全 文 ：(10):1059-1063.
[ 7] 　徐毅 , 吕宾 ,丁志山 , 等.不同温郁金提取物抑制胃癌细胞
SW620增殖和诱导凋亡的实验研究 [ J] .浙江医学 , 2004,
26(7):503-505.
[ 8] 　蔡利军 , 吕宾 ,倪桂宝 , 等.温郁金对人胃癌裸鼠原位移植
瘤生长转移的抑制作用及对 COX-2和 VEGF表达的影响
[ J] .中医药学刊 , 2006, 10(24):1843-1847.
[ 9] 　何必立 ,吕宾 , 徐毅 ,等.温郁金对胃癌细胞的抑制作用及
其对 IGF-Ⅰ 、IGF-Ⅱ表达的影响 [ J] .世界华人消化杂志 ,
2004, 12(11):2761-2763.
粘鱼须威灵仙和棉团铁线莲
对细胞免疫与体液免疫的影响比较＊
石强
(德州学院药品研究开发中心 ,山东　253023)
[摘　要 ] 　目的　比较粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲对细胞免疫和体液免疫的影响 , 为粘鱼须作为威灵仙入药提供
科学依据。方法　选择影响玫瑰花环形成 、T细胞亚群数量 、迟发型变态反应等 3个细胞免疫的指标和影响抗体形成细
胞数量 、血清溶血素数量等 2个体液免疫的指标进行比较。结果　粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲均能抑制 T细胞功能 ,降
低机体细胞免疫反应能力。结论　粘鱼须可以作为祛风湿药威灵仙使用。
[关键词 ] 　粘鱼须;威灵仙;棉团铁线莲;细胞免疫;体液免疫
[中图分类号 ] 　R286;R927.1　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2011)02-0163-04
ComparingStudyoftheEffectsofSmilaxsieboldiMiq., ClematischinensisOsbeck.
andC.hexapetelaPalonCelularImmunityandHumoralImmunity
SHIQiang(DrugResearchandDevelopmentCenterofDezhouColege, Dezhou253023, China)
ABSTRACT　Objective　TocomparetheeffectsofSmilaxsieboldiMiq., ClematischinensisOsbeck.andC.hexapetela
Paloncellularandhumoralimmunity, andfurtherdeterminethefeasibilityofSmilaxsieboldiMiq.tobeusedasadrug.　
Methods　Threecellularimmuneindexesincludingtheformationrateoferythrocyterosette, amountofTcelsubsetsandefects
ondelayedtypehypersensitivity;twohumoralimmnueonesincludingthenumberofplaqueformingcel(PFC)andamountof
serumhemolysinwerecompared.　Results　AllofSmilaxsieboldiMiq., ClematischinensisOsbeck.andC.hexapetelaPall
decoctionwereabletoinhibittheactivityofT-lymphocyteandreducethehumoralimmunefunction.　Conclusion　Smilax
sieboldiMiq.canbeusedequivalentlyasClematischinensisOsbeck.forthetreatmentofrheumatism.
KEYWORDS　SmilaxsieboldiMiq.;ClematischinensisOsbeck.;C.hexapetelaPall;Cellularimmunity;Humoral
immunity
　　威灵仙是中医临床常用祛风湿药物 ,用于治疗风
寒湿痹 、关节不利 、四肢麻木 ,并有治疗骨鲠病症之功
效 [ 1] 。威灵仙在全国应用的品种很多 ,据调查有四科
十多种 [ 2] 。 《中华人民共和国药典 》2005年版收载威
灵仙系毛茛科铁线莲属植物威灵仙(Clematischinensis
Osbeck.)、棉团铁线莲(C.hexapetelaPal)、东北铁线
莲(C.manshuricaRupr.)的干燥根及根茎。而我国北
方诸省长期以百合科植物粘鱼须 (又名华东菝葜
　[收稿日期 ] 　2010-07-21　[修回日期 ] 　2010-08-10
　[基金项目 ] 　＊山东省卫生科技发展计划课题 (基金编号:
1990032)
　[作者简介 ] 　石强(1957-), 男 , 山东禹城人 , 副教授 , 学
士 , 主要研究方向:祛风湿中药药理 , 清热解毒中药药理 , 中药
新药研制 , 缓释 、控释制剂研制 。电话:0534-2643252, E-mail:
shiqiangdzxy@126.com。
SmilaxsieboldiMiq.)的干燥根及根茎作为威灵仙使
用 [ 3] 。毛茛科铁线莲属植物和粘鱼须作为威灵仙入
药均有本草依据 [ 4] ,但科属不同 ,药理作用是否一致 ,
笔者未见报道。笔者在 1990年中国药理学会中药药
理学会第三届全国学术研讨会论文集中报道 ,粘鱼须 、
威灵仙 、棉团铁线莲具有相似的镇痛 、抗炎作用 。根据
现代医学的观点 ,风湿病属于变态反应性疾病 ,祛风湿
与影响机体的免疫功能有关 。因此 ,笔者从影响细胞
和体液免疫功能方面再对粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲
进行比较 ,为粘鱼须作为威灵仙入药提供科学依据 。
1　实验材料与制备　
1.1　药材的来源与鉴定　粘鱼须 (Smilaxsieboldi
Miq.)采自青岛市崂山 , 威灵仙 (Clematischinensis
Osbeck.)采自江 苏省江浦县 , 棉团铁线 莲 (C.
