全 文 ：C肠 n叹 Joa u rn lo f Nw e Du rgs Z因七如【卫型丛四〔] z王玉 ,张品 , 陈西敬 ,等 , 高效液相色谱法侧定对乙酞氮基酚的
血药浓度及其生物利用度 〔J] . 中国临床药学杂志 , 2阅 2 , n
( 2 )
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〔3〕 杨俊毅 ,蒋学华 ,林舒 ,等 . R P泪田 L C 同时测定血浆中对乙酞氨
基酚和咖啡因的浓度【J] . 华西药学杂志 , 2 003 , 18 ( 2 ) : 1 10 一
1 12
.
(收稿 日期 : 2 0 0 4 一 0 5 一 17 )
白茅根多糖对人 T 淋巴细胞免疫调节效应的研究 关
吕世静 1 ,黄槐莲 l ,袁汉尧 ` ,何 德` ,龙启才“
( 1 广东医学院临床免疫学教研室 , 湛江 52 4 023 ;2 中山大学中山医学院 ,广州 510089)
[摘要 1 目的 :研究白茅根多糖 ( R IP )对经植物血凝素 ( P H A )诱导的人外周血 T 琳巴细胞增殖与细胞周期的
影响。 方法 : 以 M T I、 比色法及流式细胞术检测。 结果 : 白茅根多糖对 PHA 诱导的正常人外周血 T 淋巴细胞增殖
有显著的促进作用 (尸 < 0 . 0 5 ) ,并能促进细胞从 1G 期进入 S 期 。 结论 : 白茅根多糖具有调节人外周血 T 琳巴细胞
免疫功能的效应 。
〔关挂词 l 白茅根多糖 ; T 细胞 ; 细胞周期 ;增殖
[中图分类号 ] 2R 8 5 . 5 ; 3R 92 . 6 [文献标识码 ] A [文章编号 ] 10() 3 一 37 34 ( 2 004 ) 0 9 一 08 34 一 0 2
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Co n c l us ion
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白茅根是一味常用中药 ,其化学成分中三菇类化
合物和糖类占 18 . 8 % 仁`〕。 此药具有清热凉血 、 解毒
利尿作用 ,常用于治疗急性肝炎黄疽 、小便不利和急
性肾炎水肿等〔` ,2] 。 白茅根能增强小鼠腹腔巨噬细胞
的吞噬作用和白细胞介素一 2 ( IL 2) 的产生 s[] , 但其对
人外周血 T 淋巴细胞的免疫药理作用及其药物免疫
作用的有效成分作者未见文献报道 。 为探讨白茅根
的药物有效成分 ,本实验考察从白茅根中提取的白茅
根多糖 (盗
~
i l n 介翔女昭 R鸡悦比hi ` des
,
R IP )对正
常人外周血 T 淋巴细胞增殖和细胞周期的影响 。
材料与方法
1 药物 、试剂与仪器
白茅根多糖系用产自雷州半岛新鲜的白茅根
mI 介 ar at 〔:yl i dn ir ca ( L . ) P . eB au v . V ar In aj ar
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.
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, 提取物 (湛江吉民制药股份有限
公司 ) 。 四甲基偶氮噢盐 ( M T T ) 、 碘化丙陡 (PI )为
iS g n l a 产品 , R PM I一 1 6 4 0 培养基 (美国 G IB (刀 ) ;流
式细胞仪 , M R 一 71 0 型酶标仪 。
2 方法
2
.
1 外周血 T 淋巴细胞分离 取健康志愿者外周
静脉血 ,分别用肝素 ( 1o U . n 1 L 一 ’ )和双抗 (青霉素
l o .u
n 1 L
一 1 、链霉素 l o U . n 1L 一 ’ )无钙镁磷酸缓冲
液 ( P l贾二)稀释后 , 用 iF co n 淋巴细胞分层液分离 T
淋巴细胞 , 经 P B C 洗涤 2 次 ,最后用含 10 % 小牛血
清和双抗的 R PM I一 16 40 培养液调整细胞数为 l x
、 基金项目 :广东省重点科技项目资助 ( 20(] 0 , ZK加0[ 4 20 65 ) ;湛江市科委科技三项项目资助 ( 2 00() 3A )
8 3 4
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一 ’备用 。
2
.
2 T淋巴细胞增殖活性测定[ 4l采用 M T T比
色法 ,将上述制备的细胞加人 % 孔培养板中 ,加人
不同浓度 R I P ( 2一 600拌g ·毗一 ’ ) , 培养 z o h 后加人
植物血凝素 (P H A )使终浓度 为 10 四 · rnL 一 `
,置于
37 ℃ , 5 % C q 饱和湿度条件下培养 72 ;h 于培养结
束前 4 h 加人 M T T (唾哇蓝 , 浓度 smg · m L 一 ` ,每孔
加 10拌)L , 4 h 后用酸化十二烷基磺酸钠 ( , 〕 S )终止
反应 ,以 M卫 一 7 10 型酶标仪测定 A 值 (参考波长
630urn
, 检测波长 5 7 0nr ) 。
2
.
