全 文 ：A～ X为不同居群蒲公英样品:M为 DL2000bpDNAMarker
图 6　不同居群蒲公英样品 RAPD扩增结果
4　讨论
从蒲公英叶片中提取总 DNA的关键是如何有效地去除多
糖 、生物碱及其它次生代谢产物。叶片在液氮中研磨是为了降低
DNA酶的活性 ,防止 DNA在溶出时发生降解。 CTAB是一种去
污剂 , 既能裂解细胞 ,又能有效沉淀多糖。在提取缓冲液中加入
5%PVP和 100μlβ -巯基乙醇也是为了防止多酚类物质的氧
化 、褐变。用氯仿∶异戊醇(24∶1)抽提能较好的除去蛋白质 ,
经反复试验 , 抽提 2 ～ 3次即可达到要求。同时为了除去可能残
留在 DNA沉淀中的无机盐及有机溶剂 , 采用 75%的乙醇洗涤沉
淀两次。结果表明 ,采用改良的 CTAB法进行蒲公英叶基因组总
DNA的提取 ,获得了高质量的 DNA。
Taq酶依赖于 Mg2+,而 Mg2+又受到 dNTPs影响 , dNTPs浓度
过高则会与 Taq酶竞争 Mg2+, 从而影响到 Taq酶的活性。 为了
获得重复性和稳定性较好的 RAPD谱带 , 提高分析的准确度 , 本
研究对影响 PCR的主要 5种反应组分进行了反复试验 , 探索出
了一套适合蒲公英 RAPD扩增的优化条件 , 确定了蒲公英 RAPD
最佳反应体系 , 为进一步进行蒲公英遗传多样性 RAPD分析研究
奠定了坚实的基础。
参考文献:
[ 1 ] 　国家药典委员会.中国药典 , Ⅰ部 [ S] .北京:化学工业出版社 ,
2005:244.
[ 2 ] 　张春平 ,何　平 ,胡世俊 ,等.药用金荞麦遗传多样性的 RAPD分析
[ J].中国中药杂志 , 2009, 34(6):660.
[ 3 ] 　于艳丽 ,石俊英.RAPD技术在金银花品种鉴定中的应用 [ J] .中药
材 , 2000, 23(11):678.
资源开发
收稿日期:2009-09-27;　修订日期:2010-01-10
基金项目:贵阳中医学院博士基金(No.200611);
国家中医药管理局 “西部 ”重点学科建设资助项目
(No.200414)
作者简介:王祥培(1975-),男(侗族), 贵州天柱人 ,现为贵阳中医学院副
教授 ,博士学位 ,主要从事中药及民族药品种品质与资源开发研究工作.
威灵仙及柱果铁线莲种子表面特征比较
王祥培 ,吴红梅 ,陈国仁 ,许士娜
(贵阳中医学院 ,贵州 贵阳　550002)
摘要:目的 为准确鉴别威灵仙和柱果铁线莲种子提供依据。方法 采用扫描电镜法对威灵仙及柱果铁线莲的种子表面
特征进行比较观察。结果 威灵仙及柱果铁线莲种子之间在表面结构特征上具有一定的差别。结论 威灵仙及柱果铁线
莲种子的表面特征差异可以作为二者的鉴别依据。
关键词:威灵仙 ;　柱果铁线莲 ;　种子;　扫描电镜
中图分类号:R282.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)06-1503-02
　　威灵仙为毛茛科铁线莲属植物威灵仙 ClematischinesisOs-
beck, 棉团铁线莲 ClematishexapetalaPall, 东北铁线莲 Clematis
manshuricaRupr.的干燥根及根茎。具有祛风除湿 、通络止痛之
功效 ,主要用于治疗风湿痹痛 ,肢体麻木 , 筋脉拘挛 ,屈伸不利 , 骨
哽咽喉等症状 [ 1] 。文献报道 [ 2] , 柱果铁线莲 Clematisuncinata
Champ.的根及根茎作威灵仙药材销往南方各省。同时 , 柱果铁
线莲也是贵州省作威灵仙用的主流品种 [ 3, 4] 。目前关于威灵仙
与柱果铁线莲药材的紫外鉴别 、主要药效学及体内外化学成分的
比较已有研究报道 [ 5 ～ 7] , 但威灵仙及柱果铁线莲种子的比较研究
未见报道。由于威灵仙及柱果铁线莲药材均多以种子繁殖 , 且是
同科同属的植物 , 其种子在外形上相似 , 易于混淆。为了进一步
明确威灵仙及柱果铁线莲种子间的差异 , 现对威灵仙及柱果铁线
莲的种子表面特征进行观察 , 以期为威灵仙的种子分类鉴别及引
种栽培提供科学依据。
1　材料与仪器
1.1　材料 威灵仙种子采集于成都中医药大学药用植物园 , 经原
植物鉴定为威灵仙 ClematischinesisOsbeck;柱果铁线莲种子采集
于贵阳黔灵山 , 经原植物鉴定为柱果铁线莲 Clematisuacinata
Champ。
1.2　仪器 日立公司 S-3000N型扫描电镜。
2　方法
