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滇桂艾纳香收缩子宫平滑肌活性及
膜技术初步分离纯化研究
黄永林 1 ,陈月圆1 ,文永新 1＊ ,梁荣感 2 ,刘金磊1 ,李典鹏 1
(1.广西植物研究所 ,广西 桂林 541006;2.桂林医学院 ,广西 桂林 541004)
摘要 目的:研究滇桂艾纳香收缩子宫平滑肌活性及其有效部位的初步分离纯化。方法:以家兔在体子宫平
滑肌收缩的影响为指标 , 确定膜分离后的有效部位。结果:滇桂艾纳香初提取物及反渗透截留部分均能显著增强
家兔在体子宫平滑肌的收缩强度。结论:滇桂艾纳香反渗透截留部分为收缩子宫平滑肌的有效部位。
关键词 滇桂艾纳香;膜分离技术;子宫平滑肌;有效部位
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2009)10-1598-03
收稿日期:2008-11-28基金项目:广西自然科学基金(桂科基 0448087);广西科技攻关项目(桂科攻 0630002-4B)作者简介:黄永林(1974-),男,副研究员 ,主要从事植物化学与药学研究;E-mail:hyl@gxib.cn。＊通讯作者:文永新 , Tel:0773-3550282, E-mail:wyx@gxib.cn。
滇桂艾纳香系菊科艾纳香属植物滇桂艾纳香
[ Blumeariparia(BI.)DC.]的干燥全草 。用于经期
提前 、产后血崩 、产后浮肿 、不孕症 、阴疮 ,为壮族民
间草药 ,在广西尤其是在百色地区有较长的药用历
史 ,主要产于广西西南部和云南东南部〔1, 2〕。以滇
桂艾纳香为原料制成的单方中成药具有活血化瘀 、
止血调经的功效 ,临床主要用于瘀血阻滞引起的月
经量多 ,经期延长等症 〔3-5〕。化学成分和临床对比研
究已有报道 〔6-9〕 ,其他有关工艺研究报道甚少 ,仅有
黄忠儒 〔10〕报道了滇桂艾纳香不同部位对有效成分
提取率的影响 ,但有效成分的研究及其初步纯化与
药理实验相结合研究滇桂艾纳香有效成分尚未见报
道 。本实验采用十二指肠给药 ,药物通过十二指肠
吸收后观察家兔在体子宫平滑肌收缩的变化 ,探索
滇桂艾纳香对子宫产后止血的作用机制 ,同时采用
具有操作简单 、节能 、无污染 、可在常温下连续操作
的先进膜分离技术与家兔在体子宫的平滑肌收缩试
验相结合 ,筛选滇桂艾纳香对子宫平滑肌具有收缩
作用的有效部位 。笔者在实验中发现了滇桂艾纳香
提取物对家兔在体子宫平滑肌具有较强的收缩作
用 ,且发现膜分离技术适用于滇桂艾纳香提取物中
收缩子宫平滑肌成分的分离与纯化 ,将研究结果报
道如下。
1 材料与仪器
1.1 实验动物 雌性未孕成年家兔(新西兰兔),
体质量 2.2 ～ 2.5 kg,由桂林医学院动物室提供。
1.2 主要仪器 BL420F型生物机能实验系统(成
都泰盟电子有限公司);瑞士 Precisabailneesseries
XS电子天平 (Precisa仪器有限公司);膜分离设备
(无锡超滤设备厂)。
1.3 药品与试剂 己烯雌酚注射液(上海通用药
业股份有限公司生产 ,批号:080202),缩宫素注射
液 (河南 辅仁 怀庆 堂制 药有 限公 司 , 批 号:
0702011)。
2 方法
2.1 滇桂艾纳香提取物的制备 滇桂艾纳香采自
广西南宁 ,经广西植物研究所韦发南研究员鉴定为
滇桂艾纳香 [ Blumeariparia(BI.)DC.]地上部分。
滇桂艾纳香经阴干后粉碎 ,分别用 8、6倍水(V/m)
煎煮 2.0、1.5 h,冷却至室温后过滤 ,合并滤液 ,得滇
桂艾纳香提取物(A),滤液进行超滤 、过超滤膜溶液
部分再进行纳滤 ,过纳滤溶液部分再进行反渗透浓
·1598· JournalofChineseMedicinalMaterials 第 32卷第 10期 2009年 10月DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2009.10.041
缩 ,分别得到超滤截留部分 (B)、纳滤截留部分
