全 文 ：［收稿日期］ 20120419(001)
［基金项目］ 江西省科技厅支撑计划(2010BSA10400) ;江西省卫生厅中医药科研项目(2008Z0006) ;南昌市科技重点攻关项目(洪财定
［2008］68 号)
［第一作者］ 邹志辉，硕士，主治医师，从事泌尿系结石中西医结合防治研究，Tel:0791-86633476，E-mail:qvb119@ 163. com
［通讯作者］ * 崔维奇，教授，主任医师，从事泌尿外科临床及科研，Tel:13707099328，E-mail:cl93715@ sina． com
金钱草黄酮提取物对大鼠肾脏草酸钙结石形成的影响
邹志辉1，崔维奇1* ，谌辉鹏1，胡著云2，肖辉1，赖春花1，朱根华3，严志宏3，王共先4
( 1. 南昌市第三医院 泌尿外科，南昌 330009; 2. 江西中医学院附属医院 泌尿外科，南昌 330006;
3. 江西中医学院 现代中药制剂教育部重点实验室，南昌 330004;
4. 南昌大学第一附属医院泌尿外科，南昌 330006)
［摘要］ 目的:探讨金钱草黄酮提取物对大鼠肾草酸钙结石形成的影响。方法:饲喂 1%乙二醇溶液建立大鼠肾草酸钙
结石模型，分别给予 100，200，400 mg·kg －13 种剂量的金钱草黄酮提取物 6 周。用离子对高效液相色谱法测定大鼠尿中草酸
浓度、含量，全自动生化分析仪测定血清尿素氮(BUN) ，Cr及 Ca2 +，P3 +，K +，Na +含量，原子吸收光谱仪测定肾组织及尿 Ca2 +，
Mg2 +含量，尿总 Ca2 +，Mg2 +含量测定，显微镜下观察肾小管中草酸钙结晶分布和肾小管扩张情况。结果:不同剂量黄酮组大
鼠肾 Ca2 +含量、24 h尿 Ca2 +分泌量，肾组织的草酸钙晶体沉积及肾小管扩张均明显低于草酸钙结石模型组 (P ＜ 0. 05) ，黄酮
组大鼠尿草酸浓度和 24 h累积草酸含量和草酸钙结石模型组间无明显差异。结论:金钱草黄酮提取物能抑制实验性高草酸
尿症大鼠肾脏草酸钙晶体的形成。干预实验大鼠体内钙代谢可能是金钱草黄酮提取物抑制大鼠肾脏草酸钙晶体形成的途径
之一。
［关键词］ 黄酮;草酸钙结石;金钱草
［中图分类号］ R285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)04-0195-05
Effect of Flavonoids Extracted from Lysimachia Hristinae Hance
on Renal Calcium Oxalate Stones in Rats
ZOU Zhi-hui1，CUI Wei-qi1* ，CHEN Hui-peng1，HU Zhu-yun2，XIAO Hui1，
LAI Chun-hua1，ZHU Gen-hua3，YAN Zhi-hong3，WANG Gong-xian4
(1. Departement of Urology，the Third Hospital of Nanchang City，Nanchang 330009，China;
2. Departement of Urology，Chinese Medicine Hospital of Jiangxi Province，Nanchang 330006，China;
3. Key Laboratory of Modern Preparation of Traditional Chinese Medicine (TCM) ，Ministry of Education，
Jiangxi University of TCM，Nanchang 330004，China;
4. Departement of Urology，First Affiliated Hospital of Nanchang University，Nanchang 330006，China)
［Abstract］ Objective:To investigate the effect of flavonoids extracted from Lysimachia Hristinae Hance
on renal oxalate calcium (CaOx)stone formation in rats． Method:The rat model of renal calcium oxalate stones
