全 文 ： ·880· Chin JMAP, 2013 August, Vol.30 No.8 中国现代应用药学 2013年 8月第 30卷第 8期
HPLC同时测定珠子草中没食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸的含量

梁云 1，李彩东 2*，王信 2(1.兰州市肺科医院，兰州 730046；2.兰州市第二人民医院，兰州 730046)

摘要：目的 建立同时测定珠子草中没食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸的 HPLC 法，并对珠子草该 3 种成分进行含量测定。
方法 色谱柱：Shimazu C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：0.1%磷酸(A)-乙腈(B)梯度洗脱，流速为 0.8 mL·min1；柱
温：室温；检测波长：270 nm；进样量 10 μL。结果 没食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸含量分别在 0.6~9.6 μg、0.525~8.4 μg、
0.475~7.6 μg 内与峰面积呈良好的线性关系。没食子酸的平均含量为 0.196 2%，短叶苏木酚为 0.518 2%，鞣花酸为
0.411 0%。结论 本方法操作简便，准确度高，可用于珠子草中没食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸 3 种成分含量的测定。
关键词：珠子草；没食子酸；鞣花酸；短叶苏木酚；同时测定
中图分类号：R917.101 文献标志码：A 文章编号：1007-7693(2013)08-0880-03

Simultaneous Determination of Galic Acid, Brervifolincaboxylic Acid and Ellagic Acid in Phyllanthus
Niruri Linn by HPLC

LIANG Yun1, LI Caidong2, WANG Xin2(1.Pulmonary Disease Hospital of Lanzhou, Lanzhou 730046, China; 2.The No.2
People’s Hospital of Lanzhou, Lanzhou 730046, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To establish the method for determination of galic acid, brervifolincaboxylic acid and ellagic acid
in Phyllanthus niruri Linn. METHODS HPLC separation was carried on Shimazu C18(150 mm×4.6 mm, 5 μm) column with
mobile phase consisted of acetonitrile and 0.1% phosphoric acid in a program of gradient elution. Flow rate: 0.8 mL·min-1,
column temperature: room temperature, and the detection wavelength was 270 nm. RESULTS The linear range of galic acid,
brervifolincaboxylic acid and ellagic acid were 0.69.6 μg, 0.5258.4 μg, 0.4757.6 μg, respectively; and the content of them in
Phyllanthus niruri Linn were 0.196 2%, 0.518 2%, 0.411 0%, respectively. CONCLUSION The developed method is simple,
accurate and feasible. It’s suitable for the determination of galic acid, brervifolincaboxylic acid and ellagic acid in Phyllanthus
niruri Linn.
KEY WORDS: Phyllanthus niruri Linn; galic acid; brervifolincaboxylic acid; ellagic acid; simultaneous determination