hexapetelaPal)购自德州市药材站。以上药材经山东
·163·医药导报 2011年 2月第 30卷第 2期
省德州市药品检验所鉴定为正品 ,阴干备用。
1.2　药材水煎液的制备[ 5] 　称取粘鱼须 、威灵仙 、棉
团铁线莲干燥粉末各 100 g,用水煎醇沉法制得提取
液 ,浓缩至 100 mL得质量分数为 100%水煎液备用 。
取 100%粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲水煎液各
50 mL,分别加入纯化水 50 mL, 混匀得质量分数为
50%的水煎液备用 。
1.3　药品与仪器　注射用环磷酰胺(上海第十二制
药厂生产 ,批号:921115),氢化可的松注射液(秦皇岛
制药厂生产 ,批号:930203),单克隆抗体 APAAP法检
测 T细胞亚群试剂盒(中国军事医学科学院生物制剂
发展中心生产 ,批号:950506),绵羊红细胞 、小牛血
清 、豚鼠血清(均由济南卫生防疫站提供),二硝基氯
苯(北京市药品采购供应站 , 进口分装 , 批号:
951025),硫化钠(分析纯 ,天津北方天医试剂厂生产 ,
批号:950520)。 752型紫外分光光度计(上海精密科
学仪器有限公司生产),电子分析天平(上海精密科学
仪器有限公司天平仪器厂生产), Olympus双目显微镜
(日本生产),打孔器(山东医学科学院器材站生产)。
1.4　实验动物　昆明种小鼠 ,普通级 ,健康 ,体质量
18 ～ 22 g,由山东中医药大学实验动物中心提供 。
1.5　统计学方法　采用 SPSS13.0软件统计 ,数据以
(x±s)表示 ,组间比较用单因素方差分析 ,以 P<0.05
表示差异有统计学意义。
2　方法与结果　
2.1　对玫瑰花环形成的影响[ 6] 　取小鼠 80只 ,雌雄
兼用 ,随机分成 8组。其中 6组灌胃给予受试药物 ,阳
性对照组灌胃给予环磷酰胺 , 空白对照组灌胃给予
0.9%氯化钠溶液 。剂量见表 1, qd,连续 7 d(阳性对
照组连续给药 5d)。末次给药后次日 ,摘除小鼠一侧
眼球放血 ,制备淋巴细胞悬液 [ 6] ,加入灭活小牛血清 、
绵羊红细胞 ,混匀。 37 ℃水浴温育 ,加入戊二醛 、姬 -
瑞氏混合液染色 ,显微镜下计数玫瑰花环形成细胞 ,计
算结花百分率 ,结果见表 1。
由表 1可知 , 粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲大剂量
组玫瑰花环形成百分率均低于空白对照组 ,均差异有
统计学意义(P<0.05或 P<0.01)。提示 3种药物降
低玫瑰花环形成的作用相似。
2.2　对 T细胞亚群数量的影响　取小鼠 80只 ,雌雄
兼用 ,分组 、给药同 “2.1”项。末次给药后次日 ,摘除
小鼠一侧眼球放血 ,参照单克隆抗体 APAAP法检测 T
细胞亚群试剂盒使用说明书操作 ,结果见表 2。由表 2
可知 ,粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲 2个剂量组的 CD+8
T细胞所占比例均高于空白对照组 , CD+4 /CD+8比值均
低于空白对照组 , 均差异有统计学意义 (均 P<0.
