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　·中药与天然药·
基金项目:国家高技术研究发展计划项目(2002AA2Z3226)
作者简介:于鲁海 ,男 ,硕士 ,副主任药师　　Tel:(0991)8562367　　E-mail:ylh0226@sohu.com
综合评分法优选驱虫斑鸠菊的提取工艺
于鲁海 ,孙力 ,李燕菊 ,尚靖 ,徐建国(新疆维吾尔自治区人民医院临床药学研究所 ,乌鲁木齐 830001)
摘要:目的　优选驱虫斑鸠菊的最佳提取工艺。方法　采用正交试验设计 , 以紫铆素含量 、总黄酮含量及浸膏得率为指标 ,考
察影响提取的因素。结果　驱虫斑鸠菊的最佳提取工艺为加入 10倍量水 ,浸泡 1 h, 煎煮 1 h,共 3次。 结论　该工艺可提高
驱虫斑鸠菊的提取率 。
关键词:驱虫斑鸠菊;正交试验;综合评分法;提取工艺
中图分类号:R931.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2007)05-0373-03
StudyonExtractionTechniquesforVernoniaanthelminticabyGradingMethods
YULu-hai, SUNLi, LIYan-ju, SHANGJing, XUJian-guo(TheClinicalMedicalInstituteofXinjiang, Urumqi, 830001,
China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　TooptimizetheextractiontechniquesforVernoniaanthelminticaWild.METHODS　Conditionsforthe
extractionwerestudiedbyorthogonaltestdesignaccordingtotheresultsofthecontentsofbutin, totalflavonoidsandtheextractionrate
intheextract.RESULTS　Theoptimumextractingprocedurewas:using10 timesvolumeofwaterforeachtime, marinatingonehour
andthenboilingforthreetimessustainingforonehoureachtime.CONCLUSION　TheextractionefficiencyofVernoniaanthelminti-
caWilld.canbeincreasedbypresentprocedure.
KEYWORDS:VernoniaanthelminticaWild.;orthogonaltest;gradingmethods;extractiontechniques
　　驱虫斑鸠菊(VernoniaanthelminticaWild.)为菊科一年
生草本植物 , 是新疆维吾尔医习用药材。其药用部位为驱虫
斑鸠菊植物的成熟果实 , 具有清除异常黏液质 、驱虫 、消肿 、
散寒止痛的作用 , 用于治疗湿寒性胃痛 、肝病 、白癫风等
症 [ 1] 。目前主要用于治疗白癫风 , 其所含的治疗白癫风的活
性成分以黄酮类化合物为主 , 紫铆素为活性成分之一。本实
验采用正交试验设计 , 以浸膏收率 、紫铆素和总黄酮含量为
指标 , 通过综合评分优选驱虫斑鸠菊水提取工艺条件。
1　材料和仪器
驱虫斑鸠菊成熟果实采自新疆阿克苏地区扎木台乡 ,经
北京医科大学药学院天然药物教研室艾铁民教授鉴定为菊
科植物驱虫斑鸠菊(VernoniaanthelminticaWild.);芦丁对照
品(供含量测定用 ,中国药品生物制品检定所), 紫铆素对照
品(自制 ,色谱纯度大于 99.0%);乙腈为色谱纯 , 其余试剂
均为分析纯。
Agilent1100高效液相色谱仪(美国安捷伦公司);Agi-
lent8453紫外分光光度计(美国安捷伦公司);电子天平(德
国 Sartorius)。
2　方法与结果
2.1　紫铆素含量测定方法
