全 文 ：中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2015, 46(11) · ·1181
菝葜为百合科植物菝葜 (Smilax china L.) 的干
燥根茎，具有祛风利湿、解毒散瘀的功效，中医临
床多用于治疗妇科炎症、包块、肿瘤等疾患。现代
药理学研究表明，菝葜提取物具有明显的抗炎和抗
肿瘤作用 [1-3]。
本课题组经前期药理试验确定了菝葜具抗炎作
用的各有效部位，并采用大孔吸附树脂分离纯化得
菝葜抗炎有效部位群的 UPLC-DAD指纹图谱
张小燕，黄慧辉，罗 丹，叶晓川*，刘焱文
(湖北中医药大学药学院，湖北武汉 430065)
摘要：建立了菝葜抗炎有效部位群的 UPLC-DAD指纹图谱。采用 Agilent Zorbax RRHD SB-C18色谱柱，以甲醇∶乙腈
(5∶ 1，A) ∶ 0.1％磷酸 (B) 为流动相，梯度洗脱，检测波长 0～ 25 min，290 nm；25～ 30 min，370 nm。对 10批样
品进行指纹图谱研究，得出共有峰指纹图谱，标记了 33个共有峰，确认了其中 9个特征峰分别为花旗松素、白藜芦醇苷、
氧化白藜芦醇、落新妇苷、白藜芦醇、槲皮苷、黄杞苷、山柰酚和槲皮素。10批有效部位群指纹图谱相似度均大于 0.90。
关键词：菝葜；有效部位群；抗炎；超高效液相色谱；指纹图谱
中图分类号：R93；O657.7+2 文献标志码：A 文章编号：1001-8255(2015)11-1181-05
DOI：10.16522/j.cnki.cjph.2015.11.009
收稿日期：2015-07-08
基金项目：国家自然科学基金资助项目(31370378)
作者简介：张小燕(1991-)，女，硕士研究生，专业方向：中药物
质基础及其制剂。
Tel：015271802650
E-mail：18861564@qq.com
通信联系人：叶晓川(1965-)，女，硕士生导师，从事中药物质基
础及其制剂研究。
Tel：013871277719
E-mail：yxxcc1965@163.com
UPLC-DAD Fingerprints of the Anti-infl ammatory Effective Parts Group of Smilax china
ZHANG Xiaoyan, HUANG Huihui, LUO Dan, YE Xiaochuan*, LIU Yanwen
(College of Pharmacy, Hubei University of Chinese Medicine, Wuhan 430065)
ABSTRACT: The UPLC-DAD fi ngerprints of the anti-infl ammatory effective parts group of Smilax china were
established. An Agilent Zorbax RRHD SB-C18 column was used, with the mobile phase of methanol∶acetonitrile
(5∶1, A)∶0.1％ phosphoric acid (B) by gradient elution, at the detection wavelength of 290 nm in 0 - 25 min and
370 nm in 25 - 30 min. The common pattern of fi ngerprint containing 33 common peaks was obtained by determining 10
batches of the effective parts group of Smilax china. There were nine characteristic peaks identifi ed as taxifolin, polydatin,
oxyresveratrol, astilbin, resveratrol, quercitrin, engeletin, kaempferol and quercetin, respectively. The fingerprint
similarities of 10 batches of effective parts group were all greater than 0.90.
