全 文 ：收稿日期:2007-11-01;　修订日期:2008-02-16
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.20662001);
　　　　 广西科学研究与技术开发计划项目(No.桂科攻 0480005);
　　　　 广西研究生教育创新计划硕士研究生科研创新项目
作者简介:雷　婷(1983-),女(汉族),四川广安人 ,现为广西大学在读硕
士研究生 ,学士学位 ,主要从事天然有机化学方面的研究工作.
＊通讯作者简介:林翠梧(1958-), 女(汉族),广西北流人 , 现为广西大学
教授 ,博士生导师 ,博士学位 ,主要从事天然有机化学方面的研究工作.
反相高效液相色谱法测定滇桂艾纳香中绿原酸的含量
雷　婷 , 林翠梧＊ , 陈海燕 , 黎贵卿
(广西大学化学化工学院 ,广西 南宁　530004)
摘要:目的 用反相高效液相色谱法建立滇桂艾纳香中绿原酸的含量测定方法。方法 KromasilC18(4.6 mm×150 mm, 5μm)色谱柱 ,流动相为 0.2%磷酸-乙腈(93∶7), 检测波长 326 nm,流速 1.0 ml/min。结果 在该色谱条件下 ,绿原酸在
15.3 ～ 61.2mg/L范围内与其峰面积呈良好的线性关系 ,相关系数为 0.999 2。样品平均回收率为 100.5%, RSD为 1.2%
(n=6)。结论 方法简便易行 , 结果准确 ,重复性好 ,可用于滇桂艾纳香中绿原酸含量的测定。
关键词:滇桂艾纳香;　绿原酸;　高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)09-2073-01
DeterminationofChlorogenicAcidinBlumeariparia(Bl.)DC.byHPLC
LEITing, LINCui-wu＊ , CHENHai-yan, LiGui-qing
(SchoolofChemistryandChemicalEngineering, GuangxiUniversity, Nanning530004, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofchlorogenicacidinBlumeariparia(Bl.)DC.byHPLC.Meth-odsColumnwasKromasilC
18
(4.6 mm×150 mm, 5 μm).Themobilephasewas0.2%phosphoricacid-acetonitrile(93∶7).
Thedetectionwavelengthwas326nmandflowratewas1.0 ml/min.ResultsInthiscondition, chlorogenicacidshowedagood
linearityintherangeof15.3 ～ 61.2 mg/L, r=0.9992.Theaveragerecoverywas100.5%, andRSDwas1.2%(n=6).Con-
clusionThismethodisreliable, simpleandaccurate.ItcanbeuseforthedeterminationofchlorogenicacidinBlumeariparia
(Bl.)DC.
Keywords:Blumeariparia(Bl.)DC;　Chlorogenicacid;　 HPLC
　　滇桂艾纳香 Blumeariparia(Bl.)DC为菊科艾纳香属多年生
木质草本植物 , 在我国仅分布在贵州 、云南 、广东 、广西等省少数
湿热地区 [ 1] 。以滇桂艾纳香为原料生产的妇血康颗粒具有止
血 、活血 、祛淤 、生肌及促进子宫复旧的功效。多年的临床研究表
明 , 该产品独特的功效成分能迅速到达病灶 , 加速子宫内膜脱落 、
血管闭合 , 使卵巢功能迅速恢复正常 , 取效迅速。它填补了当今
对 “功血”病和上环后出血治疗尚无特效药的空白 [ 2] 。但目前对
于滇桂艾纳香化学成分的研究很少 ,其中药材和相关制剂缺乏内
在的质量评估标准。笔者在前期对滇桂艾纳香的化学成分分离
及活性研究的基础上 ,确定绿原酸为滇桂艾纳香的主要药效成分
之一 [ 3～ 5] 。本实验建立了滇桂艾纳香中绿原酸的反相高效液相
色谱测定方法。
1　仪器与试剂
高效液相色谱仪:LabAliance公司 , prep100泵 , LabAliance
medol500检测器 , N2010双通道色谱工作站;SK3310LHC超声清
洗器(上海科导超声仪器有限公司);AL204型电子分析天平(梅
特勒 -托利多仪器有限公司);绿原酸对照品为成都福润德实业
