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China Pharmaceuticals
2012年 5月 5日 第 21卷第 9期
Vol． 21，No． 9，May 5，2012
表 1 栀子苷加样回收试验结果( n = 6)
样品含量 (mg )
1． 192 8
1． 193 1
1． 192 9
1． 190 7
1． 190 4
1． 191 8
加入量 (mg )
0． 600 2
0． 600 2
1． 200 4
1． 200 2
1． 800 6
1． 800 6
测得量 (mg )
1． 777 9
1． 781 5
2． 412 3
2． 398 6
2． 945 4
3． 003 3
回收率 (% )
97． 48
98． 03
101． 58
100． 62
97． 47
100． 61
X (% )
99． 30
RSD (% )
1． 85
金钱草颗粒是由中药材金钱草和辅料蔗糖、糊精经提取、浓
缩、精制而成的制剂，具有清利湿热、通淋、消肿之功效，临床用于
热淋、沙淋、尿涩作痛、黄疸尿赤、痈肿疔疮、毒蛇咬伤、肝胆结石、
尿路结石等症，疗效确切 [ 1 ]。金钱草为本方君药，主要化学成分为
黄酮、皂苷、多糖、生物碱等化合物。槲皮素为黄酮类制剂的主要
成分，具有保护心肌、抗氧化、抗菌、抗病毒、清除体内自由基、抗
血小板聚集、抑制恶性肿瘤生长和转移等多方面的药理作用 [ 2 ]。
笔者建立了测定金钱草中槲皮素含量的高效液相色谱法，现报道
如下。
1 仪器与试药
岛津 LC － 10ATVP型高效液相色谱仪; sartorius CP225D型电
子分析天平; 岛津 UV － 2550 型紫外可见分光光度计 ; KQ －
400KDB 型高功率数控超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公
司 )。槲皮素对照品(批号为 110831 － 200302，中国药品生物制品
精密度试验 : 精密吸取栀子苷对照品溶液 ( 0． 030 01 g / L)
10 μL，在上述色谱条件下重复进样 5 次。结果栀子苷峰面积的
RSD为 0． 54%，表明仪器精密度较好。
稳定性试验:取同一供试品溶液，在 0，6，12，18，24 h时分别
进样测定。结果的 RSD为 0． 83% ( n = 5)，表明供试品溶液在 24 h
内稳定。
重复性试验:取同一批(批号为 20100906)样品 6 份，依法制
备供试品溶液并进样测定。结果栀子苷平均含量为 0． 651 mg /片，
RSD为 1． 58% ( n = 6 )，表明方法重复性良好。
加样回收试验 : 精密称取已知含量的样品 ( 批号为
20100906，栀子苷含量 0． 651 mg /片) 6 份，每份约 0． 75 g，精密称
定，分别加入对照品贮备液( 0． 300 1 g / L) 2，4，6 mL各 2 份，按供
试品溶液制备方法制备溶液，依法测定含量。结果见表 1。
2．4 样品含量测定
分别精密吸取供试品溶液与对照品溶液各 10 μL，注入液相
色谱仪，测定 3 批样品中栀子苷峰面积，按标准曲线法计算其含
量( n = 5)。结果批号为 20090711，20090718，20090725 的 3 批样
品中栀子苷平均含量分别为 0． 651，0． 656，0． 652 mg /片 ( n = 5 )。
根据 3 批样品测定结果，暂订利胆排导片中栀子苷含量质控定量
限为 0． 30 mg /片。
3 讨论
试验中曾反复试用过不同比例的乙腈和不同浓度的磷酸溶
液作为流动相进行分离，结果乙腈 － 0． 05%磷酸溶液( 12 ∶ 88) 能
使样品峰与相邻杂质峰达到基线分离。
对供试品、对照品溶液在 200 ～ 400 nm 波长进行紫外扫描，
两者在 238 nm波长有较强吸收，而阴性无干扰，故选择检测波长
为 238 nm。
本方法结果准确，方法简便，重复性及回收率均理想，可以作
为该制剂的质量控制方法。
作者简介:黄小蕾( 1977 － ) ，硕士研究生，研究方向为天然药
物活性成分，(电子信箱) 190738638@ qq． com。
参考文献:
[ 1 ] JLZJ － ZB － 0005 － 2007，吉林省食品药品监督管理局医疗机构制剂
标准 [ S ] ．
[ 2 ] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典 (一部) [M ] ． 北京:化学工业
出版社，2010: 231 － 232．
(收稿日期: 2011 － 08 － 15 )
高效液相色谱法测定金钱草颗粒中槲皮素含量
谭忠谋，韦建乔，蒙露露
(广西壮族自治区河池市食品药品检验所，广西 河池 574000)
摘要: 目的 建立测定金钱草颗粒中槲皮素含量的高效液相色谱法。方法 色谱柱为 Phenomenex Prodigy ODS3 C18 柱( 250 mm × 4． 6 mm，
5 μm)，流动相为甲醇 － 0． 4%磷酸溶液( 50 ∶ 50)，流速为 1． 0 mL /min，检测波长为 360 nm，柱温为 30 ℃。结果 槲皮素质量浓度在
10． 4 ～ 104． 0 μg /mL范围内与峰面积呈良好线性关系( r = 0． 999 9) ，平均回收率为 99． 92%，RSD = 1． 07% ( n = 6 )。结论 该方法简便、