Key Words: Smilax china; effective parts group; anti-infl ammatory; UPLC; fi ngerprint
到主要含有黄酮类、二苯乙烯类和甾体皂苷类成分
的抗炎有效部位群 [4-6]。为控制有效部位群的质量，
稳定制备工艺，本研究应用超高效液相色谱(UPLC)
技术，建立了 UPLC-二极管阵列检测器 (DAD) 指
纹图谱，以期为菝葜抗炎有效部位群的新药开发提
供参考。
1 仪器与试药
1290系列超高效液相色谱仪，含 Agilent色谱工作站、
G4226A型高性能自动进样器和G4212A型DAD检测器(美
国 Agilent公司 )。
花旗松素 (1，批号 111816-201102)、落新妇苷 (4，批
号 111798-201102)、白藜芦醇 (5，批号 111535-200502)、
槲皮苷 (6，批号 111538-200504)、黄杞苷 (7，批号
111906-2011)、山柰酚 (8，批号 110861-201310) 和槲皮素
(9，批号 100081-200907) 对照品均为中国食品药品检定研
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究院提供；白藜芦醇苷 (2，批号 141121) 和氧化白藜芦醇
(3，批号 141021) 对照品购于武汉沅永源商贸有限公司，纯
度均为 98％；菝葜药材由湖北福人药业有限公司提供，经
湖北省中药资源与中药化学重点实验室鉴定研究室鉴定为
百合科植物菝葜 (Smilax china L.) 的干燥根茎；甲醇、乙腈
为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 菝葜有效部位群提取物的制备 [7]
取菝葜药材，切片，加 8倍量 60％乙醇回流提
取 3次，第 1次 2 h，第 2、3次各 1 h，过滤，合
并滤液，减压回收乙醇，抽滤，向滤液中加入 3％
明胶溶液(每 1 g生药加入 0.7 ml)，静置 24 h。过滤，
滤液加水配成浓度为 0.2 g/ml( 相当于药材 )的上样
液，按树脂量∶药材 =1∶ 0.6的上样量以 2 BV/h
的流速通过 D101型大孔吸附树脂柱，用 3 BV水
洗脱 (流速 2 BV/h) 至Molish反应为阴性，再用
5 BV 70％乙醇洗脱 (流速 2 BV/h)，收集 70％乙醇
洗脱液，减压浓缩，干燥，即得。按照该方法共制
备 10批菝葜有效部位群提取物（S1～ S10）。
2.2 色谱条件
色谱柱 Agilent Zorbax RRHD SB-C18柱(2.1 mm×
100 mm，1.8 m) ；流动相 甲醇∶乙腈 (5∶ 1)
(A) ∶ 0.1％磷酸 (B)，梯度洗脱 (程序见表 1) ；
流速 0.4 ml/min；检测波长 290 nm(0～ 25 min)，
370 nm(25～ 30 min) ；柱温 40 ℃；进样量 1 l。
表 1 梯度洗脱程序
Tab.1 The Gradient Elution Procedure
t/min A∶B
0→5 12∶88→15∶85
5→12 15∶85→24∶76
12→15 24∶76
15→18 24∶76→30∶70
18→20 30∶70
20→26 30∶70→42∶58
26→28 42∶58→60∶40
28→30 60∶40
2.3 溶液配制
供试品溶液：精密称取菝葜有效部位群 (样品
S1)0.05 g，置 25 ml量瓶中，加入甲醇 20 ml，超
声 (250 W，53 kHz) 溶解并定容，摇匀，经 0.22 m
微孔滤膜过滤，取续滤液即得。
对照品溶液：分别精密称取 1～ 9对照品适
量，加甲醇制成浓度为 100 g/ml的单一对照品贮
备液。精密吸取 1～ 9对照品贮备液各 1 ml，制成
浓度约为 11.1 g/ml的 1～ 9混合对照品溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 精密度试验
取“2.3”项下供试品溶液，连续测定 6次，选
择保留时间适中、峰面积较大、与其他色谱峰分
离度良好的 22号峰 ( 即 4峰 ) 为参照峰计算各色
谱峰的相对保留时间 (RRT) 和相对峰面积 (RPA)，
结果显示各峰 RRT的 RSD<0.8％，RPA的 RSD≤
2.5％，相似度大于 0.9。
2.4.2 重复性试验
精密称取同批样品 (S1) 共 6份，按“2.3”项
下方法制备供试品溶液，分别进样测定。结果各色
谱峰 RRT的 RSD<1.0％，RPA的 RSD<3.0％，相似
度大于 0.9。
2.4.3 稳定性试验
取“2.3”项下供试品溶液，分别于 0、2、4、6、
8、12和 24 h进样测定。结果各色谱峰的 RRT和
RPA基本一致，RSD均小于 3％，相似度大于 0.9，
表明样品在 24 h内稳定。
2.5 指纹图谱的建立
取 10批样品 (S1～ S10)，按“2.3”项下方法
制备供试品溶液，分别进样，记录 30 min内色谱图。
根据不同批次供试品测定结果分析相关参数，绘制
指纹图谱。混合对照品溶液和供试品溶液 (S1) 色
谱图见图 1。
2.6 指纹图谱的分析
2.6.1 共有峰的标定
用中药指纹图谱相似度评价系统 (2004年 A
版)软件进行分析，以 22号峰(即 4峰)为参照峰S，
标定共有峰 33个，RRT和 RPA结果见表 2和表 3。
2.6.2 共有峰的指认
将 10批菝葜有效部位群 (S1～ S10) 的色谱
数据导入中药指纹图谱相似度评价系统 (2004年 A
