全 文 ：［收稿日期］ 20150801(003)
［基金项目］ 国家自然科学基金项目(31370378)
［第一作者］ 黄慧辉，在读硕士，从事中药药效物质基础及质量评价研究，Tel:15902723565，E-mail:378645615@ qq． com
［通讯作者］ * 叶晓川，博士，研究员，从事中药药效物质基础及质量评价研究，Tel:13871277719，E-mail:yxxcc1965@ 163. com
·药物代谢·
菝葜抗炎有效部位群在大鼠肠外翻试验中的吸收特性考察
黄慧辉，张小燕，沈娟，罗丹，叶晓川* ，刘焱文
(湖北中医药大学 药学院，武汉 430065)
［摘要］ 目的:考察菝葜抗炎有效部位群中 6 种成分的体外肠吸收特征，为该部位的制剂开发及药代动力学研究提供参
考。方法:采用大鼠肠外翻模型，通过 HPLC测定不同取样时间肠内液中白藜芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜芦醇、槲皮苷、黄杞
苷、白藜芦醇的含量，流动相乙腈(A)-0. 1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 18 min，12% ～ 18% A;18 ～ 33 min，18% A;33 ～
45 min，18% ～21%A;45 ～ 50 min，21%A) ，流速 1 mL·min －1，检测波长 290 nm，计算吸收动力学参数，考察 6 个成分在不同肠
段(十二指肠、空肠和回肠)的吸收情况。结果:白藜芦醇苷在各肠段吸收无明显差异，而其他 5 种成分在各肠段的吸收差异
较大;6 种成分在同一肠段的吸收有较大差异，在十二指肠、空肠和回肠中的吸收率分别为 0. 85% ～ 2. 79%，0. 70% ～ 2. 73%
和 0. 90% ～ 1. 77%。槲皮苷在十二指肠和空肠的吸收率最高，白藜芦醇苷在回肠的吸收率最高;氧化白藜芦醇吸收速度明显
比其他 5 种成分慢，在十二指肠中于 90 min后才表现出较明显的吸收。结论:白藜芦醇苷、落新妇苷、槲皮苷、黄杞苷、白藜芦
醇在大鼠离体小肠的吸收为一级动力学过程，选择外翻肠囊法可评价菝葜提取物中多成分的肠吸收特性。
［关键词］ 菝葜;有效部位群;肠外翻模型;落新妇苷;氧化白藜芦醇;槲皮苷
［中图分类号］ Ｒ969. 1;Ｒ945;Ｒ285. 5;Ｒ284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2016)08-0096-04
［doi］ 10. 13422 / j． cnki． syfjx． 2016080096
［网络出版地址］ http:/ /www． cnki． net /kcms /detail /11． 3495． Ｒ． 20160311． 1034． 006． html
［网络出版时间］ 2016-03-11 10:34
Investigation of Absorption Characteristics of Anti-inflammatory Effective Parts from
Smilacis Chinae Ｒhizoma in Ｒat Intestinal Valgus Test
HUANG Hui-hui，ZHANG Xiao-yan，SHEN Juan，LUO Dan，YE Xiao-chuan* ，LIU Yan-wen
(Pharmacy Faculty，Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)
［Abstract］ Objective:To investigate absorption characteristics of six components from anti-inflammatory
effective parts of Smilacis Chinae Ｒhizoma． Method:Taking rat everted gut sac model，intestinal sac contents
were collected at different time and absorption concentration of polydatin，astilbin，oxyreverstroal，quercitrin，
engeletin and resveratrol was determined by HPLC，absorption kinetics parameters were calculated for describing
