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不同产地白茅根多糖成分的含量比较



全 文 :书药理药化
收稿日期:2011-04-12; 修订日期:2011-08-04
基金项目:国家自然科学基金(No. 30860363)
作者简介:刘荣华(1964-) ,男(汉族) ,江西吉安人,现任江西中医学院教
授,博士学位,主要从事中药质量评价和中药活性物质基础研究工作.
不同产地白茅根多糖成分的含量比较
刘荣华 ,马志林,段 锋,任 刚,邵 峰,黄慧莲,陈石生
(江西中医学院现代中药制剂教育部重点实验室,江西 南昌 330004)
摘要:目的 比较不同产地白茅根的多糖含量。方法 以葡萄糖为对照品,采用苯酚 -浓硫酸法比色,通过紫外可见分光
光度法测定采自 11 个不同产地的白茅根中多糖的含量,波长为 485nm。结果 该实验测定方法相对稳定,不同产地白茅
根中多糖的含量存在显著性差异,其中福建邵武产地的白茅根多糖含量最高(711. 45 mg /g) ,其次为湖北武汉产地含量
(604. 89 mg /g) ,江西新建产地含量最低(300. 88 mg /g)。结论 研究结果可为白茅根多糖成分合理开发,资源的利用及
质量控制提供实验依据。
关键词:白茅根; 多糖; 紫外可见分光光度法
DOI标识:doi:10. 3969 / j. issn. 1008-0805. 2012. 02. 001
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2012)02-0257-02
Comparative Analysis of Polysaccharide in the Roots of Imperata cylindrica Beauv. var.
major(Nees)C. E. Hubb. from Different Habitats
LIU Rong-hua,MA Zhi-lin,DUAN Feng,REN Gang,SHAO Feng,HUANG Hui-lian,CHEN Shi-sheng
(Key Laboratory of Modern Preparation of TCM,Jiangxi University of TCM,Ministry of Education,Nanchang
330004,China)
Abstract:Objective To compare the content of Polysaccharide in the Roots of Imperata cylindrica Beauv. var. major(Nees)C.
E. Hubb. from different habitats. Methods The content of polysaccharide in the roots of Imperiato cylindrica Beauv. var. majore.
E,Hubb. was determined by phenol - sulfuric acid colormetric method with glucose as the stationary. Results This method was
stable. There had significant difference of polysaccharide in the roots of Imperata cylindrica Beauv. var. major(Nees)C. E.
Hubb. from different habitats. The highest content of polysaccharide contained in Imperata cylindrica Beauv. var. major(Nees)
C. E. Hubb was from Shaowu,Fujian province (711. 45 mg /g) ,followed by that from Wuhan city,Hubei province (604. 89 mg /
g). And the lowest content was from Xinjian county ,Jiangxi province (300. 88 mg /g). Conclusion The experiment results pro-
vide scientific evidence for the polysaccharide development,resource utilization and quality control in Imperata cylindrica Beauv.
var. major(Nees)C. E. Hubb.
Key words:Imperata cylindrica; Polysaccharide; Phenol - sulfuric acid method
白茅根系禾本科植物白茅 Imperata cylindrica Beauv. var.
