全 文 ：收稿日期:2014-09-17; 修订日期:2015-03-26
基金项目:农业部华南作物基因资源与种质创制重点实验室开放基金
项目(No． 1630032014049)
作者简介:梅凌锋(1990-)，男(汉族)，湖北黄冈人，广东药学院中药学院
在读硕士研究生，学士学位，主要从事中药资源开发与药材道地性研究工
作．
* 通讯作者简介:杨 全(1972-)，男(汉族)，吉林双辽人，广东药学院中
药学院教授，博士学位，主要从事中药资源开发与药材道地性研究工作．
不同处理方法对广金钱草种子萌发的影响
梅凌锋，唐晓敏，杨 全* ，潘海运，程轩轩，张春荣
(广东药学院中药学院，广东 广州 510006)
摘要:目的 研究不同处理方法对广金钱草种子萌发的影响，为广金钱草规范化种植提供科学依据。方法 以浓硫酸破除
硬实和未破除硬实的种子为试验材料，采用不同浓度萘乙酸(NAA)、6 －苄氨基嘌呤(6 － BA)、赤霉素(GA3)、高锰酸钾
(KMnO4)及硝酸钾(KNO3)浸种处理观察记录种子发芽状况。结果 破除硬实种子中，25 mg·ml
－1 6 － BA 和
200 mg·ml －1 GA3处理效果最佳，发芽率分别为 84． 67%和 84． 00%，极显著高于 CK;未破除硬实的种子中，10 mg·ml
－1
KMnO4 处理组效果最佳，发芽率为 75． 00%，极显著高于 CK。结论 10 mg·ml
－1 KMnO4 处理能极显著提高广金钱草种
子发芽率。
关键词:广金钱草; 试剂处理; 发芽率; 发芽势
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 06． 080
中图分类号:Ｒ282． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)06-1476-02
广金钱草为豆科植物 Desmodiu ayrocifolium (Osbeck)Merr．，
以其干燥地上部分入药，有清热除湿、利尿通淋的功效［1］，功效
显著，近年来药材的需求量逐年增加，目前野生资源已无法满足
市场需求［2］。人工药材栽培基地主要集中在广西、广东两省，面
积较大。目前，对广金钱草的栽培技术研究较为深入，其种子存
在硬实，生产上多用浓硫酸破除［3］，但经浓硫酸处理后的种子冲
洗不干净会导致根系生长不良，从而影响药材生长。植物生长调
节剂是调节种子萌发的重要因子之一，其中 NAA 可促进细胞伸
长与分裂，诱导形成不定根，促进插枝条生［4］;6 － BA 可显著提
高降香黄檀种子的发芽率［5］;GA3 可通过增强蛋白酶体介导的
ＲGL2 降解来促进种子的萌发［6］;KMnO4 具有药肥兼用的特点，
除用作消毒剂外，还能够提高种子的发芽率［7］;KNO3 浸种可显
著提高川东獐牙菜种子发芽率和发芽指数，并能促进幼苗生
长［8］。目前，有关不同植物生长调节剂处理对广金钱草种子萌
发的影响少有报道，因此，本试验旨在研究不同处理方法对广金
钱草种子萌发的影响，探讨提高种子发芽率的最佳方法，为广金
钱草规范化种植提供技术支撑。
1 材料
广金钱草种子购于玉林药材市场，经广东药学院杨全教授鉴
定为广金钱草 Desmodiu ayrocifolium (Osbeck)Merr．干燥成熟种
子，以浓硫酸处理破除硬实及未破除硬实的种子作为供试材料。
2 方法
2． 1 广金钱草种子硬实破除 选取颗粒饱满的广金钱草种子，用
浓硫酸浸种 9 min破除硬实，不断搅拌，取出后用自来水冲洗干
净，滤纸拭干［3］，备用。
2． 2 破除硬实广金钱草种子浸种处理 分别用不同浓度 NAA、6
－ BA、GA3、KMnO4、KNO3 室温浸种 30 min 后用蒸馏水冲洗干
净。各处理浓度如下:NAA 设 10，50，100 mg·ml －1 3 个浓度;6
－ BA 设 10，25，50 mg · ml －1 3 个浓度;GA3 设 50，100，
200 mg·ml －1 3 个浓度;KMnO4 设 3，6，10 mg·ml
－1 3 个浓度;
KNO3 设 50，100，200 mg·ml
－1 3 个浓度。
2． 3 未破除硬实广金钱草种子浸种处理 浸种试剂种类和浓度
同“2． 2”，室温浸种 24 h后用自来水冲洗干净。
2． 4 发芽试验 将上述洗净的种子均匀铺在有滤纸的培养皿内，
每皿 50 粒，3 次重复，种子发芽箱 25℃催芽培养。以胚根突破种
皮后长度达到与种子等长、胚芽达到种子长度 50%时视为发芽，
每天统计发芽数。
2． 5 数据统计与处理 发芽势(%)= 3d内萌发种子粒数 /供试
种子总粒数 × 100%;发芽率(%)= 10d内萌发种子粒数 /供试种
子总粒数 × 100%;采用 SPSS 19． 0 进行方差显著性分析，用 Dun-
can法进行多重比较。
3 结果