their absorption characters in different intestinal segments (duodenum，jejunum and ileum)． Ｒesult:Absorption
of polydatin in duodenum， jejunum and ileum was no significant difference，while the other five components
showed large differences． Absorption of six ingredients showed significant differences in the same intestinal site，
their absorptivity at duodenum，jejunum and ileum were 0. 85% -2. 79%，0. 70% -2. 73% and 0. 90% -1. 77%，
respectively． Quercitrin showed the highest absorption rate in duodenum and jejunum，polydatin showed the
highest absorption rate in ileum． Absorption rate of oxyreverstroal was significantly slower than the other five
ingredients，it just showed obvious absorption after 90 min in duodenum． Conclusion:Absorption of polydatin，
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Vol． 22，No． 8
Apr．，2016
astilbin，quercitrin，engeletin and resveratrol conforms the first order kinetics，everted gut sac method can
evaluate intestinal absorption characteristics of multi-component in Smilacis Chinae Ｒhizoma extracts．
［Key words］ Smilacis Chinae Ｒhizoma;effective parts;everted gut sac model;astilbin;oxyreverstroal;
quercitrin
菝葜功能祛风除湿、解毒散瘀，临床常用于治疗
筋骨酸痛、疔疮痛肿等症，尤多用于妇科炎症如附件
炎及附件炎性包块等的治疗［1］。本课题组前期采
用大孔树脂制备得主要含有黄酮类、二苯乙烯类和
甾体皂苷类成分的菝葜提取物，通过药理实验确定
其为菝葜发挥抗炎作用的有效部位群［2-4］。目前，
针对菝葜的化学成分及药理作用研究的报道较
多［5-8］，但关于菝葜提取物的肠道吸收特征尚未见
报道。外翻肠囊法是目前研究体外肠道吸收的常用
生物模型，已被广泛应用于中药单体化合物及复方
的肠吸收研究［9-12］。本实验利用体外肠外翻模型对
菝葜抗炎有效部位群中白藜芦醇苷、落新妇苷、氧化
白藜芦醇、槲皮苷、黄杞苷和白藜芦醇在大鼠离体小
肠的吸收特征进行研究，为该部位群主要成分的药
代动力学及其制剂研究提供参考。
1 材料
1100 系列高效液相色谱仪(美国安捷伦公司) ，
TGL-16G型高速离心机(上海安亭科学仪器厂) ，
BP211D型 1 /10 万电子天平(德国赛多利斯公司)。
菝葜抗炎有效部位群提取物(自制) ，白藜芦醇苷、
氧化白藜芦醇对照品(成都普菲德生物技术有限公
司，批号分别为 131121，131021) ，落新妇苷对照品
(上海源叶生物科技有限公司，批号 PJ0709SA14) ，
槲皮苷、黄杞苷、白藜芦醇对照品(中国食品药品检
定研究院，批号分别为 111538-200504，111906-
201102，111535-200502)。Tyrode 液(自制，pH 7. 4，
含氯化钠 8. 0 g，氯化钾 0. 2 g，氯化镁 0. 1 g，氯化钙
0. 2 g，碳酸氢钠 1. 0 g，磷酸二氢钠 0. 05 g，葡萄糖
1. 0 g，加水至 1 L) ，甲醇、乙腈为色谱纯，水为超纯
水，其他试剂均为分析纯。