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A：混合对照品溶液 (1-1；2-2；3-3；4-4；5-5；6-6；7-7；8-8；9-9)，
B：供试品溶液 (15-1；17-2；20-3；22-4；24-5；27-6；28-7；32-8；33-9)
图 1 混合对照品溶液色谱图及供试品溶液 (S1)指纹图谱
Fig.1 UPLC Chromatograms of Mixed Reference Solution and Fingerprint of the Test Solution(S1)
表 2 共有峰的 RRT
Tab.2 RRTs of the Common Peaks
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 平均值 RSD/％
1 0.237 0.237 0.236 0.236 0.236 0.236 0.237 0.236 0.237 0.237 0.237 0.04
2 0.260 0.260 0.260 0.260 0.260 0.259 0.260 0.260 0.259 0.260 0.260 0.04
3 0.276 0.276 0.276 0.276 0.276 0.276 0.277 0.276 0.277 0.276 0.276 0.02
4 0.307 0.307 0.307 0.306 0.307 0.306 0.307 0.306 0.335 0.306 0.309 0.04
5 0.335 0.335 0.335 0.335 0.336 0.335 0.335 0.335 0.357 0.336 0.338 0.04
6 0.359 0.359 0.358 0.358 0.358 0.358 0.358 0.358 0.359 0.358 0.359 0.04
7 0.400 0.400 0.408 0.400 0.400 0.400 0.400 0.400 0.404 0.400 0.401 0.25
8 0.447 0.447 0.447 0.447 0.448 0.447 0.448 0.447 0.447 0.447 0.447 0.02
9 0.476 0.476 0.477 0.478 0.478 0.478 0.478 0.478 0.477 0.478 0.477 0.09
10 0.513 0.513 0.514 0.512 0.513 0.513 0.513 0.513 0.512 0.512 0.513 0.05
11 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.545 0.02
12 0.563 0.562 0.559 0.563 0.563 0.563 0.563 0.563 0.562 0.564 0.563 0.13
13 0.652 0.653 0.652 0.651 0.652 0.652 0.652 0.651 0.652 0.652 0.652 0.06
14 0.680 0.679 0.680 0.679 0.680 0.679 0.679 0.679 0.679 0.676 0.679 0.11
15 0.731 0.731 0.731 0.731 0.731 0.732 0.733 0.732 0.731 0.732 0.732 0.07
16 0.762 0.762 0.763 0.762 0.763 0.763 0.763 0.763 0.763 0.763 0.763 0.05
17 0.780 0.780 0.781 0.780 0.781 0.782 0.781 0.781 0.781 0.781 0.781 0.06
18 0.803 0.802 0.804 0.803 0.805 0.805 0.805 0.805 0.805 0.804 0.804 0.11
19 0.847 0.847 0.847 0.847 0.848 0.848 0.848 0.848 0.848 0.848 0.848 0.05
20 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.907 0.01
21 0.935 0.936 0.936 0.936 0.936 0.936 0.936 0.937 0.936 0.936 0.936 0.04
22 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00
23 1.065 1.064 1.064 1.064 1.064 1.064 1.064 1.063 1.063 1.064 1.064 0.05
24 1.169 1.167 1.169 1.168 1.169 1.169 1.169 1.168 1.169 1.170 1.169 0.09
25 1.192 1.190 1.192 1.192 1.193 1.194 1.193 1.192 1.193 1.194 1.193 0.13
26 1.243 1.242 1.244 1.244 1.245 1.245 1.245 1.245 1.246 1.246 1.245 0.13
27 1.264 1.263 1.265 1.266 1.266 1.266 1.266 1.266 1.267 1.267 1.266 0.13
28 1.333 1.331 1.332 1.333 1.335 1.334 1.333 1.333 1.333 1.335 1.333 0.13
29 1.400 1.396 1.400 1.402 1.401 1.400 1.401 1.399 1.401 1.402 1.400 0.17
