全 文 ：广西科学院学报　 ２０１５，３１（１）：４９～５３
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　 Ｖｏｌ．３１，Ｎｏ．１　Ｆｅｂｒｕａｒｙ　２０１５
网络优先数字出版时间：２０１５－０１－１４
网络优先数字出版地址：ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／４５．１０７５．Ｎ．２０１５０１１４．１０３５．０１２．ｈｔｍｌ
收稿日期：２０１４－１０－１２
修回日期：２０１４－１２－０９
作者简介：张红岩（１９８０－），女，助理研究员，主要从事植物组织
培养及转基因方面的研究。
＊广西科学院基本科研业务费资助项目（１２ＹＪ２５ＳＷＳ２２）资
助。
＊＊通讯作者：孙文波（１９７６－），男，助理研究员，主要从事生物
技术方面的研究，Ｅ－ｍａｉｌ：ｓｗｂｌｃｙ１３２０＠１６３．ｃｏｍ。
兰州百合组织培养及快速繁殖技术研究＊
Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｔｉｓｓｕｅ　Ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　Ｒａｐｉｄ　Ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｌｉｆｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉｃｏｌｏｒ（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ
张红岩，周　兴，莫勇生，唐　峰，孙文波＊＊
ＺＨＡＮＧ　Ｈｏｎｇ－ｙａｎ，ＺＨＯＵ　Ｘｉｎｇ，ＭＯ　Ｙｏｎｇ－ｓｈｅｎｇ，ＴＡＮＧ　Ｆｅｎｇ，ＳＵＮ　Ｗｅｎ－ｂｏ
（广西科学院生物研究所，广西南宁　５３０００７）
（Ｂｉｏｌｏｇｙ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ，Ｇｕａｎｇｘｉ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｎａｎｎｉｎｇ，Ｇｕａｎｇｘｉ，５３０００７，Ｃｈｉｎａ）
摘要：【目的】建立适于兰州百合（Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉｃｏｌｏｒ（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ）的快速无性繁殖技术，为食用
兰州百合试管苗规模化生产提供技术参考。【方法】以球根鳞片为外植体，采用不同消毒方法、取材部位、接种
方法和植物生长调节剂及其浓度配比，筛选适合的诱导、增殖和生根培养基。【结果】球根鳞片先用７５％酒精
处理后，用１０％的次氯酸钠与０．１３％的升汞等体积混合液消毒，再用０．１３％升汞消毒为最佳消毒方式；接种
选择与鳞茎盘相连的下部鳞片为初代培养的最佳外植体；外植体在 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．８ｍｇ／Ｌ＋
２，４－Ｄ　１．０ｍｇ／Ｌ的培养基中，能诱导出较多长势健壮的不定芽；在 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ
的培养基中，增殖倍数达１．２５；而生根培养以 ＭＳ＋ＮＡＡ　０．６ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ为最佳，生根苗生长良
好，生根率达１００％。【结论】获得适合兰州百合快速繁殖的培养基配方，建立了兰州百合的快速繁殖技术。
关键词：兰州百合　外植体　鳞片　离体培养
中图分类号：Ｓ３３９．４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００２－７３７８（２０１５）０１－００４９－０５
Ａｂｓｔｒａｃｔ：【Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ】Ｔｈｅ　ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　ｒａｐｉｄ　ｃｌｏｎａｌ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｆｏｒ　Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉ－