SD大鼠，雌性，体重(200 ± 20)g，购于湖北省
实验动物研究中心，动物合格证号 SCXK(鄂)
2008-0005。
2 方法与结果
2. 1 菝葜提取物溶液的配制 精密称取菝葜提取
物适量，加 70%乙醇 10 mL 使溶解，加 Tyrode 液定
容至 500 mL，得 6. 017 g·L －1药液，备用。
2. 2 大鼠肠外翻试验 大鼠实验前禁食 12 h，自由
饮水，颈椎脱臼处死，剖开腹腔迅速取出十二指肠
(距幽门 1 cm处取 8 cm) ，空肠(距幽门 15 cm处取
8 cm)和回肠(盲肠上 20 cm 处取 8 cm)。用冰
Tyrode液冲洗，直至无内容物流出，小心剥离肠段表
面的肠系膜和脂肪，用棉线将肠段一端结扎，小心翻
转肠管，形成管状肠囊，将肠囊开口端结扎与玻璃管
套上。向肠囊内注入 37 ℃的 Tyrode 液 1. 5 mL，置
于装有 Tyrode液 25 mL的麦氏浴槽中，整个试验过
程保持 37 ℃恒温，浴槽中通入 95%O2 /5% CO2。肠
囊平衡 5 min后，放掉麦氏浴槽中 Tyrode液，注入事
先配好的药液 25 mL，分别在给药后 15，30，45，60，
75，90，120 min 从肠囊内取样 200 μL，同时补足等
温等体积的空白 Tyrode液。
2. 3 肠内液中化学成分的含量测定
2. 3. 1 色谱条件 Agilent ZOＲBAX Eclipse XDB-
C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相乙腈
(A)-0. 1%磷酸水溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 18 min，
12% ～ 18% A;18 ～ 33 min，18% A;33 ～ 45 min，
18% ～ 21% A;45 ～ 50 min，21% A) ，流速 1 mL·
min －1，检测波长 290 nm，柱温 25 ℃，进样量 20 μL。
见图 1。
A．空白肠内液;B．对照品;C． 供试品;1. 白藜芦醇苷;2. 落新妇苷;
3. 氧化白藜芦醇;4. 槲皮苷;5. 黄杞苷;6. 白藜芦醇
图 1 菝葜提取物专属性 HPLC
Fig． 1 HPLC chromatograms of Smilacis Chinae Ｒhizoma extract
2. 3. 2 供试液制备 取肠内液于 4 ℃，12 000
r·min －1离心 20 min，取上清液，即得。
2. 3. 3 对照品储备液的制备 分别精密称取白藜
芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜芦醇、槲皮苷、黄杞苷、
白藜芦醇 1. 26，1. 56，1. 05，2. 12，1. 09，1. 07 mg，分
别置于不同 10 mL量瓶中，用甲醇超声溶解并定容，
即得。
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2. 3. 4 混合对照品储备液的制备 分别精密吸取
2. 3. 3 项下白藜芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜芦醇、
槲皮苷、黄杞苷、白藜芦醇对照品储备液 1，4，2，4，
6，3 mL，置同一 25 mL 量瓶中，加甲醇定容至刻度，
得各成分质量浓度分别为 5. 04，24. 96，8. 40，
33. 92，26. 16，12. 84 mg·L －1的混合对照品储备液。
2. 3. 5 标准曲线的绘制 精密吸取 2. 3. 4 项下混合
对照品储备液 0. 5，1，2，4，6，8 mL，分别置于 10 mL量
瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，经 0. 22 μm微孔滤膜
滤过，按 2. 3. 1 项下色谱条件测定，以峰面积为纵坐
标，质量浓度为横坐标，得白藜芦醇苷、落新妇苷、氧
化白藜芦醇、槲皮苷、黄杞苷和白藜芦醇回归方程分
别为 Y =3 068. 5X － 7. 051(r = 0. 999 6) ，Y =2 030. 1
X －21. 059(r = 0. 999 5) ，Y = 2 144. 8X － 13. 096(r =
0. 999 5) ，Y = 405. 41X － 22. 401(r = 0. 999 5) ，Y =
1 884. 1X －9. 356(r =0. 999 6) ，Y =4 630. 6X －27. 259
