全 文 ：HPLC法同时测定马先蒿属 6 种植物中
毛蕊花糖苷及桃叶珊瑚苷含量
王谨涵①，李茂星②③，曹馨元②③，马 强④，刘延彤②，陶 锐②③
［摘 要］ 目的 建立 HPLC法同时测定马先蒿属 6 种植物中毛蕊花苷及桃叶珊瑚苷含量。方法 从甘肃、青海及四川
等地采集 6 种马先蒿植物样本 11 个，75%甲醇回流提取后，采用 HPLC法测定其中的毛蕊花糖苷和桃叶珊瑚苷含量，以乙腈
(A)-水(B)为流动相，梯度洗脱(0 ～ 10 min，5% A ;10 ～ 12 min，5% ～20% A;12 ～ 30 min，20% A;30 ～ 35 min，5% A) ;检测波
长 330 nm、204 nm，流速 1 ml·min －1。结果 各样本中均能测定出毛蕊花糖苷及桃叶珊瑚苷，但含量差异较大。结论 毛蕊
花糖苷及桃叶珊瑚苷广泛存在于马先蒿属植物中，该 HPLC法分离分析效果好，简单易行，可用于马先蒿中毛蕊花糖苷及桃叶
珊瑚苷的同时定性定量分析及该属药材的质量控制。
［关键词］ 马先蒿;毛蕊花糖苷;桃叶珊瑚苷;HPLC
［中图分类号］ R927． 2 ［文献标志码］ A ［文章编号］ 1008-9926(2015)6-0542-03
［DOI］ 10． 3969 / j． issn． 1008-9926． 2015． 06． 023
Simultaneous Determination of Verbascoside and Aucubin in
6 Medicinal Plants of Pedicularis by HPLC
WANG Jin-han①，LI Mao-xing②③，CAO Xin-yuan②③，MA Qiang④，LIU Yan-tong②，TAO Rui②③
①Department of Nephrology，②Department of Pharmacy，④Department of Gastroenterology，Lanzhou General
Hospital of PLA，Lanzhou 730050，China;③Pharmacy College，Lanzhou University，Lanzhou 730000，China
［Abstract］ Objective To establish a determination method for verbascoside and aucubin in medicinal plants
of pedicularis．Methods 11 samples of 6 species of pedicularis were collected from Gansu，Qinghai and Sichuan
provinces． These samples were extracted with 75% methanol by refluence and determined by HPLC method． The
chromatographic conditions involved SinoChrom ODS-BP (4． 6 mm ×250 mm，5 μm)and a mobile phase of aceto-
nitrile(A)-H2O(B) ，0 － 10 min，5% A，10 － 12 min，5% －20% A，12 － 30 min，20% A，30 － 35 min，5% A． The
detection wavelength was 330 nm and 204 nm respectively at a flow rate of 1 ml·min －1 ． Results Verbascoside and
aucubin could be determined in all the samples and there was obvious difference in contents． Conclusion Verbasco-
side and aucubin are widely distributed in the plants of pedicularis． This HPLC method is simple，and practical and
efficient． It can be used for qualitative analysis and quality control of pedicularis．
［Key words］ pedicularis;verbascoside;aucubin;HPLC
马先蒿属(Pedicularis)植物，多具有清热解毒、
利尿、保肝等作用。苯丙素苷及环烯醚萜苷类化合
物广泛的存在于该属植物中［1-4］。毛蕊花糖苷属于
苯丙素苷化合物，因其抗炎、抗菌、抗肿瘤等药理作
用［5-7］，受到广大学者的关注。以桃叶珊瑚苷为代表
的环烯醚萜苷是该属植物的特征性成分，具有抗氧
基金项目:国家自然科学基金面上项目，No． 81374019;甘肃省中医
药管理局科研立项课题，No． GZK-2015-59
作者简介:王谨涵，医师，学士。研究方向:肾脏病治疗。Tel:
(0931)8994676;E-mail:limaox2005@ aliyun． com
作者单位:730050 甘肃兰州，兰州军区兰州总医院，① 肾脏病内
科;② 药剂科;④消化科;③ 730000 甘肃兰州，兰州大学药学院
化延缓衰老、抗病毒、神经保护等作用［8］。中药药
效是多种成分协调作用的结果，单一成分质量控制