formation was induced by administering 1% ethylene glycol (EG)for 9 weeks，then these rats were fed with 100，
200，400 mg·kg －1 of flavonoids extracted from Lysimachia Hristinae Hance respectively for 6 weeks． The
concentration and the 24 h content of oxalic acid in urine was determined by paired ion high performance liquid
chromatography，the serum urea nitrogen (BUN) ，Cr，Ca2 +，P3 +，K +，and Na + content in serum were
determined by automatic biochemical analyzer，the Ca2 + and Mg2 + content in kidney tissues and urine was
determined by atomic absorption spectrometry，the distribution of crystals in renal tubular and the renal tubular
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2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2013.04.066
distension were observed under microscope． Result:In the rats administered with different doses of flavonoids，
renal tissue calcium content，urinary calcium excretion and crystals deposition in renal tissue and tubular ectasia
were significantly lower than those of the mode;group of stone formation (P ＜ 0. 05)． However，there were no
significant differences between the two groups in the concentrations of Ox and the 24 h content of Ox in rats．
Conclusion:The flavonoids can inhibit experimental kidney calcium oxalate crystal formation in hyperoxaluria rat．
The reason may be related to the metabolism of calcium was regulated by the flavonoids．
［Key words］ flavonoids;calcium oxalate stones;Lysimachia Hristinae Hance
草酸钙结石是泌尿系结石中最常见的结石种
类，且由于其复发率高，成为泌尿系结石的研究重
点。研究表明，氧自由基可以促进草酸钙结石的形
成［1］，从抗氧自由基作用的药材中选取结石防治新
药是一条研究思路。中草药在尿石症的防治上有着
潜在的优势，金钱草是临床防治疗尿石的常用中草
药［2］，其具体有效成分及作用机制并不明确，我们
从中提取一种黄酮类化合物，该成分具备良好的抗
氧自由基作用［3］。本实验检测各组大鼠体重变化、
24 h尿量;大鼠尿草酸浓度、含量及 pH;大鼠血、尿
生化指标;肾脏草酸钙结晶及病理变化情况等方面
研究金钱草黄酮类化合物对大鼠草酸钙结石的防治
作用。
1 材料
1. 1 药物 广金钱草提取黄酮类化合物(质量分
数为 50%) ，南京泽郎科技有限公司提供，生产批号
ZL20090516RC5。芦丁对照品，购自中国药品生物
制品检定所，批号 080-9303。
1. 2 动物 SD健康雄性大鼠，清洁级，体重 220 ～
260 g，由江西中医学院动物实验中心提供，动物许
可证号 SCXK(赣)20050001。
