全 文 ：刘桂伶，宋 平，杨瑞华，等． 蓝靛果忍冬抗氧化性能分析及组培体系建立［J］． 江苏农业科学，2014，42(9):160 － 162．
蓝靛果忍冬抗氧化性能分析及组培体系建立
刘桂伶1，宋 平1，杨瑞华2，闫绍鹏1
(1．东北林业大学，黑龙江哈尔滨 150040;2．黑龙江省农业科学院园艺分院，黑龙江哈尔滨 150060)
摘要:从 5 个不同品种蓝靛果忍冬(Lonicera edulis Turcz．)果实中提取酚类物质，利用分光光度法进行抗氧化性能
分析，并对抗氧化性综合指标最高的品种建立组织培养体系。结果表明，不同品种的蓝靛果忍冬果实中酚类物质对各
种氧化自由基均有不同程度的清除能力，其中选育品种 C0307抗氧化能力最强。取蓝靛果忍冬的枝条进行水培，长出的
新芽作为外植体，根据芽的分化率确定诱导形成愈伤组织最佳培养基与激素配比为1 /2MS +0． 2 mg /L IBA + 3． 0 mg /L 6
－ BA + 0． 05 mg /L NAA，芽分化率为 85%。
关键词:蓝靛果忍冬;抗氧化性能;组织培养;酚类物质;愈伤组织;外植体
中图分类号:Q943． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2014)09 － 0160 － 02
收稿日期:2014 － 05 － 04
基金项目:公益性行业(农业)科研专项(编号:201103037)。
作者简介:刘桂伶(1990—)，女，硕士，从事园林植物研究。E － mail:
178571886@ qq． com。
通信作者:闫绍鹏，博士，高级工程师，从事遗传育种研究。E － mail:
ysp_4@ 126． com。
蓝靛果忍冬(Lonicera edulis)别称蓝靛果、蓝果忍冬，是忍
冬科忍冬属多年生落叶小灌木，主要分布在我国东北(吉林
省长白山、黑龙江省大兴安岭东部山区以及内蒙古自治区)、
华北、西北、西南(四川省)等地，此外，俄罗斯远东地区、日本
及朝鲜北部等地也都有分布［1］。蓝靛果忍冬具有较强的抗
寒能力，适应性好，生命力强，果实有很高的营养价值、保健价
值，是天然抗氧化剂的良好资源［2］。本研究对不同品种蓝靛
果忍冬果实的抗氧化性能进行分析，建立了其优良品种组织
培养体系，以期为开发利用蓝靛果忍冬资源提供依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
2012 年 3 月从黑龙江省农业科学院园艺分院浆果园采
集了野生品种 W0101 以及选育品种 C0102、C0305、C0307、
C0407 等 5 个蓝靛果忍冬品种的枝条及果实。
1． 2 方法
1． 2． 1 蓝靛果忍冬果实抗氧化性能测定 采用乙醇浸提法
从 5 个蓝靛果品种的冻存果实中提取酚类物质，参照徐建国
等的方法［3］，采用水杨酸钠络合法测定羟自由基清除能力。
参照 Binsan等的方法［4］，测定 ABTS 自由基的清除能力。参
照郭艳华等的方法［5］，采用邻苯三酚自氧化法测定超氧阴离
子清除能力。参照张建民等的方法［6］，测定 DPPH·的清除
能力。羟自由基、ABTS 自由基、超氧阴离子自由基、DPPH·
清除率计算公式如下:
C =［1 －(D1 － D2)/D0］× 100%。 (1)
式中:C为自由基清除率;D0 为未加果实酚类物质提取液的
吸光度;D1 为加入果实酚类物质提取液的吸光度;D2 为空白
试剂的吸光度。每个试样重复 3 次，取平均值。
1． 2． 2 外植体的选择及材料灭菌 选取抗氧化性能较强的
蓝靛果忍冬选育品种 C0307 为材料建立组培体系。将蓝靛
果忍冬 C0307 枝条插在水中培养，以萌发的嫩芽为外植体。
