全 文 ：碧玉兰的组培快繁技术研究
曹受金　(中南林业科技大学,湖南长沙 410004)
摘要　以碧玉兰的茎尖 、茎段作为外植体进行组织培养 ,结果表明:适宜的起始培养基是MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA0.5 mg/L;增殖培养
基是MS+6-BA2.0mg/L+NAA0.05 mg/L;生根培养基是 1/ 2MS+NAA1.0mg/ L。
关键词　碧玉兰;外植体;组织培养
中图分类号　Q943.1　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2006)21-5519-02
Tissue Culture Technique of Cymbidiuml owianum
CAO Shou-jin　(Central South University of Forestry &Technology ,Changsha,Hunan 410004)
Abstract　The stem tip and stem segment of the Cymbidiuml owianum were good explants.The culture medium was MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.5
mg/L for callus induction.The multiplicative medium was made of MS+6-BA 2.0 mg/L +NAA 0.05 mg/L.The rooting medium was 1/2MS+NAA
1.0 mg/L.
Key words　Cymbidiuml owianum;Explants;Tissue Culture
　　碧玉兰(Cymbidiuml owianum)是一种大花型的兰属植物 ,
花葶长达 100cm 以上 ,近直立或弯曲 ,每葶花多达 25朵 ,花
直径约 8 ～ 10cm ,唇瓣中裂片上有一深红色的V形斑 ,花期 4
～ 5月 ,具有以下特点:①花朵硕大 ,花形 、花色美丽 ,深受广
大消费者的喜爱;②花葶较长 ,适合于做鲜切花;③植株生长
强健 ,抗病力强;④市场价格具竞争力 , 15～ 20元/苗 ,属大众
消费的中低档兰花 ,消费群体大 ,开发前景广阔[ 1] 。由于分
株繁殖速度较慢 ,为满足市场需求 ,笔者进行了碧玉兰组培
技术快繁种苗的研究 。
1　材料与方法
1.1　材料　取碧玉兰茎尖作为外植体[ 2] 。
1.2　方法　
1.2.1　培养条件。取生长健壮 、无病虫害的碧玉兰茎尖 ,用
0.1%的洗衣粉水冲洗 2～ 3次 ,经清水洗净后 ,用 0.1%HgCl2
灭菌 15min ,再用无菌水冲洗 5～ 6次 ,剥去叶片 ,切成 1cm的
小茎段晾干 。光照强度 1200 lx ,光暗各 12 h ,培养温度(25±
2)℃,培养基 pH 值 5.8 。
1.2.2　起始培养。将上述处理过的外植体接种于起始培养
基(MS+6-BA 0.5～ 4.0mg/L+NAA 0.1～ 0.5mg/L+蔗糖 4%
+琼脂 0.5%),诱导腋芽萌发 ,30 d后转瓶。
1.2.3　增殖培养。把起始培养形成的愈伤组织切块 ,接种
于增殖培养基(MS +6-BA 0.5 ～ 4.0 mg/L+NAA 0.01 ～ 0.1
mg/L+蔗糖 4%+琼脂 0.5%)。培养条件同上 ,以诱导形成
丛生芽。比较不同条件下丛生芽的生长状态及增殖率 , 30 d
后转瓶。
1.2.4　继代增殖。在继代培养基(MS +6-BA 2.0 mg/L+
NAA 0.05mg/L)上培养 , 30d转 1次瓶。
1.2.5　生根培养。将继代培养的丛生芽切成单苗 ,接种于
生根培养基(1/2MS+NAA0.01 ～ 2.0mg/L+蔗糖 4%+琼脂
0.5%)上培养。培养条件同上 ,诱导形成完整的根系。比较
不同状态幼苗在不同条件下的生根情况。
基金项目　中南林业科技大学青年基金项目。
作者简介　曹受金(1972-),男 ,湖南衡阳人 ,副教授 ,从事园艺组培方
面的教学与科研工作。
鸣　　谢　虢炳林 、张军 、姚鸿飞 、袁雄强 、张国华等参加了部分试验工
作。
收稿日期　2006-08-07
1.2.6　移栽。取出生根培养的幼苗 ,洗去附着在苗上的培
养基 ,移栽至混合基质(珍珠岩 3∶河沙 1)中 ,荫蔽度 80%,保
湿培养。
　　表1 不同激素(浓度)对茎尖诱导的影响