30 1.519 1.518 1.518 1.518 1.520 1.518 1.520 1.519 1.519 1.520 1.519 0.07
31 1.541 1.541 1.541 1.540 1.541 1.540 1.541 1.540 1.540 1.541 1.541 0.04
32 1.614 1.614 1.615 1.611 1.615 1.614 1.615 1.613 1.616 1.614 1.614 0.13
33 1.806 1.806 1.808 1.803 1.808 1.806 1.809 1.807 1.810 1.807 1.807 0.17
版 )软件，通过校正选峰，设定匹配模式，自动匹
配色谱峰，生成共有模式指纹图谱 (R)。10批样品
指纹图谱叠加图见图 2。通过与对照品保留时间和
UV光谱扫描图进行比对，确认 15号峰为 1，17号
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表 3 共有峰的 RPA
Tab.3 RPAs of the Common Peaks
峰号 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 平均值 RSD/％
1 0.041 0.040 0.040 0.040 0.040 0.040 0.039 0.040 0.040 0.040 0.040 0.99
2 0.029 0.030 0.028 0.030 0.029 0.028 0.029 0.030 0.027 0.030 0.029 3.75
3 0.983 0.982 0.978 1.068 0.985 0.994 1.023 0.976 1.049 1.050 1.012 3.49
4 1.800 1.805 1.800 1.800 1.799 1.800 1.800 1.800 1.800 1.800 1.800 0.09
5 0.104 0.103 0.097 0.102 0.099 0.102 0.107 0.101 0.093 0.100 0.100 3.94
6 0.079 0.081 0.081 0.079 0.077 0.073 0.083 0.078 0.079 0.082 0.079 3.80
7 0.167 0.177 0.161 0.180 0.174 0.171 0.171 0.176 0.162 0.178 0.172 3.92
8 0.069 0.072 0.072 0.070 0.068 0.072 0.072 0.069 0.066 0.074 0.071 3.49
9 0.402 0.402 0.381 0.390 0.386 0.387 0.370 0.377 0.369 0.387 0.383 2.95
10 0.100 0.100 0.098 0.108 0.100 0.103 0.106 0.103 0.096 0.109 0.102 4.38
11 1.393 1.466 1.418 1.479 1.418 1.391 1.477 1.432 1.423 1.615 1.458 4.50
12 0.065 0.064 0.068 0.060 0.063 0.068 0.065 0.064 0.064 0.065 0.064 3.93
13 0.037 0.036 0.038 0.039 0.036 0.040 0.039 0.038 0.038 0.040 0.038 3.82
14 0.063 0.065 0.064 0.068 0.061 0.065 0.063 0.064 0.064 0.063 0.064 2.93
15 0.070 0.071 0.070 0.070 0.070 0.069 0.061 0.069 0.071 0.071 0.069 4.20
16 0.032 0.034 0.033 0.033 0.030 0.030 0.032 0.034 0.033 0.034 0.032 4.67
17 0.093 0.089 0.088 0.089 0.091 0.089 0.089 0.094 0.084 0.096 0.090 3.91
18 0.046 0.046 0.050 0.043 0.046 0.045 0.043 0.044 0.047 0.048 0.046 4.44
19 0.098 0.096 0.097 0.093 0.099 0.101 0.103 0.111 0.100 0.100 0.100 4.77
20 0.213 0.218 0.222 0.210 0.201 0.227 0.215 0.229 0.223 0.205 0.217 4.25
21 0.098 0.098 0.098 0.108 0.098 0.109 0.095 0.096 0.097 0.098 0.100 4.88
22 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 1.000 0.00
23 0.039 0.041 0.040 0.042 0.041 0.045 0.042 0.043 0.040 0.045 0.042 4.82
24 0.597 0.578 0.563 0.637 0.564 0.594 0.635 0.636 0.622 0.623 0.606 4.87
25 0.246 0.232 0.234 0.249 0.249 0.254 0.254 0.233 0.239 0.237 0.242 3.58
26 0.175 0.175 0.172 0.170 0.154 0.174 0.167 0.171 0.177 0.180 0.171 4.22