将萌发芽用无菌水浸泡 3 ～ 5 min，70%乙醇冲洗 10 s，无菌水
冲洗 6 次，0． 1% HgCl2 浸泡 5 min，无菌水冲洗 8 ～ 10 次，用
滤纸吸干多余水分。
1． 2． 3 组织培养体系的建立
1． 2． 3． 1 诱导培养基的筛选 将经过表面消毒的外植体分
别接种到 MS、1 /2MS、WPM 培养基上，用于诱导分化愈伤组
织及继代培养［7］。在培养基中分别添加不同浓度的 6 － BA、
NAA、IBA(表 1)，每处理重复 3 次，每次重复接种 30 瓶，30 d
后统计各处理蓝靛果忍冬芽的分化率，并观察生长情况。
表 1 蓝靛果忍冬诱导培养基正交试验因素水平
水平 A:培养基 B:IBA浓度
(mg /L)
C:6 － BA浓度
(mg /L)
D:NAA浓度
(mg /L)
1 MS 0． 1 1． 0 0． 05
2 1 /2MS 0． 2 2． 0 0． 10
3 WPM 0． 3 3． 0 0． 15
1． 2． 3． 2 生根培养 以 WPM + NAA 0． 5 mg /L 为蓝靛果忍
冬的生根培养基，移栽前将试管苗放于温室中，打开瓶口，逐
渐降低温度，并逐渐增加光强，随后移栽。
1． 3 数据统计
采用 DPS7． 05 软件进行方差分析及多重比较。
2 结果与分析
2． 1 蓝靛果忍冬果实抗氧化性能
具有氧化性自由基的物质在特定波长处有最大吸收峰，
多酚类物质可以清除自由基，从而使其在特定波长处的吸光
度发生变化。因此，可以通过测定吸光度来反映多酚类物质
对自由基的清除能力，进而测定蓝靛果忍冬果实中酚类物质
的抗氧化能力。从表 2 可以看出，不同品种的蓝靛果忍冬果
实中的酚类物质均能一定程度上削弱邻苯三酚的自氧化，对
超氧阴离子都有一定的清除作用，其中野生型品种 W0101、
选育品种 C0370 对超氧阴离子清除能力较强，清除率分别达
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到 37． 14%、31． 48%。选育品种 C0307、野生型品种 W0101
对羟自由基清除能力也较强，清除率分别为 44． 44%、
39. 07% 。野生型品种 W0101、选育品种 C0307 对 DPPH·
清除能力较强，清除率均达到 50%以上;选育品种 C0102 对
DPPH·清除能力次之;选育品种 0305 对 DPPH·清除能力最
弱。将蓝靛果忍冬冻存果实酚类物质提取液加入 DPPH·溶
液中，DPPH·混合液的颜色逐渐变浅，颜色越浅意味着对
DPPH·清除能力越强。ABTS是抗氧化试验中常用的自由基，
不同品种蓝靛果忍冬冻存果实酚类物质提取液对 ABTS自由
基的抑制作用均在 50%左右，选育品种 C0305、C0307 对 ABTS
自由基清除能力较强，清除率分别为 51． 77%、50. 36%。
表 2 不同品种蓝靛果忍冬果实抗氧化性
品种
清除率(%)
超氧阴离子 羟自由基 DPPH· ABTS自由基
W0101 37． 14 ± 0． 79d 39． 07 ± 1． 09c 50． 21 ± 2． 34d 45． 02 ± 2． 05a
C0402 20． 72 ± 1． 04a 33． 54 ± 2． 34a 40． 25 ± 0． 87b 47． 78 ± 1． 92b
C0102 24． 24 ± 2． 39b 37． 05 ± 2． 01b 48． 55 ± 1． 98c 40． 81 ± 3． 05a
C0307 31． 48 ± 3． 21a 44． 44 ± 0． 98d 51． 94 ± 2． 03d 50． 36 ± 2． 85c
