全 文 ： 中兽医医药杂志 JTCVM
2008年第 1期
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调查研究
[ 10] 廖 娟 ,杜 青 , 张 英.吲哚美辛生物黏附微囊药物
动力学及体内外相关性研究 [ J] .河北医科大学学报 ,
2005, 26(1):33-35.
[ 11] LundbergBB.Asubmicronlipidemulsioncoatedwitham-
phipathicpolyethyleneglycolforparenteraladministrationof
paclitaxel(taxo1)[ J] .IntJPharm, 1997, 49(1):16-21.
Studyonthepharmacokineticsofavermectinsmicrocapsuleinrabbits
YIJin-e, YUANHui, TUDi
(ColegeofAnimalMedicine, HNAU, ChangshaHunan410128, China)
Abstract:Theexperimentwasconductedin10 healthyrabbitstoinvestigatethepharmacokineticsofavermectinsmicrocap-
sules.Avermectinsmicrocapsulessuspensionsweregiventotherabbitssubcutaneouslyatthedoseof1.0 mg/kg, avermectinsin-
jection(0.2 mg/kg, s.c)wasgivenintheexperimentforcomparison.Thenplasmaconcentrationsofavermectinweredetermined
byHPLCwithUVdetectionat245 nm.Pharmacokineticparameterswerecalculatedby3P87programusingtheobtaineddata.The
resultswereasfollows:Avermectinsmicrocapsuleinjection:t1/2kα=21.72 h;t1/2α=56.65 h;t1/2β =239.43 h;tmax=63.06 h;
Cmax=34.30 ng/mL;AUC=11 573.88 ng/mL· h.Avermectinsinjection:t1 /2kα=7.38h;t1/2α=14.59 h;t1/2β =32.84 h;tmax
=19.78h;Cmax=20.88ng/mL;AUC=1 482.03 ng/mL· h.Itisconcludedthatavermectinsgiveaslowabsorptionandelimi-
nation, longhalf-lifeandhighbioavailabilityafteritwasmadeintomicrocapsule.
Keywords:avermectins;microcapsule;pharmacokinetics;rabbits
千里光抗菌有效部位化学成分及其急性毒性研究
李 华1 ,聂芳红 2 ,陈进东3 ,何盛昱 3 ,于增杰 1 ,林红英1 ,陈进军 1
(1.广东海洋大学农业生物技术研究所 ,广东湛江 524088;2.广东海洋大学食品科技学院;3.宁夏煤炭石嘴山中心医院)
摘 要: 用 60%乙醇作溶剂制备千里光抗菌有效部位冻干粉(即千里光 60%乙醇提取物), 分析其化学
成分 ,并用改良寇氏法测定其对小鼠腹腔注射的急性半数致死量(LD50)。结果发现 , 千里光 60%乙醇提取物
含有生物碱 、黄酮类化合物 , 但不含双稠吡咯啶生物碱;测得千里光 60%乙醇提取物对小鼠腹腔注射的 LD
50
为
2 206 mg/kg, 95%可信限为 1 867-2 607 mg/kg。表明千里光 60%乙醇提取物属低毒性物质 ,并可保留千里光的
有效成分生物碱和黄酮类化合物而排除其中的双稠吡咯啶生物碱 ,进一步提高了千里光的安全性。
关键词: 千里光提取物;化学成分;半数致死量;小鼠
中图分类号:S859.7 文献标识码:A 文章编号:1000-6354(2008)01-0007-03
千里光又名千里及 、眼明草 、九里明 、千里明等 , 为菊科
植物千里光(SenecioscandensBuch.-Ham.)的地上部分或
全草 ,生于山坡 、路旁 ,广泛分布于广东及全国各地。千里光
具有清热解毒 、杀虫 、明目等功效 , 是一种临床疗效显著 、毒
副作用小的广谱抗菌中草药 [ 1-3] 。千里光 60%乙醇提取物