2.1.1　色谱条件　色谱柱:ZORBAXSB-C18(4.6 mm×250
mm, 5 μm),流动相:乙腈-0.02 mol· L-1磷酸二氢钾溶液(0
min, 16∶84;20min, 16∶84;50 min, 24∶76;60 min, 16∶84), 流
速:1.0 mL· min-1 , 检测波长:280 nm, 柱温:室温 , 进样量:
20 μL。
2.1.2　线性关系考察　取紫铆素对照品适量 , 精密称定 ,置
适宜量瓶中 , 加甲醇溶解并用流动相稀释至刻度 , 制成 0.099
mg· mL-1的对照品溶液。 精密吸取对照品溶液 0.5, 1.0,
2.0, 3.0, 4.0, 5.0mL,分别置 5 mL量瓶中 , 加流动相稀释至
刻度 , 摇匀 ,分别吸取上述溶液各 20 μL,进样测定。 以紫铆
素浓度(C, mg)为纵坐标 , 峰面积(A)为横坐标 , 绘制标准曲
线。所得回归方程:C=0.00007A+0.0018, r=0.999 9。在
0.0495 ～ 0.495 mg内 , 紫铆素浓度与峰面积积分值有良好线
性关系。
2.1.3　精密度试验　同一供试品溶液重复进样 6次 , 结果
紫铆素峰面积积分值的 RSD为 0.79%。
2.1.4　稳定性试验　同一供试品溶液 , 在 24 h内分别于不
同时间进样 , 结果紫铆素峰面积积分值的 RSD为 0.41%。
2.1.5　重复性试验　取同一批号驱虫斑鸠菊药材平行处理
6份 ,测定 , 结果药材中紫铆素含量的 RSD为 1.45%。
2.1.6　回收率试验　取已知含量驱虫斑鸠菊药材适量 , 共 9
份 , 按高 、中 、低三个浓度分别加入对照品约 0.80, 1.00, 1.20
·373·中国现代应用药学杂志 2007年 10月第 24卷第 5期　　　　　　　　　　　　　　　ChinJMAP, 2007October, Vol.24No.5
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2007.05.003
mg各 3份 ,加入 10倍量提取溶媒 , 回流提取 3次 , 每次 1 h,
合并 , 浓缩 ,定容 , 过滤 , 进行测定 , 结果平均回收率 90.2%,
RSD为 2.8%。
2.2　驱虫斑鸠菊总黄酮含量测定 [ 1]
以芦丁为对照品 ,经 NaNO
2
-Al(NO
3
)
3
-NaOH显色反应 ,
在波长 510 nm处测定吸光度值 , 以芦丁浓度 C(mg)为纵坐
标 , 吸光度值 A为横坐标 , 绘制标准曲线。所得回归方程为
C=0.7974A+0.0029, r=0.999 3。总黄酮含量以芦丁计在
0.05065 ～ 0.5065mg之间呈良好的线性关系。
2.3　浸膏得率的测定
精密移取驱虫斑鸠菊提取液 15 mL, 置于干燥至恒重的
蒸发皿中 , 水浴蒸干 ,残渣于 105℃干燥至恒重 ,取出 , 置干燥
器中放置 30min后迅速精密称定重量。
2.4　工艺优选
通过单因素实验设计 ,以综合评分法为评定指标 , 确定
驱虫斑鸠菊提取溶媒为水 , 在此基础上 , 根据初步筛选的结
果 , 按表 1设定的因素水平表进行正交试验 , 优化提取工艺
条件。
表 1　因素水平表
Tab1　Factorsandlevels
水平
因　素
浸泡时间 /h
(A)
溶媒量 /倍
(B)
提取时间 /h
(C)
提取次数
(D)
1 2 6 1 1
2 1 8 1.5 2
3 0 10 2 3
　　称取驱虫斑鸠菊成熟果实 9份 ,每份约 10 g, 按 L9(34)
正交表的条件分别进行提取 ,过滤 , 合并滤液 ,适当浓缩或稀
释 , 定容至 100mL,离心 , 取上清液分别测定紫铆素含量 、总
黄酮含量和浸膏得率 , 并进行多指标综合评分。评分时以各
指标的最大值为参照将数据进行归一化 , 再给出不同权重。
紫铆素含量﹑总黄酮含量和浸膏得率的权重系数分别为
0.5, 0.4, 0.1。以综合值进行统计分析 , 见表 2,表 3。其中综
合评分 Y=0.5×X1 ×100/0.758 +0.4×X2 ×100/34.28 +
0.1×X3×100/119.0。
表 2　L9(34)正交试验设计表及结果