ｃｏｌｏｒ（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｉｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉｃｏｌｏｒ
（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ　ｔｕｂｅ　ｓｅｅｄｌｉｎｇｓ　ｆａｃｔｏｒｙ　ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ．【Ｍｅｔｈｏｄｓ】Ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ｂｕｌｂ　ｓｃａｌｅｓ　ａｓ　ｔｈｅ　ｅｘ－
ｐｌａｎｔｓ，ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓｔｅｒｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ，ｔｅｓｔ　ｔｙｐｅｓ，ｉｎｏｃｕｌａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄｓ，ａｎｄ
ｐｌａｎｔ　ｇｒｏｗｔｈ　ｒｅｇｕｌａｔｏｒｓ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗｅｒｅ
ｃｏｍｐａｒｅｄ．【Ｒｅｓｕｌｔｓ】Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗａｓ　７５％ａｌｃｏ－
ｈｏｌ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｆｏｌｏｗｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｍｉｘｔｕｒｅ　ｏｆ　１０％ｓｏｄｉｕｍ　ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ　ａｎｄ　０．１％ｃｏｒｒｏｓｉｖｅ
ｓｕｂｌｉｍａｔｅ（１∶１）ａｎｄ　０．１％ｃｏｒｒｏｓｉｖｅ　ｓｕｂｌｉｍａｔｅ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｆｏｒ　ｐｒｉｍａｒｙ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ
ｗａｓ　ｔｈｅ　ｌｏｗｅｒ　ｓｃａｌｅｓ　ｔｈａｔ　ｃｏｎｎｅｃｔ　ｔｏ　ｖｉｔｔａｔａ．Ｔｈｅ　ｂｅｓｔ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗａｓ　ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５
ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．８ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　１．０ｍｇ／Ｌ．Ｉｔ　ｃｏｕｌｄ　ｉｎｄｕｃｅ　ｍｏｒｅ　ａｎｄ　ｓｔｒｏｎｇｅｒ　ｓｈｏｏｔｓ．Ｔｈｅ　ｏｐ－
ｔｉｍａｌ　ｓｃａｌｅｓ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｓｕｂｃｕｌｔｕｒｅ　ｗａｓ　ＭＳ　ｗｉｔｈ　６－ＢＡ　１．０ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉ－
ｍａｌ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｗａｓ　ＭＳ＋ＮＡＡ　０．６ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ　ｗｉｔｈ　１００％ｔｈｅ　ｒｏｏｔｉｎｇ　ｒａｔｅ．
【Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ】Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｒａｐｉｄ　ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｍｅｄｉｕｍ　ｆｏｒ　Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉｃｏｌｏｒ（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ
ｗａｓ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ．Ｔｈｅ　ｈｉｇｈ　ｔｉｓｓｕｅ　ｃｕｌｔｕｒｅ　ａｎｄ　ｒａｐｉｄ
ｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎ　ｓｙｓｔｅｍ　ｏｆ　Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉｃｏｌｏｒ
（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ　ｗａｓ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉｉ　ｖａｒ．Ｕｎｉｃｏｌｏｒ（Ｈｏｏｇ）
Ｃｏｔｔｏｎ，ｅｘｐｌａｎｔ，ｓｃａｌｅｓ，ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｃｕｌｔｕｒｅ
０　引言
　　【研究意义】兰州百合（Ｌｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉｉ　ｖａｒ．
DOI:10.13657/j.cnki.gxkxyxb.2015.01.006
Ｕｎｉｃｏｌｏｒ（Ｈｏｏｇ）Ｃｏｔｔｏｎ）是百合科（Ｌｉｌｉａｃｅａｅ）百合
属（Ｌｉｌｉｕｍ ）多年生球根作物，属单子叶草本植物，
其鳞茎瓣厚、丰润、口感甜美，具有很高的营养及经
济价值［１，２］，在我国的食用百合中品质最好［３］。随着
兰州百合需求量的增加，百合种植面积不断扩大，兰
州百合种球的需求量也将大幅度上升。百合种球的
繁殖方式主要为有性繁殖和无性繁殖，有性繁殖依
靠开花授粉形成的种子。种子繁殖虽能获得大量健
康的幼苗，但存在授粉不亲合及胚发育早期死亡的
现象，结实率很低，即使获得一定量的种子，然而这
些种子发芽缓慢，一般需栽培５～６年方能开花及再
次结实，周期漫长，故在生产实践中很少采用［４］。无
性繁殖主要依靠鳞片扦插和分株小鳞茎，前者的弊
端是鳞片容易腐烂，尤其是经过多代繁殖后，常导致
种球感染病毒，造成品质退化快、不能重复利用［５］；
后者的弊端是种球数量少，不能满足生产需求。百
合的组织培养具有用种量少、繁殖系数高的优点，可
解决因持续进行营养繁殖而引起的种球退化现象，
并在短时间内生产大量优质脱毒种苗，从而为生产
提供种植材料。【前人研究进展】百合的组织培养始
于２０世纪５０年代，Ｒｏｂｂ［６］首先利用百合鳞片进行
组织培养获得成功，近年国内通过组织培养快速繁
殖百合种苗的报道增多［７～１０］，但多数侧重于切花百
合不同外植体对百合再生效果的研究，或是百合试
管内结鳞茎及小鳞茎移栽成活的研究［１１，１２］。【本研
究切入点】有关兰州百合鳞片的选择和消毒处理，鳞
片的切割及摆放方式，诱导、继代及生根培养基优化
等方面的研究较少。【拟解决关键问题】以建立完善
的无病毒食用兰州百合快繁技术为目标，通过优化
百合鳞片的消毒处理方式获得外植体，对影响百合
鳞片萌发的鳞片切割及放置方式、鳞片继代及生根
培养等诸多影响因素进行详细研究，为食用兰州百
合试管苗规模化生产提供技术参考。
１　材料和方法
１．１　材料
　　供试材料兰州百合根球由广西永福县农业局提
供。所用试剂购自南宁市柏烯坦生物试剂经营部，
均为国产分析纯级。
　　所用培养基均为 ＭＳ基本培养基中添加４．５ｇ／
Ｌ琼脂粉、３０ｇ／Ｌ蔗糖以及不同种类的激素，ｐＨ值
为５．８。其中，启动培养基中加入６－ＢＡ 、２，４－Ｄ和
ＧＡ３；继代培养基中加入６－ＢＡ和 ＮＡＡ；生根培养
基中加入ＮＡＡ和ＩＢＡ。
１．２　方法
１．２．１　外植体消毒
　　选取健康、饱满的兰州百合鳞茎，剥去表面腐烂
干枯的鳞片，留取内部清洁、完整的鳞片，然后放入
滴加有２滴洗洁精的自来水中浸泡５ｍｉｎ，后流水