1. 3 仪器 515 型高效液相色谱仪系统，包括 515
型 二 元 输 液 泵，7725i 型 手 动 进 样 器，
SymmetryShieldTM RP18 柱，WAT038040 型柱温箱，
2996 型 PDA 检测器，EMPOWER 中文色谱工作站
(美国 Waters公司) ;雷磁 PHS-3C型精密 pH计(上
海精密科学仪器有限公司) ;AL204 电子分析天平
(梅特勒-托利多仪器上海有限公司) ;TGL-16C 台式
高速离心机(上海安亭科学仪器厂) ;KQ3200E 型超
声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司) ;精密移液
器(大龙医疗设备有限公司)。Olympus Au1000 自
动分析仪(日本 Olympus公司) ，日立 180-80 型原子
吸收光谱仪(日本日立公司) ，LKB2088 型超薄切片
机(瑞典制造) ，Leitj1512 型石蜡切片机(西德制
造) ，SW-CJ-113 型标准型净化工作台(苏州净化设
备厂) ，Nikon80i型显微镜(日本尼康公司)。
2 方法
2. 1 分组及给药 大鼠适应性饲养 2 周，体重达
250 ～ 300 g，随机分为 5 组，每组 10 只，A 组为空白
对照组，大鼠每日自由饮自来水;B 组为结石模型
组，大鼠每日自由饮用 1%乙二醇溶液，造模 9 周后
开始自由饮用自来水;C 组为低剂量金钱草黄酮提
取组，大鼠在 B 组基础上，造模 9 周后开始用 100
mg·kg －1黄酮类药物灌胃 6 周;D组、E 组依此类推，
9 周后分别用 200，400 mg·kg －1黄酮类药物灌胃 6
周。各组大鼠均用标准饲料饲养 15 周。
2. 2 观察指标及检测方法 称重实验前后大鼠体
重，比较实验前后大鼠体重变化;实验结束前用代谢
笼收集 24 h尿量，测 24 h 尿量;测定大鼠尿中草酸
浓度、含量及尿 pH。处死动物后腹腔静脉穿刺取
血，离心取血清，测血清 BUN，Cr 及 Ca2 +，P3 +，K +，
Na +含量。切取右肾并纵向剖开，肉眼观察草酸钙
结晶情况，并作石蜡切片 HE 染色，Nikon80i 显微镜
下观察肾小管中草酸钙结晶分布和肾小管扩张情
况，参考文献［4］制定评分标准判定肾脏草酸钙结
晶及肾小管扩张程度，判定标准如下: (1)结晶观察
程度:0 分:无结晶;1 分:有散在的结晶亮点;2 分:
广泛的不成堆或局限结晶;3 分:有成堆结晶散在不
连接;4 分:结晶成堆且互相连接;5 分:广泛成堆结
晶，连接成片。(2)肾小管扩张程度:0 分:无扩张;1
分:散在轻度扩张;2 分:广泛轻度扩张伴散在中度
扩张;3 分:广泛中度扩张伴散在重度扩张;4 分:广
泛重度扩张。原子吸收光谱仪进行左肾组织及尿
Ca2 +，Mg2 +含量，尿总 Ca2 +，Mg2 +含量测定。
2. 3 统计学分析 采用 SPSS 19 统计软件，数据以
珋x ± s表示，组间比较用单因素方差分析检验各组间
差异显著性，P ＜ 0. 05 为有统计意义。
3 结果
3. 1 一般情况 实验过程中共有 4 只大鼠死亡，
B，C，D，E组各死亡 1 只大鼠。各组大鼠体重增加
量、24 h尿量见表 1。B，C，D，E组大鼠 24 h尿量明
显多于 A组，有极显著性差异(P ＜ 0. 01) ，黄酮提取
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013
物各组大鼠的 24 h 尿量与 B 组相比，无显著性差
异;A组大鼠体重增加明显大于 B，C，D组大鼠体重
增加，有极显著性差异(P ＜ 0. 01) ，E 组大鼠体重增
加与 A组大鼠体重增加无显著性差异，E 组大鼠体
重增加明显大于 B，C组，有显著性差异(P ＜ 0. 05) ，
表明 400 mg·kg －1黄酮类药物可有效控制因 1%乙
二醇造模过程所致大鼠体重下降;各组大鼠尿 pH
无显著性差异。
表 1 金钱草黄酮提取物对大鼠体重增加量、24 h尿量及尿 pH的影响(珋x ± s)
组别
动物数
/只
剂量
/mg·kg －1
24 h尿量
/mL
体重增加量
/ g
尿 pH
对照 10 － 7. 11 ± 0. 78 175. 88 ± 23. 98 8. 47 ± 0. 10
模型 9 － 20. 33 ± 9. 111) 81. 33 ± 35. 382) 8. 61 ± 0. 31