Tab2　ResultofL9(34)orthogonaltest
实验号
因　素
A B C D
评价 指 标
紫铆素含量
/mg· g-1
总黄酮含量
/mg· g-1
浸膏得率
/mg·g-1 综合评分
1 1 1 1 1 0.274 12.70 63.60 38.24
2 1 2 2 2 0.514 23.86 100.70 70.21
3 1 3 3 3 0.758 27.60 119.00 92.21
4 2 1 2 3 0.549 28.03 109.60 78.13
5 2 2 3 1 0.332 27.24 76.00 60.07
6 2 3 1 2 0.553 34.28 95.20 84.48
7 3 1 3 2 0.422 30.09 99.20 71.28
8 3 2 1 3 0.613 25.91 103.10 79.33
9 3 3 2 1 0.362 24.41 76.80 58.82
k1 66.88 62.55 67.35 52.37
k2 74.23 69.87 69.05 75.32
k3 69.81 78.50 74.52 83.22
R 7.35 15.95 7.17 30.85
表 3　综合评分方差分析表
Tab3　Varianceanalysisofgradingmethods
方差来源 离均差平方和 自由度 均方 F值 P值
B 382.63 2 191.31 4.61 0.0916
D 1540.48 2 770.24 18.55 0.0095
误差(A+C) 166.12 4 41.53
注:数据处理采用 EMPS3.1软件包
Note:datawasanalyzedbyEMPS3.1
直观分析表明 , 以综合评分为标准 , 在所选因素水平范
围内 , 提取次数对驱虫斑鸠菊的提取效率影响最大 ,其次为
溶媒量 , 浸泡时间和提取时间的影响最小。由于因素 A和因
素 C的影响较小 , 故列为误差项进行方差分析 , 结果表明 ,因
素 D为主要影响因素 , 具有统计学意义(P<0.01), 因素 A
和因素 C的影响则无统计学意义 。综合考虑 ,选择最佳提取
条件为 A2B3C1D3 , 即加入 10倍量水 , 浸泡 1 h, 煎煮 1 h, 共
3次。
2.5　验证试验
根据正交实验结果筛选的工艺条件 A2B3C1D3 , 进行 3
批验证试验 , 得驱虫斑鸠菊药材中紫铆素含量(0.712 ±
0.019)mg· g-1 ,总黄酮含量(29.57±0.48)mg· g-1 ,浸膏得
率(98.77±2.02)mg· g-1。
3　讨论
采用多指标综合评分法进行工艺优化 , 需解决两个问
题。一是指标间量纲不一致和指标间的矛盾问题 , 此问题可
通过适宜的数学运算予以解决;另一问题则是由于指标间的
重要性很难明确 , 故权重系数的给予存在困难。本实验通过
观察测定指标与药效筛选结果的相关度以及各指标测定方
法的准确性确定权重系数。因为在体外筛选试验中 , 紫铆素
和驱虫斑鸠菊总黄酮均有促进黑色素细胞增殖的作用 , 所以
权重系数较大;由于总黄酮采用以芦丁为对照品 , NaNO2-Al
·374· ChinJMAP, 2007October, Vol.24No.5　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2007年 10月第 24卷第 5期
(NO3)3-NaOH的显色反应方法进行含量测定 , 尽管此方法
应用很普遍 , 但与高效液相色谱法测定紫铆素含量相比 , 其
分析方法的专属性稍差 ,故确定紫铆素和总黄酮的权重系数
分别为 0.5和 0.4。另外 , 尽管认为在有效成分明确时 , 浸膏
得率越高纯度越低 , 但考虑到中药成分的复杂性 , 同时存在
许多对药效有贡献的活性成分不甚清楚以及中药治疗机制
可能是多组分﹑多靶点的作用方式 , 因此 , 设定浸膏的权重
系数为 0.1。
REFERENCES
[ 1] TheDrugsStandardofMinistryofHealthPeoplesRepublicof
China-UygurTraditionalMedicineFascicule(中华人民共和国
卫生部药品标准—维吾尔药分册)[S].1999:47, 150.