冲洗２０ｍｉｎ，转入超净台，用７５％酒精浸泡３０ｓ后
等分成３份，分别采用（１）０．１％升汞浸泡８ｍｉｎ，无
菌水冲洗３次；（２）１０％的次氯酸钠和０．１％升汞等
体积混合，浸泡８ｍｉｎ，无菌水冲洗３次；（３）１０％的
次氯酸钠和０．１％升汞等体积混合，浸泡５ｍｉｎ，无
菌水冲洗１次，再用０．１％升汞浸泡３ｍｉｎ，无菌水
冲洗３次后备用。外植体得率＝（未污染外植体／外
植体总数）×１００％。
１．２．２　不同植物生长调节剂及浓度配比对鳞片不
定芽诱导的影响
　　将消毒过的鳞片边缘薄的部分切除，然后近轴
面向上接种于添加不同植物生长调节剂的培养基中
进行不定芽诱导，每个处理重复３次，每个重复５０
个外植体。培养条件：培养室温度为２６～２８℃，光
强２２００ｌｘ，光照周期为１２ｈ／２４ｈ。培养过程中统
计污 染 率，培 养 ５０ｄ 后 统 计 不 定 芽 诱 导 率。
诱导率＝（生成鳞茎的鳞片数／接种鳞片数）×
１００％。
１．２．３　切割和放置方式对鳞片不定芽诱导的影响
　　将消毒后的鳞片随机分为２份，１份鳞片先把
周边切掉，然后横切成上、中、下３部分，另１份鳞片
纵切为左、中、右３部分，每种切法的鳞片分别接种
于启动培养基（ＭＳ＋ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　１．０
ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３１．０ｍｇ／Ｌ）上，放置方式分为近轴面向
上和向下各半，每个处理重复３次，每个重复１００个
外植体。培养条件同１．２．２节，培养３０ｄ后统计萌
发情况。
１．２．４　不同激素浓度配比对鳞片不定芽增殖的
影响
　　将外植体初代培养获得的不定芽离体后接种于
不同激素浓度配比的继代培养基上（表４），每个处
理重复３次，每个重复接种６０个不定芽。培养条件
同１．２．２节，培养过程中观察不定芽的长势，３０ｄ后
统计增殖系数。
１．２．５　不同激素浓度配比对不定芽生根的影响
　　将继代培养基中长势较好的鳞茎转入不同激素
浓度配比的生根培养基中（表５），每个处理重复３
次，每次重复５０个外植体，每瓶接种５个，培养条件
同１．２．２节，２０ｄ后统计根部发育情况。生根率＝
０５ 广西科学院学报　２０１５年２月　第３１卷 第１期
（生根的芽数／接种的总芽数）×１００％。
２　结果与分析
２．１　不同的消毒处理方法对鳞片萌发的影响
　　经过消毒处理的鳞片，如果消毒时间过长，鳞片
的活力降低甚至死亡；时间过短则灭菌不彻底，导致
污染率过高。经过方法（１）、（２）和（３）消毒处理后的
鳞片培养大约１周之后能够确定污染率，且鳞片的
颜色也会发生变化，由乳白色变为浅绿色，不同消毒
方法处理过的鳞片其萌发程度不同。由表１可以看
出，方法（３）处理过的鳞片得率最高为５９％，且转绿
时间也较短。只有转绿的鳞片最终才能诱导出芽，
而且转绿时间越短，表明鳞片受到的毒害越小，同时
诱导出芽的时间也越短［１３］。因此，消毒方式（３）是
适用于兰州百合鳞片的消毒方式，既可以有效灭菌，
又能保证较高的成活率和较短的诱导时间。
表１　不同消毒处理方法对兰州百合鳞片消毒的影响
Ｔａｂｌｅ　１　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ　ｏｎ　ｂｕｌｂｓ
ｆｒｏｍＬｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉ　ｖａｒ
消毒方式
Ｄｉｓｉｎｆｅｃｔｉｏｎ
ｔｒｅａｔｍｅｎｔｓ
接种数（块）
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
污染数（块）
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｐｏｌｕｔｉｏｎ
得率
Ｙｉｅｌｄ（％）
转绿时间
Ｔｕｒｎ　ｇｒｅｅｎ
ｔｉｍｅ（ｄ）
（１） １００　 ６３　 ３７　 １３
（２） １００　 ５２　 ４８　 １０
（３） １００　 ４１　 ５９　 ５
２．２　不同植物生长调节剂及浓度配比对不定芽诱
导的影响
　　从表２可知，鳞片在不同植物生长调节剂及浓
度配比的启动培养基上，其形态和颜色变化都会有
明显不同，不定芽芽点出现时间及其长势都不同，其
