全 文 ：［收稿日期］ 20111112(010)
［第一作者］ 萨仁格日乐，副主任药师，从事蒙药资源和质量研
究，Tel:13804753686，E-mail:srgrl@ 126． com
［通讯作者］ * 王青虎，博士，副教授，从事蒙药有效成分提取
分离鉴定及其质量标准研究，Tel:15894890037，E-
mail:wqh693@ 163． com
HPLC同时测定蒙药光叶苦荬菜中 5 种有效成分的含量
萨仁格日乐1，照日格图2，邰文泉2，王青虎2*
(1. 内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂科，内蒙古 通辽 028000;
2. 内蒙古民族大学蒙医药学院，内蒙古 通辽 028000)
［摘要］ 目的:建立一种 HPLC 同时测定蒙药光叶苦荬菜中的 5 种有效成分。方法:采用 HPLC，Hypersil ODS-2 色谱柱
(4. 6 mm × 300 mm，5 μm) ;乙腈-水梯度洗脱;检测波长切换，Ixerisoside A 和 Ixerin M 238nm，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、
芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯 326 nm;柱温为 30 ℃。结果:在所用的实验操作条件下，5 种
对照品溶液分别在检测范围内具有良好的线性关系 (r ＞ 0. 999 3) ，平均回收率分别为 97. 08% (RSD 1. 28%) ，96. 33% (RSD
1. 64%) ，96. 50% (RSD 1. 45%) ，95. 50% (RSD 1. 38%) ，96. 00% (RSD 1. 22%)。结论:方法简便、快速、准确，可为评价该
药材质量提供依据。
［关键词］ 高校液相色谱法;同时测定;光叶苦荬菜;5 种有效成分
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)19-0100-04
Simultaneous Determination of Five Active Compounds in Ixeris chinensis
SA-ren-ge-ri-le1，ZHAO-ri-ge-tu2，TAI Wen-quan2，WANG Qing-hu2*
(1. Affiliated Hospital，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，China;2. College of
Traditional Mongolian Medicine，Inner Mongolia University for Nationalities，Tongliao 028000，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for simultaneous determining five avtive compounds from
the whole plant of I． chinensis by HPLC． Method:The separation by gradient elution was performed on Hypersil
ODS-2 column (4. 6 mm × 300 mm，5 μm)at 30 ℃ with acetonitrile and water as the mobile phase and detection
at 238 nm and 326 nm． Result:Five active compounds were linear in the detection range (r = 0. 999 3)． The
average recoveries of five active compounds were 97. 08% (RSD 1. 28%) ，96. 33% (RSD 1. 64%) ，96. 50%
(RSD 1. 45%) ，95. 50% (RSD 1. 38%) ，96. 00% (RSD 1. 22%)． Conclusion:The results indicated that the
developed assay method was rapid，accurate，reliable and could be readily utilized as a quantitative analysis method
for I． chinensis．
［Key words］ HPLC;simultaneous determination;Ixeris chinensis;five avtive compouds
光叶苦荬菜，蒙古名苏斯乌布斯、萨日赫依、库
日冲、陶来茵益达日、敖兰益达日、毛盖益达日，系为
菊科植物山苦荬 Ixeris chinensis (Thunb．)Nakai 的
干燥全草。春、夏花盛开时采收，除去枯叶、残茎、洗
净泥土，通风处阴干［1］。本品味苦，性凉、涩、钝、
稀;有抑希拉，清热之功效。蒙医临床用于希拉性热
头痛，高烧，食欲不振，目黄，口苦，与金腰草、五灵
脂、伞梗虎耳草、船形乌头、木鳖子等配伍，制成六味
苦荬散或八味当药散用，与胡连、丹参等配伍，制成
七味胡连散用于血热病。苦买菜植物的主要化学成
分有黄酮［2，3］、倍半萜［4-6］和三萜类［7］等，笔者在光
叶苦荬菜乙酸乙酯层的化学成分研究前期工作中分
离得到了黄酮和倍半萜类化合物，包括 ixerisoside
A，ixerin M，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-
O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸
酯。现代医学研究表明，中华苦荬菜具有抗炎保肝、
抗烟 碱、抗 氧 化、抗 病 毒、抗 白 血 病 等 作 用。
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第 18 卷第 19 期
2012 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 19
Oct．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.19.007
Zheng［8］等人对其抗炎保肝作用进行了进一步研究，
发现从中华苦荬菜中分离的单体木犀草素-7-O-β-D
葡萄糖苷的活性高于粗提物，表明木犀草素-7-O-β-
D-葡萄糖苷是其抗炎保肝作用的活性成分之一。
Zhang 等［9］ 报 道 从 中 华 苦 荬 菜 中 提 取 的
chinensiolides E 对 VA-13 恶性肺肿瘤细胞生长有显