准确、重复性好，可用于测定金钱草颗粒的含量。
关键词:含量测定; 金钱草颗粒;槲皮素; 高效液相色谱法
中图分类号: R284． 1; R286． 0 文献标识码: A 文章编号: 1006 － 4931 (2012 )09 － 0024 － 02
Content Determination of Quercetin in Lysimachia Granules by HPLC
Tan Zhongmou， Wei Jianqiao，Mong Lulu
( Hechi Institute for Food and Drug Control， Hechi， Guangxi， China 574000 )
Abstract: Objective To establish an HPLC method for determining the content of quercetin in Lysimachia Granules． Methods HPLC
method was used． The column type was Phenomenex Prodigy ODS3 (250 mm × 4． 6 mm，5 μm) ． The mobile phase was methanol － 0． 4%
phosphorous acid(50 ∶ 50) ． The flow rate was 1 mL /min． The detective wavelength was 360 nm and column tempreture was 30 ℃． Results
The linear range of quercetin was 10． 4 － 104． 0 μg /mL( r = 0． 999 9)，the average recovery was 99． 92% and the RSD was 1． 07% ( n = 6) ．
Conclusion The method is simple and accurate，and can be used reliably for the quality control of Lysimachia Granules．
Key words: content determination; Lysimachia Granules; quercetin; HPLC
檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨檨
·药物鉴定·
Drug Identification
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China Pharmaceuticals
2012年 5月 5日 第 21卷第 9期
Vol． 21，No． 9，May 5，2012
1． 槲皮素
A． 对照品溶液 B． 供试品溶液 C． 阴性对照品溶液
图 1 高效液相色谱图
表 1 槲皮素加样回收试验测定结果( n = 6)
样品含量 (μg /mL)
42． 3
42． 2
44． 8
43． 6
42． 5
43． 0
加入量(μg /mL)
62． 4
62． 4
41． 6
41． 6
20． 8
20． 8
测得量 (μg /mL)
103． 8
104． 0
86． 6
85． 8
63． 2
63． 9
回收率 (% )
98． 56
99． 04
100． 48
101． 44
99． 52
100． 48
X (% )
99． 92
RSD (% )
1． 07
厂家
重庆迪康长江制药有限公司
重庆科瑞制药有限责任公司
重庆浪高制药有限公司批号
批号
070701
070201
070303
槲皮素含量( mg /袋)
64． 279 6
10． 716 3
48． 280 4
RSD (% )
0． 98
1． 06
1． 14
表 2 样品含量测定结果( n = 3)
检定所，供含量测定用) ;金钱草颗粒(重庆迪康长江制药有限公
司，批号为 070701; 重庆科瑞制药有限责任公司，批号为 070201;
重庆浪高制药有限公司，批号为 070303) ;甲醇为色谱纯，水为重
蒸馏水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2．1 色谱条件
色谱柱: Phenomenex Prodigy ODS3 C18 柱 ( 250 mm × 4． 6 mm，
5 μm) ;流动相:甲醇 － 0． 4%磷酸溶液( 50 ∶ 50) ;流速: 1． 0 mL /min;
检测波长: 360 nm;柱温: 30 ℃ ; 进样量: 10 μL。
2．2 溶液制备
精密称取槲皮素对照品 5． 20 mg，置 25 mL 容量瓶中，加甲
醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为 0． 208 g / L 的贮备
液; 取上述溶液 2 mL，置 10 mL 容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至
刻度，摇匀，即得对照品溶液。取装量差异项下的本品 5 g，精密称
定，置 50 mL 圆底烧瓶中，加入甲醇 － 25%盐酸( 4 ∶ 1) 25 mL，加