01)。 3种药物大剂量组 CD+4 T细胞数量均低于空白
对照组 ,但差异无统计学意义。提示 3种药物降低
CD+4 /CD+8比值的作用相似 。
表 1　粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲对玫瑰花环形成的影响
Tab.1　TheeffectsofSmilaxsieboldiiMiq., Clematis
chinensisOsbeck.andC.hexapetelaPalontheformationrate
ofE-rosegarland　 %, x±s
组别 小鼠 /只 药物
剂量 /
(g· kg-1)
玫瑰花环
形成率
粘鱼须
　小剂量组 10 粘鱼须水煎液 10 15.0±9.7＊1
　大剂量组 10 粘鱼须水煎液 20 11.6±11.5＊1
威灵仙
　小剂量组 10 威灵仙水煎液 10 23.2±17.2
　大剂量组 10 威灵仙水煎液 20 16.7±14.5＊2
棉团铁线莲
　小剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 10 22.1±15.0
　大剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 20 10.7±9.8＊1
阳性对照组 10 环磷酰胺 0.080 9.5±4.8＊1
空白对照组 10 0.9%氯化钠溶液 … 32.3±11.4
　　与空白对照组比较 , ＊1 P<0.01, ＊2 P<0.05
Comparedwiththeblankcontrolgroup, ＊1 P<0.01, ＊2 P<
0.05
2.3　对迟发型变态反应的影响　取小鼠 80只 ,雌雄
兼用 ,随机分成 8组。其中 6组灌胃给予受试药物 ,阳
性对照组灌胃给予氢化可的松 ,空白对照组灌胃给予
0.9%氯化钠溶液。剂量见表 3, qd,连续 7 d(氢化可
的松组连续 5 d)。第 2次给药当天用 8%硫化钠小鼠
腹部脱毛 ,范围约 3cm×3 cm,均匀涂抹 2.5%二硝基
氯苯丙酮溶液 ,次日再用同样方法强化致敏一次。致
敏后第 5天 ,将 2.5%二硝基氯苯丙酮溶液涂抹于小
鼠右耳进行攻击 , 24 h后处死小鼠 ,剪下左 、右耳廓 ,
用打孔器取下耳片 ,称质量 ,左右耳片质量差为肿胀
度 [ 7] ,结果见表 3。由表 3可见 ,粘鱼须 、威灵仙 、棉团
铁线莲大剂量组耳部肿胀度均低于空白对照组 ,均差
异有统计学意义(均P<0.05),提示 3种药物降低耳
部肿胀度的作用相似 。
2.4　对抗体形成细胞(PFC)数量的影响 　取小鼠
240只 ,雌雄兼用 ,分组 、给药同 “2.1”项 。给药第 3天
时每只小鼠腹腔注射 5%绵羊红细胞 0.5mL。末次给
药次日断头放血处死小鼠 ,取脾脏 ,冰浴下 ,每 3只小
鼠的脾为一组 ,制备脾细胞悬液[ 8] ,加入 0.2%绵羊红
细胞和 1：20豚鼠血清 ,混匀。另设不加脾细胞悬液
的对照管(以磷酸缓冲 0.9%氯化钠溶液代替),置
·164· HeraldofMedicineVol.30No.2 February2011
表 2　粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲对 T细胞亚群的影响　
Tab.2　TheeffectsofSmilaxsieboldiiMiq., ClematischinensisOsbeck.andC.hexapetelaPalontheamountofTcelsubsets
　 x±s
组别 小鼠 /只 药物 剂量 /(g· kg-1) CD+4 /% CD+8 /% CD+4 /CD+8
粘鱼须
　小剂量组 10 粘鱼须水煎液 10 45.0±5.8 31.5±3.7＊1 1.44±0.12＊1
　大剂量组 10 粘鱼须水煎液 20 40.4±2.9 32.4±2.6＊1 1.25±0.07＊1
威灵仙
　小剂量组 10 威灵仙水煎液 10 47.4±6.8 32.3±5.2＊1 1.47±0.13
　大剂量组 10 威灵仙水煎液 20 41.2±6.0 38.0±8.7＊1 1.12±0.21＊1
棉团铁线莲
　小剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 10 45.7±2.7 31.3±4.5＊1 1.49±0.12＊1
　大剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 20 40.0±2.6 32.2±3.7＊1 1.25±0.08＊1
阳性对照组 10 环磷酰胺 0.080 29.6±2.7＊1 30.0±3.1＊1 0.99±0.11＊1
空白对照组 10 0.9%氯化钠溶液 … 42.9±4.4 26.1±1.9 1.85±0.19