著的抑制作用。 Ahn EM 等［10］ 第 1 次从 Ixeris
dentata form a albif lora 的根中提取分离出的中美菊
素，9α-羟基愈创木-4(15) ，10 (14) ，11 (13)-三
烯-6，12-内酯，还阳参属苷对人体结肠癌细胞和肺
腺癌细胞有相对较高的细胞毒活性，此外化合物
ixerin M，还阳参属苷对酰基辅酶 A:胆固醇酰基转
移酶具有抑制活性。黄酮和倍半萜类化合物是光叶
苦荬菜的主要活性成分，国内外学者对该植物的研
究主要集中在化学成分和药理作用上，未见光叶苦
荬菜中同时测定黄酮苷和倍半萜苷的报道。为了快
速、简便的测定光叶苦荬菜中活性成分，本实验建立
了高效液相色谱法同时测定该药材中 ixerisoside A，
ixerin M，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-
β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯
的方法。
1 仪器与试药
AUW220D 型电子天平(日本岛津) ，HH-S26S
型水浴锅(金坛市大地自动化仪器厂) ，RE52-2 型
旋转蒸发器(上海泸西分析仪器厂) ，KQ-100 型系
列超声波冲洗器(昆山市超声仪器有限公司) ，UV-
2501PC 型分光光度计(日本岛津) ，高效液相色谱
仪(LC10-Atvp 输液泵，SPD-M10Avp 检测器，SCL-
10Avp 工作站，DGU-12A 脱气机)。
光叶苦荬菜采集于内蒙古通辽市，并经内蒙古
民族大学蒙医药学院蒙药生药教研室主任布和巴特
尔教 授 鉴 定 为 菊 科 植 物 山 苦 荬 ixeris chinensis
(Thunb．)Nakai 的干燥全草;ixerisoside A(S1) ，
ixerin M(S2) ，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(S3)、木犀
草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(S4)和木犀草素-7-O-β-D-
葡萄糖苷乙酸酯(S5)均自制并用高效液相色谱仪
分别测定其纯度均 ＞ 98. 0%，可作为对照品使用;甲
醇为色谱纯(天津市光复精细化工研究所) ;水为超
纯水;其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果［11-14］
2. 1 色谱条件 大连依利特 hypersil ODS2 柱(4. 6
mm × 300 mm，5 μm) ，流动相乙腈(A)-水(B) ，梯度
洗脱，(0 ～ 5 min，18% A，5 ～ 10 min，18% ～ 45% A，
10 ～ 20 min，45% ～ 65% A，20 ～ 32 min，65% A) ，柱
温 30 ℃，检测波长，ixerisoside A 和 ixerin M 238
nm，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、芹菜素-7-O-β-D-
葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯 326
nm;流速 1. 0 mL·min － 1。在上述色谱条件下，
ixerisoside A(S1) ，ixerin M(S2) ，芹菜素-7-O-β-D-
葡萄糖苷(S3)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(S4)和
木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯(S5)达到基线
分离(R1. 0) ，理论塔板数均不低于 3 500，分离色
谱图见图 1。
A. 样品供试液(326 nm) ;B. S3、S4 和 S5 混合对照液(326nm) ;
C. 样品供试液(238 nm) ;D. S1 和 S2 混合对照液(238 nm)
图 1 样品供试液和混合对照液的 HPLC 图谱
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 取 ixerisoside A 和
ixerin M 对照品适量，精密称定，加甲醇溶解，分别
配成 1. 6，1. 2 g·L － 1的储备液;另取芹菜素-7-O-β-D-
葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-
7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯对照品适量，加 60% 乙醇
溶解，分别配成 1. 0，2. 0，1. 2 g·L － 1的储备液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 光叶山苦荬研细，称取
粗粉 1. 0 g，精密称定，加入氯仿 20 mL，称定质量，
超声 20 min，滤过，药渣挥去氯仿后，精密加甲醇
10 mL，称定质量，超声 30 min，放冷，用甲醇补充失
重的量，过滤，即得。
2. 3 方法学考察
·101·
萨仁格日乐，等:HPLC 同时测定蒙药光叶苦荬菜中 5 种有效成分的含量
2. 3. 1 检测波长的选择 分别取 ixerisoside A、
ixerin M、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-
β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯
的对照液，在 200 ～ 400 nm 进行扫描，结果确定 S1
和 S2 的检测波长为 238 nm，S3、S4 和 S5 的检测波
长为 326 nm。
2. 3. 2 线性关系考察 精密吸取 ixerisoside A 和
ixerin M 对照品储备液适量，加甲醇配制成 6 个不同
浓度的系列混合对照溶液;另吸取芹菜素-7-O-β-D-
葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-
7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯的储备液加 60%乙醇配制
成 6 个不同浓度的系列混合对照溶液。分别取上述
溶液 20 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以浓度
为横坐标，峰面积为纵坐标，得回归方程和线性范
围，结果见表 1。
表 1 5 种有效成分的回归方程式和最低检测限
化合物 回归方程式 r
线性范围
/ g·L － 1
LOQ
/ g·L － 1
S1 Y = 1. 19 × 106 X － 27 928 0. 999 5 0. 040 ～ 0. 16 0. 020
