全 文 ：艾纳香挥发油栓质量标准研究
王　嵩，赵永恒，周毅生＊
（广东药学院，广东 广州５１０００６）
摘　要：目的：建立艾纳香挥发油栓的质量控制标准。方法：采用薄层色谱法对艾纳香进行定性鉴别，气
相色谱法测定龙脑含量。结果：薄层鉴别可以检测出艾纳香对应的斑点，斑点清晰，阴性对照无干扰；龙
脑对照品在０．０２５～１．６０ｍｇ·ｍＬ－１之间线性关系良好（ｒ２＝０．９９９７），平均回收率为９８．３４％（ＲＳＤ为
０．４２％，ｎ＝６）。结论：该方法操作简单，准确性高，重复性好，可用于该制剂的质量控制。
关键词：艾纳香；挥发油栓；质量标准
中图分类号：Ｒ２８４　　　文献标识码：Ａ　　　文章编号：１６７３－２１９７（２０１４）０５－００３５－０４
收稿日期：２０１３－１２－１１
作者简介：王嵩（１９８８－），男，广东药学院硕士研究生，研究方向为中药制剂开发。
通讯作者：周毅生（１９５７－），男，广东药学院教授，研究方向为药物新剂型与新技术。
Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　ｆｏｒ　Ｂｌｕｍｅａ　Ｖｏｌａｔｉｌｅ　Ｏｉｌ　Ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ
Ｗａｎｇ　Ｓｏｎｇ，Ｚｈａｏ　Ｙｏｎｇｈｅｎｇ，Ｚｈｏｕ　Ｙｉｓｈｅｎｇ＊
（Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｚｈｏｕ　５１０００６，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：Ｔｏ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　Ｂｌｕｍｅａ　ｖｏｌａｔｉｌｅ　ｏｉｌ　ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｕｓｅｄ　ｔｈｅ　ｗａｙｓ　ｏｆ　ＴＬＣ　ｔｏ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅ　Ｂｌｕｍｅａ　ｉｎ　ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ．ＧＣ　ｗａｙｓ　ｔｏ　ｍｅａｓｕｒｅ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ｏｆ　Ｂｏｒｎｅｏｌ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：Ｔｈｅ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ｏｆ　ＴＬＣ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍ－
ｐｌｅ　ａｎｄ　ｃｏｎｔｒａｓｔ　ｈａｖｅ　ｓａｍｅ　ｃｏｌｏｒ　ｓｐｏｔｓ　ｗｉｔｈ　ｓｉｍｉｌａｒ　ＲＦ　ｖａｌｕｅ．Ｂｏｒｎｅｏｌ　ｗａｓ　ｌｉｎｅａｒ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　０．０２５－１．６０ｍｇ？ｍＬ－