3． 1 激素处理对广金钱草种子萌发的影响
3． 1． 1 NAA处理对广金钱草种子萌发的影响 由表 1 可知，低
浓度(10mg /ml)NAA浸种能够极显著提高破除硬实种子的发芽
率，说明 NAA处理能够促进破除硬实种子的萌发;NAA 浸种对
未破除硬实种子的发芽率影响不显著，高浓度 NAA 浸种处理显
著降低了发芽势。
表 1 不同浓度 NAA对广金钱草种子发芽势和发芽率的影响(珋x ± s)
浓度
/mg·ml － 1
破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
未破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
10 74． 00 ± 1． 15Bb 82． 00 ± 1． 15Cc 37． 00 ± 3． 11Bb 68． 00 ± 2． 00
50 64． 00 ± 3． 05Aa 70． 67 ± 1． 76AaBb 20． 00 ± 4． 76Aa 65． 50 ± 6． 50
100 64． 67 ± 1． 76Aa 73． 33 ± 0． 67Bb 21． 00 ± 2． 65Aa 69． 00 ± 4． 20
CK 68． 67 ± 0． 67AaBb 68． 67 ± 0． 67Aa 39． 00 ± 2． 38Bb 62． 50 ± 2． 06
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
3． 1． 2 6 － BA对广金钱草种子萌发的影响 由表 2 可知，6 － BA
浸种能极显著提高破除硬实种子的发芽势和发芽率，
25 mg·ml －1 处理组发芽势和发芽率极显著性高于 CK，
50 mg·ml －1处理组发芽势和发芽率均有所降低，说明低浓度 6
－ BA对破除硬实广金钱草种子的萌发有促进作用。6 － BA浸种
对未破除硬实广金钱草种子萌发影响不显著。
3． 1． 3 GA3 对广金钱草种子萌发的影响 由表 3 可知，GA3 浸种
能够显著提高破除硬实种子的发芽势和发芽率，并且随着 GA3
浓度的增大而升高，200 mg·ml －1时发芽势和发芽率均极显著高
·6741·
时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 6
于 CK。说明高浓度 GA3 对破除硬实的广金钱草种子萌发有促
进作用。
表 2 不同浓度 6 － BA对广金钱草种子发芽势和发芽率的影响(珋x ± s)
浓度
/mg·ml － 1
破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
未破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
10 78． 67 ± 4． 37BbC 81． 33 ± 1． 76Bb 42． 00 ± 1． 83 65． 50 ± 1． 70
25 83． 33 ± 2． 67bC 84． 67 ± 1． 33Bb 39． 00 ± 4． 51 62． 00 ± 2． 83
50 63． 33 ± 1． 33Aa 66． 00 ± 2． 00Aa 44． 00 ± 1． 41 67． 50 ± 1． 50
CK 68． 67 ± 0． 67AaB 68． 67 ± 0． 67Aa 39． 00 ± 2． 38 62． 50 ± 2． 06
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
表 3 不同浓度 GA3 对广金钱草种子发芽势和发芽率的影响(珋x ± s)
浓度
/mg·ml － 1
破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
未破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
50 65． 33 ± 3． 712Aa72． 00 ± 0． 00AaBb 40． 50 ± 2． 50 70． 50 ± 3． 30
100 68． 67 ± 1． 764Aa74． 67 ± 1． 764Bb 43． 00 ± 4． 04 71． 00 ± 3． 11
200 80． 67 ± 1． 333Bb84． 00 ± 1． 155Cc 42． 50 ± 2． 22 65． 50 ± 2． 63
CK 68． 67 ± 0． 67Aa 68． 67 ± 0． 67Aa 39． 00 ± 2． 38 62． 50 ± 2． 06
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
3． 2 化学试剂处理对广金钱草种子萌发的影响