无法表征其整体特性，因此，近几年对于中药的质量
控制已经逐渐由单一指标成分定性定量转向于活性
有效成分、多指标成分［9］。目前关于马先蒿属植物
中有效成分含量测定的报道较少，且多数集中于单
一毛蕊花糖苷和桃叶珊瑚苷测定，尚未见报道对这
2 种成分进行同时测定。本试验在前期工作的基础
上，建立了 HPLC法同时测定 3 种不同产地 6 种马
先蒿属植物中毛蕊花糖苷［10］、桃叶珊瑚苷的含量，
有效评价了马先蒿属植物活性组分的质量稳定性，
为其质量控制提供参考，为其单体生物活性的进一
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步研究奠定基础。
1 材料
1． 1 仪器 高效液相色谱仪(包括 1525 型四元梯
度泵，2998 型二极管阵列检测器，2707 型自动进样
器，TCM型柱温箱，美国 Waters 公司) ，HP-8453 紫
外可见分光光度计(美国惠普公司) ，电子分析天平
(BP210s，Sartorius 公司) ，SK7200H 超声波清洗器
(上海科导超声仪器有限公司)。
1． 2 试药 毛蕊花糖苷对照品(含量 ＞ 97． 5%，实
验室自制，MS，NMR 确定其结构)、桃叶珊瑚苷对照
品(纯度≥98%，中国食品药品检定研究院，批号:
111761) ;6 种不同马先蒿药材地上部分分别于 2014
年 8 月采自甘肃、青海及四川，并由兰州大学药学院
马志 刚 教 授 鉴 定 为 甘 肃 马 先 蒿 Pedicularis
kansuensis Maxim，中国马先蒿 Pedicularis chinensis
Maxim，藓生马先蒿 Pedicularis muscicola Maxim，碎
米蕨叶马先蒿 Pedicularis cheilanthifolia Schrenk，俯
垂马先蒿 Pedicularis cernua Bonati，白花甘肃马先蒿
Pedicularis albiflora Li。甲醇为色谱纯，其余试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 SinoChrom ODS-BP(4． 6
mm ×250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈(A)-水(B)梯
度洗脱:0 ～ 10 min，5% A ;10 ～ 12 min，5% ～ 20%
A;12 ～ 30 min，20% A;30 ～ 35 min，5% A;流速
1 ml·min －1;柱温 25 ℃;进样量 10 μl。
2． 2 溶液的制备 (1)对照品溶液 精密称取毛蕊花
糖苷、桃叶珊瑚苷对照品 6． 00 mg，分别置于 100 ml 量
瓶中，以 10%乙腈溶解定容至刻度，得对照品贮备液。
(2)供试品溶液 取各样品地上部分适量，粉碎(过 4
号筛)，分别准确称取 2 g，置具塞锥形瓶中，精密加入
75%甲醇 50 ml，称定质量，60 ℃回流提取 30 min，冷
却，再称定质量，加 75%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤
过，取续滤液 1 ml 稀释定容至10 ml，作为供试品溶液。
测定前以 0． 45 μm微孔滤膜滤过。
2． 3 系统适用性试验 取毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷
对照品溶液与供试品溶液各适量，按照 2． 1 项下色
谱条件进样测定，结果表明，供试品中的毛蕊花糖
苷、桃叶珊瑚苷色谱峰与相邻成分的色谱峰可达到
基线分离，其他成分对测定无干扰。理论塔板数以
毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷计算应不小于 3000，分离
度大于 1． 5，见图 1。
A:λ = 204 nm，样品中桃叶珊瑚苷色谱图;
B:λ = 330 nm，样品中毛蕊花糖苷色谱图;
a桃叶珊瑚苷对照品，a毛蕊花糖苷对照品，1 桃叶珊瑚苷，2 毛蕊花糖苷，
b藓生马先蒿(天堂) ;c中国马先蒿(天堂) ;d甘肃马先蒿(天堂) ;
e藓生马先蒿(天祝) ;f中国马先蒿(天祝) ;g俯垂马先蒿(天祝) ;
h甘肃马先蒿(青海) ;i白花甘肃马先蒿(青海) ;j藓生马先蒿(诺尔盖) ;
k碎米蕨叶马先蒿(诺尔盖) ;l轮叶马先蒿(诺尔盖)
图 1 马先蒿 HPLC色谱图
2． 4 线性关系考察 取混合对照品溶液(毛蕊花
苷浓度为 12． 86 μg·ml －1，桃叶珊瑚苷浓度为43． 57
μg·ml －1)分别进样 50、100、150、200、250、300 μl。
分别以毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷对照品溶液浓度
(X，μg·ml －1)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘
制标准曲线，得回归方程分别为:
Y = 5176． 16 X － 193 912，r = 0． 9991
Y = 812 138 X － 20 143，r = 0． 9997
结果表明毛蕊花糖苷在 0． 6 ～ 13． 07 μg·ml －1，桃
叶珊瑚苷在 0． 06 ～3． 85 μg·ml －1范围内与峰面积线性
关系良好。