１（ｒ２＝０．９９９７），ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒ　ｗａｓ　９８．３４％（ＲＳＤ＝０．４２％，ｎ＝６）Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄｓ　ｗｅｒｅ　ｓｉｍｐｌｅ，ａｃｃｕｒａｔｅ，ｒｅ－
ｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ，ａｎｄ　ｃａｎ　ｂｅ　ｕｓｅｄ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｑｕａｌｉｔｙ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｏｆ　ｔｈｉｓ　ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．
Ｋｅｙ　Ｗｏｒｄｓ：Ｂｌｕｍｅａ；Ｖｏｌａｔｉｌｅ　Ｏｉｌ　Ｓｕｐｐｏｓｉｔｏｒｙ；Ｑｕａｌｉｔｙ　Ｃｏｎｔｒｏｌ
　　艾纳香为菊科艾纳香属植物艾纳香Ｂｌｕｍｅａ　ｂａｌｓａｍｉｆ－
ｅｒａ（Ｌｉｎｎ．）Ｄ．Ｃ，苗药名档窝凯Ｄｉａｎｇｄ　ｖｏｂ　ｂｖｉｄ植物，药用
部位为枝叶、嫩枝。其性味温辛，具有活血温中、镇痛消炎、
祛风除湿等功效［１、２］，多用于妇女产后祛风除湿、杀菌止痒。
体外抗菌试验表明，艾纳香对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、
绿脓杆菌、白色念珠菌等均有显著抑制效果，疗效确切。目
前，用于治疗细菌感染的药物多为抗生素类药物，如达克宁
软膏、环丙沙星栓、甲硝唑栓、咪康唑栓、α－干扰素栓等，这些
抗生素药物易引起耐药性及毒副作用，而洗剂、膏剂等传统
剂型在作用部位滞留时间短，难以达到有效浓度，易被排出
体外。为提高患者的顺应性及艾纳香的治疗效果，我们研
制了艾纳香挥发油栓，通过阴道给药的方式，使药物快速作
用于患处，以提高疗效，减少首过效应。鉴于左旋龙脑为艾
纳香挥发油中的主要有效成分，本实验建立了对艾纳香挥
发油栓中左旋龙脑的定性定量分析方法，以期为新药艾纳
香挥发油栓质量标准的建立提供依据。
１　仪器与试药
１．１　仪器
ＡＹ１２０电子分析天平（日本岛津公司）ＣＳＩＯＩ２型电热
鼓风干燥箱（重庆试验设备厂）；ＳＢ－１００Ｄ超声波清洗仪（宁
波新芝生物科技股份有限公司）；ＨＨ－６型恒温水浴锅（江苏
金坛市宏华仪器厂）；天美ＧＣ７８９０系列气相色谱仪（上海天
美科学仪器有限公司）；ＳＰＨ－３００Ａ氢气发生器（北京中惠
普）；ＰＥＧ色谱柱（北京京科瑞达科技有限公司）；微量进样
器（上海安亭微量进样器厂）。
１．２　试药
艾纳香为菊科艾纳香属植物艾纳香Ｂｌｕｍｅａ　ｂａｌｓａｍ－
ｉｆｅａｒ（Ｌｉｎｎ．）Ｄ．Ｃ的嫩枝及叶；艾纳香挥发油（实验室提
取）；艾纳香挥发油栓（１．５ｇ／粒，自制，批号：２０１３０１１３、
２０１３０１１４、２０１３０１１５）；左旋龙脑对照品（中国食品药品生物
制品检定研究院）；水杨酸甲酯、聚山梨酯－８０、石油醚（６０～
９０℃）、乙酸乙酯、羟甲基纤维素纳、薄层层析硅胶Ｇ。所用
试剂均为分析纯，所用辅料均符合中国药典２０１０版标准。
１．３　栓剂处方及制备方法
栓剂处方：聚乙二醇６０００　８４３ｇ，聚乙二醇４０００　５０７ｇ，艾