金钱草 9 100 6. 44 ± 3. 351) 115. 33 ± 31. 132) 8. 65 ± 0. 33
9 200 17. 87 ± 5. 191) 124. 50 ± 32. 52) 8. 65 ± 0. 27
9 400 19. 33 ± 6. 611) 153. 44 ± 34. 62 8. 47 ± 0. 10
注:与对照组比较1)P ＜ 0. 01，与模型组比较2)P ＜ 0. 01。
3. 2 大鼠 24 h尿草酸(Ox)浓度、Ox含量的比较及
尿 Ca2 +，Mg2 +分泌量、肾 Ca2 +，Mg2 +含量比较 结
果如表 2。A组大鼠尿中 Ox和 24 h累积 Ox含量明
显低于其他各组(P ＜ 0. 05) ，而 B，C，D，E 组间大鼠
尿中 Ox 和 24 h 累积 Ox 含量无明显差异;C，D，E
组肾 Ca2 +含量及 24 h 尿 Ca2 +量高于 A 组，但低于
B组，差异均显著(P ＜ 0. 05)。各组间肾 Mg2 +含量
及 24 h尿 Mg2 +分泌量无显著性差异。
表 2 金钱草黄酮提取物对大鼠尿草酸浓度、尿草酸含量及尿 Ca2 +、Mg2 +分泌量和肾 Ca2 +，Mg2 +含量的影响(珋x ± s)
组别
动物数
/只
剂量
/mg·kg －1
尿 Ox
/mg·L －1
24 h尿 Ox含量
/mg
尿 Ca2 +
/μmol·24 h －1
尿 Mg2 +
/mol·24 h －1
肾 Ca2 +
/mg·g － 1
肾 Mg2 +
/μmol·g － 1
对照 10 － 53. 81 ± 34. 35 0. 82 ± 0. 56 3. 24 ± 0. 86 9. 41 ± 1. 89 2. 26 ± 0. 82 11. 20 ± 1. 22
模型 9 － 96. 32 ± 25. 461) 2. 31 ± 1. 121) 8. 42 ± 1. 462) 6. 97 ± 1. 62 11. 35 ± 2. 412) 9. 41 ± 2. 51
金钱草 9 100 95. 44 ± 25. 531) 2. 23 ± 0. 921) 4. 13 ± 1. 391) 8. 06 ± 1. 09 8. 62 ± 2. 161) 11. 20 ± 3. 34
9 200 90. 08 ± 25. 141) 2. 06 ± 0. 811) 5. 81 ± 1. 741) 8. 23 ± 2. 01 7. 93 ± 2. 231) 9. 06 ± 1. 79
9 400 85. 17 ± 17. 421) 1. 93 ± 0. 761) 5. 42 ± 1. 171) 7. 12 ± 1. 74 7. 66 ± 1. 671) 10. 25 ± 3. 21
注:与对照组比较1)P ＜ 0. 05;与模型组比较2)P ＜ 0. 05。
3. 3 血清生化检查 结果见表 3。A组血清 BUN，
Cr含量明显低于其他各组，有显著性差异(P ＜
0. 05) ，其他各组间血清 BUN，Cr 含量无明显差异;
A组血清 Ca2 +明显高于其他组，有显著性差异(P ＜
0. 05) ，而 B，C，D，E 组之间血清 Ca2 +无显著性差
异;P2 +，K1 +，Na1 +含量各组间亦无显著性差异。
表 3 金钱草黄酮提取物对大鼠生化指标的影响(珋x ± s)
组别
动物数
/只
剂量
/mg·kg －1
BUN
/mmol·L －1
Cr
/μmol·L －1
Ca2 +
/mmol·L －1
P2 +
/mmol·L －1
K +1
/mmol·L －1
Na +1
/mmol·L －1
对照 10 － 9. 58 ± 2. 28 36. 60 ± 3. 91 2. 73 ± 0. 11 3. 41 ± 0. 65 10. 05 ± 1. 96 155. 42 ± 6. 50
模型 9 － 16. 18 ± 4. 181) 48. 75 ± 6. 691) 2. 39 ± 0. 461) 3. 46 ± 0. 95 8. 78 ± 1. 85 152. 86 ± 9. 03
金钱草 9 100 9. 93 ± 1. 741) 37. 71 ± 5. 851) 2. 38 ± 0. 191) 3. 32 ± 0. 53 8. 03 ± 1. 76 147. 84 ± 4. 48
9 200 8. 22 ± 1. 171) 36. 00 ± 4. 841) 2. 42 ± 0. 221) 3. 64 ± 0. 61 8. 36 ± 1. 66 148. 58 ± 5. 48