有限公司提供 , 含量在 99%以上;滇桂艾纳香干草(广西桂西制
药有限公司提供)。乙腈 、甲醇为色谱纯试剂 , 乙醇 、磷酸为分析
纯试剂 , 重蒸水自制。
2 　方法与结果
2.1　色谱条件 KromasilC18色谱柱(4.6 mm×150mm, 5 μm);
流动相为 0.2%磷酸 -乙腈(93∶7);流速 1.0 ml· min-1;检测
波长 326 nm[ 6] ;柱温为室温;进样量 10μl。
2.2　对照品溶液制备 精密称取绿原酸对照品 25.5 mg, 用甲醇
溶解并定容至 50ml, 摇匀。分别移取 0.3, 0.5, 0.7, 0.9, 1.2 ml
于 5只 10 ml容量瓶中加甲醇至刻度 , 摇匀。得到浓度分别为
15.3, 25.5, 35.7, 45.9, 61.2 mg/L的溶液。
2.3　供试品溶液的制备 将滇桂艾纳香干草干燥后粉碎 , 过 20
目筛 , 混合均匀后精密称取 1.5 g置于具塞烧瓶中 , 准确加入
53%乙醇 50 ml, 称定重量 ,用超声波 80℃提取 1 h, 放冷 ,再称定
重量 , 用 53%乙醇补足减失重量 , 摇匀备用。
2.4　线性关系考察 精密吸取对照品溶液 10.0 μl, 注入高效液
相色谱仪 ,依法测定 , 见图 1。以峰面积分值为纵坐标(Y), 样品
浓度(mg/ml)为横坐标(X), 绘制标准曲线 , 结果表明绿原酸在
15.3 ～ 61.2 mg/L范围内呈良好的线性关系。回归方程为:Y=
12 494X-128 013, r=0.999 2。
图 1　对照品(左)和样品(右)色谱图
2.5　精密度实验 精密吸取 “ 2.3”项制备的样品溶液 10 μl, 重复
进样 6次 , 测定峰面积 , RSD为 0.72%,精密度良好 ,其色谱峰见
图 1。
表 1　回收率实验结果
编
号
取样量
m/g
样品含量
m/mg
加入对照品量
m/mg
测得总量
m/mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
1 1.512 9 1.934 7 0.020 8 1.955 8 98.6
2 1.505 1 1.924 7 0.031 2 1.972 4 101.7
3 1.500 9 1.919 4 0.041 6 1.971 6 100.5 100.5 1.2
4 1.505 3 1.924 9 0.052 0 2.008 8 101.6
5 1.512 4 1.934 0 0.062 4 2.014 7 100.9
6 1.504 0 1.923 3 0.072 8 1.985 6 99.5
　　n=6
2.6　稳定性实验 取供试品溶液 ,于制备后 0, 2, 4, 7, 24h进样 10
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.9 时珍国医国药 2008年第 19卷第 9期
μl,测定峰面积 , RSD为 0.45%,结果表明样品溶液在 24h内稳定。
2.7　重复性实验 称取同一批样品 6份 , 按照 “ 2.3”项下的方法
处理并测定含量 , RSD为 0.71%。
2.8　回收率实验 精密称取已知含量的样品 6份 , 并分别精密加
入一定量的对照品 , 按 “ 2.3”项下方法处理并测定含量 ,分别计
算加样回收率。结果见表 1。
2.9　样品的含量测定 分别精密称取药材叶 、枝 、花各 1.5 g,按
“ 2.3”的方法制备供试液 , 测定含量。结果见表 2。
表 2　样品含量测定 mg· g-1
样品 1 2 3
叶 1.525 1.519 1.529
枝 0.993 0.989 0.990
花 0.596 0.598 0.592
3　讨论
在对乙醇浓度进行单因素实验时发现 ,绿原酸的提取得率随
着乙醇浓度的升高呈先上升后下降的趋势 , 当乙醇浓度为 53%
时 , 绿原酸的提取得率达到最大。而随着提取温度升高 , 提取得
率也增大 , 当提取温度上升到 90℃以上 , 绿原酸得率反而下降 ,
这和绿原酸在高温下可能分解有关。
在选择流动相时 ,我们用了甲醇 -水 , 甲醇 -水 -甲酸 ,乙腈
-水 , 乙腈 -水 -磷酸几个系统。以甲醇 -水为流动相时 ,样品
的保留时间太长 , 而且分离度也不是很好。 用乙腈 -水为流动
相 , 所测样品能够较好的分离 , 加酸后能够有效抑制拖尾。
通过测定滇桂艾纳香叶 、花 、枝的含量可以看出其叶中绿原
酸的含量最大 , 枝中含量最小。此方法的建立可以为滇桂艾纳香
中药材及其制剂的质量控制提供参考。
参考文献:
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社 , 2006:478.