纳香挥发油１５０ｇ，聚山梨酯－８０　１５ｇ，山梨酸钾适量，１．５ｇ／
粒，共制１　０００粒。精密称取艾纳香挥发油０．１５ｇ，置已称重
的蒸发皿中，加入０．０１５ｇ聚山梨酯－８０及适量山梨酸钾，再
—５３—
加入制备好的熔融聚乙二醇混合基质１．３５ｇ，６０～６５℃水浴
加热熔融，搅拌均匀后，快速灌注于已涂抹过润滑剂的栓模
内，固化脱模，用吸水纸吸去栓剂表面的水分。
２　艾纳香化学成分
艾纳香化学成分主要集中于挥发油及黄酮类，采用
ＧＣ－ＭＳ法分析艾纳香挥发油化学成分；采用色谱法提取分
离，主要得到黄酮类、甾体类化合物。梁会［３］从艾纳香的氯
仿、乙酸乙酯部位第１次分离得到帕得马亭（ｐａｄｍａｔｉｎ）、胡
萝卜苷 （ｄａｕｒｃｏｓｔｅｒｏｌ）、木犀草素（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）、３，５，５′，７－四羟
基黄烷酮（３，５，５′，７－ｔｅｔｒａｈｙｄｒｏｘｙｆｌａｖａｎｏｎｅ）。林永成等［４］
报道利用 Ｍｓ、ＮＭＲ、ＩＲ和ＵＶ谱数据推论分得一种新的化
合物：５，３′，５′－三羟基－７－甲氧基二氢黄酮，熔点２２０－２２２℃。
黄永林等［５］报道首次从艾纳香中分离得北美圣草素及５，４′－
二羟基３，７，３′－三甲氧基－黄酮。陈铭等［６］从艾纳香地上部
分分离得黄酮类化合物１３个，其中，３，５，３′，４′－四羟基－７甲
氧基黄酮、二羟槲皮素－７，４′－二甲醚、儿茶素为首次在该植
物中得到。朱廷春［７，８］利用硅胶柱层析、反相Ｃ１８、重结晶等
技术分离纯化得１１个化合物：艾纳香素、花椒油素、二氢槲
皮素－７，４′－二甲醚、鼠李黄素、木犀草素、５，４′－二羟基－７－甲氧
基－黄酮、木犀草素－７－甲醚、二氢斛皮素－４′－甲醚、５，４′－二羟
基３，７，３′－三甲氧基－黄酮、北美圣草素；其中，花椒油素为首
次从该属植物中分离出。严启新等［９］报道首次从该属植物
中分离得到化合物３，５－二羟基－３′，４′，７－三甲氧基及ｃｈｒｙ－
ｓｏｓｐｌｅｎｏｌ　Ｃ。文永新等［１０］建立紫外分光光度法测得艾纳香
的枝条、茎、叶总黄酮含量分别为１．２１％、１．３６％、２．９４％；
同时建立了简便可行、稳定性好、重复性高的方法测定艾纳
香中二氢黄酮醇、艾纳香素及花椒油素的含量。ＺＯＲＢＡＸ
ＸＤＢ－Ｃ１８（４．６ｍｍ×１５０ｍｍ，５μｍ），柱温：３０℃，检测波长
２９０ｎｍ，流动相为甲醇∶ 水 ＝６０∶４０，流速 ０．８ ｍＬ·
ｍｉｎ－１［１１、１２］。
艾纳香叶主要含有左旋龙脑（Ｌ－Ｂｏｒｎｅｏｌ）、樟脑、挥发
油、油脂及其它成分。何正有［１３］、王远辉［１４］采用ＧＣ－ＭＳ法
比较了不同方法制备的艾叶挥发油样品中化学成分及含量
差异。郝小燕等［１５］采用ＧＣ－ＭＳ定性定量分析了艾纳香挥
发油中２８个成分，像Ｌ－龙脑、芳樟醇、α－蒎烯等具有抗菌、
发汗、平喘等活性成分。王远辉［１６］采用ＧＣ法分析了不同
季节艾纳香化学成分的变化。夏稷子［１７］、方灿［１８］、孙明
玉［１９］、周欣［２０］等采用ＧＣ法建立了简便准确的方法测定艾
纳香中左旋龙脑的含量，且测得艾纳香挥发油中，萜类化合
物约占８５．６％。夏稷子、赵智等［２１］还建立了艾纳香ＧＣ指
纹图谱分析法，比较了１４个不同产区艾纳香挥发油成分及
含量的差异，为制定艾纳香的质量评价提供了依据。