为千里光抗菌有效部位 [ 4] ,但对该抗菌有效部位的化学成分
分析和急性毒性研究尚未见报道。本研究以千里光全草植
物化学预试为基础 ,制备千里光抗菌有效部位即千里光 60%
乙醇提取物并分析其化学成分 ,测定其对小鼠的急性半数致
死量 ,为丰富千里光抗菌有效部位的药效学和毒理学资料提
供试验依据。
1 材料与方法
收稿日期:2007-08-15
基金项目:广东省科技攻关计划重点引导项目(2004B20201007);湛
江科技攻关计划项目(湛科 [ 2006] 94号)
作者简介:李华(1980-),女 ,在读硕士研究生 ,研究方向:高效无公
害饲料。陈进军教授为通讯作者 , E-mail:jchen777@ya-
hoo.com.cn
1.1 千里光
于 2007年 5月采自广东省湛江市郊区 , 经广东海洋大
学农业生物研究所鉴定为菊科千里光属多年生草本植物千
里光(SenecioscandensBuch.-Ham.)。将千里光全草阴干 ,
粉碎 ,储藏于阴凉干燥处备用。
1.2 试剂与仪器
碘化钾 、碘化汞钾 、硅钨酸 、苦味酸 、 3, 5 -二硝基苯甲
酸 、磷钼酸 、醋酸镁 、三氯化铁 、白明胶 、茚三酮 、硝酸银 、镁
粉 、层析用硅胶 G等 , 均为国产分析纯试剂。 Ehrlich试剂:将
0.5 g对 -二甲氨基苯甲醛溶解在 25 mL含 0.35 mL高氯酸
的无水乙醇中(新鲜配制)。 KQ-100B型超声波机(昆山市
超声仪器有限公司), LG-WD700(MG-5061T)型微波炉(天
津乐金电子电器有限公司), RE-52C型旋转蒸发仪(巩义市
英峪予华仪器厂), BENCHTOP型冷冻干燥机(德国 Virtis公
司), WFH-203型三用紫外分析仪(温州市孚华分析仪器厂)。
1.3 动物及其饲养管理
普通级昆明系小鼠 ,体重 18-22 g,雌雄兼用 , 由广东医
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调查研究
学院试验动物中心提供(合格证号:粤监 2007A029)。雌雄
分笼饲养 ,室温 24-28 ℃, 相对湿度 60% ～ 80%,每日光照
12h,无对流风 。饲料为广东医学院实验动物中心提供的小
鼠全价颗粒料 , 自由采食 、饮水 , 每天更换 1次饮水 , 隔天更
换 1次垫料。饲养观察 1周后用于试验。
1.4 千里光全草植物化学预试
将千里光全草粉末过 20目筛 ,按文献 [ 3, 4]所述方法, 制备
预试液 , 采用试管分项提取预试法和圆形纸层析预试法进行。
1.5 千里光 60%乙醇提取物的制备
取过 20目筛的千里光全草粉末 250 g, 装入烧瓶 , 按 10
倍量加入体积分数 60%乙醇 ,浸泡 24 h后超声处理 20 min,
再按 100 mL/30 s进行微波处理 ,过滤 , 得滤液。在残渣中加
入 8倍量的体积分数 60%乙醇 , 按前述方法重复处理 1次。
合并 2次滤液 , 旋转蒸发 , 浓缩至不含乙醇。浓缩液用乙醚
萃取 3次 ,取下层液体 , 置于 4 ℃冰箱 12 h后 , 乘冷过滤 , 滤
液用洁净的青霉素瓶按每瓶 2 mL分装 , 冷冻干燥成粉末 , 即
得千里光 60%乙醇提取物冻干粉。用重量法计算提取率。
1.6 千里光 60%乙醇提取物中主要成分检测
千里光 60%乙醇提取物中生物碱检查采用试管法 , 进行
碘化碘钾反应 、苦味酸反应和硅钨酸反应 [ 1] 。 黄酮类化合物
采用圆形纸层析法 ,以 1%三氯化铝溶液喷洒 , 在紫外灯下观
察 ,如果出现黄绿色荧光条带 , 则为黄酮类化合物阳性 [ 4] 。
千里光 60%乙醇提取物中双稠吡咯啶生物碱(pyrroliz-
idinealkaloids, PAs)的检测采用薄板层析法进行 。用适量
甲醇将少量千里光 60%乙醇提取物溶解 、点样 ,展开剂为氯
仿∶甲醇∶氨水(85∶14∶2), 用 Ehrlich试剂喷雾显色 , 观察。
如有淡紫色或紫褐色斑点 ,则为 PAs阳性 [ 1] 。
1.7 千里光 60%乙醇提取物的急性毒性试验
1.7.1 预试验 将供试小鼠分为 5组 , 每组 4只 , 雌雄兼
用 ,以粗筛所得 16 590 mg/kg为最高剂量 , 腹腔注射千里光
60%乙醇提取物 ,剂量组比为 3∶1(表 1)。连续观察 7 d, 确
定零致死剂量(Dn)和最高致死剂量(Dm)[ 5] 。
1.7.2 正式试验 将供试小鼠分为 6组 , 每组 10只 , 雌雄
兼用。按表 1于早晨 8∶30腹腔注射给予千里光 60%乙醇提
取物 ,给药体积为 0.2 mL/10g体重。 给药后观察 4 h,以后