中在配方 ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．８ｍｇ／Ｌ＋
２，４－Ｄ　１．０ｍｇ／Ｌ的启动培养基上不定芽诱导效果
最好，从乳白色到浅黄色再到浅紫色需要２５ｄ左
右，此时鳞片开始萌动出现芽点，接着鳞片变为绿紫
色，芽点长大成为小鳞茎，且长势最好。而在其他配
方的启动培养基上鳞片不定芽萌发较慢，不定芽数
量少且长势弱。
２．３　外植体切割和放置方式对鳞茎形成的影响
　　由表３可以看出，鳞片放置和切割的方式对其
增殖率有显著影响。前期实验表明：近轴面向下放
置的外植体萌发慢，且系数非常低，而近轴面向上放
置的萌发快，所以在中后期的实验过程中均采取近
轴面向上的放置方式。而切割方式实验表明：横切
的下部萌发率最高，中部次之，上部最低；纵切的中
部萌发率最高，左部和右部差异不明显，但是横切的
中部萌发率又高于纵切的中部。因此，取百合鳞片
横切的下部为外植体且近轴面向上放置，萌发快且
萌发率高。
表２　不同植物生长调节剂及浓度配比对不定芽诱导的
影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｔｉｏ
ｏｎ　ａｄｖｅｎｔｉｔｉｏｕｓ　ｂｕｄ　ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
６－ＢＡ　 ２，４－Ｄ　 ＧＡ３
诱导率
Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）
生长特征
Ｇｒｏｗｔｈ　ｓｔａｔｕｓ
１．０　 ０．８　 ０　 ９
鳞片变化较慢，２个月后
才转绿
Ｓｃａｌｅｓ　ｃｈａｎｇｅ　ｓｌｏｗｌｙ，ａｆ－
ｔｅｒ　２ ｍｏｎｔｈｓ　ｔｏ　ｔｕｒｎ
ｇｒｅｅｎ
１．０　 ０．８　 ０．８　 ２７
鳞片变化较慢，１０ｄ后
转绿
Ｓｃａｌｅｓ　ｃｈａｎｇｅ　ｓｌｏｗｌｙ，ａｆ－
ｔｅｒ　１０ｄａｙｓ　ｔｏ　ｔｕｒｎ　ｇｒｅｅｎ
１．５　 １．０　 ０　 ３３
鳞片萌发较快，７ｄ出现
少量芽点
Ｓｃａｌｅｓ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｆａｓ－
ｔｅｒ，７ｄｍｉｎｏｒ　ｂｕｄ　ｐｏｉｎｔｓ
１．５　 １．０　 ０．８　 ５８
鳞片萌发快，５ｄ转绿，且
边缘出现较多芽点
Ｓｃａｌｅｓ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｆａｓ－
ｔｅｒ，ａｆｔｅｒ　５ｄａｙｓ　ｔｏ　ｔｕｒｎ
ｇｒｅｅｎ　ａｎｄ　ｔｈｅ　ｅｄｇｅ　ａｐ－
ｐｅａｒｅｄ　ｍｏｒｅ　ｂｕｄｓ
２．０　 １．０　 ０．８　 ４１
鳞片萌发快，产生膨松愈
伤组织，出芽较少
Ｓｃａｌｅｓ　ｇｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｆａｓ－
ｔｅｒ，ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｓｃａｌｅｓ　ｇｅｎｅｒ－
ａｔｅｄ　Ｌｏｏｓｅ　Ｃａｌｕｓ　ａｎｄ
ａｐｐｅａｒｅｄ　ｌｅｓｓ　ｂｕｄｓ
表３　外植体切割和放置方式对鳞茎形成的影响
Ｔａｂｌｅ　３　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｃｕｔ　ａｎｄ　ｐｌａｃｅ　ｗａｙ　ｏｎ　ｂｕｌｂ　ｆｏｒｍａｔｉｏｎ
切割方式
Ｃｕｔ　ｗａｙ
放置方式
Ｐｌａｃｅ　ｗａｙ
接种数（块）
Ｎｏ．ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
转绿率
Ｔｕｒｎ　ｇｒｅｅｎ
ｒａｔｅ（％）
分化率
Ｄｉｆｆｅｒｅｎ－
ｔｉａｔｉｏｎ
ｒａｔｅ（％）
横切上
Ｏｎ　ｔｈｅ　ｃｒｏｓｓ
近轴面向上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ １００　 ９０　 ５３
近轴面向下
Ｔｈｅ　ｎｅａｒ　ａｘｉｓ
ｏｒｉｅｎｔｅｄ
１００　 ９０　 ３６
横切中
Ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｒｏｓｓ
近轴面向上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ １００　 ９６　 ７９
横切下
Ｕｎｄｅｒ