３　方法与结果
３．１　艾纳香挥发油栓中龙脑的薄层鉴别
３．１．１　龙脑对照品溶液的制备　取龙脑对照品适量，精
密称定，加乙酸乙酯制成０．２ｍｇ·ｍＬ－１的龙脑对照品溶液。
３．１．２　挥发油溶液的制备　取挥发油适量，精密称定，加
乙酸乙酯制成０．５ｍｇ·ｍＬ－１的挥发油溶液。
３．１．３　对照药材溶液的制备　取艾纳香新鲜嫩枝及叶
３０ｇ，剪碎，置１００ｍＬ锥形瓶中，加５０ｍＬ乙酸乙酯，称重，超
声处理３０ｍｉｎ，放至室温，再称定，用乙酸乙酯补足重量，摇
匀，过滤，续滤液作为对照药材溶液备用。
３．１．４　供试品溶液的制备　取艾纳香挥发油栓剂１０粒，
切成粉末，置１０ｍＬ量瓶中，加５ｍＬ乙酸乙酯，热水浴加热
使挥发油溶解，放冷，再添加乙酸乙酯稀释至刻度，置冰浴
中冷却，取出后立即过滤，续滤液放至室温，摇匀，作为供试
品溶液备用。
３．１．５　阴性样品溶液的制备　取空白栓剂１０粒，切成粉
末，置１０ｍＬ量瓶中，加５ｍＬ乙酸乙酯，热水浴加热，放冷，
再添加乙酸乙酯稀释至刻度，置冰浴中冷却，取出后立即过
滤，续滤液放至室温，摇匀，作为阴性样品溶液备用。
３．１．６　艾纳香挥发油栓的薄层鉴别　取龙脑对照品溶
液、对照药材溶液、供试品溶液、阴性样品溶液，用毛细管分
别点样于同一硅胶Ｇ板上，每次点样后用电吹风冷风吹干。
以石油醚（６０～９０℃）－乙酸乙酯（２０∶１）为展开剂，展开，取
出，晾干，喷以３％的香草醛硫酸溶液，在１０５℃加热至斑点
显色清晰。检查供试品色谱，结果在与对照品色谱龙脑斑
点相应的位置上显示相同颜色的斑点，如图１所示。
图１　艾纳香挥发油栓的薄层色谱
３．２　艾纳香挥发油栓中龙脑的含量测定
３．２．１　气相色谱条件　色谱柱：ＰＥＧ－２０Ｍ（１０％），填充柱
（２ｍ×３ｍｍ×２μｍ）；载气：氮气（０．０６ＭＰａ），燃气：氢气（０．
０４ＭＰａ），助燃气：空气（０．０４ＭＰａ）；柱温：１２０℃，气化温度：
２５０℃，ＦＩＤ检测器，检测器温度：２８０℃；进样量为１μＬ，柱流
量为１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１，不分流。
３．２．２　对照品溶液的制备　取龙脑对照品适量，精密称
定，加乙酸乙酯制成５ｍｇ·ｍＬ－１的龙脑对照品储备液。精
密量取龙脑对照品储备溶液５、１０、２０、４０、８０、１６０、３２０μＬ分
置于１０ｍＬ量瓶中，分别精密加入１ｍＬ内标溶液水杨酸甲
酯（７ｍｇ·ｍＬ－１），再添加乙酸乙酯稀释至刻度，摇匀，作为龙
脑对照品溶液备用。
３．２．３　供试品溶液的制备　取艾纳香挥发油栓剂１０粒，
精密称定，切碎，精密称取１．５００ｇ，置１０ｍＬ量瓶中，精密加
—６３—
入１ｍＬ内标溶液水杨酸甲酯（７ｍｇ·ｍＬ－１），加乙酸乙酯适
量，超声处理（２５０Ｗ，频率３３ｋＨｚ）２０ｍｉｎ，取出，放冷，加乙
酸乙酯至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液备
用。
３．２．４　阴性对照溶液的制备　取空白栓剂１０粒，精密称
定，切碎，精密称取１．５００ｇ，置１０ｍＬ量瓶中，精密加入１ｍＬ
内标溶液水杨酸甲酯（７ｍｇ·ｍＬ－１），加乙酸乙酯适量，超声
处理（２５０Ｗ，频率３３ｋＨｚ）２０ｍｉｎ，取出，放冷，加乙酸乙酯至
刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为阴性对照溶液备用。
３．２．５　最低检测限　精密量取龙脑对照品溶液１μＬ，进
样分析，确定最低检测限（Ｓ／Ｎ＞３）。结果龙脑在本色谱条
件下的最低检测限为０．１４７μｇ。
３．２．６　定量限　精密量取龙脑对照品溶液１μＬ，进样分
析，确定定量限（Ｓ／Ｎ＞１０）。结果龙脑在本色谱条件下的定
量限为０．４４１μｇ。
３．２．７　系统适应性　照“３．２．１气相色谱条件”项下方法，
分别精密吸取１μＬ对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液
进样分析，理论塔板数按龙脑计算不低于３　０００。供试品色
谱图中，在与对照品色谱图相应保留时间处有相同的色谱
峰，且相邻峰之间分离度均大于１．５。阴性对照溶液色谱图
中，在与对照品色谱图相应保留时间处无色谱峰，结果见图
２。
图２　艾纳香挥发油栓气相色谱
３．２．８　线性关系考察　分别精密吸取浓度为０．０２５、
０．０５、０．１０、０．２０、０．４０、０．８０、１．６０ｍｇ·ｍＬ－１的龙脑对照品
溶液１μＬ，进样分析，以龙脑峰面积与内标峰面积的比值为
纵坐标，以相应浓度的比值为横坐标，得线性回归方程为Ｙ
＝１．７２８３Ｘ－０．００７（ｒ２＝０．９９９７）。结果表明，龙脑在０．０２５
～１．６０ｍｇ·ｍＬ－１浓度范围内呈良好的线性关系。
３．２．９　精密度试验　精密吸取龙脑对照品溶液１μＬ，连
续进样５次，记录龙脑的峰面积并计算ＲＳＤ。龙脑峰面积
的ＲＳＤ为１．３６％，结果表明，该仪器精密度良好。
３．２．１０　稳定性试验　取供试品，按“３．２．３供试品溶液的
制备”项下方法制备试样溶液，将试样溶液置室温下放置，
按照“３．２．１气相色谱条件”项下方法每隔２ｈ进样分析。在
１０ｈ内试样溶液峰面积无显著变化，ＲＳＤ为１．９４％。结果
表明，试样溶液在室温下放置１０ｈ稳定。
３．２．１１　加样回收试验　取已知龙脑含量的样品５０ｍｇ，
共６份，精密称定，置１０ｍＬ量瓶中，分别精密加入龙脑对照
品溶液（３２ｍｇ·ｍＬ－１）及内标溶液水杨酸甲酯（７ｍｇ·ｍＬ－１）
各１ｍＬ，再加入乙酸乙酯萃取后定容，得试样溶液。按“３．
２．１气相色谱条件”项下方法进样分析，计算平均回收率和
ＲＳＤ，结果见表１。
表１　龙脑加样回收试验 （ｎ＝６）
序号
样品量
（ｍｇ）
样品中的
量（ｍｇ）
加入量
（ｍｇ）
测得量
（ｍｇ）
回收率
（％）
平均回收
率（％）
ＲＳＤ
（％）
１　 ５０　 ２．９６５　 ３．２　 ６．０９７　９７．８８％
２　 ５０　 ３．０３０　 ３．２　 ６．１９５　９８．９１％
３　 ５０　 ３．０５２　 ３．２　 ６．２０２　９８．４４％
９８．３４　 ０．４２
４　 ５０　 ２．９４２　 ３．２　 ６．０８８　９８．３１％
５　 ５０　 ３．０５４　 ３．２　 ６．１８６　９７．８８％
６　 ５０　 ２．９２２　 ３．２　 ６．０７８　９８．６３％
３．２．１２　样品测定　按”３．２．３供试品溶液的制备”项下方
法制备试样溶液，按“３．２．１气相色谱条件”项下方法进样分
析，内标法计算３批艾纳香挥发油栓中龙脑的含量。结果
见表２。
表２　艾纳香挥发油栓的含量测定 （ｎ＝６）
批号／编号
龙脑平均含量
（ｍｇ／粒）
实际含量／标示
