全 文 ：收稿日期: 2007 - 08 - 22
作者简介:周桂芬 ( 1976 - ) ,女, 黑龙江鸡西人, 2005级博士研究
生,研究方向:中药活性成分研究。
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第 26卷 第 1期
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中 华 中 医 药 学 刊
CH INESE ARCH IVES OF TRAD IT IONAL CH INESE MED IC INE
Vo.l 26 No. 1
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中华中医药
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学刊
苦苣菜中黄酮类化合物的含量测定
周桂芬1,张 涵 2,吕圭源1
( 1. 浙江中医药大学,浙江 杭州 310053 ; 2.上海中医药大学, 上海 201203)
摘 要:目的:建立苦苣菜总黄酮的含量测定方法, 为考察其内在质量提供依据。方法:通过不同提取方法,
采用紫外 -可见分光光度法测定苦苣菜总黄酮的含量,检测波长为 510nm。结果:采用 70%乙醇超声提取苦苣菜
总黄酮, N aNO2 -A l( NO3 ) 3 -NaOH为显色系统的含量测定方法, 线性范围 13. 2~ 79. 2Lg /mL, r = 0. 9998, 平均
加样回收率为 98. 27% , RSD= 1. 67% ( n = 6) ,测得样品中总黄酮的含量为 2. 12%。结论:含量测定方法操作简
便,快捷, 重现性好,与传统提取法相比,超声提取法具有快速、高效等显著优点。
关键词:苦苣菜;总黄酮; 分光光度法
中图分类号: R284. 2 文献标识码: A 文章编号: 1673 - 7717( 2008) 01 -0218 - 03
Determ inat ion of Tota l F lavono ids inSonchusO leraceu s by Spectroscopy
ZHOU Gu i-fen1, ZHANG H an2, LU Gui-yuan1
( 1. Zhejiang Ch ineseM ed icalUn iversity, H angzhou 310053, Zhejiang, Ch ina;
2. ShanghaiUn iversity of Ch inese M ed icin e, Shanghai 201203, C hina)
Abstrac:t Ob jective: To e stablish a m ethod of dete rm ina tion o f tota l flavonoids in Sonchus o lera ceus and to prov ide
basis fo r the study o f its in te rnal quality. M ethods: The con tent of to tal flavonoids inSonchus o lera ceusw as de term ined by
UV -V is spec troscopy w ith a de tec tion w aveleng th a t 510nm by diffe rent ex trac tion m ethods. Results: The to ta l fla-
vono ids, which w as ex trac ted from Sonchus o leraceus by 70% a lcoho ,l wa s determ ined by ultravio le t spec tro scopy w ith
NaNO 2 -A l( NO3 ) 3 -NaOH system, the line r range varied from 13. 2~ 79. 2Lg /mL ( r = 0. 9998 ), average recove ry
wa s 98. 27% , RSD = 1. 67% ( n = 6 ). The average con tent of to tal flavono ids in Sonchus o leraceus w as 2. 12% .
C onclusion: The m ethod w as easily operated and reproducible. Compared w ith traditiona l extrac tion, the u ltrason ic ex-
trac tion had highe r ex trac tion e fficiency.