ｔｈｅ　ｃｒｏｓｓ
近轴面向上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ １００　 ９７　 ９７
纵切左
Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ
ｌｅｆｔ
近轴面向上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ １００　 ９５　 ８１
纵切中
Ｉｎ　ｔｈｅ
ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ
近轴面向上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ １００　 ９６　 ９２
纵切
Ｌｏｎｇｉｔｕｄｉｎａｌ
ｒｉｇｈｔ
近轴面向上
Ａｄａｘｉａｌ　ｓｉｄｅ １００　 ９４　 ８０
２．４　不同激素浓度配比对不定芽增殖的影响
　　转入继代培养基中增殖培养所用的小鳞茎为初
１５张红岩等：兰州百合组织培养及快速繁殖技术研究 　 　　
代培养阶段所得，培养２０ｄ左右，在转接的小鳞茎
基部形成新的不定芽，继而长成新的小鳞茎。由表
４可以看出，在不添加任何激素的 ＭＳ空白培养基
上，鳞茎产生小鳞茎比较少，增殖系数仅为０．１２，且
生长较弱；在只添加６－ＢＡ的培养基上，鳞茎均能产
生小鳞茎，且随着６－ＢＡ浓度的增加，增殖系数也提
高，当６－ＢＡ 浓度为１．０ｍｇ／Ｌ时，增殖系数达到
１．０５，但是当６－ＢＡ浓度提高到１．２ｍｇ／Ｌ时，鳞茎
出现变异现象；在只添加ＮＡＡ的培养基上，增殖系
数几乎为０，并会产生较多的根。而在同时添加６－
ＢＡ和ＮＡＡ的培养基上，均有一定程度的增殖，当
６－ＢＡ和ＮＡＡ浓度分别为１．０ｍｇ／Ｌ和０．１ｍｇ／Ｌ
时，增殖系数达到１．２５；但是当６－ＢＡ 和ＮＡＡ浓度
分别为１．０ｍｇ／Ｌ和０．５ｍｇ／Ｌ时，鳞茎出现变异，
且增殖系数降低。实验结果表明，ＭＳ＋６－ＢＡ　１．０
ｍｇ／Ｌ＋ＮＡＡ　０．１ｍｇ／Ｌ的继代培养基增殖系数最
高，继代苗生长整齐，抽生叶片较长，长势最好。
表４　不同激素组合对兰州百合鳞茎增殖的影响
Ｔａｂｌｅ　４　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　６?ＢＡ　ａｎｄ　ＮＡＡ
ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｂｕｌｂｓ　ｆｒｏｍＬｉｌｉｕｍ　ｄａｖｉｄｉ　ｖａｒ
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
６－ＢＡ　 ＮＡＡ
接种数（块）
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｅｘｐｌａｎｔｓ
新小鳞
茎数（个）
Ｎｕｍｂｅｒ　ｏｆ
ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｕｌｂ
增殖
倍数（倍）
Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ｍｕｌｔｉｐｌｅ
０　 ０　 ６０　 ７　 ０．１２
０．２　 ０　 ６０　 １２　 ０．２
０．４　 ０　 ５９　 ２３　 ０．３９
０．６　 ０　 ６０　 ３８　 ０．６３
０．８　 ０　 ５８　 ４９　 ０．８５
１．０　 ０　 ６０　 ６３　 １．０５
１．２　 ０　 ６０　 ４９　 ０．８２
０　 ０．１　 ５６　 ２　 ０．０４
０　 ０．５　 ５７　 １　 ０．０２
１．０　 ０．１　 ５９　 ７４　 １．２５
１．０　 ０．５　 ６０　 ５１　 ０．８５
２．５　不同激素浓度配比对不定芽生根的影响
　　转入生根培养基的兰州百合小鳞茎，在８～１５ｄ
之内在鳞茎底部都会产生白色的突起，然后逐渐成
长为根系。由表５可以看出，不添加任何激素的空
白培养基，根点出现的较晚，并且根较弱，条数最少，
而在添加了激素的培养基上，都有较高的生根率，其
中以 ＭＳ＋ ＮＡＡ　０．６ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ表现
最好，根点出现早，根粗壮且整齐，根的条数也最多，
所以选为兰州百合的生根培养基。
表５　不同激素浓度对比对不定芽生根的影响