9 400 9. 06 ± 2. 42 36. 85 ± 6. 171) 2. 52 ± 0. 30 3. 25 ± 0. 11 7. 67 ± 1. 42 150. 41 ± 7. 55
注:与对照组比较1)P ＜ 0. 05。
3. 4 外观观察及肾组织病理学检查 肉眼观察示
A组为正常肾组织结构，肾脏表面色泽均匀，组织结
构清晰，切面鲜红色，病理切片未见明显结晶及肾小
管扩张;B组大鼠肾脏明显肿胀，可见肾脏表面有突
出并散在分布的黄白色结石样颗粒物，切面苍白色，
刀切及手触摸时均有明显细砂摩擦感，皮质和髓质
分界不清楚，而其余组之间肾脏大体外形、颜色无明
显差别，病理切片见结晶广泛分布，部分互相连接成
片、成堆，且直径较大，管腔内周围有晶体聚集。显
微镜下显示大鼠肾脏草酸钙晶体为淡蓝色晶体，不
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邹志辉，等:金钱草黄酮提取物对大鼠肾脏草酸钙结石形成的影响
规则、折光性较强。各组大鼠肾脏草酸钙结晶及肾
小管扩张评分如表 4，见图 1。各组间肾脏草酸钙结
晶及肾小管扩张程度均有一定差异，其中 A 组大鼠
肾脏结晶及肾小管扩张程度均明显轻于 B，C，D，E
组(P ＜ 0. 01) ;B 组大鼠肾脏结晶及肾小管扩张程
度均重于其他各组，其中与 E 组有明显差异(P ＜
0. 01) ，与 C，D组有差异(P ＜ 0. 05) ;E 组大鼠肾草
酸钙结晶轻于 C组(P ＜ 0. 05) ，D，E组间无差别;E
组大鼠肾小管扩张程度明显轻于 C 组及 D 组(P ＜
0. 01) ，C，D组间无差别。
A. 对照组;B．模型组;C. 金钱草 100 g·kg －1组;D. 金钱草 200 g·kg －1组;E. 金钱草 400 g·kg －1组
图 1 金钱草黄酮提取物对大鼠肾脏的影响(HE染色，× 100)
表 4 金钱草黄酮提取物对大鼠肾小管
扩张及肾脏结晶的影响(珋x ± s)
组别
动物数
/只
给药剂量
/mg·kg －1
肾小管
扩张积分
肾脏结晶
积分
对照 10 － 0. 11 ± 0. 33 0. 22 ± 0. 44
模型 9 － 3. 66 ± 0. 701) 3. 44 ± 1. 011)
金钱草 9 100 2. 62 ± 1. 181，3，4，5) 2. 62 ± 0. 741，3)
9 200 2. 55 ± 1. 131，3，5) 2. 33 ± 0. 501，3)
9 400 1. 44 ± 0. 521，2) 1. 66 ± 0. 71，2，4)
注:与对照组比较1)P ＜ 0. 01;与模型组比较2)P ＜ 0. 01，3)P ＜
0. 05;与高剂量黄酮组比较4)P ＜ 0. 05，5)P ＜ 0. 01。
4 讨论
金钱草为报春花科植物过路黄的干燥全草，具
有清热利湿、通淋、消肿之功效，是治疗尿路结石的
常用中草药。现代药理研究表明，金钱草化学成分
主要为有黄酮类化合物(flavonoids)、三萜醇配糖
体、生物碱、多糖、鞣质、氨基酸及氯化钾等［5］，其中
黄酮类化合物为主要成分，所含化合物分子中的羰
基及酚羟基，可能是预防草酸钙结石形成和复发的
功能基团。一方面可与尿液中的钙离子络合形成溶
解度较大的化合物，降低尿液的草酸钙饱和度，抑制
草酸钙结晶的生长，一方面可与晶体表面暴露的钙
离子结合，覆盖晶体表面生长点，阻止结晶相互聚集
或粘附于细胞表面。另外，黄酮结构中的羟基可与
草酸根的羧基产生氢键作用，降低游离的草酸根离
子浓度，抑制草酸钙结晶的生长［6］。本实验发现造
模后大鼠服用金钱草黄酮后，大鼠肾 Ca2 +含量、24 h
尿 Ca2 +分泌量，肾组织的草酸钙晶体沉积均多于空
白组，却明显少于草酸钙结石模型组，这与上述描述
机制相符，表明黄酮提取物是金钱草防治尿路结石
的有效成分。
乙二醇法是复制泌尿系统结石动物模型的常规
方法，也是新药评审中规定选用的方法之一。该法
操作简单、成石率高，并且重复性好，已被广泛应用
于防治泌尿系结石药物的药理学、药效学研究。本
实验中 A组血清 Ca2 +明显高于其他组，而 B，C，D，
E组之间血清 Ca2 +无显著性差异，考虑可能正是大
鼠在肾结石造模过程中，形成草酸钙结晶，消耗了大
鼠体内的 Ca2 +所致。另外，国内外新近研究表明高
浓度的草酸本身具有细胞毒性作用，诱导肾小管上
皮细胞氧自由基-抗氧自由基系统失衡，破坏肾脏上
皮细胞正常组织结构，导致草酸钙结晶黏附，配合草