218
DOI：10.13193/j.archtcm.2008.01.220.zhougf.083
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Keywords: Sonchus o leraceus; to tal flavonoids; spec tro scopy
苦苣菜 ( S onchus o leraceus L. )系菊科 ( Com positae )苦
苣菜属 ( Sonchus) 1~ 2年生的草本植物。味苦, 性寒, 具有
清热解毒、凉血止血等作用。主治肠炎、痢疾、黄疸、咽喉肿
痛、吐血、尿血等症 [1 ]。苦苣菜既是良好的的中药材又是
营养丰富的优良野菜, 而且资源丰富,主要含有木犀草素、
芹菜素及其苷类等黄酮类化合物 [2]。已有报道苦苣菜总
黄酮对实验性肝损伤具有明显的保护作用 [3], 民间常将其
用于治疗黄疸性肝炎, 但对苦苣菜总黄酮的含量测定未见
报道,为进一步开发利用该植物资源,本文利用紫外 -可见
分光光度法对苦苣菜全草总黄酮进行了含量测定研究,为
苦苣菜的合理利用和质量控制提供一定的科学依据。
1 仪器与试剂
1. 1 材料
本实验所用苦苣菜于 2006年 9月采于黑龙江省鸡西
市城子河区,经浙江中医药大学资源鉴定教研室陈锡林教
授鉴定为菊科 ( Com positae)苦苣菜属 ( Sonchus)苦苣菜。
1. 2 仪器
Lam bda 12紫外 -可见分光光度仪 ( P erk in E lm e r);
LP123电子天平 (常熟市恒器厂 ); KQ - 500DE型数控超声
波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司 ) ;电子恒温不锈钢水
浴锅 (上海东里建材试验设备有限公司 )。
1. 3 试剂
95%乙醇,石油醚, 硝酸铝, 亚硝酸钠, 氢氧化钠, 三氯
化铝等,均为国产分析纯;芦丁对照品 (中国药品生物制品
检定所提供,批号: 10080 -200306)。
2 方法与结果
2. 1 苦苣菜总黄酮的含量测定 [ 4]
2. 1. 1 芦丁对照品溶液的制备 精密称取 120e 干燥至
恒重的芦丁对照品 66mg, 置 50mL容量瓶中, 加 70% 乙醇
70m L,超声使溶解,加 70%乙醇至刻度 ,摇匀, 即得。芦丁
对照品的浓度为 1. 32m g /m L。
2. 1. 2 供试品溶液制备 ( 1)不同提取方法考察。索氏
提取法: 精密称取苦苣菜粉末 1. 0g,加 100mL石油醚于索
氏提取器中提取至石油醚无色,放冷,弃去石油醚液, 将药
渣中石油醚挥干,后加入 70% 乙醇 80mL提取至提取液无
色,滤过, 定容于 100mL容量瓶中。
回流提取法: 精密称取苦苣菜粉末 1. 0g, 加石油醚
100mL回流 1h, 放冷, 弃去石油醚液, 将药渣中石油醚挥
干,后加入 70%乙醇 40mL提取 1h, 滤过,残渣再加入 70%
乙醇 40mL提取 1h,滤过, 合并滤液,定容于 100mL的容量
瓶中。
超声提取法: 精密称取苦苣菜粉末 1. 0g, 加石油醚
100mL回流 1h, 放冷, 弃去石油醚液, 将药渣中石油醚挥
干, 后加入 70%乙醇 40mL超声提取 30m in, 滤过,残渣再加
入 70%乙醇 40mL超声提取 30m in,滤过, 合并滤液,定容于
100mL的容量瓶中。
各取上述提取液 2m L,经显色后测得的结果见表 1 [参
照 2. 1. 3 - ( 4)项下方法 ]。 3种提取方法中, 超声方法总
黄酮含量明显高于索氏和回流, 并且超声法的提取速度快,
效率高,而且不用加热,避免高温对黄酮结构的影响, 故采
用超声提取法。
表 1 不同提取条件下总黄酮的含量
项目 超声 回流 索氏
吸光度 ( A) 0. 4645 0. 3403 0. 2966
总黄酮含量 (% ) 2. 10 1. 56 1. 37
( 2)筛选后样品溶液的制备。精密称取苦苣菜粉末
1. 0g,加石油醚 100mL回流提取 1h, 放冷, 弃去石油醚液,
将药渣中石油醚挥干, 药渣加 70%乙醇 40mL超声提取两
次,每次 30m in, 合并滤液, 定容于 100mL的容量瓶中, 备
用。
2. 1. 3 显色条件的考察 ( 1)显色系统的筛选。方法 1:
分别精密吸取 0. 5mL的芦丁标准品溶液和 2mL的样品溶
液于 10m L的容量瓶中,加 0. 1m o l /L的 A lC l3溶液 2mL, 摇
匀,放置 6m in,再加入 1mo l /LNa( A c) 2溶液 3m L, 用 70%乙
醇定容。
