全 文 ：.了 9 .
胃癌患者的 T细胞亚群和刀豆素A 诱导
抑制细胞功能测定
上海第二医科大学附属新华医院内科 、 消化病研究三室
梁松林 陆汉明 李定 国 顾鹤定 施强 华 蒋祖明
内容提要 对 8 4例胃癌患者和 5 4例对照受试者测定了刀豆素A 诱导抑制细胞 ( C七 nA 一S C) 功
能和单克隆抗体鉴定的 T细胞亚群。 测定结果表明进展期胃癌伪 nA 一S C功能和 OK T鑫细胞 与对
照组相比都有显著的升高 ,
oKT
别q业言细胞比值则割卜常显著的下降。 相关性检验示 C O D A 一SC
功能同 。 E 理志细胞未达到统计学上显著程度 , 而同 O E T 刻O E丁右细胞比值有显著负相关 。 21 例胃
癌患者手术后较手术前的 C o几A一 SC 功能有非常显著的下降 ; 26 例胃癌患者化疗前后无显著统计
学差异。 同样 , 用 风 。 , 细胞代替自身淋巴细胞作靶细胞测定 C七n A一阴 功能发现癌症组较非癌对
照组也有非常显著的差异。 结果提示 C七几A一CS 功能与癌肿负荷有关 。
胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一 , 居
消化道癌肿之首 。 先前我们对胃癌的免疫学
研究主要根据 T 细胞亚群及胸腺后前体细胞
的表面标志从数量上进行研究 l3L 阅 。 本文的
目的在于研究机体在正常和带瘤情况下及带
瘤不同病期 T 细胞亚群数量和功能两方面的
变化 , 以判定它们对肿瘤的辅助诊断 、 观察疗
效 、 估计预后和监视复发的理论意义和实用
价值 。
材料 和 方 法
一 、 检侧对象:
(一 ) 胃癌组 84 例 , 均经胃镜活检和手
术后病理证实 。 其中男性 61 例 ,女性 23 例 ,
平均年龄 5 5 岁 ( 1 7~ 7 3岁 ) , 胃癌分期按 1 , 8 1
年全国胃癌协作组会议 T N M 分期 。
(二 ) 对照组共 45 例 ,其中 1 5 例为良性
胃病 , 8 例为其他癌肿 (肝 、 结肠 、 乳腺瘩 ) , 均
有病理证实 , 2 例为正常成人 (男性 21 例 ,
女性 2 4 例 ) 。 平均年龄 4 7 岁 ,范围 ( 1 7~ 6 9
岁 ) 。
二 、 检侧方法 :
(一 ) C沁立人 致分裂反应和及 C o几乙正幻
功能侧定参照 S五阅 和盛慈珍阅的方法 。
(二 ) 另用 K “ , 细胞 (人白血病细胞株 )
作靶细胞测定 C o n A白 5 0 活性 L’ ]闺 。
co n A
we s o 诱导相培养为 48 小时刃。 n 人
浓度为 20 鳍 /回 , 效应相中 K o . , 细胞 诱 导
细胞 ( C o n A - 5 0 和对照细胞 )等比配对 ,培养
48 小时 ,终止培养前 16 小时加入 . H - T d R I
四叮功 l ,收获计数同方法 (一 ) 。
(三 ) T 细胞亚群用 O K T 系统单 克隆
抗体 ( O R T HD P h a m a e eu t i e a l oC , U S人 ) 以
直接荧光法测定闭 。
采取受试者空腹静脉血 s m l , E D印人 抗
凝 , 磷酸缓冲液稀释 2一 3 倍 , 加入含 侧 o of l
液试管中 , 4 0 9 离心 20 分钟 , 吸取单个核细
胞层 , 洗涤后计算并调节细胞到 l x 10 1/ m l 。
实验管单克隆抗体悬液与计数的单核细胞 :1
10 稀释 ,对照管内不含单抗 , 置于 2吧一 8℃
冰箱经 30 分钟 , 加入计算介质后制片 , 即刻
在荧光显微镜下检查 。
结 果
一 、 胃福和对照组 C o n A e S C 功能的比
较 : 图 1 。 正常人 ( 2 例 ) oC n A 一 S C 功能为
3 1
.
6 8 士 22 . 9忍% ; 良性胃病 ( 1 5例 )为 3 0 . 1 4 土
2 2
.
9 7形 ; 胃癌 I 期 ( 7例 ) 为 2 7 . 5 1 士 2 2 . 1 3
目二 83 n =2
n 二2 ? n = 15
牟丰考翔
八énU月,`
正常
对照组
晓性
胃病组
胃筋组
l 期
胃瓜姐
!