起始培养基
mg/ L
诱导数
个
诱导率
% 诱导情况
6-BA 0.5+NAA 0.1 12 30 诱导速度慢,抽新芽少
6-BA 1.0+NAA 0.1 22 55 诱导速度较快 ,新芽长势正常
6-BA 2.0+NAA 0.1 34 85 诱导速度快,新芽长势好
6-BA 3.0+NAA 0.1 32 80 诱导速度较快 ,抽生新芽多 ,
新芽长势一般
6-BA 4.0+NAA 0.1 30 75 诱导速度较快 ,新芽长势一般
6-BA 0.5+NAA 0.5 14 35 诱导速度慢,新芽少,较弱
6-BA 1.0+NAA 0.5 24 60 诱导速度较快 ,新芽长势正常
6-BA 2.0+NAA 0.5 36 90 诱导速度较快 ,新芽多 ,粗壮
6-BA 3.0+NAA 0.5 34 85 诱导速度快,新芽长势一般
6-BA 4.0+NAA 0.5 32 80 诱导速度较快 ,新芽细弱 ,叶小
　注:接种愈伤组织数均为 40个。
2　结果与分析
2.1　不同激素(浓度)对茎尖诱导的影响　茎尖材料接种培
养 10d后 ,顶芽开始萌发 ,切口形成愈伤组织 , 20 d后长出不
定芽 ,30 d后诱导速度快的可分化出 3～ 4个不定芽 ,差的仅
萌出 1个芽 。由表 1可见 ,参试的 10种培养基都能诱导出愈
伤组织 ,分化出幼苗 ,诱导率在 30%以上。在附加 6-BA 2.0
mg/L的培养基上 ,诱导率高达 85%～ 90%;6-BA 2.0 mg/L+
NAA 0.5mg/L分化的新芽多 ,粗壮;当 6-BA 4.0mg/L时 ,不定
芽出现明显的变异 ,新芽细弱 ,叶小。
2.2　不同激素(浓度)对不定芽分化的影响　诱导产生的愈
伤组织接种在 15种不同激素浓度组合的增殖培养基上 ,培
养 30d后(表 2),平均诱导率 74.3%,其中以 6-BA 2.0mg/L+
NAA 0.05mg/L最好 ,分化率 92%,月增殖率达 4.5倍 ,分化
出的不定芽多 、粗壮 ,无变异 ,长势好。
随着 6-BA浓度的增加 ,茎尖愈伤组织减少 ,块茎小 ,愈
伤组织有似海绵化 ,颜色淡黄色 ,分化的不定芽少 ,长势细
弱。说明 6-BA对诱导不定芽有促进作用 ,只有使用浓度适
当才能提高诱导率 ,幼苗长势好 ,而一定量的NAA对不定根
的分化有促进作用。
安徽农业科学 , Journal of Anhui Agri.Sci.2006, 34(21):5519-5520　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　责任编辑　罗芸　责任校对　罗芸
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2006.21.039
　　表 2　　不同植物激素(浓度)增殖培养基对不定芽分化的影响
增殖培养基
mg/L
接种数
个
分化数
个
不定芽总数
个
平均分化数
个
分化率
%
6-BA 0.5+NAA 0.01 40 20 40 2.0 50
6-BA 1.0+NAA 0.01 40 28 84 3.0 70
6-BA 2.0+NAA 0.01 40 32 121 3.8 80
6-BA 3.0+NAA 0.01 40 30 105 3.5 75
6-BA 4.0+NAA 0.01 40 29 93 3.2 73
6-BA 0.5+NAA 0.05 40 26 91 3.5 65
6-BA 1.0+NAA 0.05 40 30 126 4.2 75
6-BA 2.0+NAA 0.05 40 37 167 4.5 92
6-BA 3.0+NAA 0.05 40 34 143 4.2 85
6-BA 4.0+NAA 0.05 40 32 128 4.0 80
6-BA 0.5+NAA 0.1 40 24 77 3.2 60
6-BA 1.0+NAA 0.1 40 29 116 4.0 73
6-BA 2.0+NAA 0.1 40 33 149 4.5 83
6-BA 3.0+NAA 0.1 40 32 134 4.2 80
6-BA 4.0+NAA 0.1 40 30 105 3.5 75
合计 600 446 1682 3.8 74.3
2.3　继代增殖培养代数对萌发率 、增殖率 、成苗率的影响　
在MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.05mg/L培养基上进行继代增
殖培养 ,随着代次的增加 ,9代以后 ,其萌发率 、增殖率 、成苗