方法 2: 分别精密吸取 0. 5mL的芦丁标准品溶液和
2mL的样品溶液于 10m L的容量瓶中, 加 5%的 N aNO2溶液
0. 4m L, 摇匀,放置 6m in, 加 10% A l( NO3 ) 3 0. 4m L, 摇匀, 放
置 6m in, 再加 4% NaOH 4mL, 70% 乙醇定容, 摇匀, 放置
10m in。
方法 3: 分别精密吸取 0. 5mL的芦丁标准品溶液和
2mL的样品溶液于 10m L的容量瓶中, 加 5%的 N aNO2溶液
0. 4mL, 摇匀,放置 6m in,加 10% A lC l3溶液 0. 4m L, 摇匀,放
置 6m in, 再加 4% NaOH 4mL, 70% 乙醇定容, 摇匀, 放置
10m in。
通过比较各显色系统的测定结果,表明方法 2显色灵
敏、稳定, 故采用 NaNO 2 -A l( NO 3 ) 3 -NaOH为显色系统。
( 2) N aNO2 -A l( NO 3 ) 3 -NaOH 显色系统各试剂浓度
的选择。根据正交表 L9 ( 34 )进行三因素三水平的正交实
验,对显色剂 NaNO2 -A l( NO3 ) 3 - NaOH 体系中的各物质
的浓度进行最优化选择。试验结果表明: N aNO
2
质量分数
为 5% , A l( NO3 ) 3质量分数为 10% 和 NaOH 质量分数为
4% ,显色溶液的吸光度值最大,而且测定溶液澄清。
( 3)样品吸光度值的确定。在采用 NaNO 2 -A l( NO 3 ) 3
-N aOH为显色系统,测定苦苣菜总黄酮含量时发现, 在不
加 A l( NO
3
)
3
和 NaNO
2
的情况下, 单独加入 NaOH溶液在测
定波长下也有较大的吸收。为了抵消样品供试液中某些化
学成分可能与碱作用生成有色物质而引起的误差 [5 ], 故本
法在用 NaNO2 -A l( NO 3 ) 3 -NaOH系统测定样品吸光度时
都随行做一个样品和 N aOH显色的溶液系统,两者吸光度
差就是样品溶液中黄酮类物质的吸光度, 该法与一般简单
地测定溶液的吸光度相比,所得结果更为准确。
( 4)吸收波长的确定。取/ 2. 1. 10项下芦丁对照品溶液
0. 5mL和 / 2. 1. 2 - ( 2) 0项下样品溶液 2mL, 分别置于 10mL
容量瓶中,加 70%乙醇至 2mL, 加 5%的 NaNO2 0. 4mL,摇匀,
放置 6m in, 加 10% A l( NO
3
)
3
0. 4mL, 摇匀, 放置 6m in, 再加
4% NaOH 4mL, 70%乙醇定容, 摇匀放置 10m in。以 70%乙
醇平行实验为空白参比, 在分光光度仪上 200~ 700nm波长
范围内扫描,结果对照品和样品溶液均在 510nm波长处有最
大吸收峰,故以 510nm为测定波长。如图 1。
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图 1 芦丁和样品在 400~ 700nm的扫描图谱
2. 1. 4 标准曲线的绘制 精密吸取 / 2. 1. 10项下芦丁对照
品溶液 0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6m L,分别置于 10mL容量
瓶中,按 / 2. 1. 3 - ( 4) 0项下操作, 以第 1份溶液为空白, 在
510nm波长处测定吸光度。以吸光度 ( A )为纵坐标, 浓度
( C )为横坐标,绘制标准曲线。得标准曲线 (图 2)和回归方
程 A= 0. 0115C - 0. 0185, r = 0. 9998, 表明样品检测浓度在
13. 2~ 79. 2Lg /mL的范围内与吸光度线性关系良好。
图 2 标准曲线
2. 1. 5 精密度试验 精密吸取 / 2. 1. 10项下芦丁对照品
溶液 0. 5mL, 置于 10m L容量瓶中, 共 6份, 按 / 2. 1. 3 -
( 4) 0项下操作, 分别测定吸光度。结果, RSD= 0. 82% ,表
明本法精密度良好。
2. 1. 6 稳定性试验 精密吸取 / 2. 1. 2 - ( 2) 0项下样品溶
液 2m L,按 / 2. 1. 3 - ( 4) 0项下操作, 每隔 10m in测定 1次。
结果, 40m in内测得吸光度的 RSD = 1. 72% ,表明在 40m in
内完成测定结果准确。
2. 1. 7 重现性试验 取样品粉末 ,按 / 2. 1. 2 - ( 2) 0项下
方法制备成供试品溶液 6份, 分别从中精密吸取 2mL, 按
/ 2. 1. 3 - ( 4 ) 0项下操作, 测定吸光度。结果, RSD = 1.