收稿日期:2006-10-21
作者简介:段晓颖 ,女 ,硕士生导师 ,副主任药师　　Tel:(0371)66233639
正交试验法优选马钱子醇提工艺研究
段晓颖 (河南中医学院第一附属医院药学部,河南 郑州 450000)
摘要:目的　优选马钱子最佳醇提工艺。方法　采用正交试验法 , 以士的宁的含量为考察指标 , 对乙醇浓度 、乙醇用量 、回流
时间和次数等因素进行研究。结果　最佳提取工艺为加 65%乙醇 10倍 , 回流 3次 ,每次 1h。结论　该提取工艺合理 ,为工业
化生产提供了科学依据。
关键词:马钱子;士的宁;正交试验;高效液相色谱
中图分类号:R931.6　　　文献标识码:A　　　文章编号:1007-7693(2007)05-0375-03
OptimalExtractionTechnologyofSemenstrychnibyOrthogonalDesign
DUANXiao-ying(DepartmentofPharmacy, TheFirstAffiliatedHospitalHenanCollageofTCM, Zhengzhou450000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　Tooptimizetheethanol-extractiveprocessforSemenstrychni.METHODS　Theorthogonaltestdesign
wasusedinthestudiesofethanolconcentraction, amountofsolvent, extractiontimeandextractionfrequency, andcontentofstrychine
wasusedinthetestasguide.RESULTS　Theoptimalconditionwasadded10 timesamountof65% ethanolforthreetimesand1
hourforeachtime.CONCLUSION　Theextractiontechnologyisreasonableandprovidescientificbasisforindustrializeprocess.
KEYWORDS:Semenstrychni;strychine;orthogonaltest;HPLC
　　马钱子 [ 1]为马钱科植物马钱 Semenstrychni的干燥成熟
种子 , 用砂烫法炮制。具有通络止痛 , 散结消肿的功效 ,用于
风湿顽痹 , 麻木瘫痪 , 跌扑损伤 , 痈疽肿痛;小儿麻痹后遗症 ,
类风湿关节痛。制马钱子含生物碱类成分 , 有士的宁(番木
鳖碱)、伪番木鳖碱 、马钱子碱 、伪马钱子碱等 ,它们易溶于乙
醇 , 本实验以主要成分士的宁的提取量为指标 , 采用正交试
验法优选马钱子的醇提工艺。
1　仪器与试药
高效液相色谱仪(日本岛津 10ATVP型), 电子天平(德
国 sartoriusBS210s), 制马钱子(来源:安徽亳州), 士的宁对
照品(0705-9304, 供含量测定用 , 中国药品生物制品检定
所), 甲醇 、正己烷 、二氯甲烷均为色谱纯 , 其他试剂均为分
析纯。
2　方法与结果
取制马钱子粗粉 18份 ,每份 30 g,按照 L9(34)正交试验
表 ,加乙醇回流提取 ,同一号试验重复 1次 [ 2] , 测定乙醇回流
液中士的宁的含量 ,以士的宁的提取量为指标进行工艺优选。
2.1　试验设计表
正交试验考察因素为乙醇浓度 ,加醇倍数 ,回流时间 ,回
流次数 , 每个因素选择三个水平 , 见表 1。
表 1　因素水平表
Tab1　Thefactorsandlevels
水平 乙醇浓度 /% 乙醇量 /倍 时间 /h 次数
1 95 6 1 1
2 80 8 2 2
3 65 10 3 3
2.2　回流液中士的宁的测定方法
2.2.1　色谱条件　色谱柱为 AgilentZORBASIL(4.6 mm×
150mm, 5 μm);流动相:正己烷-二氯甲烷-甲醇 -浓氨试液
(42.5∶42.5∶5∶0.35);检测波长:254 nm;柱温:室温 , 流速:
1.0 mL· min-1;理论塔板数按士的宁峰计算应不低于
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