全 文 ：收稿日期:2007-11-02;　修订日期:2008-01-22
基金项目:广西区自然科学基金(No.桂科基 0575023)
作者简介:周吴萍(1979-),女(仫佬族), 广西宜州人, 现任广西工学院讲
师 ,硕士学位 ,主要从事中草药药效成分分析与检测工作.
＊通讯作者简介:李军生(1963-), 男(汉族),广西临桂人 , 现任广西工学
院教授 ,博士学位 ,主要从事生物分子的结构与功能研究工作.
广西传统中药一点红总黄酮含量分析
周吴萍 ,韦媛媛 ,李军生＊ ,陈晓伟 ,阎柳娟
(广西工学院 ,广西 柳州　545006)
摘要:目的 建立一点红总黄酮的含量测定方法 , 考察一点红原药材质量的优劣。 方法 利用正交设计法考察最佳提取
条件 , 采用紫外 -可见分光光度法 ,以芦丁为对照品 ,于 510nm波长处测定总黄酮含量。结果 芦丁在 0.031 2 ～ 0.083 2
mg/ml范围内呈良好线性关系(R2 =0.998 4),平均加样回收率为 96.8%, RSD=1.21%(n=6)。 3批样品总黄酮平均含
量为 9.918mg/g。结论 该法重复性较好 ,对仪器要求不高 ,准确可靠 , 可用于一点红质量控制。
关键词:一点红;　总黄酮;　芦丁;　含量测定
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1593-01
ContentAnalysisofTotalFlavonesinEmiliasonchifoliainGuangxi
ZHOUWu-ping,WEIYuan-yuan, LIJun-sheng＊ ,CHENXiao-wei,YANLiu-juan(GuangxiUniversityofTechnology, Liuzhou, Guangxi, 545006, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodfordeterminationofflavonecontentinEmiliasonchifolia.MethodsThebestexperi-
mentalconditionswereoptimizedthroughorthogonaldesigntest, andtheconteatofflavoneswasdeterminedatthewavelengthof
510nmbyUV-visiblespectrophotometrywithrutinasastandard.ResultsThecalibrationcurveshowedgoodlinearityinthe
rangeof0.0312 ～ 0.0832mg/ml(R2 =0.9984), theaveragerecoverywas96.8%, RSD=1.21%(n=6).Theaveragecontent
offlavonesinthesampleswas9.918mg/g.ConclusionThemethodissimple, accurate, reproducibleandcanbeusedforquali-
tycontrolofEmiliasonchifolia.
Keywords:Emiliasonchifolia;　Totalflavones;　Rutin;　Contentdetermination
　　一点红是广西传统中草药 ,为菊科植物一点红Emiliasonchifo-
lia(Linn.)DC.的干燥全草, 具有清热解毒 、消炎 、利尿的功效 [ 1] 。
一点红主要含有黄酮类 [ 2] , 生物碱类 [ 1] , 植物甾醇 、脂肪酸 [ 3]等化
学成分 ,是妇科临床常用药广西特产中成药花红片的主要原料
药 [ 4] 。国内外文献仅在其临床应用和药理作用 [ 5 , 6]方面有少部分
报道 ,在原料药的质量控制方面未见有相关报道。由于其具体化
学活性成分尚未明确 ,对于原料药材的鉴定和质量检测也只能通
过经验和外观品质进行简单的验证。据报道 [ 5] , 黄酮类物质是一
点红中抗氧化和消炎的活性成分 , 故通过测定一点红总黄酮含量
来控制原料药质量 ,对确保成药疗效有重要的意义。
1 　仪器与试药
1.1　仪器 UV2100型紫外可见分光光度计(尤尼柯仪器有限公
司);AL104型电子天平 (梅特勒 -托利多仪器有限公司);
B2200S型超声波发声仪(必能信上海有限公司)。
1.2　试剂 芦丁对照品(中国药品生物制品检定所);石油醚 、甲醇、
无水乙醇 、丙酮 、氯仿 、乙醚(市售分析纯);10%Al(NO3)3;5%NaNO2;4%NaOH;广西一点红干燥品(广西花红药业提供)。
2 　方法与结果
2.1　 对照品溶液制备 精密称取芦丁对照品 5.2mg置 25ml容
量瓶中 , 加 60%乙醇溶解至刻度 ,摇匀 ,即得浓度为 0.208 mg/ml
芦丁对照品贮备液。
2.2　检测波长的选择 分别取芦丁对照品液 、一点红总黄酮样品液
适量,显色剂显色后 ,以未加样液的显色层作为参比在 200 ～ 800nm
范围内进行光谱扫描,结果显示,在可见光区芦丁对照品液和一点红
样品液在 510nm处较大吸收 ,故选择 510nm为测定波长。
2.3 　标准曲线制备 精密量取芦丁对照品溶液 0.0, 1.5, 2.0,