热回流 1 h，放冷，转移至 50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇
匀，用 0． 45 μm的微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。制
备不含金钱草的样品，同法制成阴性对照品溶液。
2．3 方法学考察
专属性试验: 在拟订的色谱条件下，槲皮素的保留时间约为
15 min，理论板数为 5 278;槲皮素与相邻峰的分离度为大于 1． 5，
拖尾因子为 0． 97。供试品溶液与对照品溶液色谱在同一保留时
间有相同的波峰出现，而阴性对照品溶液则无相应的峰，证明阴
性对照品溶液不干扰测定，含量测定方法专属。高效液相色谱图
见图 1。
线性关系考察 : 精密量取对照品贮备液各 0． 5，1． 0，2． 0，
3． 0，5． 0 mL ，分别置 10 mL 容量瓶中，加甲醇稀释至刻度。分别
精密吸取上述溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以质
量浓度 X (μg /mL)对峰面积 Y 进行线性回归，得回归方程 Y =
13 315 X － 5 604． 4，r = 0． 999 9( n = 5)。结果表明，槲皮素质量浓
度在 10． 4 ～ 104． 0 μg / mL范围内与峰面积呈良好线性关系。
精密度试验: 对同一份对照品溶液，连续进样 6 次，测定槲皮
素的峰面积。结果的 RSD = 0． 18% ( n = 6 )，表明仪器精密度良
好。
稳定性试验:取同一供试品(重庆科瑞制药有限责任公司，批
号为 070201)溶液，分别在配制后 0，2，4，6，8，12 h 时测定槲皮
素峰面积。结果的 RSD = 0． 37% ( n = 6)，表明供试品溶液在 12 h
内稳定。
重复性试验:取同一批号(重庆科瑞制药有限责任公司，批号
为 070201)样品 6 份，依法制备供试品溶液并平行测定，按外标
法计算含量。结果平均含量为 4． 254 6 mg /袋，RSD =0． 60% ( n =6)，
表明方法重复性较好。
加样回收试验:取同一批次(重庆科瑞制药有限责任公司，批
号为 070201) 样品( 槲皮素含量为 4． 254 6 mg /袋，平均装量为
10． 151 6 g /袋)约 0． 1 g精密称定，共取 6 份，分别精密加入对照
品贮备液 0． 1，0． 2，0． 3 mL，依法制备供试品溶液，按上述色谱条
件进样测定，按外标法计算出含量，计算回收率。结果见表 1。
2．4 样品含量测定
按供试品溶液的制备方法和拟订的色谱条件，对 3批样品进
行测定。结果见表 2。
3 讨论
取槲皮素对照品溶液，用岛津 UV － 2550 型紫外分光光度计
在 200 ～ 400 nm 波长范围进行扫描，结果槲皮素在 254 nm 和
360 nm波长处有最大吸收;同样条件下，样品于 254 nm和 360 nm
波长下的色谱图和检测波长为 360 nm的色谱图，峰形较好，杂质
干扰较小，且槲皮素吸收更灵敏。因此，采用 360 nm 为检测波
长 [ 3 ]。
采用高效液相色谱法测定槲皮素含量已有文献报道，但由于
制剂组成成分的不同，流动相不完全相同。本试验曾试用甲醇 －
1． 0%醋酸水溶液( 50 ∶ 50) [4 ]为流动相，但主峰峰形不好，不够对
称; 用甲醇 － 0． 4%磷酸 [ 5 ] ( 50 ∶ 50)时主峰峰形较对称，分离效果
好，不拖尾。故选用后者为流动相。
分别以水浴加热回流 1，1． 5，2，2． 5 h提取，测得槲皮素含量
分别为 4． 227 5，4． 273 4，4． 275 8，4． 216 3 mg /袋，故选择用甲
醇 － 25%盐酸( 4 ∶ 1 )、水浴加热回流 2 h为最佳提取条件。
3 个不同厂家产品中槲皮素含量差异较大，建议生产时选用
符合规定的金钱草来投料。本法回收率好，精密度、重现性高，样
品处理简便，分析快速，可用作进一步完善金钱草颗粒的质量控
制指标。
作者简介:谭忠谋，男，主管药师，研究方向为药理分析，(电
子信箱) youxiagx@ sina． com。
参考文献:
[ 1 ] WS － 11446 ( ZD － 1446 ) － 2002，国家中成药标准汇编·内科 (肝胆分
册 ) [ S ] ．
[ 2 ] 徐国防 ． HLPC 法同时测定泌感颗粒中小檗碱和槲皮素的含量 [ J ] ．
药物分析杂志，2008，28( 3) : 23．
[ 3 ] 国家药典委员会 ． 中华人民共和国药典(一部) [M ] ． 北京:化学工业
出版社，2005: 152．
[ 4 ] 徐 飞，陆兔林 ． HPLC测定复方银杏颗粒中槲皮素、山奈素、异鼠李
素及总黄酮醇苷的含量 [ J ] ． 中成药，2007，8( 11) : 26．
[ 5 ] 卫星星，王转花 ． 高效液相色谱法测定苦荞籽壳中芦丁和槲皮素的
含量 [ J ] ． 药物分析杂志，2007，27( 12) : 18．
(收稿日期: 2011 － 07 － 19 )
t / min
0 10 20
A
t / min
0 10 20
B
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B
0 10 20
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·药物鉴定·
Drug Identification