(C)、反渗透截留部分(D)。
2.2 动物造模及分组〔11, 12〕 取雌性未孕成年家兔
60只 ,体质量 2.2 ～ 2.5 kg,随机分为 6组生理盐水
组 、阳性 (缩宫素)对照组 、滇桂艾纳香 A、B、C、D
组 ,各组均在实验前 24 h腹腔注射已烯雌酚注射液
1.0mg/kg,人工促使动物处于动情前期或动情期 ,
以提高子宫平滑肌对药物的敏感性。实验时静脉注
射 30.0mg/kg戊巴比妥钠进行麻醉 ,仰位固定于手
术台上 ,右上腹部剪毛作一长约 2.0 cm的切口 ,打
开腹腔 ,找出十二指肠 ,作一十二指肠瘘 ,进行十二
指肠插管 ,并打开盆腔 ,找出子宫 ,分离周围组织 ,在
一侧子宫中点缝一丝线与张力换能器连接 ,将子宫
的阴道端和卵巢端分别缝合在特制的玻璃固定器底
部两侧支点处 ,子宫负荷 3.0 g,待子宫舒缩平稳后 ,
从十二指肠分别灌注生理盐水或不同部分的滇桂艾
纳香提取物 500 mg/kg,阳性对照组静脉注射缩宫
素 5.0U/kg。
2.3 数据的收集及处理 〔11, 12〕 采用 BL420F型生
物机能实验系统 ,描记至给药后 120 min子宫平滑
肌收缩曲线 ,观察给药前后子宫平滑肌收缩张力的
变化 ,并计算收缩提高率。
收缩强度(g)=平均药后收缩张力 -平均药前收缩张力
收缩提 高率 (%)=(药后收缩强度 -药前收缩强度)药前收缩强度 ×
100%
2.4 统计学处理 数据以 x±s表示 ,用 PEMS3.1
统计包进行统计学处理 ,以 P<0.05为差异有显著
性 。
3 结果
滇桂艾纳香组家兔通过十二指肠给药吸收 20
min后在体子宫平滑肌收缩强度显著增强 ,且作用
时间持续至给药后 120 min;在同等剂量下滤液(A)
组及反渗透截留部分(D)组对家兔在体子宫平滑肌
收缩强度分别达到 2.65、3.34 g,收缩提高率分别达
到 63.31%、76.14%,且与生理盐水组比较均差异
显著(P<0.05),而超滤截留部分 (B)组及纳滤截
留部分(C)组与生理盐水组比较均无明显差异(表
1,图 1),说明滇桂艾纳香初提取物能增强家兔在体
子宫平滑肌的收缩强度 ,通过超滤 、纳滤及反渗透膜
分离技术能对滇桂艾纳香中对家兔在体子宫平滑肌
收缩的有效部位进行分离 、收集 。
4 讨论
采用十二指肠给药 ,药物能很快地通过十二指
肠吸收快速进入血液产生药效 ,能有效地排除因提
表 1 艾纳香对正常家兔在体子宫
平滑肌收缩的影响( x±s, n=10)
组别 剂量 /(mg/kg) 收缩强度 /g
生理盐水组 - 0.18±0.16
缩宫素对照组 5.0u 5.46±1.14＊
A号样品组 500.0 2.65±0.53＊
B号样品组 500.0 0.86±0.13
C号样品组 500.0 1.91±0.45
D号样品组 500.0 3.34±1.22＊
注:与生理盐水组比较 , ＊P<0.05
图 1 各实验组对正常家兔在体子宫平滑肌收缩提高率(%)
注:与生理盐水组比较 ,缩宫素组 、原料组 、反渗透截留组均具有
显著性差异
取物不纯而影响动物药理试验模型的准确性和真实
性。为了探讨滇桂艾纳香对子宫产后止血的作用机
制 ,本实验采用对家兔注射已烯雌酚促使动物处于
动情前期或动情期 ,以提高子宫平滑肌对药物敏感
性 ,通过十二指肠给药 ,观察在体家兔子宫平滑肌的
反应 。结果显示 ,滇桂艾纳香初提取物及反渗透截
留部分在给药 20 min后 ,家兔在体子宫平滑肌收缩
强度显著增强 ,且作用时间能持续至给药后 120
min,收缩强度分别达到 2.65、3.34 g,收缩提高率分
别达到 63.31%、76.14%,且与生理盐水组比较均
差异显著(P<0.05),这一结果对探讨滇桂艾纳香
治疗子宫产后止血作用机制具有重要意义。
膜分离是一种新型分离技术 ,与传统分离方法
相比 ,具有工艺简单 、节能 、成本低 ,能在常温下进行
且不发生相变 ,特别适用于对热敏感的物质处理。
为了改变工业化生产中传统的水提醇沉工艺 ,节约
生产成本 。本实验采用膜分离技术与药理实验相结