major(Nees)C. E. Hubb. 的干燥根茎,又名兰根、地筋、白花茅
根、茅草根、甜草根等[1],广泛分布于全国各地,具有凉血止血、
清热生津、利尿通淋之功效[1,2]。白茅根中含有大量的多糖类成
分,具有调节人外周血 T淋巴细胞免疫功能、抗耐缺氧及抗氧化
等作用[3 ~ 6],具有很高的开发利用价值。然而,关于白茅根多糖
的含量测定迄今仍未见文献报道。本研究对不同产地的白茅根
多糖进行含量测定,建立含量测定方法,并探讨不同产地白茅根
中多糖的含量差异,旨在为白茅根资源的合理开发利用及质量控
制提供实验依据。
1 仪器与试药
CE - 601T型万分之一电子天平[赛多利斯(北京)科学仪器
有限公司],V - 2550 型紫外分光光度计(日本岛津 Shimadzu 公
司) ,高速中药粉碎机(YF - 103,200g,瑞安市永历制药机械有限
公司) ;数显鼓风干燥箱(Gzx - 9070MBE 型,上海博迅实业有限
公司医疗设备厂) ;精密恒温水浴锅(HH - S型,中国江苏省金坛
市医疗仪器厂) ;中国药典专用筛(1 ~ 9 号筛,浙江省上虞市华康
化验仪器厂) ;葡萄糖对照品 (分析纯,国药集团,批号
F20071214)。所有化学试剂均为分析纯(购自国药集团化学试
剂有限公司)。
白茅根样品均于 2010 - 09 分别采自四川安岳、江西新建、江
西九江、江西宁都、江西崇仁、湖北武汉、广东广州、河北石家庄、
安徽砀山、河南郑州、福建邵武,并经江西中医学院刘荣华教授鉴
定,凭证标本存于江西中医学院中药标本室。
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液制备[7] 白茅根用 95%乙醇回流脱脂 2 次,每
次 2 h,药渣自然挥干至无醇味,60 ℃恒温干燥,粉碎,过 4 号筛,
精密称量白茅根粉末 0. 5 g,置于 100 ml 圆底烧瓶中,精密加入
50 ml蒸馏水,称定重量,浸泡 1 h,煎煮回流 1 h,放冷,加水补足
缺失的重量,摇匀,抽滤,精密量取滤液 0. 5 ml,置于 50 ml 容量
瓶中,加水至刻度,摇匀即得。
2. 2 对照品溶液的配制 精密称定 105℃干燥至恒重的葡萄糖
60 mg,置于 100 ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并定容至刻度,充分
摇匀,备用。
2. 3 苯酚 -浓硫酸比色试剂的配制 精密称取苯酚 2. 0 g,置于
50 ml容量瓶中,加蒸馏水溶解并定容至刻度,配制成 4%的苯酚
水溶液。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 最大吸收波长的选择 采用苯酚 -硫酸比色法,精密吸取
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL. 23 NO. 2 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期
葡萄糖对照品溶液、白茅根样品溶液及蒸馏水各 3. 0 ml,分别置
于 3 个 50 ml容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,精密量取上述各
溶液 2 ml,置于 3 个 10 ml容量瓶中,再分别加入 4 ℅苯酚溶液 1
ml和浓硫酸 7 ml,摇匀,40℃水浴中加热 30 min,取出后常温下
放置 5 min,取适量至比色皿中,按照紫外 -可见分光光度法方法
测定,在 200 ~ 600 nm 波长范围内进行扫描,结果表明,葡萄糖对
照品溶液及白茅根溶液在 485 nm 处有吸收峰,而空白对照溶液
(蒸馏水)在该波长下无吸收峰。结果见图 1。
A -空白对照(蒸馏水)UV扫描光谱图,
B -葡萄糖和白茅根溶液 UV扫描光谱图;
a -白茅根样品,b -葡萄糖对照品
图 1 白茅根样品及葡萄糖对照品
溶液 200 ~ 600 nm UV扫描光谱图
2. 4. 2 线性关系考察[1] 精密吸取对照品试液 1. 0,1. 5,2. 0,
2. 5,3. 0,5. 0 ml于 50 ml容量瓶中,加水定容至刻度,摇匀,分别
精密量取上述溶液 2 ml,置于 10 ml容量瓶中,以蒸馏水为空白,
同“2. 4. 1”项下方法操作,在 485 nm处测定吸光度。以葡萄糖对
照品浓度为横坐标,吸光度为纵坐标,根据葡萄糖溶液吸光度的
实际值绘制标准曲线,建立标准曲线的回归方程为:Y = 63. 813X
+ 0. 004 3,R2 = 0. 998 1,线性范围为 0. 002 4 ~ 0. 014 4 mg。结果