3． 2． 1 KMnO4 对广金钱草种子萌发的影响 由表 4 可知，适宜
浓度 KMnO4 浸种能显著提高广金钱草种子的发芽率。浓度为
6 mg·ml －1时，破除硬实的广金钱草种子发芽率为 73． 33%和
77． 33%，较 CK 提高了 4． 44% 和 8． 66% (P ＜ 0． 05);浓度为
10 mg·ml －1时，未破除硬实的广金钱草种子发芽率为 75． 00%，
为对照组的 1． 2 倍(P ＜ 0． 01)。
表 4 不同浓度 KMnO4 对广金钱草种子发芽势和发芽率的影响(珋x ± s)
浓度
/mg·ml － 1
破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
未破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
3 66． 67 ± 4． 05Bb 72． 67 ± 0． 67Bb 37． 00 ± 5． 07 61． 00 ± 2． 38Aa
6 73． 33 ± 4． 37Bb 77． 33 ± 3． 71Bc 37． 00 ± 1． 00 68． 00 ± 2． 16AaBb
10 47． 33 ± 2． 40Aa 55． 33 ± 1． 76Aa 32． 50 ± 3． 30 75． 00 ± 4． 43Bb
CK 68． 67 ± 0． 67Bb 68． 67 ± 0． 67Bb 39． 00 ± 2． 38 62． 50 ± 2． 06Aa
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
3． 2． 2 KNO3 对广金钱草种子萌发的影响 由表 5 可知，适宜浓
度 KNO3 浸种能够显著提高广金钱草种子的发芽率。浓度为
100 mg·ml －1时，破除硬实的广金钱草种子发芽势和发芽率分别
为 72． 67%和 78． 00%，较 CK高 4． 00%、9． 33%(P ＜ 0． 01);浓度
为 100 mg·ml －1时，未破除硬实种子发芽势和发芽率达到
41． 50%和 73． 00%，为对照组的 1． 06，1． 17(P ＜ 0． 01)倍。
表 5 不同浓度 KNO3 对广金钱草种子发芽势和发芽率的影响(珋x ± s)
浓度
/mg·mL －1
破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
未破除硬实种子
发芽势 /% 发芽率 /%
50 66 ± 1． 15AaB 68 ± 1． 155AaB 39． 50 ± 2． 22 70． 00 ± 3． 16ab
100 72． 67 ± 0． 67Bb78 ± 3． 46Bb 41． 50 ± 3． 59 73． 00 ± 3． 70b
200 63． 33 ± 3． 33Aa 66． 67 ± 2． 40Aa 34． 50 ± 1． 71 73． 00 ± 0． 58b
CK 68． 67 ± 0． 67AaBb68． 67 ± 0． 67Aa 39． 00 ± 2． 38 62． 50 ± 2． 06a
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
3． 3 最佳处理方法筛选 以发芽率作为评价指标，选择发芽率最
高的处理方法进行方差析。
3． 3． 1 破除硬实种子最佳处理方法的筛选 由表 6 可知，
25 mg·ml －16 － BA和 200 mg·ml －1 GA3 处理组发芽势显著高
于其他处理组，发芽率也较其他处理组高。
3． 3． 2 未破除硬实种子最佳处理方法的筛选 由表 7 可知，浓度
为 10 mg· ml －1 的 KMnO4 浸种后广金钱草种子发芽率达
75． 00%，显著高于其他处理组。
表 6 破除硬实种子最佳处理方法的筛选(珋x ± s)
组别 浓度 /mg·ml － 1 发芽势 /% 发芽率 /%
NAA 10 74． 00 ± 1． 15a 82． 00 ± 1． 15
6 － BA 25 83． 33 ± 2． 67b 84． 67 ± 1． 33
GA3 200 80． 67 ± 1． 333ab 84． 00 ± 1． 155
KMnO4 6 73． 33 ± 4． 37a 77． 33 ± 3． 71
KNO3 100 72． 67 ± 0． 67a 78 ± 3． 46
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
表 7 未破除硬实种子最佳处理方法的筛选(珋x ± s)
组别 浓度 /mg·ml － 1 发芽势 /% 发芽率 /%
NAA 100 21． 00 ± 2． 65Aa 69． 00 ± 4． 20
6 － BA 50 44． 00 ± 1． 41Bc 67． 50 ± 1． 50