2.5, 3.0, 3.5, 4.0 ml, 分别置 10 ml容量瓶中 , 分别加入 5%
NaNO2 0.75ml, 摇匀静置 5min, 加入 10%Al(NO3)3 0.75 ml,摇
匀静置 5 min, 加入 4% NaOH溶液 4 ml, 60%乙醇稀释至刻度 ,
摇匀 , 放置 5 min后 , 以第 1管作空白对照 ,在 510 nm处测吸光
度。以芦丁对照品浓度为横坐标 , 吸光度为纵坐标 ,绘制标准曲
线 , 结果表明芦丁在 0.031 2 ～ 0.083 2 mg/ml范围内浓度与吸光
度呈良好的线性关系。得回归方程为 Y=12.305 0X-0.000 3,
R2 =0.998 4(n=6)。
2.4　一点红提取条件的优化 经过单因素预实验确定考察因素
的大概范围 , 选择溶媒用量 、药材粒度 、提取时间 、溶媒浓度为考
察因素 ,按照正交实验表安排实验(见表 1), 正交实验数据及其
直观分析结果见表 2。
表 1　因素水平
水平 A药材粒度
B
溶媒用量V/ml
C
提取时间 t/min
D
溶媒浓度(%)
1 粗 15 15 30
2 中 30 30 70
3 细 45 60 95
表 2　正交实验结果
实验号 A B C D 总黄酮含量m/mg· g-1
1 1 1 1 1 2.910 2
2 1 2 2 2 3.478 3
3 1 3 3 3 4.874 1
4 2 1 2 3 7.114 0
5 2 2 3 1 7.633 4
6 2 3 1 2 6.026 5
7 3 1 3 2 9.061 7
8 3 2 1 3 6.529 7
9 3 3 2 1 9.078 0
K1 11.262 6 19.085 9 15.466 4 19.621 6K2 20.773 9 17.641 4 19.670 3 18.566 5K3 24.669 4 19.978 6 21.569 2 18.517 8R 13.406 8 2.337 2 6.102 8 1.103 8
从实验的极差结果可知 ,各个因素对总黄酮提取量的影响程
度大小依次为:A>C>B>D, 直观分析 , 较优水平组合为
A
3
B
3
C
3
D
1
。因此 , 本实验选 A
3
B
3
C
3
D
1
为最佳提取方法 , 即提取
方案为选用细粉 ,超声提取时间 60min, 提取溶媒为 30%乙醇 , 提
取溶媒量为 45ml。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期
2.5　精密度实验 吸取芦丁对照品溶液 , 按显色条件显色后 ,于
510nm处测其吸光度 ,连续测定 5次 , RSD= 0.16%(n=5),结
果显示仪器精密度良好。
2.6　重复性实验 取同一批一点红全草粗粉约 0.5g, 共 6份 ,精
密称定 , 按照样品测定项下操作 , 测定一点红中总黄酮含量 , 其
RSD=0.56%(n=6), 结果说明方法重复性较好。
2.7　 稳定性实验 取对照品溶液和样品溶液显色后于 0, 1, 2, 3,
4, 5 h进行吸光度测定 , 对照品溶液吸光度的 RSD=1.41%(n=
6),样品溶液吸光度的 RSD=1.29%(n=6)。结果显示对照品
和样品溶液显色后在 5 h内测定稳定。
2.8　加样回收率实验 取已知含量的同一批一点红全草粗粉约
0.25 g,共 6份 , 分别精密加入芦丁对照品液(0.85 mg/ml)适量 ,
混匀蒸干 , 按照样品测定项下操作测定 , 结果平均加样回收率为
96.8%, RSD=1.21%(n=6)。
2.9　 样品测定 取 3批一点红全草粗粉各 0.5 g,分别置 100ml
具塞锥形瓶中 , 加入石油醚 30 ml超声提取 15 min, 弃去石油醚 ,
加入 30%乙醇 45ml超声提取 60min,滤过 , 按上述条件显色 ,用
30%乙醇定容到 100 ml, 摇匀静置 5min,以未加样液的显色层作
为参比 , 于 510 nm处测吸光度。结果见表 3。
表 3　样品测定结果 mg· g-1
样品批号 总黄酮含量
1 9.9917
2 9.8570
3 9.9057
3　讨论
实验中曾对不同提取方法进行提取效果对比 , 结果冷浸提
取 、索氏提取和回流提取效果不如超声提取 , 且超声提取操作简
单。经过几种提取溶剂对比考察 ,选用总黄酮常用提取溶剂乙醇
进行提取 ,效果较好。实验过程中 , 叶绿素溶出对测定影响较大 ,
故用石油醚提取去除叶绿素。选择几个影响因素进行正交实验
设计 , 最佳提取方案经过 3批样品的测定结果进行验证 , 数据表
明比其他组合提取率高。
广西花红药业独家生产的中草药制剂花红片是临床治疗妇
女盆腔炎 、附件炎等妇科炎症的常用药 , 一点红作为主要的原料
药 , 其具体化学成分并未明确 , 《中国药典》 2005版尚未收录该品
种。本实验采用正交设计法对一点红总黄酮提取条件进行了筛
选优化 , 确定最佳提取方法 , 寻找最适测定波长 ,建立一套适合的
含量测定方法 ,同时分析了广西 3批一点红中总黄酮的含量 , 为
一点红原药材质量检测提供方法参考。
参考文献:
[ 1 ] 　广西壮族自治区革命委员会卫生局.广西本草选编(下册)[M].南
宁:广西人民出版社 , 1974:940.