每天上 、下午各 1次 , 观察 7 d。记录供试小鼠临床表现 , 并
按表 2记录各组小鼠的死亡数和死亡率 , 按改良寇氏法求出
急性 LD50及其 95%可信限 [ 5] 。
2 结果
2.1 千里光全草化学成分预试结果
采用试管分项提取预试法和圆形纸层析预试法进行千
里光全草化学成分预试 , 其结果显示 , 千里光全草含有生物
碱 、黄酮类物质和酚性成分 、强心甙 、鞣质 、氨基酸等 , 不含氰
甙 、皂甙 、多肽与蛋白质 、蒽醌类。
2.2 千里光 60%乙醇提取物得率
千里光 60%乙醇提取物冻干粉重 36.58g,提取率为 14.63%。
2.3 千里光 60%乙醇提取物中主要成分的检测结果
试管法检查总生物碱发现 , 碘化碘钾反应阳性(+), 苦
味酸反应阴性(-),硅钨酸反应阳性(+), 结果为生物碱阳
性。在紫外灯下观察 , 出现明显的黄绿色荧光条带 , 说明含
有黄酮类化合物。经薄板层析法检查 , 未出现淡紫色或紫褐
色斑点 ,即在千里光 60%乙醇提取物中未检出 PAs。
2.4 千里光 60%乙醇提取物的急性毒性试验结果
2.4.1 供试小鼠的临床表现 各剂量组供试小鼠给予千里
光 60%乙醇提取物后不久出现程度不同的活动减少或倦卧
不动 ,少数兴奋不安 , 以后表现基本正常。部分小鼠死前抽
搐 、麻痹或共济失调 , 少数有眼球突出和扭体 , 浅表血管充
血 、皮肤紫绀 , 公鼠睾丸色泽暗。
2.4.2 急性 LD50预试结果 由表 1可知 , Dn为 614 mg/kg,
Dm为 5 530 mg/kg。在 Dn和 Dm范围内将正式试验确定为 6
个剂量组 ,组间比为 1∶0.65, 由高剂量依次递减 5 530 mg/kg、
3 568mg/kg、2 302mg/kg、1 485mg/kg、958mg/kg和 618mg/kg,
作为 LD50正式试验的剂量 ,结果见表 2。
表 1 千里光 60%乙醇提取物急性 LD50预试方法和结果
组别 剂量 /mg· kg-1 动物数 /只 死亡数 /只
1 205 4 0
2 614 4 0
3 1 843 4 2
4 5 530 4 4
5 16 590 4 4
表 2 千里光 60%乙醇提取物的急性 LD50正式试验结果
组别 剂量/mg· kg-1
剂量对数
(X)
动物数
/只
死亡数
/只 P P
2
1 618 2.79 10 0 0.0 0.00
2 958 2.98 10 0 0.0 0.00
3 1 485 3.17 10 1 0.1 0.01
4 2 302 3.36 10 5 0.5 0.25
5 3 568 3.55 10 10 1.0 1.00
6 5 530 3.74 10 10 1.0 1.00
根据表 2数据 , 求得 LD
50
为 2 206 mg/kg。 LD
50
的 95%
可信限为 1 867-2 607 mg/kg。
3 讨论
3.1 千里光的有效成分
植物化学成分预试结果表明 , 千里光全草含有生物碱 、
酚性成分 、黄酮类物质 、强心甙 、鞣质 、氨基酸等物质 , 不含氰
甙 、皂甙 、多肽与蛋白质 、蒽醌类。据报道 , 黄酮类化合物是
千里光的有效成分 ,生物碱可能也是其有效成分之一 [ 4] 。 本
研究中生物碱 、黄酮类化合物等主要化学成分的预试结果与
文献报道 [ 3 , 4]一致 ,为判定生物碱和黄酮类物质为千里光的
主要有效成分提供了证据。
3.2 千里光 60%乙醇提取物主要化学成分分析
黄酮类物质和生物碱为千里光的主要有效成分。黄酮
类物质的适宜乙醇提取体积分数为 60% ～ 70%, pH值为 8;
生物碱适宜的乙醇提取体积分数为 95%, pH值为 3 -5[ 6] 。
据此 ,本研究利用 60%乙醇作为溶剂 , 制备千里光抗菌有效
部位 ,千里光 60%乙醇提取物的提取率达 14.63%。采用经
典方法对千里光 60%乙醇提取物中黄酮类物质和生物碱进
行检测 ,发现在提取过程的几个关键环节中 , 黄酮类物质和
生物碱的检测结果越来越明显。
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调查研究
此外 , 有些 PAs是有毒生物碱 [ 7] 。本研究采用对 PAs检
测特异性强的 Ehrlich试剂 , 利用薄板层析法对千里光 60%
乙醇提取物中 PAs进行了检测(该法对 PAs检测的灵敏度为
0.5μg[ 8]), 结果发现 , 千里光 60%乙醇提取物中含有生物
碱 , 但未检出 PAs, 可见进行千里光 60%乙醇提取物的精制 ,
可以排除千里光中的 PAs。
3.3 千里光 60%乙醇提取物的急性毒性评价
根据世界卫生组织化合物急性毒性分级 ,以小鼠为试验