27 0.680 0.662 0.648 0.689 0.696 0.723 0.715 0.718 0.704 0.704 0.695 3.56
28 0.055 0.055 0.057 0.057 0.058 0.064 0.061 0.060 0.058 0.061 0.059 4.50
29 0.045 0.046 0.047 0.043 0.046 0.049 0.048 0.046 0.047 0.043 0.046 4.15
30 0.130 0.136 0.131 0.135 0.129 0.134 0.138 0.132 0.132 0.138 0.134 2.20
31 0.094 0.090 0.094 0.092 0.098 0.101 0.101 0.097 0.094 0.093 0.095 3.91
32 0.062 0.060 0.063 0.062 0.061 0.058 0.059 0.063 0.064 0.059 0.061 3.13
33 0.047 0.044 0.048 0.046 0.044 0.044 0.045 0.049 0.047 0.043 0.045 4.43
为 2，20号为 3，22号为 4，24号为 5，27号为 6，
28号为 7，32号为 8，33号为 9。
2.6.3 相似度评价
采用中药指纹图谱相似度评价系统 (2004年 A
版 )软件进行相似度评价，以 10批样品平均数据
生成的共有模式指纹图谱 (R) 为对照，各批次菝葜
有效部位群指纹图谱的相似度均大于 0.9，表明菝
葜抗炎有效部位群的生产工艺稳定。结果见表 4。
3 讨论
参考文献[8-10]，本试验比较了乙腈∶ 0.1％磷酸、
乙腈∶ 0.1％乙酸、甲醇∶乙腈∶ 0.1％乙酸、甲
醇∶乙腈∶ 0.1％磷酸等流动相体系，均采用梯度
洗脱。结果表明，以甲醇∶乙腈 (5∶ 1，A) ∶ 0.1％
磷酸 (B) 系统梯度洗脱，各色谱峰峰形和分离度均
较好，故选用之。
本研究分别采用 Agilent Zorbax Eclipse Plus C18
柱 (2.1 mm×50 mm，1.8 m)、Agilent Zorbax Eclipse
Plus C18柱 (2.1 mm×100 mm，1.8 m) 和 Agilent
Zorbax RRHD SB-C18柱 (2.1 mm×100 mm，1.8m)
进行分离，结果显示 Agilent Zorbax RRHD SB-C18色
谱柱的分离效果较好，故选用之。同时采用 DAD进
行扫描，结果显示在波长 290 nm处，色谱峰数量多，
分离度较好，基线较平稳，信号强度较强。9的最大
吸收波长为 370 nm，加之其含量很低，故在 25 min
时将测定波长改为 370 nm，以提高信号强度。
中国医药工业杂志 Chinese Journal of Pharmaceuticals 2015, 46(11) · ·1185
15-1；17-2；20-3；22-4；24-5；27-6；28-7；32-8；33-9
图 2 不同批次菝葜有效部位群的 UPLC-DAD指纹图谱
Fig.2 UPLC-DAD Fingerprint Chromatograms of Different Batches of the Effective Parts Group of Smilax china
表 4 不同批次菝葜有效部位群 (S1～ S10)UPLC-DAD指纹图谱的相似度
Tab.4 Similarities between Samples from Different Batches of the Effective Parts Group of Smilax china (S1～S10)
样品 S1 S2 S3 S4 S5 S6 S7 S8 S9 S10 R
S1 1.000 0.999 0.99 0.991 0.997 0.994 0.99 0.991 0.932 0.981 0.996
S2 0.999 1.000 0.984 0.996 0.995 0.996 0.993 0.993 0.933 0.985 0.997
S3 0.990 0.984 1.000 0.970 0.991 0.978 0.968 0.973 0.919 0.956 0.982
S4 0.991 0.996 0.97 1.000 0.989 0.995 0.996 0.990 0.914 0.988 0.993
S5 0.997 0.995 0.991 0.989 1.000 0.996 0.991 0.994 0.939 0.985 0.998
S6 0.994 0.996 0.978 0.995 0.996 1.000 0.998 0.998 0.936 0.994 0.999
S7 0.99 0.993 0.968 0.996 0.991 0.998 1.000 0.997 0.929 0.997 0.996
S8 0.991 0.993 0.973 0.99 0.994 0.998 0.997 1.000 0.951 0.997 0.998
S9 0.932 0.933 0.919 0.914 0.939 0.936 0.929 0.951 1.000 0.943 0.949
S10 0.981 0.985 0.956 0.988 0.985 0.994 0.997 0.997 0.943 1.000 0.993
R 0.996 0.997 0.982 0.993 0.998 0.999 0.996 0.998 0.949 0.993 1.000
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