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然产物研究与开发 , 2006, 18:691.
[ 5 ] 　郑毅男 ,李向高 ,黄　晔 , 等.人参水提取物止血活性的药理研究
[ J] .吉林农业大学学报, 1990, 12(1):29.
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收稿日期:2008-01-14;　修订日期:2008-05-10
基金项目:科技部国家科技攻关计划 (No.2004BA721A30);　国家中医药管理局中医药科学技术研究专项基金(No.06-07ZQ10)
作者简介:何明军(1979-),男(汉族),河南南阳人 ,现任中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所研究实习员 ,学士学位 ,主要从事
南药资源引种与栽培研究工作.
＊通讯作者简介:冯锦东(1952-),男(汉族),海南万宁人 ,现任中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所副研究员 ,学士学位 ,主要从
事南药资源保护与开发研究工作.
濒危药用植物
降香黄檀种子贮藏条件与萌发特性初步研究
何明军 , 冯锦东＊ , 欧淑玲 , 陈　葵 , 李榕涛 , 杨新全
(中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所海南分所 ,海南 万宁　571533)
摘要:目的 观察研究珍稀濒危药用植物降香黄檀种子贮藏条件 、种子萌发特性和幼苗叶片生长速度。 方法 通过室内
考察 , 测定降香黄檀种子千粒重 、发芽率 ,采用不同处理进行贮藏条件试验 , 对幼苗叶片的生长速度进行连续观测记录。
结果 对于保持降香黄檀种子(去果荚)活力 ,在冰箱冷藏(12℃)条件下比保存在室温条件下的种子能够贮藏更长时间;
对降香黄檀种子不同处理可以改变其发芽率 ,但效果都没有带荚直播发芽率高;幼苗叶片生长速度在前期较快 , 达 5 ～ 9
片叶 /月 ,后期速度降低并逐渐开始分枝。结论 降香黄檀种子带果荚低温保存效果较其他保存方法好;降香黄檀带果荚
直接播种较其他处理发芽率高;降香黄檀幼苗叶片生长速度在移栽后两个月达到最快。
关键词:降香黄檀;　贮藏条件;　发芽率
中图分类号:S567　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)09-2074-02
StudyonDifferentStorageConditionsandCharacteristicsofGerminationofEndangered
MedicinalPlantDalbergiaodoriferaT.Chen.Seeds
HEMing-jun, FENGJin-dong＊ , OUShu-ling, CHENKui, LIRong-tao, YANGXin-quan
(HainanBranch, InstituteofMedicinalPlantDevelopment, ChineseAcademyofMedicalSciences＆PekingU-nionMedicalColege, HainanWanning571533 , China)Abstract:ObjectiveTostudytheseedsofendangeredmedicinalplantDalbergiaodoriferaT.Chen.basedonefectsofdifer-entstorageconditions, characteristicsofgermination, andspeedofleavesgrowth.MethodsMeasured1000-seedweights, ger-
minationpercentagewithdiferentprocessandspeedofseedlingleaves.ResultsShowedthatcomparedwiththedrystorageat
roomtemperature, thedryseedsofDalbergiaodoriferaT.Chen.storageat12℃ canbepreservedforlonger.Diferentprocess
canchangethegerminationpercentage, seedingwithoutinfusionwasthebestmethodtoimprovethegerminationpercentage.ThespeedofgrowthofDalbergiaodoriferaT.Chen.Seedlingleaveswashighprophase, butgraduallyfall2 monthslater, andbeganto
sendoutbranches.ConclusionThedryseedsofDalbergiaodoriferaT.Chen.storageat12 ℃ canbepreservedforlonger, see-
dingwithoutinfusionwasthebestmethodtoimprovethegerminationpercentage, thespeedofseedlingleavesgrowthgetthehigh-
estpointafter2 months.Keywords:DalbergiaodoriferaT.Chen.;　Storageconditions;　Germinationrate
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 9期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.9