 2 ] 　刘勇民.维吾尔药志,上册 [ M] .乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社 ,
1999:167.
[ 3 ] 　付玉杰 ,祖元刚 ,赵春建 ,等.RP-HPLC法测定甘草中甘草苷和异
甘草苷的含量 [ J] .中草药 , 2004, 35(5):576.
[ 4 ] 　闫永红 ,王文全 ,杨　娜.HPLC测定栽培甘草中甘草苷的含量 [ J] .
中国中药杂志 , 2006, 31(11):926.
[ 5 ] 　伍蔚萍 ,阎宏涛 ,孙文基.HPLC法测定甘草中甘草苷的含量 [ J] .药
物分析杂志 , 2004, 24(4):425.
收稿日期:2008-10-30;　修订日期:2009-04-05
基金项目:贵阳中医学院博士基金;
国家中医药管理局西部重点学科建设
资助项目(No.200414)
作者简介:王祥培(1975-),男(侗族),贵州天柱人 ,现任贵阳中医学院副
教授 ,博士学位 ,主要从事中药及民族药品种、品质与药效研究工作.
威灵仙与柱果铁线莲体内外的高效液相色谱对比分析
王祥培 , 钱海兵 , 黄　婕 , 靳凤云 , 孙宜春 , 吴红梅
(贵阳中医学院 ,贵州 贵阳　550002)
摘要:目的 对常用中药材威灵仙及其地方品种柱果铁线莲体内外的高效液相色谱(HPLC)进行比较。 方法 采用 HPLC
法分别测定威灵仙 、柱果铁线莲 、威灵仙含药血浆 、柱果铁线莲含药血浆和空白血浆的指纹图谱 , 并分别进行威灵仙与柱
果铁线莲 、威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆指纹图谱共有峰的分析。结果 威灵仙与柱果铁线莲药材 HPLC指纹
图谱有 10个共有峰 ,威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含药血浆 HPLC指纹图谱有 5个共有峰。结论 对威灵仙和柱果铁线
莲体的体内外共有峰进行深入的比较分析 ,将有助于阐明具有相同功效的同属植物可能具有相同的药效物质基础。
关键词:威灵仙;　柱果铁线莲;　含药血浆;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)09-2224-02
ComparativeStudyonClematisChinesisandClematisuncinatabyHPLCinvitroandin
vivo
WANGXiang-pei, QIANHai-bing,HUANGJie,JINFeng-yun,SUNYi-chun,WUHong-mei
(GuiyangColegeofTraditionalChineseMedicine, Guiyang550002, China)
Abstract:ObjectiveTocompareClematischinesisofcommontraditionalChinesemedicineandClematisuncinataoflocalvarie-
tybyHPLCfingerprintinvitroandinvivo.MethodsThefingerprintsofClematischinesis, Clematisuncinata, medicatedplasma
ofClematischinesis, medicatedplasmaofClematisuncinataandplasmaofblankweredeterminedbyHPLC.Thecommonpeaks
betweenClematischinesisandClematisuncinata, medicatedplasmaofClematischinesis, medicatedplasmaofClematisuncinata
wereanalyzed.ResultsTherewere10 commonpeaksinChromatographicfingerprintofClematischinesisandClematisuncinata,
therewere5 commonpeaksinChromatographicfingerprintofmedicatedplasmaofClematischinesisandmedicatedplasmaof
Clematisuncinata.ConclusionFurtherstudiesoncommonpeaksofClematischinesisandClematisuncinataishelpfultoelucidate
thesamegenericplantswhichmighthavethesameeffectivesubstance.
Keywords:Clematischinesis;　Clematisuncinata;　Medicatedplasma;　HPLC
　　威灵仙为毛茛科铁线莲属植物威灵仙 ClematischinensisOs-
beck、棉团铁线莲 ClematishexapetalaPal.及东北铁线莲 Clematis
manshuricaPupr.的干燥根及根茎 [ 1] 。具有祛风除湿 、通络止痛
的功效 , 为古今中医临床常用的祛风湿止痛药 , 市场需求量大。
经笔者调查 , 在贵州地区作为商品威灵仙药材的品种繁多 , 其中
柱果铁线莲 ClematisuncinataChamp.的干燥根及根茎在贵州为
·2224·
时珍国医国药 2009年第 20卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.9
商品威灵仙药材的主流品种。同时 , 柱果铁线莲也作为商品威灵
仙药材销往南方各省 [ 2] 。柱果铁线莲与威灵仙同属于毛茛科铁
线莲属植物 , 并且功效相同。但相同的功效 , 是否具有相同的药
效物质基础 , 有待商榷。
中药化学成分复杂 ,但只有进入血液的成分才有可能成为有
效成分 [ 3] 。因此本实验采用 HPLC法分别测定威灵仙 、柱果铁线