动物 , LD50在 501-5 000 mg/kg之间的化学物属于低毒性物
质。本研究测得千里光 60%乙醇提取物对小鼠腹腔注射的
LD50为 2 206 mg/kg, 加之千里光 60%乙醇提取物中未检出
PAs,可见千里光 60%乙醇提取物属低毒性物质 ,并可以排除
千里光中的 PAs,进一步提高千里光的安全性。
参考文献:
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AnalysisonthechemicalcompositionsofantibacterialextractfromSenecio
scandensBuch.-Ham.andtestsonitsacutetoxicity
LIHua, YUZeng-jie, LINHong-ying, CHENJin-jun
(InstituteofAgriculturalBiotechnology, GuangdongOceanUniversity, ZhanjiangGuangdong524088, China)
Abstract:Thefreeze-driedpowderofantibacterialextractfromSenecioscandensBuch.-Ham.waspreparedusing60% al-
coholasthesolvent.Themainchemicalcompositionsoftheextractwasanalyzed, andtheacutemediumlethaldose(LD
50
)intraper-
itonealyinjectedtomiceoftheextractwasconductedwiththemodifiedKabersmethod.Theresultsshowedthattheextractcon-
tainedalkaloidsandflavonesbutnotpyrrolizidinealkaloids(PAs), andthattheLD
50
oftheextractintraperitoneallyinjectedtomice
was2 206 mg/kg, withthe95%confidencelimitof1 867-2 607 mg/kg.Itwasindicatedthattheextractwasinlowertoxicityand
containedefectivepartsofalkaloidsandflavonesbutgotridofPAsfromS.scandens, whichenhancedtheherbssafety.
Keywords:ExtractfromSenecioscandensBuch.-Ham.;chemicalcomposition;mediumlethaldose;mouse
人参总皂苷及其衍生物对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响
郭志廷 1 ,韦旭斌2 ,梁剑平 1 ,刘 宇 1 ,罗晓琴1
(1.中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所 农业部新兽药工程重点实验室 , 甘肃兰州 730050;2.吉林大学畜牧兽医学院)
摘 要: 探讨人参总皂苷及其衍生物对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响。采用中性红试验和 MTT法分
别测定总皂苷及其衍生物对巨噬细胞吞噬中性红作用及其代谢功能的影响。结果显示 , 总皂苷及其衍生物浓度
在试验范围内对小鼠巨噬细胞吞噬中性红及其代谢功能均有不同程度的促进作用 ,而衍生物的促进作用更强 ,且
对巨噬细胞的细胞毒性明显降低。提示衍生物对巨噬细胞的免疫活性优于总皂苷。
关键词: 人参总皂苷;衍生物;巨噬细胞;分子修饰
中图分类号:S852.4 文献标识码:A 文章编号:1000-6354(2008)01-0009-03
人参皂苷是人参主要的有效成分之一 , 大量研究表明 ,
收稿日期:2007-10-12
基金项目:国家自然科学基金资助项目(30471272)
作者简介:郭志廷(1979-),男 ,硕士研究生 ,主要从事临床兽医中药
研究。
其具有抗肿瘤 、抗病毒 、降血糖 、延缓衰老 、美容和提高机体
免疫力等功效 [ 1 , 2] 。纵观国内外文献 , 几乎所有对人参皂苷
的研究均停留在原药的基础上 ,对于其分子结构的化学修饰
及修饰前后的生物学活性有何变化报道甚少。为了获得生
物学活性更强 、毒性更低的皂苷类衍生物 , 笔者等对人参总
皂苷进行了硫酸化修饰。前期试验证实 , 人参总皂苷及其衍