全 文 ：2．11 样品测定 精密称取 3 批阴地蕨样品各 3 份，
每份 0．250 g，按“2．3”项下方法制备溶液，按“2．1．2”项
色谱条件分别进行分析，测定峰面积，计算各成分的
量，结果见表 2。
表 2 阴地蕨中山奈酚、槲皮素的测定结果
Tab． 2 Ｒesults of content determination on kaempferol
and quercetin in Botrychium ternatum n= 3
样品
山奈酚
平均质量分数 /
(mg·g－1)
ＲSD /
%
槲皮素
平均质量分数 /
(mg·g－1)
ＲSD /
%
20130217 1．33 1．47 3．02 1．28
20140116 1．26 1．75 3．84 1．37
20140213 1．12 1．38 3．16 1．56
3 讨论
研究证实，阴地蕨有显著的抑制癌细胞增殖及转移
的作用［12］，但迄今为止，其资源还未得到有效的开发利
用，对其化学成分的研究报道也很稀少。笔者在本实验
中用 HPLC-MS /MS法对阴地蕨中山奈酚及槲皮素进行
鉴定并测定二者的含量，首次报道阴地蕨中的山奈酚成
分，实验结果进一步证实阴地蕨抗菌、抗炎、止咳等功效
的物质基础，可以为该民族药的药用价值开发及扩大资
源利用提供一定的科学依据。
参考文献
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DOI:10．3870 / j．issn．1004-0781．2015．10．026
不同产地及不同药用部位
马蓝中靛蓝和靛玉红的含量测定
程佩佩，夏叶，方玉，答国政，黄静，张秀桥
(湖北中医药大学药学院，武汉 430065)
摘 要 目的 建立反相高效液相色谱( ＲP-HPLC) 法同时测定不同产地、不同药用部位马蓝中靛蓝、靛玉红的含
量。方法 选用 Agilent TC-C18色谱柱 ( 4． 6 mm × 250 mm，5 μm ) ，流动相为甲醇-水 ( 75 ∶ 25 ) ，柱温 25 ℃，流速
1．0 mL·min－1，检测波长 290 nm。结果 靛蓝在 0．051 3～0．820 8 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系( r = 0．999 3) ，
平均回收率为 99．00%，ＲSD为 1．30%( n = 6) 。靛玉红在 0．049 5 ～ 0．792 0 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系( r =
0．999 9) ，平均回收率为 98．88%，ＲSD为 1．51%( n = 6) 。结论 马蓝中靛蓝、靛玉红因产地和药用部位的不同，含量差
异较大。该方法操作简便、快速、可靠，可为马蓝药材的质量控制提供实验依据。
关键词 马蓝;靛蓝;靛玉红;含量测定;色谱法，高效液相
中图分类号 Ｒ281．1; Ｒ927．2 文献标识码 B 文章编号 1004－0781( 2015) 10－1363－04
·3631·医药导报 2015年 10月第 34卷第 10期
Determination of Indigo and Indirubin in Baphicacanthus cusia from Different Producing
Areas and Medicinal Parts by ＲP-HPLC
CHENG Peipei，XIA Ye，FANG Yu，DA Guozheng，HUANG Jing，ZHANG Xiuqiao( School of Pharmacy，
Hubei University of Chinese Medicine，Wuhan 430065，China)
ABSTＲACT Objective To establish a ＲP-HPLC method for determining indigo and indirubin in Baphicacanthus cusia
from different producing areas and medicinal parts． Methods The separation was achieved by an Agilent TC-C18 Column
( 4．6 mm×250 mm，5 μm) at 25 ℃ using methanol-water ( 75 ∶ 25) as mobile phase at a flow rate of 1 mL·min－1 ． The
detection wavelength was 290 nm． Ｒesults Indigo had a good linear relationship with peak area at range of 0． 051 3 －
0．820 8 μg ( r= 0．999 3) ．The recovery rate was 99．00% and ＲSD was 1．30% ( n = 6) ． Indirubin had a good linear relationship
with peak area at range of 0．049 5－0．792 0 μg ( r= 0．999 9) ．The recovery rate was 98．88% and ＲSD was 1．51% ( n = 6) ．
Conclusion The contents of the two components are obviously different in Baphicacanthus cusia because of different places or
medicinal parts．The proposed method is simple，rapid and reliable． This method for determination of indigo and indirubin in
Baphicacanthus cusia by ＲP-HPLC provides a basis for quality control of Baphicacanthus cusia．
KEY WOＲDS Baphicacanthus cusia; Indigo; Indirubin; Content determination; Chromatography，high performance liquid