将样品种子在超声装置上超声清洗 2 min, 除去种子表面的
杂质和灰尘 , 再分别以 50%, 70%, 80%, 90%, 100%浓度乙醇梯
度脱水 ,自然干燥后用导电双面胶布将样品固定在样品台上。真
空喷金镀膜 90 s。取出将样品放入 S-3000N型扫描电镜观察
室 ,以 15kV加速电压进行观察。结果见图 1 ～ 15。
3　结果
3.1　威灵仙种子和柱果铁线莲种子的整体表面观
3.1.1　威灵仙种子的整体表面观 为扁卵圆形 ,表面黑灰色。长
3.7 ～ 5 cm,宽 2.9 ～ 4.1 cm, 厚约 0.9mm。种子两面中间各具一
圆卵形微凹。边缘较宽而厚 , 基部稍尖;种脐在尖头上凹陷 , 圆
形 ,小。花柱和种子表面可见密布的毛 ,黄白色 , 羽状。顶端有羽
状花柱残留 ,花柱长 1.5 ～ 4.0 cm, 花柱毛直径 10 ～ 12.5 μm, 黄
白色羽毛长约 3.0 mm(见图 1 ～ 3)。
3.1.2　柱果铁线莲种子的整体表面观 为圆柱近钻形 ,表面棕褐
色。长 0.6 ～ 0.7 cm,底部直径约 1.0 mm,中部直径约 0.8 mm。
顶部直径约 0.4 mm。 皱缩 , 有纵皱纹。基部钝平 , 稍突 , 种脐在
突起上微凹。种子表面无毛 ,或顶端有稀疏毛。顶端有羽状花柱
残留 ,花柱长 0.9 ～ 1.9 cm,花柱毛直径 10 ～ 30 μm, 黄白色羽毛
长 3 ～ 4 mm(见图 4 ～ 5)。
3.2　威灵仙种子和柱果铁线莲种子表面超微结构
3.2.1　威灵仙种子的表面超微结构 100×时可见侧面皱缩而成
的横皱纹(见图 2), 200 ×时在毛根部之间见到紧密的纵皱纹连
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接(见图 6)。在 100×时可见到底部的种脐有果柄残留 , 并向内
凹陷呈圆柱空心状(见图 7)。在 300×和 600 ×时可见到鱼鳞状
突起的纹饰(见图 8,图 9)。在 1 000×时可看到毛根处的紧密皱
纹(见图 10)。
3.2.2　柱果铁线莲种子的表面超微结构 100×时可见整体是密
集的纵皱纹 ,由上而下由密变疏 ,上部密而窄 , 下部疏而宽(见图
11 ～ 13)。 300×时可看到柱果铁线莲种子在接近底部时皱缩形
成纵沟和脊(见图 14), 在脊上可见少量向下凹陷的小坑(见图
14)。在 300×时底部则向内凹陷形成圆形种脐(见图 15)。
图 1　威灵仙种子　　　　　图 2　威灵仙种子侧面(100×)
图 3　威灵仙种子上的茸毛(500×)　　　图 4　柱果铁线连种子
图 5　柱果铁线莲种子　　　　　　　　图 6　威灵仙种子
的顶部茸毛(1 500×)　　　　　　　侧面(200×)
图 7　威灵仙种子　　　　　　　图 8　威灵仙种子
的底部(100×)　　　　　　　　的表面(300×)
图 9　威灵仙种子　　　　　　图 10　威灵仙种子
的表面(600×)　　　　　　　的表面(1 000×)
图 11　柱果铁线莲种子　　　　　　图 12　柱果铁线莲种子
　　　的顶部(100×)　　　　　　　　的中部(100×)
图 13　柱果铁线莲种子　　　　图 14　柱果铁线莲种子
　　　的底部(100×)　　　　　　　的底部(300×)
图 15　柱果铁线莲种子(300×)
4　讨论
实验结果表明 ,威灵仙种子和柱果铁线莲种子在表面的结构
纹饰上有差异。柱果铁线莲种子只有一级纹饰 , 为密布的纵皱
纹。而威灵仙种子在低倍镜时看到的是纵皱纹 , 在高倍镜时看到
的是纵横交错的鱼鳞状纹饰。此外威灵仙种子全身可见密布的
毛 ,而柱果铁线莲种子只在顶部可见稀疏的毛 , 并且威灵仙种子
为黑灰色扁卵圆形 , 而柱果铁线莲种子为棕褐色圆柱近钻形。因
此 ,威灵仙种子和柱果铁线莲种子在表面结构特征上存在差异 ,
能有效的进行科学区分。
致谢:威灵仙种子由成都中医药大学生药教研室马云桐博士
协助采集 ,在此表示感谢!
参考文献:
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[ 5 ] 　黄　婕,靳凤云 ,王祥培 ,等.威灵仙类药材的紫外谱线组法鉴别研
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[ 7 ] 　王祥培 ,钱海兵 ,黄　婕 ,等.威灵仙与柱果铁线莲体内外的高效
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