3 F A Cs
can 流式细胞仪测定细胞周期 [ 4」 用不
同浓度的 R IP (20 和 10 0拼g · m L 一 ` ) 与 T 淋巴细胞
(细胞数为 5 X 10 6 · rnL 一 ’ )
、
pHA ( 100滩
·毗 一 ’ )共
育 7 2h 后收获细胞 ,冷 I〕B S 洗涤 2 次 ,用 7 0 % 乙醇
棍匀细胞备用 ;上机前用 PBS 洗涤后再用 PBS 调整
细胞浓度为 1 只 10 “ · m L 一 ` , 加人 NR A 酶 50 雌
·
m L
一 ` ,
37 ℃水浴 30 而 n 后置于冰浴终止反应 , 每 1
毫升细胞悬液加 IP 染液 10 群L ( 1拼g’ m L 一 ’ ) , 置暗
室中 30m in 。 最后用 F AC S can 流式细胞仪分析细
胞周期 。
3 统计学分析
实验结果采用方差分析 。
结 果
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R IP 能明显促进经 P H A 活化的 T 淋巴细胞
1) N A 合成增加 , 使 T 细胞从 G l 期进入 S 期 , 结果
见表 2 。
表 2 F J p 对 P HA 诱导的 T 淋巴细胞周期的影响
aT b 2 E f卜又 t o f IR P on T ce l l c ycl ign
p ha 阴 耐此曰 勿 P HA 勇 士 、 , n 二 23
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R lp 细胞增殖周期组 别 ` 一_一一 一 /沐唱 , 证 曰 一 ’ G l S GZP日A 对照1牛叭 + IU PP H A + R IP l劝的 82 . 29 士 4 . 1475 . 3 8士 4 . 37 6 . 53 土 3 . 82 5 67 土 1 . 0215 1 1士 l . 94 B1 1 30 士 2 , 08 “ 12 . 37 土 3 9 111 . 6 5士 4 . 刁113 84 士 3 9 1与 1耳认对照组 比较 a 尸 < 0 05
1 对 P H A 活化的 T 淋巴细胞增殖的影响
经 P H A 活化后的 T 淋巴细胞在不 同浓度的
R IP 作用下孵育 7 2 h , M T r 比色法测定。 结果显
示 :当 R IP 的浓度在 (5 一 120) 雌 · m L 一 `时 ,对 T 淋
巴细胞增殖的促进作用随 R IP 浓度加大而增强 ,其
吸收度值明显高于 P HA 对照组 (尸 < 0 . 05 ) ;当 R IP
浓度大于 120 陀 · rnL 一 `时
, 其促进 T 淋巴细胞增殖
的作用反而减弱 。 结果见表 1 。
表 1 R I P 对 T 淋巴细胞增殖的影响
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Of T I抑叩 b K尹e 厉 土 s , n 二 2 3
讨 论
本研究用 M了1, 比色法和流式细胞仪分析法测
定了不同浓度白茅根多糖对 P HA 活化的人外周血
T 淋巴细胞增殖的影响 。 流式细胞仪分析法直接 ,
较准确地证明了 R IP 主要作用于细胞周期的 S 期 ,
并直接观察细胞内 1) N A 的含量 , 证明 IR P 对正常
人外周血 T 淋巴细胞增殖有明显的促进作用 。 淋
巴细胞增殖试验是目前检测 、 判断 T 淋巴细胞免疫
功能的一项可靠 、 又能说明问题的常用检测实验方
法 。 2 种检测方法均显示出 R IP 对 T 淋巴细胞的增
殖有明显的促进作用 。 本研究初步发现白茅根多糖
对正常人 T 淋巴细胞有免疫调节效应 ,是否是由于
白茅根多糖也能作用于乙型肝炎患者体内的 T 淋
巴细胞 、增强调节宿主的细胞免疫功能 ,从而达到消
灭清除乙型肝炎病毒在宿主体内持续增殖致病的免
疫效应 ,使乙型肝炎患者康复 ,很值得深思 。 本研究
观察了茅根多糖对正常人外周血 T 淋巴细胞的直
接调 节作用 , 其结果与实验动物研究的结论类
似虹3 3。 也许能从实验室角度 , 为今后研究白茅根药
用于治疗乙肝提供理论依据 , 找到新的切人点和突
破 口 。
〔作者简介〕 吕世静 ( 19 59 一 ) , 男 , 副教授 , 主要从事抗感染
免疫及肿瘤免疫研 究。 联系电话 : ( 07 59 )2 388 53 5 。
参 考 文 献
组 别
R王八对照
P卜认 + R IP
R IP /叹 . 翻 L 一 1
黄泰康 .现代本草纲 目〔M」北京 : 中国医药科技出版社 , 2 0 01 .
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与 1啊八对照组 比较 , a : P < 0 05
2 对 P H A 活化的 T 淋巴细胞周期的影响 (收稿 日期
: 2 00 4 一 0 3 一 10 )
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