. 一 八期
图 1 胃癌和对照组 O n A一 SC 功能的比较
拓 ; 胃癌 ( 1一 IV 期 ) 为 5 3 . 6 7 士 2 1 . 3 3终 。 以
上资料经方差分析 ,正常对照与良性胃病 、 胃
疡 I 期 C o n A 一 5 0 功能相比 ,无显著差异 , 正
常对照与进展期胃痛 C o n A一 SC 功 能 相 比 ,
有非常显著差异 (尸 < 0 . 01 ) , 良性胃病 、早期
胃庙与进展期胃癌 C o n A一 s C 功能相比也 有
显著差异 ( P < 0 . 05 ) 。
二 、 , 瘤息者手术前后 C o n A名 C 功能
的比较 : 图 2。 2 2例胃癌患者手术前 Con A -
5 0 功 能 为 58 . 8 5土 29 . 30 拓 , 术 后 降 至
2 8
.
8 5 士 2 0 . 5 9% , 有极显著差异 ( P ( 0 . 0 1 ) 。
三 、 胃盛息者化疗前后 co . . Awe S C 功 能
的比较 : 图 3。 2 6 例胃盛患者经用 S F u , C O
N U
、 自力霉毒等方案治疗 , 化疗前 oO n A一C
功能为 3 3 . 3 5 士 2 2 . 0 9% , 化疗后为 2 6 . 1 9 士
16
.
82 %
,统计学上无显著差异 。
四 、 用 K 。 . : 细胞为靶细胞侧 定 oC n A -
S C 功能在一店 和非痛对照组中的 比较 : 图
4
。 胃癌组 ( 2 例 )的抑制率为 6 . 0 士 5 . 84 % ;
非癌对照组 (包括正常对照和 良性胃病 20 例 )
为 27 . 7 士 14 . 58 % , 两者有非 常 显著 差 异
( P < 0
.
0 1 )
。
五 、 13 例受试者同时以两种不 同 的 靶
细胞 测定 C o n A se S C 功能的比较 : 图 5。 相关
性检验 二 = 一 0 . 42 7 ( P ) 0 . 0 5 ) , 无显著统计
学意义 。
术前 术后
图 2 胃痛息者手术前后 Oo 几A we S C 功能
B丑
万
n 匕 26
化疗前
图 3 胃庙息者化疗前后
化疗后
伪 n A一 S C 功能的比车交
六 、 , 翻 、 其他启肿和非盛对用姐的 T
细施亚群 (用单克隆杭体鉴定 )荧先法侧定 :
n二 0 2
n二 13
r二 0 . 416
s e r卜| L ll几 f印0 43 20 1
裂舰 O Ss e V uc层霭霖理思田羡缺契布皿
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。。。。七”.公。二、”:…
2 ( ) 4 0 60 8〔) 10 0
K铭 : 细胞为靶细胞 C。 刀人一 S C 活性
图 5 用两种不同的靶细胞检测 OC n A一 S C
活性的比较
对照组 胃癌组 无显著差异 。 O K T玄细胞在胃癌组和其他癌
图 4 以 K “ 2 细胞为靶细胞检测 oC nA一 c 功 症组比正常对照 组 显 著 降 低 ( p < 0 . 0 5) 。
能胃癌和对照组的比较 O K J ,衷细胞在胃癌组 、 其他癌症组和各对照
O K T 系统在胃癌组和其他癌症组 之 间 组之间无显著差异 。 O K T在细胞在胃 癌 组 、
表 1 胃癌 、其他癌肿和非癌对照组 T 亚群的检测结果
} 正常对照 良性胃病 胃癌 n 一 I v 其他癌肿 胃癌术后 > 3年一— 阵二生` 一上生一一土兰一一二立O K T一 ” 7· 5 8士 5 · 4 8 “ 8·邓 士 6· 24 印 · 4 7士 7 · 7 6* “ 2· 8 7士 7· 。 8* ” 5· 6 7士 4 · 59O K T 价 · 91 士 4· 7 1 豁 · 2 6士 6· 0 5 32 · 8 9士 “ · 3 8 ” 5· 6 2士 3· 7 0 ” 6· , 6 士 ” · 8O K T言 _ { 邪 · 6 7士” ·助 27 · 6 士 ” · 7 5 ” 3· 8 , 士 ” · 8 1* * ” 3·加一 士 ” · 2 7O K T麦/o K T志 】 ] · 4 士 o · 18 1 · 38 士 o · 1 7 0 · 9 8 士 o · 1 3水 * 1· 10 士 0 · 15* 1 · 2 士 0· 2 1字* 尸 < .0 肠 * * P < 0 . 01其他癌症组与正常对照组和 良性胃病组相比有非常显著的升高 ( P < 0 . 01 卜 胃癌术后 3
年与对照组相比无明显升高 。 O K T刀OK T右
细胞比值在胃癌组比正常对照组和 良性 胃病
组有非常显著降低 ( P < 0 . 0 1 ) , 而其他癌症