(r = 0. 999 9) ，线性范围依次为 0. 252 ～ 5. 040，
1. 248 ～ 24. 960，0. 420 ～ 8. 400，1. 696 ～ 33. 920，
1. 308 ～26. 160，0. 642 ～12. 840 mg·L －1。
2. 3. 6 精密度试验 取 2. 3. 4 项下混合对照品溶
液，按 2. 3. 1 项下色谱条件连续进样 5 次，计算白藜
芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜芦醇、槲皮苷、黄杞苷、
白藜芦醇峰面积的 ＲSD 分别为 1. 7%，1. 0%，
1. 7%，1. 0%，1. 9%，1. 7%，表明仪器精密度良好。
2. 3. 7 稳定性试验 取空肠于 120 min 时样品，分
别于 0，4，8，10，12，24 h 按 2. 3. 1 项下色谱条件测
定，结果白藜芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜芦醇、槲皮
苷、黄杞苷、白藜芦醇峰面积的 ＲSD 分别 2. 6%，
1. 3%，4. 9%，3. 9%，1. 3%，1. 2%，表明供试品溶液
在 24 h内稳定性良好。
2. 3. 8 样品测定 取各供试品溶液适量，按 2. 3. 1
项下色谱条件测定，计算药物累积吸收量(Q)。
Q = 1. 5Cn + 0. 2∑
n－1
i = 1
Ci
式中 Cn 为各时间点取样的实测浓度，Ci 为第
n － 1个时间点取样的实测浓度。以 Q 对时间进行
零级、一级和 Higuchi 方程拟合，以相关系数(r)为
拟合优劣的判断标准，结果显示一级方程拟合较好。
以 Q平均值对时间作线性回归，r均 ＞ 0. 95，说明符
合一级吸收;相关回归分析得斜率(L)与吸收表面
积(A) ，计算吸收速率常数(Ka) ，即 Ka = L /A;按 V =
Q120 min /1. 5C0 × 100% 计算药物吸收率(V) ，式中
Q120 min为 120 min 时药物累积吸收量，C0 为药物初
始质量浓度。氧化白藜芦醇在空肠和回肠段 90 min
可检测到，在十二指肠段 120 min 才可检测到，故未
对其进行回归分析。结果显示各成分的累积吸收
量-时间曲线均呈现上升趋势，未呈现饱和趋势，说
明 6 种成分在 120 min内吸收未达到饱和状态。结
果见表 1 ～ 4 和图 2。
表 1 菝葜抗炎有效部位群中 6 种成分在十二指肠的回归方程和吸
收率 (n = 3)
Table 1 Linear regressions and absorption rates of six ingredients
from anti-inflammatory effective parts of Smilacis Chinae Ｒhizoma
in duodenum (n = 3)
化合物 回归方程 r 吸收率 /%
白藜芦醇苷 Q = 0. 027t － 0. 595 0. 991 1. 82
落新妇苷 Q = 0. 137t － 2. 470 0. 975 0. 88
氧化白藜芦醇 － － 1. 59
槲皮苷 Q = 0. 286t － 7. 994 0. 952 2. 79
黄杞苷 Q = 0. 129t － 3. 535 0. 971 0. 85
白藜芦醇 Q = 0. 060t － 1. 524 0. 953 0. 89
表 2 菝葜抗炎有效部位群中 6 种成分在空肠的回归方程和吸收率
(n = 3)
Table 2 Linear regressions and absorption rates of six ingredients
from anti-inflammatory effective parts of Smilacis Chinae Ｒhizoma
in jejunum (n = 3)
化合物 回归方程 r 吸收率 /%
白藜芦醇苷 Q = 0. 026t － 0. 426 0. 999 1. 69
落新妇苷 Q = 0. 250t － 4. 591 0. 984 1. 37
氧化白藜芦醇 － － 0. 70
槲皮苷 Q = 0. 141t － 3. 230 0. 990 2. 73
黄杞苷 Q = 0. 239t － 5. 777 0. 982 1. 35
白藜芦醇 Q = 0. 110t － 3. 068 0. 968 1. 20
表 3 菝葜抗炎有效部位群中 6 种成分在回肠的回归方程和吸收率
(n = 3)