酸钙成核、生长、聚集，从而促进肾结石的形成［1］。
近年来发现，黄酮类化合物可能是除维生素 E、维生
素 C类和胡萝卜素外的另一类天然强抗氧化剂。
它不仅存在中药金钱草中，在其他多种中草药等植
物中均可广泛提取，此类天然多酚抗氧化剂具有优
良的抗氧化性和清除自由基的能力［7］。目前动物
实验及体外实验证明氧自由基对肾小管破坏及功能
影响是草酸钙结石形成的关键环节［8］，这也是寻找
抗氧自由基药物用于防治草酸钙结石的理论依据，
通过本实验研究说明金钱草黄酮提取物除有抑制大
鼠肾 Ca2 +含量、24 h 尿 Ca2 +分泌量的作用外，其抗
氧自由基的作用也可能是其防治草酸钙结石的机
制［9］，要进一步阐明金钱草黄酮提取物对草酸钙结
石的防治机制，还需更深入、广泛的研究。
［参考文献］
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
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［责任编辑 李玉洁］
［收稿日期］ 20121011(012)
［基金项目］ 贵州省卫生厅项目;贵州省科技厅、贵阳中医学院联合基金项目［黔科合中药字(2010)LKZ7012］
［第一作者］ * 刘维琴，硕士，副教授，硕士研究生导师，从事中西医结合心血管疾病的临床和实验研究，Tel:0551-2836351，E-mail:
syggood8002@ 163． com
丹参酮ⅡA 对房颤大鼠心房肌组织 LTCCα1c mRNA
表达的干预研究
刘维琴1* ，马清华2，牟霞3
( 1. 贵阳中医学院第二附属医院，贵阳 550001; 2. 贵阳中医学院，贵阳 550002;
3. 贵州省武警总队医院，贵阳 550005)
［摘要］ 目的:探讨丹参酮ⅡA(TanⅡA)对房颤(AF)大鼠心房肌细胞 L 型钙通道 α1c 亚单位(LTCCα1c 或 CaLα1c)
mRNA表达的影响，揭示活血祛瘀中药预防和治疗房颤的作用机制。方法:采用乙酞胆碱-氯化钙(Ach-CaCl2)药物经尾静脉
注射法复制 AF大鼠模型，随机分成 3 组:模型组、丹参酮治疗组、维拉帕米干预组，并设正常对照组。2 周后，应用免疫组化方
法和 RT-PCR法检测心房肌细胞 CaLα1c mRNA及蛋白表达变化。结果:与正常对照组相比，模型组 CaLα1c亚单位 mRNA表
达水平降低，L型钙通道(LTCC)蛋白表达水平减低，两组比较具有差异性(P ＜ 0. 05) ;与模型组比较，丹参酮治疗组、维拉帕米
干预组均明显改善了房颤大鼠心房组织 CaLα1c亚单位 mRNA 表达和蛋白表达水平减低状态(P ＜ 0. 05)。结论:丹参酮ⅡA
能够改善房颤大鼠心房肌细胞重构过程的损伤程度，可能是其干预治疗房颤的靶点之一。
［关键词］ 丹参酮ⅡA;L型钙通道 α1c亚单位;房颤
［中图分类号］ R285． 5 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2013)04-0199-04
Effects of TanshinoneⅡA on Protein Expression of
L-type Calcium Channelα1c in Rat Atrial Fibrillation Model
LIU Wei-qin1* ，MA Qing-hua2，MOU Xia3
(1. Second Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001，China;
2. Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550002，China;
3. Armed Police Force Hospital of Guizhou，Guiyang 550005，China)
［Abstract］ Objective:To explore the possible mechanism and effect of tanshinoneⅡA on the protein
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第 19 卷第 4 期
2013 年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 19，No． 4
Feb．，2013