　　与空白对照组比较 ＊1 P<0.01
Comparedwiththeblankcontrolgroup, ＊1 P<0.01
　　表 3　粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲对小鼠迟发型变态反
应的影响 　
Tab.3　TheeffectsofSmilaxsieboldiMiq., Clematis
chinensisOsbeck.andC.hexapetelaPalondelayed type
hypersensitivity　 x±s
组别 小鼠 /只 药物
剂量 /
(g· kg-1)
肿胀度 /
g
粘鱼须
　小剂量组 10 粘鱼须水煎液 10 12.5±2.2
　大剂量组 10 粘鱼须水煎液 20 9.6±2.8＊1
威灵仙
　小剂量组 10 威灵仙水煎液 10 13.5±1.8
　大剂量组 10 威灵仙水煎液 20 10.2±2.7＊1
棉团铁线莲
　小剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 10 11.4±3.6
　大剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 20 10.6±1.7＊1
阳性对照组 10 氢化可的松 0.66 9.0±2.2＊2
空白对照组 10 0.9%氯化钠溶液 … 13.4±3.3
　　与空白对照组比较 , ＊1 P<0.05, ＊2 P<0.01
Comparedwiththeblankcontrolgroup, ＊1 P<0.05, ＊2 P<0.01
37 ℃水浴温育 1 h,离心 ,于 413 nm波长处测定吸光
度(A)。结果见表 4。由表 4可知 ,粘鱼须 、威灵仙 、棉
团铁线莲 2个剂量组的 A值均稍低于空白对照组 ,但
差异无统计学意义。提示 3种药物对抗体形成细胞数
量无显著影响。
2.5　对血清溶血素数量的影响　取小鼠 80只 ,雌雄
兼用 ,分组 、给药同 “2.1”项 。给药第 3天每只小鼠腹
腔注射 20%绵羊红细胞 0.2 mL免疫 。末次给药次
日 ,从小鼠眼球部取血 ,加入 5%绵羊红细胞和 1：10
豚鼠血清 ,混匀 , 37 ℃水浴温育 , 0℃冰浴条件下终止
反应。离心 ,取上清液于 540 nm波长处测定 A值 [ 9] ,
结果见表 5。由表 5可见 ,粘鱼须 、威灵仙 2个剂量组
和棉团铁线莲小剂量组 A值均稍低于空白对照组 ,但
差异无统计学意义 。棉团铁线莲大剂量组 A值明显低
于空白对照组 , 差异有统计学意义(P<0.05)。提示
粘鱼须 、威灵仙对溶血素数量没有显著影响。大剂量
棉团铁线莲有降低溶血素数量的作用 。
表 4　粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲对 PFC的影响
Tab.4　TheeffectsofSmilaxsieboldiiMiq.、 Clematis
chinensisOsbeck.andC.hexapetelaPallonthenumberof
antibodyproducingcells(PFC)　 x±s
组别 小鼠 /只 药物
剂量 /
(g· kg-1) A值
粘鱼须
　小剂量组 30 粘鱼须水煎液 10 0.83±0.08
　大剂量组 30 粘鱼须水煎液 20 0.83±0.03
威灵仙
　小剂量组 30 威灵仙水煎液 10 0.83±0.10
　大剂理组 30 威灵仙水煎液 20 0.81±0.13
棉团铁线莲
　小剂量组 30 棉团铁线莲水煎液 10 0.79±0.11
　大剂量组 30 棉团铁线莲水煎液 20 0.77±0.16
阳性对照组 30 环磷酰胺 0.080 0.29±0.02＊1
空白对照组 30 0.9%氯化钠溶液 … 0.84±0.03
　　与空白对照组比较 ＊1 P<0.01
Comparedwiththeblankcontrolgroup, ＊1 P<0.01
3　讨论　
根据上述研究结果 ,笔者认为 ,粘鱼须 、威灵仙 、棉
团铁线莲都能降低玫瑰花环形成百分率;显著提高
CD+8细胞数量 ,降低 CD+4 /CD+8 比值 ,且能抑制致敏小
鼠耳部肿胀 ,提示 3种药物有相似的抑制 T细胞功能 ,
抑制小鼠细胞免疫的作用。粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线
·165·医药导报 2011年 2月第 30卷第 2期
莲都有减少 CD+4细胞数量的趋势 ,提示 3种药物可以
一定程度地减少 TH、Tr和 TD细胞数量 ,降低 3类细胞
的功能 ,为抑制小鼠迟发型变态反应(耳部水肿)提供
了依据 。粘鱼须 、威灵仙 、小剂量棉团铁线莲对 PFC