Table3 Linear regressions and absorption rates of six ingredients
from anti-inflammatory effective parts of Smilacis Chinae Ｒhizoma
in ileum (n = 3)
化合物 回归方程 r 吸收率 /%
白藜芦醇苷 Q = 0. 027t － 0. 498 0. 985 1. 77
落新妇苷 Q = 0. 220t － 3. 903 0. 984 1. 57
氧化白藜芦醇 － － 0. 90
槲皮苷 Q = 0. 306t － 7. 656 0. 988 1. 27
黄杞苷 Q = 0. 206t － 4. 664 0. 989 1. 58
白藜芦醇 Q = 0. 087t － 2. 413 0. 974 1. 54
3 讨论
菝葜抗炎有效部位群中含有多种黄酮类及二苯
乙烯类成分，其中白藜芦醇苷、落新妇苷、氧化白藜
芦醇、槲皮苷、黄杞苷和白藜芦醇是其发挥抗炎作用
的主要活性成分［13-14］。因此，本文选择这 6 种成分
为指标成分，能大致反映菝葜抗炎有效部位群提取
物的吸收情况。通过对不同肠段的大鼠离体小肠吸
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表 4 菝葜抗炎有效部位群中 6 种成分在各肠段的 Ka(珋x ± s，n = 3)
Table 4 Absorption rate of six ingredients from anti-inflammatory effective parts of Smilacis Chinae Ｒhizoma in different intestinal segments
(珋x ± s，n = 3)
肠段 白藜芦醇苷 落新妇苷 槲皮苷 黄杞苷 白藜芦醇
十二指肠 0. 021 ± 0. 002 0. 109 ± 0. 021 0. 165 ± 0. 100 0. 103 ± 0. 008 0. 116 ± 0. 105
空肠 0. 021 ± 0. 002 0. 183 ± 0. 014 0. 199 ± 0. 076 0. 173 ± 0. 016 0. 076 ± 0. 014
回肠 0. 020 ± 0. 001 0. 191 ± 0. 020 0. 156 ± 0. 077 0. 181 ± 0. 019 0. 081 ± 0. 011
图 2 菝葜抗炎有效部位群中 6 种成分在十二指肠(A)，空肠(B)，
回肠(C)累积量-时间曲线 (珋x ± s，n = 3)
Fig． 2 Accumulation-time curves of six ingredients from anti-
inflammatory effective parts of Smilacis Chinae Ｒhizoma in
duodenum (A) ，jejunum (B)and ileum (C) (珋x ± s，n = 3)
收试验发现，6 种成分在十二指肠、空肠、回肠 3 个
肠段均有吸收，但各成分吸收状况差异较大。
实验中发现，氧化白藜芦醇在 90 min 后才在肠
内有少量的累积，推测可能是氧化白藜芦醇结构母
核中含有酚羟基和烯键，使得其稳定性差，容易转化
为其他物质，导致其在前面几个时间点未被检出，因
此得到的线性回归方程的相关系数较低(0. 75 ～
0. 91)。落新妇苷在小肠中吸收最快，15 min 时便
可在各肠段肠液中检测出。文献显示槲皮苷与落新
妇苷的结构极其相似，槲皮苷在 30 min 后样品液中
才检测出，最后累积吸收率也与落新妇苷有较大差
异，可能是物质的绝对构型等影响了药物的吸
收［15］。白藜芦醇苷在各肠段的吸收未显示出明显
差异，相对于其他成分具有较好的吸收，其与白藜芦
醇及氧化白藜芦醇相比均显示出较大差异，可能是
由于成苷后使其稳定性和水溶性均有所增加。
菝葜提取物水溶性较差，所以先用少量 70%乙
醇将其溶解，再用 Tyrode 液稀释，但是放置一段时
间后仍会有少量沉淀产生。实验结果显示菝葜抗炎
有效部位群提取物整体的肠吸收率偏低，可能是其
水溶性差，在肠液中溶解度低，导致其吸收障碍，提
示制剂研究中应考虑采用适当方法改善原料溶解性
以提高其生物利用度。
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［责任编辑 刘德文］
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