率呈明显下降趋势(表 3)。
　　表 3 继代代数对茎块萌发、增殖、成苗率的影响 %　
继代代数 萌发率 增殖率 成苗率 生长状况
1 85 280 90 幼苗茁壮
3 92 296 91 幼苗茁壮
6 96 315 93 幼苗茁壮
9 89 248 85 幼苗中等
12 80 110 60 幼苗细弱
2.4　NAA不同浓度对幼苗生根的影响　当继代培养的幼苗
长出 2～ 3片叶时 ,从基部切下单苗接于含有 5种不同浓度的
NAA生根培养基上培养 ,结果表明(表 4),在 NAA 0.1 ～ 1.0
mg/L的培养基上 ,10 d左右开始长根 , 30 d后不定根生根率
达 100%,不定根伸长达 3.5～ 4.7cm ,平均每株幼苗有 3.7 ～
5.4条根 ,幼苗长势粗壮。随着NAA浓度的增加或减少 ,不
定根数减少 ,幼苗长势变弱。
　　表4 NAA不同浓度对幼苗生根的影响
NAA
mg/ L
接种幼苗数
个
生根率
%
平均根数
条/株
平均根长
cm
幼苗长势
　　0.01 40 　50 1.5 2.0 细
0.1 40 100 3.7 3.5 中等
0.5 40 100 4.2 4.3 中等
1.0 40 100 5.4 4.7 粗壮
2.0 40 100 3.3 3.4 中等
2.5　生根苗的炼苗　幼苗在生根培养基上培养 30 d后 ,长
至 4～ 5 cm高 ,将瓶苗在室内过渡 7 ～ 10 d ,取出幼苗 ,洗净附
着在根上的培养基 ,用0.5%～ 1.0%的多菌灵或高锰酸钾溶
液消毒 30 s ,晾干。移栽在珍珠岩 3∶河沙 1的混合基质中 ,浇
足定根水 ,置于 80%荫蔽度的荫棚中 ,保湿 10 d后 ,荫蔽度调
整为 60%。在炼苗过程中必须保持较适宜的温 、湿度 ,高温
季节每天喷雾 2～ 3次。小苗移栽 10 d后 ,每 7 d喷施 0.5%
氮肥 1次或MS无机盐的营养液。30 d后 ,成活率可达 95%。
抽发新叶后即可移栽塑料袋或土壤中。
3　小结
试验表明 ,MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.5 mg/L 、MS+6-
BA 2.0mg/L+NAA 0.05mg/L 、1/2MS+NAA 1.0mg/L分别是
碧玉兰组培快繁的起始培养 、增殖培养和生根培养适宜的培
养基;继代增殖培养宜在第 9代以前就出瓶进行生根培养;
良好的炼苗技术可使其成活率达 95%。
参考文献
[ 1] 李明 ,施继惠.碧玉兰菌根真菌的调查[ J] .云南师范大学学报, 2006
(3):55.
[ 2] 范成明 ,李枝林.兰花组织培养及分子生物学研究进展[ J] .园艺学报 ,
2003(4):487.
(上接第 5504页)
　　表3 各处理对产量的影响
处理 小区产量∥kg 8档果产量∥kg/ hm2
A1B1 　　12.35 51189.15
A1B2 8.28 34322.55
A1B3 7.19 29827.35
A2B1 16.14 50188.95
A2B2 12.45 38714.55
A2B3 8.61 26759.10
A3B1 9.26 32901.15
A3B2 8.60 30551.10
A3B3 7.09 25179.15
3　小结
(1)不同的栽培密度和整枝方法对植株生长势影响较
大 ,双杆整枝和连续摘心整枝方法能明显降低植株高度 ,可
比单杆整枝低 48.43%～ 61.97%,方便果实采收 ,且有利于
植株在较低大棚(如中棚)内生长。
(2)连续摘心整枝能有效提高花序结果率 ,其中种植密
度 33000和 37 710株/hm2 结果率较高 , 43 995 株/hm2 结果
率最低 。
(3)不同的栽培密度和整枝方法对单果重和产量影响
较大。连续摘心整枝能提高单果重和产量 ,单果重比双杆
整枝重 29.10%,产量比双杆整枝高 29.64%;在相同整枝条
件下 ,随着密度的降低其平均单果重增加。
(4)综上所述 ,杭樱 1 号最适合的栽培密度为 33 000
株/hm2 ,结合连续摘心整枝方法能明显提高植株的结果力 、
单果重和产量 ,并能有效降低植株的高度。
　　本刊提示　文稿题名下写清作者及其工作单位名称 、邮政编码;第一页地脚注明第一作者简介 ,格式如下:“作者简介:
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5520 　　　　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2006年