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西北植物学报 , 2003, 23(4):671.
[ 3 ] 　高建军 ,程东亮.一点红化学成分的研究 [ J] .中国中药杂志 , 1993,
18(2):102.
[ 4 ] 　韦飞燕.花红片薄层色谱鉴别研究 [ J] .广西中医学院学报 , 2000,
17(1):65.
[ 5 ] 　B.SShylesh, J.Padikkala.Antioxidantandanti-inflammatoryactivity
ofEmiliasonchifolia[ J] .Fitoterapia, 1999, 70:275.
[ 6 ] 　K.N, Muko, F.C.Ohiri.Apreliminarystudyontheanti-inflamimatory
propertiesofEmiliasonchifolialeafextracts[J] .Fitoterapia, 2000, 71:65.
收稿日期:2007-11-20;　修订日期:2008-01-25
基金项目:广西科学基金项目(No.0728023);　广西大学科学基金项目(No.X061037)
作者简介:聂奇森(1982-),女(汉族),内蒙古呼和浩特人 ,现为广西大学轻工与食品工程学院在读硕士研究生 , 学士学位 ,主要从事天然产物活性成
分研究提取工作.
＊通讯作者简介:韦保耀 (1963-),男(汉族),广西桂港人 ,现任广西大学轻工与食品工程学院教授 ,博士学位 ,主要从事天然高分子多糖类 、多酚类及
植物香气成分的分离 、提纯 、化学结果及生理活性研究工作.
桂枝中抗过敏活性成分的研究
聂奇森 ,滕建文 ,黄　丽 , 韦保耀＊ , 郭金龙
(广西大学轻工与食品工程学院 ,广西 南宁 530004)
摘要:目的 跟踪确定中药桂枝中的抗过敏活性成分。方法 桂枝通过 70%乙醇溶液提取 , 不同有机溶剂萃取及大孔树
脂 HP-20、聚酰胺和 SephadexLH-20对样品进行纯化 , 以透明质酸酶抑制率为指标对各组分抗过敏活性进行跟踪 , 确
定抗过敏活性最强的组分 , 通过薄层层析 、显色反应和光谱鉴定对抗过敏活性最强的组分定性。 结果 桂枝大孔树脂
40%乙醇洗脱部分的酶抑制率为 62.3%, 过聚酰胺 40%丙酮洗脱部分酶抑制率达到 73%, 过凝胶甲醇洗脱后 , 活性成分
酶抑制率最高达 93%。结论 桂枝中强过敏组分为缩合类单宁。
关键词:桂枝;　透明质酸酶;　缩合类单宁
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1594-03
StudyontheAntiallergicComponentsofRamulusCinnamomi
NIEQi-sen, TENGJian-wen, HUANGLi, WEIBao-yao＊ , GUOJin-long
(TheInstituteofLightIndustryandFoodEngineering, GuangxiUniversity, Nanning530004, China)
Abstract:ObjectiveTotrackandascertaintheantialergiccomponentsofRamulusCinnamomi.MethodsItwasextractedby
70% ethanolandorganicsolventsbyturns, thenpurifiedbyDiaionHP-20, polyamideandSephadexLH-20.Atthesametime,
theantialergicactivitywascarriedoutbymeasuringtheinhibitionrateonhyaluronidase.Thenthebestantiallergiccomponents
wereascertainedbyTLC, colorreactionandspectrumcertification.ResultsTherateofRamulusCinnamomiextractpurifiedby
DiaionHP-20andelutedby40% ethanolwas62.28%, purifiedbypolyamideandelutedby40% acetonewas73%, purified
bySephadexLH-20 andelutedbymethanolwas93%.ConclusionThebestantialergiccomponentsofRamulusCinnamomiare
condensedtannins.
Keywords:RamulusCinnamomi;　Hyaluronidase;　Condensedtannins
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7