Ｔａｂｌｅ　５　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｏｒｍｏｎｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ＮＡＡ
ｏｒ　ＩＢＡ　ｏｎ　ｒｏｏｔｉｎｇ
浓度
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
（ｍｇ／Ｌ）
ＮＡＡ　ＩＢＡ
接种数（个）
Ｎｕｍｂｅｒ
ｏｆ　ｅｘｐｌａｎｔｓ
生根时间
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｔｉｍｅ（ｄ）
根系发育情况
Ｓｔａｔｕｓ　ｏｆ
ｒｏｏｔ　ｇｒｏｗｔｈ
生根率
Ｒｏｏｔｉｎｇ
ｒａｔｅ（％）
０　 ０　 ５０　 ２５
有弱小根点出现
Ｗｅａｋ　ｒｏｏｔ　ｐｏｉｎｔ－
ｅｄ
１７．６
１．０　 ０　 ５０　 ８～１０
过于膨大，畸形
Ｏｖｅｒｌｙ　 ｉｎｆｌａｔｅｄ，
ｍａｌｆｏｒｍａｔｉｏｎ
３１
０．８　 ０　 ５０　 ８～１０
膨大，参差不齐
Ｔｈｅ　ｒｏｏｔｓ　ｄｉｌａｔｅｄ，
ｕｎｅｖｅｎ
３１．８
０．６　 ０　 ５０　 ９～１１
根细长
Ｒｏｏｔｓ　ｓｌｅｎｄｅｒ ８９．３
０．６　 ０．１　 ５０　 １１～１２
根系粗壮、整齐
Ｒｏｏｔｓ　ｓｔｏｕｔ，ｎｅａｔ １００
０．４　 ０．１　 ５０　 １２～１４
较粗壮
Ｒｅｌａｔｉｖｅｌｙ　ｔｈｉｃｋ ９７．６
０．２　 ０．２　 ５０　 １５～１７
细短
Ｓｈｏｒｔ　ａｎｄ　ｔｈｉｎ ９６．７
３　讨论
　　在百合组织培养过程中，不同消毒剂对百合鳞
片的消毒效果影响显著，根据消毒效果及对外植体
的伤害程度筛选出适合兰州百合鳞片的最佳消毒方
式：７５％ 酒精处理后，再用 １０％ 的次氯酸钠与
０．１３％的升汞等体积混合对鳞片消毒，再用０．１３％
升汞消毒。通过比较不同鳞片位置的分生能力可
知：靠近鳞茎盘下部的鳞片分生能力较强，这可能是
由于受极性支配，鳞片基部和近轴端表现出最大的
发生潜力，所以接种时应选择与鳞茎盘相连的下部
鳞片为初代培养的最佳外植体，这与王爱勤等［１１］和
屈姝存等［１４］所报道的结果一致。
　　植物生长调节剂对离体组织的生长发育起关键
作用，培养基中植物生长调节剂的种类和浓度调节
对兰州百合植株的再生方式和器官分化具有重要作
用，适当的激素组合能够高效诱导百合芽的分化、增
殖及根的生长。本研究获得的最佳诱导培养基为
ＭＳ＋６－ＢＡ　１．５ｍｇ／Ｌ＋ＧＡ３０．８ｍｇ／Ｌ＋２，４－Ｄ　１．０
ｍｇ／Ｌ，使用该培养基能诱导出较多长势健壮的兰州
百合不定芽。其中，添加一定浓度的ＧＡ３可以缩短
诱导时间，增加诱导率，ＧＡ３在诱导植物分化及开花
方面有许多报道，但在促进兰州百合芽分化方面的
研究还未见报道，有关具体作用机理还需进一步
研究。
２５ 广西科学院学报　２０１５年２月　第３１卷 第１期
　　在进行兰州百合的根诱导时，ＮＡＡ浓度偏高
或偏低都会降低小鳞茎生根的能力，０．６ｍｇ／Ｌ是促
进小鳞茎生根的最佳浓度；添加０．１ｍｇ／Ｌ的ＩＢＡ
能使根更健壮和整齐。所以兰州百合生根培养基以
ＭＳ＋ＮＡＡ　０．６ｍｇ／Ｌ＋ＩＢＡ　０．１ｍｇ／Ｌ为最佳，生
根率达１００％，生根苗生长良好，这与前人的研
究［１，４］稍有出入，可能是基因型和外植体差异所致。
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ｇｅｓ　ａｎｄ　ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ　ｏｆ　ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅ－
ｓｉｓ　ｏｆ　ｓｃａｌｅ　ｅｘｐｌａｎｔｓ　ｏｆ　Ｌｉｌｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ［Ｊ］．Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅ
Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９９８，２（４）：２８８－２９４．
（责任编辑：陆　雁）　　
３５张红岩等：兰州百合组织培养及快速繁殖技术研究