和胃癌术后 3 年以上者与正常对照相比也有
显著的降低 (p < 。 . 0 5 ) 。
七 、 1 2 例 受试者 C o n A e S C 功能和 O K
T 系统 T 亚群相关性比较 :
c 。。 人侣 c 功能和 OK T 孟细胞相关性检
验 犷 二 0 · 4 71 , 尸> 。 . 05 , 无显著统计学意义
(图 6) ; C o n A - 5 0 功能和 OK T鑫细胞比值相
关性检验 二 = 一 0 . 6 1 2 , P < 0 . 05 , 有显著统
n = 11
r二 0 . 4 71
ǎ袂à彭窿O切l峨口。
20 40 60 80 10 。
O K T志细胞计数
图 6 C o n A 一 S C 功能和 O K 丁奋细胞的关系
计学意义 (图 7 )。
n= 1 1
OK T郭 OK T 右比值
Co n A
一 0 5功能和 OK T 创 OK T 言比值的关系
溶性物质释放增多有关 。 手术切除原发癌肿
后 ,抑制细胞活性下降 , 癌症根治术后存活 3
年以上者抑制细胞活性无 明显升高 , 部分复
发病人 C o n A 一S C 有升高趋势也佐证了抑 制
细胞活性升高可能是一种继发现象 。
三 、 C o n A一 S C 与胃癌临床的关系 : C o n
A 一S C 功能是一项非特异性免疫指标 , 而且
变异较大 , 应当承认它不能对癌症作出早期
诊断 。 但从癌瘤发生 、 发展和转归的全过程
来看 ,它对胃癌患者病期及预后的估计 、 临床
疗效的判断 、 复发的监视颇有意义 。 在临床
动态观察中 , 以未经手术 、 化疗和免疫疗法时
C o n A一 s C 功能作为自身对照的依据 , 似更合
理 [ i 〕〔1 0 〕 。
胃癌的化学疗法是综合治疗的一 部 分 ,
化疗对机体免疫状态影响如何 , 各家说法不
一 。本实验对 26 例胃癌患者化疗前后 C o n ~A
S C活性进行观察 ,发现化疗并未使 C o n A一 50
活性显著降低 , 这可能与本资料中接受化疗
的胃癌患者大多为进展期有关 。 一般随病期
进展 , 抑制细胞活性本身就有升高趋 势〔 1 ` 〕 ,
即使常规化疗可在一定程度上降低抑制细胞
活性 , 也可能被自然升高的趋势所掩盖 。
四 、 C o n A名 C 功能检测中分别应用 两
种不同靶细胞所得结果的比较 : 以经诱导的
自身淋 巴细胞作靶细胞检测 C o n A 一S C 功能
由于实验周期较长 ,受试者需两次抽血 ,给实
验带来一定困难 。 P a n u s h 〔` 〕等 用 工M g 细 胞
株作靶细胞测定 o o n A一 S C 功能 , 实验周 期
大为缩短 ,且病人仅需一次抽血 ,增加了实验
的实用性 。 国内闺有人用 K “ , 细胞作 靶 细
胞检测 C o n A一C 功能 。 我们改良了他们 的
方法 ,亦以 K 。 。 , 细胞为靶细胞 , 但整个实验
在 48 小时完成 。 发现胃癌患者较非癌 对 照
受试者抑制活性相反非常显著下降 , 其作用
机制 比较复杂 ,有人认为 K 。。 , 细胞是对 N K
细胞敏感的 , 因而可能 N K 细胞在 C o n A一 9 0
中起主要作用 , 还有人认为 C o o A一 S C 的抑
制效应是 C o n A 吸收了 T 细 胞 生 长 因 子
ǎ砍à刘地O叩州`。
汁1
1
.`酚
讨 论
一 、 C o n A 诱导抑制细胞的特征 : 至今
尚无资料表明它是哪一类具有特异表面标志
的细胞亚群 , 但已知 C o n A 一5 0 具有 E 花 环
形成能力 , 带有组织胺受体 , 不带 D R 抗原
川 。 一般还认为 C o n A一 S C 与 I酮 受体 、 T且 ,
和 O K T鑫表面标志 、 花生凝集素受体 、 茶碱
和腺普受体有关 。 尽管 已知人体内具有抑制
功能的细胞除抑制性 T 细胞外还包括巨噬细
胞和 自然杀伤细胞 , 但大量实验证明 C o n A一
S C 是 以 T 抑制细胞为主的 [ ’ 〕〔 8 〕〔’ 〕 。
二 、 C o n A一 S C 异常的可能机制 : 有 关
抑制细胞功能异常的探索 , 国内外广为开展
的是对自身免疫性疾病的研究 。 在这些疾病
中通常表现为抑制细胞数量减少 和 活 性 下
降 。 相反免疫缺陷病 、 急性病毒感染 、恶性肿
瘤等常表现为抑制活性升高 。 关于进展期胃
癌患者抑制细胞升高的原因 , 我们认为〔 , 」〔 1 “ “
可能是肿瘤组织释放的可溶性物质 , 经血循
环进入胸腺诱导 T 细胞有利于向抑制细胞分
化 , 抑制活性相应增高 。 本实验中良性 胃病
和早期癌症的抑制细胞活性不增高 , 进展期
胃癌则明显升高 ,这可能与癌肿负荷增大 ,可
.8 3
.