基金项目：兰州市科技局立项项目(2007-1-75)
作者简介：梁云，男，主任药师 Tel: 18919952149 E-mail: Lzliangyun@163.com *通信作者：李彩东，女，博士，主任药师 Tel:
(0931)8361836 E-mail: lzlicaidong@163.com
珠子草(Phyllanthus niruri Linn)为大戟科叶
下珠属植物，是我国传统的中草药，主要含黄酮
类、木脂素类、生物碱类、鞣质等多种成分，
具有平肝清热、利水解毒之功效，用于肠炎、
肝炎、痢疾、尿路感染、无名肿痛等疾病的治
疗，具有明显的抗乙型肝炎病毒活性及对肝损
伤的保护作用 [1-4]，且不良反应少，是一种值得
深入开发的天然药物。其药效成分主要为多酚
类化合物 [3,5]。本研究建立了用高效液相色谱法
同时测定珠子草中没食子酸、短叶苏木酚和鞣花
酸的含量的测定方法，为珠子草植物药的开发应
用提供理论依据，为更好地控制珠子草药材的质
量提供方法。
1 仪器与试剂
Waters 2695-2996 高效液相色谱仪 (美国
Waters公司)；FA2004N电子分析天平(上海精密科
学仪器有限公司)；AUW120D电子分析天平(岛津
公司)；没食子酸对照品(中国药品生物制品检定
所，批号：110831-200302，供含量测定用)；短叶
苏木酚对照品(德尔塔林试剂公司，批号：18490-
0805，纯度>98%)；鞣花酸对照品(天津一方科技
有限公司，批号：00597，纯度>98%)；珠子草药
材(采自云南蛮耗)，经兰州市第二人民医院李彩东
主任药师鉴定为珠子草(Phyllanthus niruri Linn.)；
乙腈、甲醇均购自深圳西陇化工股份有限公司，
色谱纯；双蒸水(自制)，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Shimazu C18(150 mm×4.6 mm，5
μm)；流动相：乙腈(B)-0.1%磷酸(A)梯度洗脱，洗
脱程序见表 1。流速为 0.8 mL·min1；柱温为室温，
检测波长：270 nm；进样量 10 μL。
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2013.08.016
中国现代应用药学 2013年 8月第 30卷第 8期 Chin JMAP, 2013 August, Vol.30 No.8 ·881·
表 1 梯度洗脱程序表
Tab 1 Gradient elution program
时间/min 乙腈/% 0.1%磷酸/%
0 3 97
10 11 89
30 13 87
45 20 80
55 30 70
65 50 50
75 3 97
2.2 混合对照品溶液的制备
分别精密称取没食子酸、短叶苏木酚和鞣花
酸对照品 2.4，2.1和 1.9 mg，置于同一 10 mL量
瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成没
食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸浓度分别为 0.24，
0.21，0.19 mg·mL1的混合对照品溶液。
2.3 供试溶液的制备
取珠子草药材粉末约 2.0 g，精密称定于 100
mL锥形瓶中。精密加入 50%甲醇溶液 30 mL，称
定重量，超声提取 30 min，放冷，再称定重量，
加 50%甲醇溶液补足减失的质量。取适量经 0.45
µm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
测定方法：分别精密吸取上述供试品溶液，
对照品溶液各 10 μL，注入液相色谱仪，按“2.1”
项下方法进行测定。
2.4 线性关系考察
分别精密吸取混合对照品溶液 2.5，1.0，1.5，
2.0，4.0 μL，注入液相色谱仪，在“2.1”项下色
谱条件进样分析。以对照溶液的质量(μg)为横坐
标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线并进行回归
分析计算，没食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸的标
准曲线回归方程分别为 Y=156 207X–93 561
(r=0.999 9) ； Y=136 949X106 083(r=0.999 8) ；
Y=601 584X501 384(r=0.999 9)。结果表明没食子
酸、短叶苏木酚和鞣花酸质量分别在 0.6~9.6 μg、
0.525~8.4 μg、0.475~7.6 μg内与峰面积呈良好的线
性关系。
2.5 仪器精密度试验
取同一混合对照溶液按“2.1”项下色谱条件，
重复进样 6 次，记录峰面积。计算没食子酸、短
叶苏木酚和鞣花酸峰面积的 RSD 分别为 1.30%，
1.40%，1.39%，表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
精密称取珠子草药材粉末(蛮耗)样品 6份，按
“2.3”项下方法制备供试品溶液，按“2.1”项下
色谱条件进样分析。测得没食子酸 RSD为 1.09%；
短叶苏木酚 RSD为 2.13%；鞣花酸 RSD为 1.05%。
表明本方法重复性良好。
2.7 稳定性试验
取同一供试品溶液，室温下放置 0，2，4，8，
12，24 h，按“2.1”项下色谱条件进样分析，记
录峰面积，计算没食子酸、短叶苏木酚和鞣花酸
峰面积的 RSD分别为 1.22%，2.58%，1.31%。表
明供试液室温放置 24 h内稳定。
2.8 加样回收率试验
称取已知含量的珠子草药材粉末 9 份，每份
约 1.0 g，精密称定。分别加入没食子酸对照品
(0.108 mg·mL1)，短叶苏木酚对照品(0.315 mg·mL1)
和鞣花酸对照品(0.228 mg·mL1)适量，使加入量与
样品含量相当；按“2.3”项下方法制成供试品溶
液，在“2.1”项下色谱条件进行分析。结果没食
子酸平均回收率 97.04%，RSD 1.45%；结果短叶
苏木酚平均回收率 97.20%，RSD 1.95%；结果鞣
花酸平均回收率 100.5%，RSD 2.82%。
2.9 含量测定
精密称取珠子草药材粉末 5 份，按“2.3”项
下方法制成供试品溶液，分别精密吸取供试品溶
液和对照品溶液各 10 μL，注入高效液相色谱仪，
以外标法进行含量测定，结果见图 1和表 2。