C0305 28． 99 ± 1． 03c 33． 66 ± 1． 67a 33． 47 ± 1． 03a 51． 77 ± 1． 63c
注:同列数据后不同字母表示差异显著(P ＜ 0． 05)。
2． 2 蓝靛果忍冬组培体系建立
2． 2． 1 基本培养基及激素配比对于外植体诱导分化的影响
由表 3 可知，在其他组分条件相同、培养基条件不同的情况
下，4 ～ 6 组分化率大于 1 ～ 3、7 ～ 9 组，说明 1 /2 MS培养基比
MS培养基、WPM培养基诱导分化形成愈伤组织效果好。在
培养基一致情况下，5 组的分化率最高，达 85%，增殖倍数为
7． 8 倍，表明 1 /2MS + 0． 2 mg /L IBA + 3. 0 mg /L 6 － BA +
0． 05 mg /L NAA诱导分化形成愈伤组织效果好，确定此为最
佳诱导分化的培养基与激素配比。
表 3 蓝靛果忍冬诱导分化培养试验
处理 培养基
IBA
浓度
(mg /L)
6 － BA
浓度
(mg /L)
NAA
浓度
(mg /L)
平均
分化数
(个)
平均
分化率
(%)
平均增
殖倍数
1 MS 0． 1 1． 0 0． 05 19． 0 63． 3 1． 9
2 MS 0． 2 2． 0 0． 10 21． 9 73． 0 2． 1
3 MS 0． 3 3． 0 0． 15 21． 6 72． 2 3． 9
4 1 /2MS 0． 1 2． 0 0． 15 22． 0 73． 3 4． 6
5 1 /2MS 0． 2 3． 0 0． 05 25． 5 85． 0 7． 8
6 1 /2MS 0． 3 1． 0 0． 10 22． 5 75． 0 5． 5
7 WPM 0． 1 3． 0 0． 10 21． 3 71． 0 4． 2
8 WPM 0． 2 1． 0 0． 15 20． 6 68． 7 2． 3
9 WPM 0． 3 2． 0 0． 05 21． 6 72． 2 3． 6
2． 2． 2 生根培养 当苗高 1． 5 ～ 2． 0 cm时，切取单芽分别转
接于生根培养基进行培养，培养 20 d左右开始长出浅绿色的
根，生根率达 95%以上，说明控制蓝靛果忍冬试管苗生根的
主要因素是 NAA，且 NAA 浓度为 0． 5 mg /L 时，植株生根状
况最好。由于根粗壮、生根数少，生根状况好的苗木较易成
活，因此选择培养基 1 /2MS + NAA 0． 5 mg /L为蓝靛果忍冬的
生根培养基。图 1 为选育品种 C0307 蓝靛果忍冬的组培体系
建立过程。
3 结论与讨论
不同品种的蓝靛果忍冬果实中酚类物质对各种自由基的
清除能力不同。野生型品种 W0101、选育品种 C0370 对超氧
阴离子清除能力较强，清除率分别达到 37． 14%、31． 48%。
选育品种 C0307、野生型品种 W0101 对羟自由基清除能力也
较强，清除率分别为 44． 44%、39． 07% 。野生型品种W0101、
选育品种 C0307 对 DPPH·清除能力较强，清除率均达到
50%以上;选育品种 C0102 对 DPPH·清除能力次之;选育品
种 0305 对 DPPH·清除能力最弱。综合以上各项指标，确定
选择选育品种 C0307 进行蓝靛果忍冬组培体系建立。根据
芽分化率确定诱导形成愈伤组织最佳培养基与激素配比为
1 /2MS + 0． 2 mg /L IBA + 3． 0 mg /L 6 － BA +0． 05 mg /L NAA，
芽分化率为 85%。用 1 /2MS + 0． 5 mg /L NAA 作为蓝靛果忍
冬的生根培养基，生根效果较好。
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