和溶血素数量没有显著影响 ,仅大剂量的棉团铁线莲
能降低溶血素数量 ,提示 3种药物对体液免疫无明显
影响。
表 5　粘鱼须 、威灵仙 、棉团铁线莲对血清溶血素数量的影响
Tab.5　TheeffectsofSmilaxsieboldiMiq., Clematis
chinensisOsbeck.andC.hexapetelaPallontheamountof
serumhemolysin　 x±s
组别 小鼠 /只 药物
剂量 /
(g· kg-1) A值
粘鱼须
　小剂量组 10 粘鱼须水煎液 10 0.61±0.01
　大剂量组 10 粘鱼须水煎液 20 0.60±0.04
威灵仙
　小剂量组 10 威灵仙水煎液 10 0.60±0.02
　大剂量组 10 威灵仙水煎液 20 0.59±0.03
棉团铁线莲
　小剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 10 0.59±0.03
　大剂量组 10 棉团铁线莲水煎液 20 0.58±0.02＊1
阳性对照组 10 环磷酰胺 0.080 0.02±0.01＊2
空白对照组 10 0.9%氯化钠溶液 … 0.61±0.03
　　与空白对照组比较 , ＊1 P<0.05, ＊2 P<0.01
Comparedwiththeblankcontrolgroup, ＊1 P<0.05, ＊2 P<0.01
根据药效学研究结果 ,笔者认为粘鱼须与威灵仙 、
棉团铁线莲有相似的镇痛 、抗炎和免疫抑制作用 ,粘鱼
须可以作为祛风湿药威灵仙使用。至于粘鱼须免疫抑
制作用的有效成分 ,以及粘鱼须与毛茛科铁线莲属植
物威灵仙 、棉团铁线莲的药动学和临床疗效具何差异
等问题 ,则有待于进一步的药理研究和临床观察 。
[ DOI] 　10.3870/yydb.2011.02.008
[参考文献 ]
[ 1] 　全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编 [ M] .北京:人
民卫生出版社 , 1975:614-615.
[ 2] 　李家实 ,肖培根 , 楼之岑.中药威灵仙的原植物和生药学
研究 [ J] .药学学报 , 1980, 15(5):288-297.
[ 3] 　谢宗万.中药品种理论研究 [ M] .北京:中国中医药出版
社 , 1991:49-59.
[ 4] 　谢宗万.中药材品种论述(上册)[ M] .上海:上海科学技
术出版社 , 1964:95-96.
[ 5] 　陈奇.中药药理研究方法学 [ M] .2版.北京:人民卫生出
版社 , 2006:68-69.
[ 6] 　卢大用 ,李凤茹 , 胥彬.小鼠淋巴细胞玫瑰花结形成实验
方法研究 [ J] .中国药理学通报 , 1993, 9(4):310-311.
[ 7] 　徐叔云 , 卞如濂 ,陈修.药理实验方法学 [ M] .3版.北京:
人民卫生出版社 , 2002:1429-1430.
[ 8] 　徐叔云 ,卞如濂 , 陈修.药理实验方法学 [ M] .北京:人民
卫生出版社 , 1982:943-948.
[ 9] 　吴铁 ,汤少明 , 彭剑飞 ,等.小鼠全血法测定血清溶血素的
方法学探讨 [ J] .中国药理学通报 , 1992, 8(2):155-156.
大鼠肝脏和肠道羧酸酯酶 CES2
对伊立替康的部位特异性代谢作用＊
刘东 ,张程亮 ,向道春 ,徐艳娇
(华中科技大学同济医学院附属同济医院药学部 ,武汉　430030)
[摘　要 ] 　目的　探讨羧酸酯酶同工酶 CES2在大鼠肝脏和肠道的表达特征 ,并研究其对伊立替康(CPT-11)的水
解代谢作用。方法　采用 CPT-11与大鼠肝脏和各肠段 S9组分共同孵育 , 高效液相色谱法测定代谢产物 SN-38的生成
量。采用荧光定量 PCR技术(RT-PCR)对各组织中的 CES2进行定量分析。结果　大鼠肝脏和肠道表现出对 CPT-11的
部位特异性水解作用 , 肝脏的水解活性强于肠道 , 各肠段水解 CPT-11的作用强度依次为:十二指肠 >空肠 >回肠 >结
肠。 RT-PCR结果同样显示 CES2的两个主要同工酶 AB010635和 AY034877在肝脏中的含量明显高于肠道 ,并随着肠段
的下行而递减 。结论　CPT-11在大鼠肝脏和肠道 S9中可被有效水解 , 但代谢产物 SN-38的生成量在各组织中不一致这
一现象与 CES2在不同组织中的部位特异性分布有关。该研究结果为通过抑制 CES2预防 CPT-11毒副作用的策略开发
提供了基础。
[关键词 ] 　伊立替康;肝脏;肠道;羧酸酯酶
[中图分类号 ] 　R9789.1;R969　　　[文献标识码 ] 　A　　　[文章编号 ] 　1004-0781(2011)02-0166-05
·166· HeraldofMedicineVol.30No.2 February2011