合的方法 ,筛选滇桂艾纳香中收缩子宫平滑肌的有
效部位。实验结果显示 ,超滤截留部分(B)、纳滤截
留部分(C)与生理盐水组比较均无明显差异 ,为无
效部位 ,而反渗透截留部分(D)与生理盐水组比较
差异显著 ,为收缩子宫平滑肌的有效部位。该方法
工艺简单 、操作方便 、成本低 、不产生二次污染 ,具有
很好的应用价值。
·1599·JournalofChineseMedicinalMaterials 第 32卷第 10期 2009年 10月
参 考 文 献
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巴西蜂胶 3种单体成分的体内抗肿瘤实验
韩利文 1 , 2 ,刘可春 1 , 2＊ ,王思锋 1 , 2 ,何秋霞 1 , 2 ,袁延强 1 , 2 ,王 雪 1 , 2
(1.山东省科学院生物研究所 ,山东 济南 250014;2.山东省科学院药物筛选研发平台 ,山东 济南 250014)
摘要 目的:研究巴西蜂胶中的 3种单体成分:阿替匹林 、Baccharin、山奈甲黄素的体内抗肿瘤作用。方法:测
定阿替匹林 、Baccharin、山奈甲黄素腹腔注射给药 9 d后对 S180荷瘤小鼠肿瘤的抑制作用。结果:Baccharin与山奈
甲黄素 3个剂量对 S180未观察到明显抑瘤作用 ,阿替匹林 31.3、 20.8 mg/kg对 S180无明显抑瘤作用 , 但 6.25 mg/kg
抑瘤作用显著 , 抑制率为 34.0%(P<0.05)。结论:巴西蜂胶中有价值的抗肿瘤成分为阿替匹林 , 有进一步研究的
价值。
关键词 巴西蜂胶;肿瘤;阿替匹林;Baccharin;山奈甲黄素
中图分类号:R285.5 文献标识码:A 文章编号:1001-4454(2009)10-1600-03
收稿日期:2008-12-05资金项目:山东省科技攻关计划项目(032040102)作者简介:韩利文(1980-),男,助理研究员 , 硕士 ,主要从事天然药物提取分离和新药研发研究;Tel:0531-82605331, E-mail:hanliwen08@yahoo.com.cn。＊通讯作者:刘可春 , Tel:0531-82605352, E-mail:hliukch@keylab.net。
蜂胶是蜜蜂从植物花苞及树干上采集的树胶 ,
混入其上颚腺分泌物和蜂蜡等物质而成的一种具有
芳香气味的胶状固体物质 ,是蜜蜂用来防护 、抵御病
虫害和病原微生物入侵巢房的御敌物质 ,同时也是
修补巢房和内环境消毒杀菌的一种特殊物质。蜂胶
的化学成分由蜜蜂采集地区的植物分泌物决定 。蜂
胶的化学成分主要包括黄酮类化合物 、芳香酸与芳
香酸酯 、醛与酮类化合物 、脂肪酸与脂肪酸酯 、萜类
化合物 、甾体化合物 、氨基酸 、糖类化合物 、烃类化合
物 、醇及酚类及其它化合物 。欧洲 、北美洲 、南美洲 、
亚洲及非洲蜂胶的化学成分都不相同 。处于南美洲
热带地区的巴西绿蜂胶 ,由于主要植物来源为酒神
菊树 ,含有独特的异戍二烯基肉桂酸衍生物 ,为巴西
蜂胶中的一类重要的生理活性成分。体外细胞实验
表明 ,其对人鼻咽癌 、子宫颈癌 、乳腺癌 、肾癌 、大肠
癌等人癌细胞株均具有强烈的毒杀作用 〔1〕。本研
究室从巴西蜂胶分离得到 3种单体化合物 ,本实验
考察这 3种单体化合物对移植小鼠肿瘤细胞的抑制
作用 。
1 材料与仪器
1.1 实验动物 SPF级雄性昆明种小鼠 ,体质量
19 ～ 22g,由山东鲁抗医药集团有限公司提供 ,合格
证号:鲁动质字 D20020921。
1.2 药物与试剂 巴西蜂胶(Brazilpropois):购自
巴西 BIOESSENS公司 ,产地为巴西;阿替匹林 (Ar-
tepilinC, 4-羟基 -3, 5-二异戊二烯基肉桂酸)、Bac-
charin(4-苯丙酰氧基-3-异戊二烯基肉桂酸)、山奈
甲黄素为本研究室分离制得 ,制备过程如下:巴西蜂
·1600· JournalofChineseMedicinalMaterials 第 32卷第 10期 2009年 10月