GA3 100 43． 00 ± 4． 04Bc 71． 00 ± 3． 11
KMNO4 10 32． 50 ± 3． 30ABb 75． 00 ± 4． 43
KNO3 100 41． 50 ± 3． 59Bbc 73． 00 ± 3． 70
表中大写字母表示 0． 01 极显著水平，小写字母表示 0． 05 显著水平
4 讨论
采用植物生长调节剂浸种是提高种子发芽率、促进幼苗早期
生长发育的一种有效方法［9］。随着科学技术和农业的发展，运
用植物生长调节剂调控植物的生长发育和产量形成已经逐渐成
为农业生产中不可缺少的重要措施，与传统农业技术相比，植物
生长调节剂能够调控基因的表达，实现作物生长的“人为”调
控［10］。
本实验结果表明，适宜浓度的 NAA、GA3、6 － BA、KMnO4 和
KNO3 均可促进广金钱草种子的萌发。25 mg·ml
－1 6 － BA 和
200 mg·ml －1 GA3 处理对于破除硬实的广金钱草种子处理效果
最佳，GA3 是一种主要的种子萌发促进剂，在适宜的浓度下可通
过代替低温层积，打破某些植物种子的休眠，促进其萌发［11，12］。
10 mg·ml －1 KMnO4 处理对未破除硬实的广金钱草种子浸种效
果最佳，KMnO4 浸种可消除种子表面携带的病源微生物及其他
有害物质，也可与种子内膜脂、糖类等一些还原性物质起反应使
其氧化变性，使种皮透性或种子内物质组成发生变化，从而改变
种子的物质代谢状态，种子便从休眠状态转向萌发状态［8，13］。
本实验结果还表明，NAA、GA3 和 6 － BA 等植物激素对提高
破除硬实的广金钱草种子发芽率效果显著，但对未破除硬实的广
金钱草种子影响不大，可能原因是激素浸种时间(24h)过短，有
待进一步研究。KMnO4 和 KNO3 对促进破除硬实和未破除硬实
的广金钱草种子的萌发都有显著效果。可能原因:①KMnO4 的
强氧化性可以对种子进行消毒，同时改善种子透性，进而打破种
子的休眠。②广金钱草种子存在硬实，植物激素较难进入种子内
部从而不能发挥作用，K +则可能通过离子通道较易进入种子内
部，对打破种子休眠有促进作用。浓硫酸处理破除硬实的种子发
芽率最高提高 16． 00%，未破除硬实的种子发芽率最高提高
12． 50%。由于浓硫酸具有强酸性、强腐蚀性、强氧化性等特点，
使用过程中危险性高，对水体和土壤污染严重，故考虑
10 mg·mL －1KMnO4 浸种 24 h，能极显著提高广金钱草种子发芽
率，建议推广使用。
参考文献:
［1］ 国家药典委员会．中国药典，一部［S］．北京:中国医药科技出版社，
2010:43．
［2］ 岑丽华，徐 良，郑雪花，等．广金钱草规范化栽培技术［J］．湖南中
医学院学报，2005，25(05):29．
［3］ 唐晓敏，程轩轩，杨 全，等．广金钱草种子萌发特性及种子硬实研
究［J］．种子，2014，33(3):78．
［4］ 潘瑞炽．植物生理学［M］．北京:高等教育出版社，2004:167．
·7741·
LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 6 时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期
［5］ 吴国欣，王凌晖，梁惠萍，等．三种植物生长调节剂对降香黄檀种子
发芽的影响［J］．基因组学与应用生物学，2010，29(1):120．
［6］ 于晓丹，毛培胜．激素对草本植物种子休眠、萌发的影响［J］． 草业
科学，2014，31(1):150．
［7］ 孙 鹏，周道顺，梁 臣，等．高锰酸钾及植物激素对君迁种子萌发
的影响［J］．东北林业大学学报，2014，42(6):19．
［8］ 刘建成，刘新元，刘 冰，等．不同处理对川东獐牙菜种子萌发的影
响［J］． 中草药，2011，42(2):367．
［9］ 金正律．植物生长调节剂对决明子种子发芽及幼苗生长的影响
［J］． 种子，2009，28(12):79．
［10］ 王 非，王金侠，李 强，等． GA3 和 IAA 处理对 4 种铁线莲种子
萌发的影响［J］． 草业科学，2014，31(4):672．
［11］ 赵 敏，邵凤赟，周淑新，等．植物生长调节剂对农作物和环境的安
全性［J］． 环境与健康杂志，2007，24(5):370．
［12］ 郑 健，郭守华，宋 瑜，等．臭椿种子萌发最适条件研究［J］ ． 西
北植物学报，2007，27(5):1030．
［13］ 王文帆，杜 倩，梁素钰，等．不同溶液对橡胶草种子发芽能力的影
响［J］． 安徽农业科学，2014，42(2):369．
收稿日期:2014-08-29; 修订日期:2015-01-30
基金项目:贵州省中药现代化重大专项项目(黔科合重大专项字［2012］
6010 号);
