全 文 ：药 物 研 究
The medicine study
基金项目:广西自然科学基金项目 (2010GXNSFA013195)。
作者简介:陈美安 (1984 －) ，女，广西玉林人，博士研究生，研究方向:中药药效物质基础与质量标准化研究。
通讯作者:姜建萍 (1965 －) ，女，江苏溧阳人，教授，博士，研究方向:中药、民族药质量与成分分析研究。
滇桂艾纳香乙酸乙酯提取物中总黄酮的含量测定
陈美安1 姜建萍2 甄汉深2 马文芳1，2 张 翰2
1. 成都中医药大学，四川 成都 611137;2. 广西中医药大学，广西 南宁 530001
【摘 要】 目的:建立滇桂艾纳香乙酸乙酯提取物中总黄酮的含量测定方法，为其质量控制标准提供依据。方法:采用紫外 －可见
分光光度法，以芦丁为对照品，5%亚硝酸钠溶液 － 10%硝酸 － 4%氢氧化钠溶液为显色系统，测定滇桂艾纳香乙酸乙酯提取物中总黄酮的
含量，测定波长为 510nm。结果:芦丁在 0. 0108 ～ 0. 0645mg /ml 范围内呈良好的线性关系，其回归方程为:A = 12. 363C + 0. 0055 (r =
0. 9996) ;平均加样回收率为 99. 17% (RSD为 0. 66%)。结论:该方法快速简便、结果准确，可作为滇桂艾纳香乙酸乙酯提取物中总黄酮
含量测定的有效方法。
【关键词】 滇桂艾纳香;乙酸乙酯提取物;总黄酮;紫外 －可见分光光度法
【中图分类号】R284. 1 【文献标识码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2013)07 － 0015 － 02
滇桂艾纳香 (Blumea riparia (Bl. )DC. ) ，属于菊科艾
纳香属植物，为广西民间常用壮药，具有活血、止血、利
水作用，用于经期提前、产后血崩、产后浮肿、不孕症
等［1］。目前，有文献报道［2］在滇桂艾纳香的预试验研究中
发现其可能含有黄酮类或其苷类物质。在其化学成分研究
中，已分离得到芹菜素、小麦黄素、木犀草素、山奈酚、
鼠李柠檬素等多种黄酮类化合物［3 － 5］。黄酮类化合物是一
类存在于多种植物中的多酚类化合物，具有多种潜在的药
理活性。已有文献报道了［6］不同产地滇桂艾纳香中总黄酮
的含量测定，但对其乙酸乙酯提取物中总黄酮的含量测定
未见文献报道，故本文采用紫外 －可见分光光度法对滇桂
艾纳香乙酸乙酯提取物进行总黄酮含量测定，为其质量控
制提供科学依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器与试剂 Agilent 8453 紫外 － 可见分光光度仪
(美国安捷伦公司) ;METTLER － AE100 电子分析天平 (瑞
士 METTLER公司) ;芦丁对照品 (中国药品生物检定所，
供含量测定用) ;水为蒸馏水，亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化
钠、甲醇、乙醇等试剂均为分析纯。
1. 2 药材 滇桂艾纳香药材，分别采自广西百色地区
那坡县、德保县、凌云县及龙州县，经广西中医药大学
药用植物教研室刘寿养副教授鉴定为菊科艾纳香属植物
滇桂艾纳香 (Blumea riparia (Bl. )DC. )的干燥全草。
表 1 不同产地滇桂艾纳香药材
编号 产地 采集日期
1 广西百色市那坡县 2010. 03. 12
2 广西百色市德保县 2010. 04. 07
3 广西百色市凌云县 2009. 10. 21
4 广西百色市龙州县 2009. 12. 06
2 方法与结果
2. 1 供试品溶液制备 取滇桂艾纳香干燥药材粗粉适量，
加 10 倍量 70%乙醇渗漉提取，减压浓缩得到乙醇浓缩液。
再依次用石油醚 (60 ～ 90℃)、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进
行萃取，减压浓缩得到各部位提取物。取乙酸乙酯提取物
约 2. 0mg，精密称定，用 70%乙醇超声溶解，放冷，定量
转移至 25ml 容量瓶中，加 70%乙醇稀释至刻度，摇匀，
即得。
2. 2 对照品溶液制备 称取 105℃干燥至恒重的芦丁对照
品约 26mg，精密称定，置 100ml容量瓶中，加 70%乙醇约
20ml超声溶解，放冷，加 70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
2. 3 黄酮的定性检识 取同一批滇桂艾纳香乙酸乙酯提取
物 3 份，适量，加甲醇稀释溶解，分别进行盐酸 －镁粉反
应、三氯化铝 －乙醇反应、氨熏试验。结果表明滇桂艾纳
香乙酸乙酯提取物中含有黄酮类化合物。
2. 4 检测波长的选择 精密吸取芦丁对照品溶液和供
试品溶液，各 2ml，分别用 5%亚硝酸钠溶液 － 10%硝酸
－ 4%氢氧化钠溶液显色系统显色后，以相应的试剂作
空白，在 400 ～ 800nm 波长范围内测定吸光度，寻求最
大吸收波长。结果表明显色后的对照品溶液和供试品溶
液均在 510nm 处有最大吸收，故选择测定吸收波长
为 510nm。
2. 5 标准曲线的绘制 精密吸取芦丁对照品溶液 1. 0，
2. 0，3. 0，4. 0，5. 0，6. 0 ml，分别置于 25ml 容量瓶中，
加水至 10ml，加 5% 亚硝酸钠溶液 1. 0ml，摇匀，放置
5min，加 10%硝酸铝溶液 1. 0ml，摇匀，放置 5min，加 4%
氢氧化钠溶液 10. 0ml，再加水至刻度，摇匀，放置 15min。
以相应的试剂作空白，在 510nm 波长处测定吸收值。以对
照品溶液浓度 (C)为横坐标，吸光度 (A)为纵坐标，绘
制标准曲线，求得回归方程:A = 12. 363C + 0. 0055，r =
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中国民族民间医药