见图 2。
图 2 葡萄糖溶液标准曲线
2. 4. 3 精密度实验 取对照品溶液(0. 0048mg /ml)按“2. 4. 2”
项下方法连续平行测定 5 次。结果吸光度平均值为 0. 303,
RSD = 0. 83%(n = 5)。
2. 4. 4 重复性实验 取江西九江样品 5 份按“2. 4. 2”项下方法分
别重复测定 5 次。结果吸光度平均值为 0. 306,RSD = 1. 58%。
2. 4. 5 稳定性实验 取葡萄糖对照品溶液和江西新建供试品溶
液,按“2. 4. 2”项下方法,分别于 0,30,60,90,120,150 min后 6 个
时间段分别测定。测定结果表明,葡萄糖对照品吸光值在所选时
间内相对稳定,而供试品溶液在 2 h 内测定基本稳定,平均吸光
值为 0. 197,RSD = 1. 94% (n = 5)。
2. 4. 6 加样回收实验 精密称取白茅根粉末(产地江西新建)
0. 25 g,共 9 份,分别精密加入葡萄糖对照品适量,按供试品处理
方法,测定其吸光度,分别计算其加样回收率在 98% ~ 102%之
间。结果见表 1。
2. 5 不同产地白茅根样品含量测定 分别精密称取 11 个产地的
白茅根粉末 0. 5 g,分别按照“2. 1”项下方法制备供试品溶液,依
据上述条件测定多糖含量。结果见表 2。
表 1 白茅根多糖加样回收率
编号
样品含
量 m /mg
对照品加
入量 m /mg
测得量
m /mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 150. 50 185. 38 339. 62 102. 02
2 150. 48 185. 31 337. 84 101. 11
3 150. 66 185. 29 337. 37 100. 77
4 150. 59 150. 65 300. 16 99. 28
5 150. 68 150. 62 299. 34 98. 70 100. 50 1. 21
6 150. 57 150. 60 299. 59 98. 95
7 150. 44 120. 35 271. 82 100. 86
8 150. 71 120. 39 273. 17 101. 72
9 150. 59 120. 41 272. 35 101. 12
n =9
表 2 不同产地白茅根样品多糖含量
产地 吸光值
多糖含量
C /mg·g - 1
吸收波长
λ /nm
安徽砀山 0. 334 516. 67 485
江西九江 0. 303 474. 82 485
江西崇仁 0. 202 316. 55 485
福建邵武 0. 454 711. 45 485
江西新建 0. 192 300. 88 485
江西宁都 0. 212 332. 22 485
广东广州 0. 238 372. 96 485
河南郑州 0. 227 355. 73 485
河北石家庄 0. 234 366. 69 485
湖北武汉 0. 386 604. 89 485
四川安岳 0. 251 393. 34 485
n =3
3 讨论
3. 1 波长的确定 通过在 200 ~ 600 nm波长范围内对空白溶液、
葡萄糖对照品溶液以及白茅根样品溶液进行扫描,结果表明,对
照品与供试品均在 485 nm 处为最大吸收峰,且空白溶液在该波
长处无吸收干扰。因此确定测定波长为 485 nm。
3. 2 苯酚的浓度的确定 实验过程中采用苯酚 -浓硫酸比色法
测定,分别考察了文献报道和《中国药典》采用的 7%与 4%苯酚
溶液[7],结果显示 7%的苯酚对样品会降低紫外吸光值,因此采
用的 4%苯酚浓度。
各产地白茅根多糖含量差异性比较显著,以福建邵武的白茅
根多糖含量为最高(711. 45 mg /g) ,其次是湖北武汉(604. 89 mg /
g) ,以江西新建产地白茅根的含量最低(300. 88 mg /g) ;从 11 个产
地白茅根多糖含量分析结果来看,江西、广东、河南、河北这 4 个产
地白茅根多糖含量水平相当,而福建、湖北、安徽、四川这 4 个产地
的含量相对较高。通过不同产地的白茅根的多糖的含量比较,为
白茅根药材产地的选择及质量控制方法提供一定的依据。
参考文献:
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时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 2 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL. 23 NO. 2