S2 Y = 1. 00 × 106 X － 20 194 0. 999 3 0. 030 ～ 0. 12 0. 012
S3 Y = 1. 30 × 106 X － 8 059 0. 999 7 0. 012 ～ 0. 10 0. 007
S4 Y = 1. 02 × 106 X － 23 297 0. 999 8 0. 025 ～ 0. 80 0. 010
S5 Y = 1. 28 × 106 X － 10 314 0. 999 7 0. 015 ～ 0. 12 0. 008
注:Y =峰面积，X =浓度 / g·L － 1。
2. 3. 3 最低检测限(LOQ) 取 ixerisoside A、ixerin
M，芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡
萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯对照
品溶液以不同比例稀释后测定，以信噪比 2 ～ 3 为最
低检出，结果见表 1。
2. 3. 4 精密度试验 分别取同一 S1 和 S2 的混合
对照品液和 S3、S4 和 S5 混合对照品液，在上述色谱
条件下，连续进样 6 次，测定峰面积。计算 S1，S2，
S3，S4，S5 的峰面积 RSD 分别为 1. 02%，1. 25%，
1. 04%，1. 11%，1. 32%。
2. 3. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于制
备后 0，4，6，8，12 h 依法测定，以峰面积值计算，S1，
S2，S3，S4，S5 的 峰 面 积 RSD 分 别 为 1. 35%，
1. 64%，1. 38%，1. 73%，1. 26%，表明供试品溶液在
12 h 内基本稳定。
2. 3. 6 重复性试验 取同一采集时间的样品 6 份，
制备供试品溶液，进行测定，计算 S1，S2，S3，S4，S5
的质量分数，其 RSD 分别 1. 58%，1. 43%，1. 84%，
1. 79%，1. 68%。
2. 3. 7 回收率试验 精密称取样品(采集时间为
20100526)0. 50g，6 份，精密加入 1 S1，S2，S3，S4，S5
适量，制备供试品溶液，测定，计算加样回收率和
RSD，结果见表 2。
表 2 回收率测定(n = 6)
对照品
取样量
/ g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
RSD
/%
S1 0. 500 0 0. 505 0 0. 48 0. 971 97. 08 1. 28
S2 0. 5000 0. 3055 0. 30 0. 595 96. 33 1. 64
S3 0. 500 0 0. 153 5 0. 20 0. 346 96. 50 1. 45
S4 0. 500 0 1. 041 1. 00 2. 015 97. 50 1. 38
S5 0. 500 0 0. 244 0 0. 20 0. 436 96. 00 1. 22
2. 4 样品测定 精密吸取 3 个不同采集时间的样
品供试品溶液 3 份，每份 20 μL，进样测定，计算样
品中 S1，S2，S3，S4，S5 的质量分数，结果见表 3。
表 3 光叶山苦荬中 S1，S2，S3，S4，S5 的测定(n = 5) mg·g － 1
采集时间 S1 S2 S3 S4 S5
2009-05-02 1. 021 ± 0. 015 0. 615 ± 0. 009 0. 327 ± 0. 005 2. 010 ± 0. 019 0. 541 ± 0. 010
2010-04-29 1. 108 ± 0. 013 0. 634 ± 0. 011 0. 358 ± 0. 007 2. 028 ± 0. 021 0. 505 ± 0. 010
2010-05-26 1. 010 ± 0. 013 0. 611 ± 0. 012 0. 307 ± 0. 006 2. 081 ± 0. 027 0. 488 ± 0. 006
3 讨论
在流动相选择中，曾采用甲醇-水、乙腈-水的不
同梯度洗脱系统，结果乙腈-水梯度洗脱(0 ～ 5 min，
乙腈比例为 18%，5 ～ 10 min，由乙腈比例 18%递升
至 45%，10 ～ 20 min，乙腈比例由 45% 递升至
65%，20 ～ 32 min，乙腈比例为 65%) ，分离效果好，
重复性强，可同时检测到 ixerisoside A、ixerin M、芹
菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖
苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷乙酸酯，且各成分
均达到基线分离。
据光叶山苦荬的化学成分前期研究结果，
ixerisoside A、ixerin M、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、
木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-
葡萄糖苷乙酸酯均分离于乙酸乙酯层，故先用氯仿
提取后，药渣回去氯仿加甲醇超声提取，制备供
试液。
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第 18 卷第 19 期
2012 年 10 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 19
Oct．，2012
经紫外光谱扫描可知，ixerisoside A 和 ixerin M
在 238 nm 处有最大吸收，而芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖
苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-
D-葡萄糖苷乙酸酯分别在 261，326 nm 处有两个吸
收。故选择 238 nm 为 ixerisoside A 和 ixerin M 的检
测波长，326 nm 为芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀
草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄
糖苷乙酸酯的检测波长。
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［责任编辑 顾雪竹
檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶
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