2． 5 精密度试验 取毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷混合
对照品溶液，按 2． 1 项下色谱条件连续进样 6 次，毛
蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷峰面积的 RSD 为分别为
1． 64%、0． 45%，表明仪器精密度良好。
2． 6 稳定性试验 取甘肃马先蒿供试品溶液，室温
放置，分别于 0、2、4、6、12、24 h 进行测定，结果显示
毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚苷峰面积的 RSD 分别为
0． 94%、0． 21%，表明供试品溶液在 24 h内稳定。
2． 7 重复性试验 取甘肃马先蒿药材粉末，按 2． 2
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(2)项下方法分别平行制备 6 份供试品溶液，以 2． 1
项下色谱条件测定，得样品中毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚
苷含量的 RSD 分别为 1． 07%、0． 24%，表明该方法
的重复性良好。
2． 8 加样回收率试验 精密称取 2． 0 g 已知含量
的甘肃马先蒿药材粉末 6 份，分别精密加入毛蕊花
糖苷、桃叶珊瑚苷混合对照品溶液(毛蕊花苷浓度
为 12． 86 μg·ml －1，桃叶珊瑚苷浓度为 43． 57
μg·ml －1)100 μl，按照 2． 2(2)项下方法制备样品溶
液，按 2． 1 项下的色谱条件进行测定，计算得平均加
样回收率及其 RSD，结果见表 1。
表 1 马先蒿加样回收率结果
成分
样品量 /
μg
加入量 /
μg
测得量 /
μg
回收率 /
%
珋x /
%
RSD /
%
毛蕊花糖苷 1． 40 1． 29 2． 64 96． 45 95． 52 0． 91
1． 40 1． 29 2． 62 94． 66
1． 41 1． 29 2． 64 95． 35
1． 38 1． 29 2． 61 95． 13
1． 39 1． 29 2． 61 94． 79
1． 39 1． 29 2． 63 96． 74
桃叶珊瑚苷 0． 87 0． 44 1． 30 97． 15 98． 47 2． 34
0． 87 0． 44 1． 32 101． 95
0． 87 0． 44 1． 30 98． 79
0． 92 0． 44 1． 34 96． 73
0． 86 0． 44 1． 28 95． 84
0． 87 0． 44 1． 31 100． 36
2． 9 样品含量测定 取一定量 3 批药材，按 2． 2 项
下方法制备供试品溶液，以 2． 1 项下色谱条件进行
分析，结果见表 2。
表 2 马先蒿不同样品中 2 种成分的含量(n = 6)
样品名称 采集地 毛蕊花糖苷 /% 桃叶珊瑚苷 /%
藓生马先蒿 天堂 0． 77 0． 25
中国马先蒿 天堂 1． 24 0． 48
甘肃马先蒿 天堂 1． 13 0． 67
藓生马先蒿 天祝 1． 03 0． 51
中国马先蒿 天祝 2． 38 0． 52
俯垂马先蒿 天祝 0． 83 0． 40
甘肃马先蒿 青海 1． 01 0． 81
白花甘肃马先蒿 青海 1． 93 1． 09
藓生马先蒿 诺尔盖 0． 50 0． 24
碎米蕨叶马先蒿 诺尔盖 0． 94 0． 87
轮叶马先蒿 诺尔盖 0． 52 0． 67
3 讨论
3． 1 检测波长 流动相及耐用性的考察经紫外全波
长扫描，毛蕊花糖苷在 330 nm有最大吸收波长，桃叶
珊瑚苷在 204 nm有最大吸收波长。为了排除甲醇末
端吸收对桃叶珊瑚苷含量测定的影响，提高测定的准
确性，故选择末端吸收稍低的乙腈作为流动相，并考察
了不同比例的乙腈-水，比较了色谱柱 waters C18与 Si-
noChrom ODS-BP，waters 1525 系列高效液相色谱仪与
waters 600-996型为高效液相色谱仪的分离效果。最终
确定以 waters 600-996型为高效液相色谱仪，SinoChrom
ODS-BP为色谱柱，乙腈(A)-水(B)梯度洗脱:0 ～ 10
min，5% A;10 ～12 min，5% ～20% A;12 ～30 min，20%
A;30 ～35 min，5% A为色谱条件。
3． 2 样品制备方法的考察 考察了不同提取溶剂，
比较了回流提取、超声提取对毛蕊花糖苷、桃叶珊瑚
苷提取效率的影响，结果表明 75%甲醇 60 ℃回流
提取 30 min提取效率最高。
3． 3 含量测定成分的考察 中药材的药效是其有
效成分协同作用的结果，单一成分含量的测定不能
全面的反映药材的品质，而多指标成分质量控制能
更好的反映中药的整体特性。因此基于课题组前期
工作和相关文献报道，本试验采用 HPLC 法同时测
定了 3 种不同产地 6 种不同马先蒿属植物中毛蕊花
糖苷、桃叶珊瑚苷的含量，方法简便、可靠，为其质量
控制提供参考，为优质药材的筛选及其单体生物活
性的进一步研究奠定基础。
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(收稿日期:2015-05-06;修回日期:2015-07-02)
(本文编辑 狄亚敏)
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