( T C G乃 的缘故 , 而 k , 6 , 细胞是不依 赖 于
T拐 F 生长的。 总之 , 值得继续研究。五 、 c o n A , s C 与 O K T 系统单克隆 抗
体鉴定的 T 细胞亚群的关系 : 迄今 , 用单克
隆抗体 ( m A b) 检测 T 细胞亚群被认为是较
可靠的方法 。 T 细胞亚群的数量与功能之间
的关系如何是一个颇有兴趣的问题 。 有人 ls[ 〕
对慢性肝炎病人测定了用 m A b 鉴定的 T 细
胞亚群和抑制细胞功能 , 与正常对照组相比 ,
抗核抗体 、 抗平滑肌抗体阳性的慢性活动性
肝炎患者 O凡T右细 胞 显 著 下 降 , O K T打
O K T言细胞比值升高 , 抑制指数和 O K T 右细
胞呈正相关 ,但和 OK T 东/O K T 鑫细胞比值呈
负相关 。 但也有人报道了不同的结果 l[ 幻。 我
们对进展期胃癌患者组的测定发现OK T 言细
胞和 C o n A 一S C 活性都明显高于正常对照组
和 良性胃病组 ; O K T 打O K T 右比值对照组非
常显著降低 , 并与 oC n A ` S C 功能有显著负
相关 ( r = 一 0 . 61 2) 。 这一结果表 明 C o n A -
8 0 功能在一定程度上可反映 T五/ T s的比值 。
以 m A b 检测 T 细胞亚群所需试剂目前
尚靠进 口 ,价格昂贵 , 不易广泛开展 。 在此情
况下 , C。 。 A - S C 功能测定具有经济 、 可行 、 重
复性较好的优点 , 能较客观地反映机体的抑
制功能 , 对疾病的随访观察也比较易行 1L 。“ 。
参 考 文 献
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,
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( 1 9印年 9 月 2 5 日收稿 , 19阴 年 10 月 18 日修回 )
S T U D I E S O N T 一 C E L L S U B P O P U L A T LON A N D C O N C A N A V A L IN
A 一 I N D U C E D S U P P R E S S O R C E L L F U N C T LON I N G A S T F J C
C A N℃ E R P A T到E N T S
L i压n g S o n -gl i
n (梁松林 ) et al .
肠那村姗耐 of 几 et 犷 , 乙万己 d诫、 , 瓜 , 丑` ` 丑山娜协忍, 少加 &咖己万心咖忍U ” 加时豌夕
I n 8 4 P a t ien tS w it 五 g明 tr i e e a n e er ajn d 4 5 n or m a l e on tor ls , co n e a n a v a l血 A - idn u e e d
s u即 r二 o r e e l l ( C o n 入一 C ) f un e幻 o n 朗 w e l l as T o e l l 二 b op p u互时 io n s id en t i f i e d b y m o o -
e l o n a l an t i bo d ies w er 咖d i e d . A 5 1笋 i f i e an t i n e r eas i n Con A e SC f u n e t i o n a n d O K T S
, 湘 i t i v e e e l ls a n d a m a r k de d e e r~
i n O K T 4
+
/O R T S
+ r at i o w细 n o et d 血 a d v a n e e d g as t r i o
e
an
e e r P时 i en 切 明 e恤 p a r de w i t h n or m a l co n t r o ls . T五e e o r r e lat i o n b e七w e n C o n A一 S C f u n e -
t i姐 an d OK T S I兀旧 i t i v e e e l坛 s h o w de on str i k i n g s t时 15七i e a l d i f f e r en e e , w h er e始 a n e g a t i v e
cor
r e l a t i o n o e e ur
r叭 b et w e e n C o n A一 S C f u n e t i o n o n d O K T 4 + /O K T S + r a七10 . I n 2 1 e as e s o f
g as t r i e e a n e er w ho h尽d u n d er g o n e su r g e r y
,
ht o C
o n A沼 C f un o t i血 w a o r e m a r k a b ly lo w er
t h an i及 t h胎 e w i t h o u t 兜 r g e r y ; w h e r e韶 恤 2 6 e ase
o n e h e m o七h er aP y , t h er e w as n o 就 at i st ie a l
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