莲 、威灵仙含药血浆 、柱果铁线莲含药血浆和空白血浆的指纹图
谱 , 并分别对威灵仙与柱果铁线莲 、威灵仙含药血浆与柱果铁线
莲含药血浆指纹图谱共有峰进行分析 ,为进一步研究具有相同功
效的威灵仙和柱果铁线莲是否具有相同的药效物质奠定基础。
1　仪器与材料
1.1　仪器 Agilent1100型高效液相色谱仪(自动进样品), 二极
管阵列检测器(DAD);AB104-N型电子天平(德国 Metler-To-
ledoGroup公司);80 -2B离心机(湖南星科科学仪器有限公
司);WH-2微型漩涡混合仪(上海泸西分析仪器厂)。
1.2　试药 威灵仙 ClematischinesisOsbeck.产于四川峨眉山 , 柱
果铁线莲 ClematisuncinataChamp.产于贵州贵阳 , 均由贵阳中医
学院王祥培副教授鉴定。乙腈为色谱纯 ,其余试剂均为分析纯 ,
水为重蒸镏水。
1.3　动物 清洁级大鼠 12只 ,雌雄各半, 体重(200±20)g, 由贵阳
医学院实验动物中心提供, 动物合格证号:SCXK(黔)2002-0001。
2　实验方法
2.1　色谱条件 Dikma公司 DiamonsilC18(250 mm×4.6 mm,
5μm)色谱柱;流动相:A(乙腈)-B(0.05%磷酸)梯度洗脱 , 0 ～
15 min(B:99.9%※ 90%);15 ～ 20 min(B:90%※ 87%);20 ～ 50
min(B:87%※ 75%);50 ～ 70 min(B:75%※ 60%);70 ～ 90 min
(B:60%※ 0%);90 ～ 105 min(B:0%※ 0%), 流速均为 1 ml/
min。检测波长:250 nm, 柱温 25℃。进样量 10 μl。
2.2　供试品溶液的制备
2.2.1　威灵仙和柱果铁线莲灌胃液的制备 分别取威灵仙和柱
果铁线莲各 100g,分别加水煎煮 3次 , 煎液滤过 ,滤液浓缩 , 制成
含药量 1g/ml的溶液 ,供灌胃用。
2.2.2　威灵仙和柱果铁线莲供试液的制备 分别取威灵仙和柱
果铁线莲药材粉末(过 40目筛)0.5 g, 精密称定 , 置锥形瓶中 ,
分别加 50ml70%乙醇 , 称定其重量 ,超声提取 30 min, 放冷 ,再称
定重量 , 用 70%乙醇补足减失的重量 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 用
微孔滤膜(0.45μm)滤过 ,供高效液相色谱分析用。
2.2.3　血浆样品的采集和处理 大鼠随机分为威灵仙给药组 、柱
果铁线莲给药组和空白组 ,每组 4只。给药组以药液量 10 ml/kg
灌胃 , 空白组给予同体积的蒸馏水 , 1次 /d, 连续 3d。末次给药后
1h, 腹腔注射 20%乌拉坦(1 ml/100 g), 麻醉后 ,从下腔静脉取血
约 5ml于肝素钠抗凝的具塞离心管中 , 离心 10 min(3 000 r/
min),微量移液器吸取血浆 1 ml置离心管中 , 加入乙腈 2 ml,漩
涡振荡 30s,在离心机上离心 30 min(4 000 r/min), 取上清液用
微孔滤膜(0.45μm)滤过 ,供高效液相色谱分析用。
2.3　高效液相色谱分析 按液相色谱条件 , 分别测定威灵仙药
材 、柱果铁线莲药材 、威灵仙含药血浆 、柱果铁线莲含药血浆和空
白血浆的高效液相色谱指纹图谱。
3　结果
图 1(A～ E)分别为威灵仙药材 、柱果铁线莲药材 、空白血
浆 、威灵仙含药血浆和柱果铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹
图谱。由图 1(A, B)可见 ,威灵仙与柱果铁线莲高效液相色谱指
纹图谱共有 10个色谱峰 ,即 1 ～ 10号峰。由图 1(C, D, E)可见 ,
与空白血浆高效液相色谱指纹图谱相比 ,威灵仙含药血浆与柱果
铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱有 5个共有峰 ,即 a～
e号峰。比较图 1(A, B, C, D, E)可知 , 威灵仙药材和柱果铁线莲
药材高效液相色谱指纹图谱共有峰 5号保留时间与威灵仙含药
血浆和柱果铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱共有峰 d
号相对应 , 说明威灵仙药材和柱果铁线莲药材可能有一个相同的
原型成分吸收入血 ,其它可能为代谢成分。
A-威灵仙　B-柱果铁线莲　C-空白血浆
D-威灵仙含药血浆　E-柱果铁线莲含药血浆
图 1　高效液相色谱指纹图谱图
4　讨论
实验中分别采用甲醇沉淀法 、高氯酸沉淀法 、乙腈沉淀法对
血浆样品进行处理 ,从对待测组分的影响 、干扰情况及对色谱分
析条件的影响等方面进行考虑 ,确定采用乙腈沉淀法处理血浆样
品。
通过二极管阵列检测器分别对威灵仙药材与柱果铁线莲药
材高效液相色谱指纹图谱 10个共有峰 、威灵仙含药血浆与柱果
铁线莲含药血浆的高效液相色谱指纹图谱 5个共有峰的光谱图
进行分析 ,其光谱图相一致。
比较图 1(A, B, C, D, E)发现 ,威灵仙药材与柱果铁线莲药材
具有 10个相同的化学成分 ,而威灵仙含药血浆与柱果铁线莲含
药血浆检出 5个相同成分 , 其中 1个为药材的原型成分 , 但这些
共有成分是否是威灵仙和柱果铁线莲发挥相同功效的药效物质
基础 , 有待于进一步研究。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ 部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:204.
[ 2 ] 　肖培根.新编中药志 [ M] .北京:化学工业出版社 , 2002:679.
[ 3 ] 　王喜军.中药血清药物化学的研究动态及发展趋势 [ J] .中国中药
杂志 , 2006, 31(10):789.
·2225·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.9 时珍国医国药 2009年第 20卷第 9期