贵州省贵阳市科技计划项目(筑科合同［2011204］8 号)
作者简介:徐东升(1988-)男(汉族)，湖北孝感人，贵阳中医学院在读硕士
研究生，学士学位，主要从事中药质量控制及新药研究工作．
* 通讯作者简介:高言明(1956 －)，男(汉族)，贵州贵阳人，贵阳中医学院
教授，硕士研究生导师，学士学位，主要从事中药质量控制及新药研究工
作．
不同采收期毛钩藤药材中钩藤碱等
3 种成分的含量变化研究
徐东升1，高言明1* ，杨 春2，林昌虎3，吴明花1，唐才林1
(1．贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002; 2． 贵州理工学院，贵州 贵阳 550003;
3．贵州科学院，贵州 贵阳 550001)
摘要:目的 测定不同采收期毛钩藤中钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱的含量变化，为毛钩藤的合理采收及品质评价
提供依据。方法 采用高效液相色谱法，色谱条件:WondaSil C18(4． 6 mm × 200 mm，5μm)色谱柱，以乙腈 － 0． 2%氨水梯
度洗脱，流速为 1ml·min －1，检测波长为 254nm，柱温为 25℃。结果 1 ～ 12 月采收的毛钩藤中的钩藤碱、去氢钩藤碱、异
去氢钩藤碱的含量得到准确测定。结论 当年秋季至次年初夏采收的毛钩藤药材质量相对较好。
关键词:毛钩藤; 钩藤碱; 去氢钩藤碱; 异去氢钩藤碱; 不同采收期; 高效液相色谱
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2015． 06． 081
中图分类号:Ｒ284． 2;Ｒ567 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2015)06-1478-02
在现行使用的《中国药典》2010 版上没有采用某个有效成分
含量测定指标作为中药钩藤质量评价的标准［1］，因此钩藤药材
的采收期是根据民间习惯于秋、冬二季采收。用具有降压药效作
用的钩藤碱、去氢钩藤碱、异去氢钩藤碱含量［2 ～ 4］来研究中药钩
藤不同采收期的质量就有一定的意义。
1 仪器与试药
高效液相色谱仪(Agilent1260)，DAD 检测器，安捷伦化学工
作站;AE － 240 双量程电子分析天平，量程:万分之一和十万分之
一两档(梅特勒 －托利多上海有限公司)，Dela320 型 pH计(梅特
勒 －托利多上海有限公司)，超声波清洗器(KQ5200DE 型，昆山
市超声仪器有限公司)。钩藤碱对照品购自中国食品药品检定
研究院，(批号:111927 － 201102)，去氢钩藤碱和异去氢钩藤碱对
照品均购自天津马克生物技术有限公司(批号分别为:PCM －
GT20010304 － 3，PCM － GT20010304 － 4);乙腈、甲醇、氨水和三
氯甲烷均为分析纯，水为娃哈哈纯净水。药材样品均采自贵州省
开阳县翁昭村钩藤种植基地人工种植五年生毛钩藤，采样于
2012 年 1 月至 2012 年 12 月，按每月 1 至 10 号之内在同一毛钩
藤种植区域中采取带钩老茎枝作为样品，经贵阳中医学院讲师付
志明鉴定为茜草科植物毛钩藤 Uncaria hirsute Havil，药材样品在
室内阴干经粉碎后于 45℃烘至恒重并置于干燥器中备用。
2 方法与结果
2． 1 对照品溶液的制备 分别精密称取钩藤碱、去氢钩藤碱和异
去氢钩藤碱各适量，用甲醇配制成以上 3 种对照品浓度均为
0． 10mg·ml －1的混合对照品溶液。
2． 2 供试品溶液的制备 精密称取各毛钩藤样品约 2． 0g，加入
2ml氨水浸泡 30min，再加入三氯甲烷 30ml，甲醇 5ml，超声提取
1h，取出，放冷，过滤，滤液置于 60℃水浴上挥干，残渣用甲醇溶
解于 10mL量瓶中并定容至刻度，摇匀，用 0． 45μm 微孔滤膜虑
过，即得供试品溶液。
2． 3 色谱条件［5］ 色谱柱为 WondaSil C18柱(4． 6 mm × 200 mm，
5μm);流动相 A为乙腈 － B为 0． 2%氨水，梯度洗脱，0 ～ 45min，
72% ～45% B;45 ～ 60min，45% ～37% B。检测波长 254nm;柱温
25℃;流速 1． 0ml·min －1;进样量 20μl，分离效果见图 1 和图 2。
A －去氢钩藤碱 B －异去氢钩藤碱 C －钩藤碱
图 1 毛钩藤供试品色谱图
2． 4 线性关系考察 精密量取“2． 2”项下的混合对照品溶液
·8741·
时珍国医国药 2015 年第 26 卷第 6 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2015 VOL． 26 NO． 6