Chinese journal of ethnomedicine and ethnopharmacy
药 物 研 究
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0. 9996。结果表明芦丁在 0. 0108 ～ 0. 0645mg /ml 范围内呈
良好的线性关系。标准曲线见图 1。
2. 6 精密度试验 精密吸取对照品溶液 2. 0ml，按 2. 5 标
准曲线操作项下依法显色后，连续测定 6 次，计算 RSD 值
为 0. 11% (n = 6) ，结果表明仪器精密度良好。
2. 7 稳定性试验 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶
液，各 2. 0ml，分别按 2. 5 标准曲线操作项下依法显色后，
按 0，20，40，80，120，160，200，240min 测定吸收值，
其测定值基本稳定，RSD 值分别为 0. 61%和 0. 10% (n =
6) ，结果表明对照品溶液和供试品溶液在 240min内稳定。
2. 8 重复性试验 取同一批样品约 2. 0mg，6 份，精密称
定，加入适量 70%乙醇超声溶解，放冷，定量转移至 25ml
容量瓶中，按 2. 5 标准曲线操作项下依法显色后测定吸收
值，含量平均值为 58. 61%，RSD值为 0. 15% (n = 6) ，结
果表明重现性良好。
2. 9 加样回收率试验 取已知含量的样品约 1. 0mg，6
份，精密称定，分别加入一定量的芦丁对照品溶液，用适
量 70%乙醇超声溶解，放冷，定量转移至 25ml容量瓶中，
按 2. 5 标准曲线操作项下依法显色后测定吸收值，测定平
均回收率为 99. 17%，RSD 值为 0. 66% (n = 6) ，结果见
表 2。
表 2 加样回收率试验结果
编号
取样量
(mg)
原有量
(mg)
加入量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均回收
率 (%)
RSD
(%)
1 2. 03 1. 1898 1. 0748 2. 2583 99. 41
2 1. 99 1. 1663 1. 0748 2. 2279 98. 77
3 2. 02 1. 1839 1. 0748 2. 2544 99. 60
4 2. 05 1. 2015 1. 0748 2. 2768 100. 05
5 2. 03 1. 1898 1. 0748 2. 2541 99. 02
6 2. 00 1. 1722 1. 0748 2. 2275 98. 18
99. 17 0. 66
2. 10 样品中总黄酮的含量测定 分别取四批滇桂艾纳香
乙酸乙酯提取物约 2. 0mg，精密称定，加入适量 70%乙醇
超声溶解，放冷，定量转移至 25ml 容量瓶中，按 2. 5 标准
曲线操作项下依法显色后测定吸收值，计算含量。结果见
表 3。
表 3 样品中总黄酮含量测定结果
编号 产地 含量 (%)
1 广西百色市那坡县 49. 61
2 广西百色市德保县 52. 86
3 广西百色市凌云县 43. 34
4 广西百色市龙州县 58. 61
3 讨论
3. 1 本文建立滇桂艾纳香乙酸乙酯提取物中总黄酮的含量
测定研究，方法简便、快速、准确，适合作为滇桂艾纳香
乙酸乙酯提取物中总黄酮含量测定的方法，为控制其质量
提供科学数据。
3. 2 本实验参照紫外 － 可见分光光度法 (《中国药典》
2010 年版一部附录ⅤA)［7］，以芦丁为对照品，采用统一
显色方法，即 5%亚硝酸钠溶液 － 10%硝酸 － 4%氢氧化钠
溶液，使芦丁的邻二酚羟基官能团显色，使其在 510nm有
明显的吸收，且供试品溶液显色后的最大吸收波长也为
510nm。同时考察了 5%亚硝酸钠溶液 － 10%硝酸 － 4%氢
氧化钠溶液显色系统的加入量，结果发现 5%亚硝酸钠溶
液 － 10%硝酸 － 4%氢氧化钠溶液的加入量分别为 1. 0ml、
1. 0ml、10. 0ml时，供试品中的总黄酮含量最高。
3. 3 在选择样品溶剂时，考察了 30%乙醇、50% 乙醇、
70%乙醇、乙醇、30%甲醇、50%甲醇、70%甲醇、甲醇
作为溶剂，结果表明用 70%乙醇作为样品的溶剂，测得总
黄酮含量最高。
3. 4 从不同产地样品的总黄酮含量测定中可看出，其含量
有一定的差别，其中广西百色市龙州县的含量最高，而广
西百色市凌云县的含量最低。
参考文献
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－ 278．
［2］ 姜建萍，陈晨，刘喜华等． 滇桂艾纳香化学成分预试研究 ［J］． 广西中
医学院学报，2009，12 (13) :46 － 48．
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天然药物，2007，5 (6) :421 － 424．
［4］ 曹家庆，党权，付红伟，等． 滇桂艾纳香化学成分的分离与鉴定 ［J］．
沈阳药科大学学报，2007，24 (10) :615 － 617．
［5］ 曹家庆，孙淑伟，陈欢，等． 滇桂艾纳香黄酮类化学成分的研究 ［J］．
中国中药杂志，2008，33 (7) :782 － 784．
［6］ 姜建萍，杜秀，丘琴，等． 不同产地滇桂艾纳香中总黄酮的含量测定
［J］． 广西中医学院学报，2009，12 (4) :44 － 46．
［7］ 国家药典委员会编． 中华人民共和国药典 2010 版 (一部) ［S］． 北京:
化学工业出版社，2010:附录 30．
(收稿日期:2013. 02. 23)
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