56% ,表明重现性良好。
2. 1. 8 回收率试验 取已知含量的样品约 0. 1g, 精确称
定,平行 6份, 再分别精确加入芦丁对照品溶液 1. 6mL,按
/ 2. 1. 2 - ( 2) 0项下方法制备成供试品溶液,分别从中精密
吸取 2m L,按 / 2. 1. 3 - ( 4) 0项下操作,测定吸光度, 计算回
收率。试验结果表明:回收率在 95% ~ 105% 之间, 加样回
收率良好,结果详见表 2。
表 2 回收率试验结果
药材重量
( g)
药材中总黄酮量
( mg)
加入芦丁量
( mg)
测得量
( mg)
回收率
(% )
平均回收率
(% )
RSD
(% )
0. 1002 2. 12424 2. 112 4. 178 97. 27
0. 1001 2. 12212 2. 112 4. 239 100. 25
0. 1002 2. 12424 2. 112 4. 178 97. 23 98. 27 1. 67
0. 1004 2. 212848 2. 112 4. 314 99. 47
0. 1001 2. 12212 2. 112 4. 185 97. 66
0. 1003 2. 122636 2. 112 4. 187 97. 75
2. 1. 9 样品含量测定 精确吸取 / 2. 1. 2 - ( 2) 0项下样品
溶液 2. 0mL,共 3份, 分别置于 10mL容量瓶中, 按 / 2. 1. 3
- ( 4) 0项下操作, 测定吸光度。根据回归方程计算样品中
总黄酮含量,总黄酮含量平均值为 2. 12%。结果详见表 3。
表 3 样品含量测定结果
样品编号 吸光度 含量
(% )
平均含量
(% )
RSD(% )
1 0. 4852 2. 19
2 0. 4461 2. 02 2. 12 1. 87
3 0. 499 2. 25
2. 2 定性实验 ) 总黄酮的鉴别 [6 ]
2. 2. 1 颜色反应 ¹ 紫外灯下荧光:取样品溶液点在滤纸
上,在可见光下呈灰黄色,在紫外灯下有亮兰色荧光; º浓
氨水反应:取样品液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏, 立
即在紫外灯下观察, 有明显的黄褐色荧光斑点; » A lC l3反
应:取样品液点在滤纸上, 喷 2% A lC l3乙醇溶液, 吹干在紫
外灯下呈黄色荧光斑点; ¼ HC l -Mg反应:取样品溶液 1mL
于试管中加入镁粉, 再加入几滴浓 HC ,l水浴加热 ,升起的
泡沫呈紫红色。
2. 2. 2 纸层析 取样品溶液 20LL点在滤纸上, 用正丁醇
-冰醋酸 -水 = 4B1B5上层为展开剂, 上行展开 8cm, 取出
凉干,喷 2% A lC l3乙醇溶液, 吹干后于紫外灯下有黄色荧
光斑点。
以上表明:制备的样品溶液中含黄酮类化合物。
3 讨 论
黄酮类化合物易溶于甲醇、乙醇等溶剂 , 甲醇毒性很
大,而且浸透能力强, 提取范围广,杂质较多, 故采用乙醇做
溶剂提取苦苣菜总黄酮,用 70%乙醇做溶剂可以除去大部
分蛋白质、多糖类等水溶性杂质, 但苦苣菜中叶绿素等脂溶
性成分不易除掉,对测定干扰较大, 故先用石油醚脱脂后提
取。通过比较超声提取、回流提取、索氏提取,结果表明超
声提取效率明显高于回流和索氏提取, 并且超声提取时间
短,操作方便, 而且不用加热,避免高温对黄酮结构的影响,
故采用超声提取法。
本法在用 NaNO2 -A l( NO 3 ) 3 -NaOH系统测定样品吸
光度时都随行做一个样品和 NaOH显色的溶液系统, 两者
吸光度差作为样品溶液中黄酮类物质的吸光度, 该法与一
般简单地测定溶液的吸光度相比,所得结果更为准确。
黄酮类化合物母核上多带有酚羟基, 对光和空气中的
氧很敏感,其溶液长时间久置后吸光度会下降,因此, 待测
液不宜久放,并避光低温保存。
近年来,苦苣菜这一资源已受到广泛的重视, 被制成消
暑保健食品、罐头等, 畅销国内外 [7 ], 并跻身于美国市场上
最畅销的 /十大天然药用植物0之林, 具有广泛的发展前
景。本文对苦苣菜总黄酮进行了含量测定, 对苦苣菜的栽
培、采集与深加工综合利用及开发, 提供参考。
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