量（％）
ＲＳＤ
（％）
２０１３０１１３　 ８９．０２　 ９８．９１　 １．０２
２０１３０１１４　 ８７．６６　 ９７．４０　 １．３５
２０１３０１１５　 ８８．９８　 ９８．８７　 １．１６
　　结果表明，三批艾纳香挥发油栓中龙脑平均含量的
ＲＳＤ均小于３％，初步将艾纳香挥发油栓中龙脑的含量计
定为标示量的９５％～１０５％。
３．３　艾纳香挥发油栓质量评价
三批栓剂的外观色泽均匀一致，无裂缝，无分层及药物
附聚现象，硬度、融变时限、重量差异等均符合规定［２２］。栓
剂在ｐＨ４．５磷酸缓冲溶液中（含１．０％聚山梨酯－８０）溶出速
度无明显差异，４５ｍｉｎ的累积溶出度达到７０％以上，３ｈ的累
积溶出度达到９０％以上。
４　结语
本试验对薄层色谱条件展开剂的选择及比例进行了摸
索，参考文献［２３－２６］，有以正己烷－乙醚、石油醚－乙酸乙酯、
甲苯－乙酸乙酯为展开剂进行龙脑的薄层鉴别。考虑到溶剂
的毒性，选用石油醚－乙酸乙酯作为展开剂较为合适。考察
不同比例条件下石油醚－乙酸乙酯（１∶１、８∶２、１０∶１）的展
开效果，结果表明，当石油醚－乙酸乙酯比例为１∶１时，斑点
的Ｒｆ值过大，几乎接近前沿线，色谱带不清晰，没有达到分
离的效果，不断调整比例，降低极性溶剂乙酸乙酯的浓度，
当石油醚－乙酸乙酯为２０∶１时，斑点的Ｒｆ值适宜，展开效
果良好，故以石油醚－乙酸乙酯（２０∶１）为最佳展开条件。
—７３—
本试验对气相色谱条件进行了摸索，考察了色谱柱、柱
温、气化温度、检测器温度对色谱峰出峰的影响。参照文献
的报道，以ＳＥ－５４为色谱柱，在柱温１２０℃、气化温度２６０℃、
检测器温度３００℃条件下［１５，１７，１８］进样分析，未能检测到龙脑
对照品色谱峰，分析可能是色谱柱选择不恰当造成，ＳＥ－５４
为非极性色谱柱，而龙脑含有极性键，改用中极性色谱柱
ＰＥＧ－２０Ｍ（１０％），相同柱温、气化温度、检测器温度下进样
分析，能检测到龙脑对照品溶液及供试品溶液色谱峰，但峰
形不够好，需改善柱温、气化温度、检测器温度进行调整。
分别考察柱温１００℃、１２０℃、１４０℃对出峰的影响，１００℃下，
龙脑峰保留时间约为９～１０ｍｉｎ，出峰时间慢，且与内标水杨
酸甲酯色谱峰重叠；１４０℃下，龙脑峰保留时间约为２～
３ｍｉｎ，出峰时间过快，最终确定柱温为１２０℃，龙脑峰保留时
间为６．５ｍｉｎ，出峰时间适宜，且与内标水杨酸甲酯色谱峰之
间有合适的保留时间；还分别考察了梯度升温、进样口温度
在１８０～２６０℃之间，检测器温度在１８０～３００℃之间对色谱
峰出峰及峰形的影响。梯度升温，基线容易漂移，易造成峰
面积的误差。进样口温度过低，易造成样品气化不完全，检
测器温度过高易损坏柱子。最终确定色谱条件为：色谱柱
ＰＥＧ－２０Ｍ（１０％），柱温１２０℃，气化温度２６０℃，检测器温度
２８０℃较为适宜。
本文采用薄层色谱法及气相色谱法对艾纳香挥发油栓
中龙脑进行定性鉴别及含量测定，方法灵敏准确，重复性良
好，专属性强，初步建立了艾纳香挥发油栓的质量标准，以
确保药品安全、有效、质量可控。
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（责任编辑：姜付平）
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