图 1 高效液相色谱图
A对照品；B样品
Fig 1 HPLC chromatogram
Acontrol; Bsample
表 2 含量测定结果
Tab 2 Results of content determination of sample
编号 没食子酸 含量/%
短叶苏木酚
含量/%
鞣花酸
含量/%
1 0.197 0.514 0.409
2 0.195 0.527 0.413
3 0.196 0.519 0.406
4 0.196 0.508 0.410
5 0.197 0.523 0.417
平均含量% 0.196 2 0.518 2 0.411 0
RSD% 0.43 1.44 1.02
·882· Chin JMAP, 2013 August, Vol.30 No.8 中国现代应用药学 2013年 8月第 30卷第 8期
由结果可知没食子酸平均含量为 0.196 2%，
短叶苏木酚平均含量为 0.518 2%，鞣花酸平均含
量为 0.411 0%。
3 讨论
3.1 提取条件的选择
本研究曾对 70%甲醇超声提取、50%甲醇超声
提取、30%甲醇超声提取、提取时间、温度等提取
方式和提取条件进行考察，发现 70%甲醇、50%
甲醇超声提取在相对较短的时间内提取较为完
全；综合实验条件和工作效率等因素，将提取条
件定为 50%甲醇超声提取。
3.2 色谱柱的选择
分别考察了费罗门双子星 C18 柱、迪马Ⅱ代
C18柱和岛津 VP-ODS C18柱分别对于珠子草中 3
种成分的分离效果，在既定的色谱条件下，发现
岛津 VP-ODS C18柱已能实现较好的分离效果，峰
型较好，故选用岛津 VP-ODS C18柱。
通过以上研究证明：本法操作简便，方法科
学，准确度高，可用于珠子草多成分质量评价。
REFERENCES
[1] ZHONG Y, ZUO C X, LI F Q, et al. Chemical composition of
Yexiazhu and its research activity against hepatitis B virus [J].
China J Chin Mater Med(中国中药杂志 ), 1998, 23(6):
363-364.
[2] NIU X F, HE L C, FAN T, et al. Protecting effect of brevifolin
and 8,9-single-epoxy brevifolin of Phyllanthus simplex on rat
liver injury [J]. China J Chin Mater Med(中国中药杂志),
2006, 31(18): 1529- 1532.
[3] SHIN M S, KANG E H, LEE Y I. A flavonoid from medicinal
plants blokes hepatitis B virus antigen secrcetion in
HBV-infected hepatocytes [J]. Antiviral Res, 2005, 67(3):
163-168.
[4] WEI P, LIU W X, JIA F L, et al. Protective effect of
8-methoxypsoralen against acetaminophen-induced acute
hepatic injury in mice [J]. Chin J Mod Appl Pharm(中国现代
应用药学), 2012, 29(8): 682-686.
[5] CAI J, LIANG J Y. Progress of studies on constituents and
pharmacological effect of Phyllanthus urinaria L. [J]. Strait
Pharm J(海峡药学), 2003, 15(1): 1-3.
收稿日期：2012-12-10



降糖保健食品和中成药中 12种化学药的液相快速筛查

余小平，郑明，陈蕾(浙江省衢州市食品药品检验所，浙江 衢州 324002)

摘要：目的 建立降糖保健食品和中成药中 12 种化学药的液相快速筛查方法。方法 采用 HPLC-DAD，色谱条件：Agilent
Extend C18 色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 µm)，以 0.014%三氟乙酸水溶液(pH 2.7±0.05)、0.01 mol·L-1 庚烷磺酸钠溶液、乙腈
为三元梯度洗脱流动相，柱温：30 ℃，流速：1.0 mL·min1，检测波长：220 nm。结果 12 种化学降糖药实现了同时分
离与专属性鉴别；利用本法从 28 种 39 批样品中检出 7 种 12 批非法添加化学药品。结论 本法可用于降糖类保健食品及
中成药中非法添加 12 种化学降糖药的快速筛查。
关键词：化学降糖药；保健食品；中成药；高效液相色谱法；快速筛查
中图分类号：R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2013)08-0882-05

Rapid Screening of 12 Anti-diabetic Agents in Traditional Chinese Medicines and Health Care Products
by HPLC

YU Xiaoping, ZHENG Ming, CHEN Lei(Quzhou Institute for Food and Drug Control, Quzhou 324002, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To develop an HPLC method for the identification of 12 anti-diabetic drugs added illegally into
traditional Chinese medicines and health care products. METHODS The liquid chromatography method was used. HPLC
separations were performed on the Agilent Extend C18 column with the mobile phase of 0.014% trifluactic acid, 0.01 mol·L1
sodium heptanesulfonate solution and acetonitrile by gradient elution at the flow rate of 1.0 mL·min1, the detection wavelength
was 220 nm. RESULTS Twelve kinds of anti-diabetic agents were well separated and clearly identified by HPLC. Seven kinds
of 12 batches of illegally added chemicals had been successfully detected among 28 kinds of 39 batches of samples on the market.

基金项目：衢州市科技计划项目(2011064)
作者简介：余小平，男，主任药师 Tel: (0570)8587279 E-mail: Mr.yuxp@tom.com