马蓝［Baphicacanthus cusia (Nees)Bremek］为爵
床科植物，广泛分布于我国西南、华南及华东地区，是
我国常用药用植物，其叶经加工成干叶后在我国华南
地区常作大青叶使用［1］;茎、叶加工成一种深蓝色的
粉末入药称为青黛［2］，青黛性寒味咸，具有清热解毒、
凉血止血、清肝泻火的功效;根及根茎入药称为南板蓝
根［3］，南板蓝根性寒、味苦，归心、胃经，具有清热解
毒、凉血、消斑的功效，主治温病发热，发斑，发疹，风热
感冒、咽喉肿痛、流行性感冒、脑脊髓膜炎、乙型脑炎、
肝炎、肺炎、腮腺炎、丹毒、痈肿、火眼、神昏吐等症［4］。
马蓝叶的主要活性成分为靛蓝、靛玉红等吲哚类化合
物［5］。靛玉红具有抗肿瘤作用，是治疗慢性粒细胞白
血病的有效成分［6］，靛蓝既是一种染料又具有保肝作
用［7］。马蓝是一种应用较广泛的药用植物，由于生长
周期较长，产量低，过量采挖等因素导致其野生资源急
剧减少，市场上充斥着来源于其同科属的伪品，如球花
马蓝、广西马蓝等［8］，由于这些伪品的原植物形态与
正品马蓝较相似，易于混淆，严重影响临床用药安全。
伪品因不含有效成分靛蓝、靛玉红，故不能与正品马蓝
混用［8］。为了有效控制马蓝相关药材的质量，笔者建
立 高 效 液 相 色 谱 (high performance liquid
chromatography，HPLC)法测定不同地区马蓝根、茎、叶
中主要活性成分靛玉红、靛蓝的含量［9-10］。
1 仪器与试药
1．1 仪器 DIONEX P680 高效液相色谱仪(美国
收稿日期 2014－06－30 修回日期 2014－09－23
作者简介 程佩佩(1988－)，女，湖北仙桃人，在读硕士，主
要从事中药资源、品质及 开 发 研 究 工 作。电 话:(0)
13343581351，E-mail:1173814267@ qq．com。
通信作者 张秀桥(1965－)，女，河北新乐人，教授，博士，
主要从事中药品种、质量及资源开发研究工作。电话:(0)
13871392318，E-mail:qiaoxzh2000@ 163．com。
DIONEX公司);SHIMADZU UV-1800 分光光度计(日
本岛津公司);十万分之一分析天平(瑞士 Metiler
Toledo公司);KQ-250B超声波清洗仪(昆山超声仪器
有限公司)。
1．2 试药 靛蓝对照品(上海源叶生物科技有限公
司，批号:YM0306SA14，含量≥98%);靛玉红对照品
(上海源叶生物科技有限公司，批号:20121023，含量≥
98%);甲醇(色谱纯);N，N-二甲基甲酰胺(分析纯，天
津市天力化学试剂有限公司);水为重蒸馏水。样品
共 15 批，见表 1，经湖北中医药大学生药教研室张秀
桥教授鉴定，为爵床科植物马蓝(Baphicacanthus
cusia)的根、茎、叶。
表 1 马蓝样品来源
Tab．1 Sources of Baphicacanthus cusia
编号 药用部位 来源
S1 叶 河南南阳 1
S2 叶 河南南阳 2
S3 茎 河南南阳
S4 叶 海南兴隆
S5 茎 海南兴隆
S6 叶 广西 1
S7 叶 广西 2
S8 叶 重庆 1
S9 叶 重庆 2
S10 茎 重庆
S11 叶 广东广州
S12 根 广东广州 1
S13 根 广东广州 2
S14 叶 华南植物园
S15 茎 华南植物园
2 方法与结果
2．1 色谱条件及系统适应性 采用 Agilent TC-C18色
·4631· Herald of Medicine Vol. 34 No. 10 October 2015
谱柱(4． 6 mm×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-水 =
(75∶25);流速 1．0 mL·min－1;柱温 25 ℃;检测波长
290 nm;进样量 20 μL。靛玉红、靛蓝理论板数
均＞4 000，两组份之间及与其他峰分离度＞5。
2．2 溶液的制备
2．2．1 对照品溶液的制备 分别精密称取干燥至恒
重的靛蓝和靛玉红对照品 1．28，1．24 mg，置于 25 mL
量瓶，加 N，N-二甲基甲酰胺溶解并定容，制成每毫升
含靛蓝和靛玉红 0．051 2，0．049 6 mg的溶液，作对照品
储备溶液。分别精密吸取上述各对照品储备溶液
1 mL，置5 mL量瓶，加 N，N-二甲基甲酰胺至刻度，摇
匀，即得各对照品溶液。
2．2．2 供试品溶液的制备 马蓝样品用粉碎机粉碎，
过内径 0．425 mm(40 目)筛。取干燥至恒重样品约
75 mg，精密称定，置 10 mL 量瓶中;加 N，N-二甲基甲
酰胺适量，超声处理 30 min，冷却;加 N，N-二甲基甲酰
胺至刻度，摇匀，滤过;取续滤液，用内径 0．45 μm微孔
滤膜滤过，即得供试品溶液。
2．3 线性关系考察 分别精密量取对照品储备溶液
0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0 mL置于 10 mL量瓶中，加 N，
N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀。分别按照“2．1”项
色谱条件进行测定，以进样量(μg)为横坐标，色谱峰
面积(A)为纵坐标，绘制标准曲线，建立回归方程，靛
蓝:Y = 16． 954X + 0． 005 9，r = 0． 999 7，线性范围是
0．051 3～0．820 8 μg;靛玉红:Y = 52．978X－0．135 4，r =
0．999 9，线性范围是 0．049 5～0．792 0 μg。
2．4 精密度实验 分别精密吸取靛蓝和靛玉红对照
品溶液 20 μL，重复进样 6 次，测定峰面积。靛蓝、靛
玉红峰面积的 ＲSD 分别为 2．26%和 0．86%，表明仪器
精密度良好。
2．5 稳定性实验 取 S6 号样品 1 份，按“2．2．2”项下
方法制备供试品溶液，室温放置，分别于 0，2，4，6，8，
12，24 h进样测定。结果靛蓝和靛玉红的峰面积 ＲSD
分别为 1．78%和 1．90%，表明供试品溶液在 24 h 内稳
定性良好 。
2．6 重复性实验 取 S6 号样品 6 份，分别按“2．2．2”
项下制备供试品溶液，按“2．1”项下色谱条件测定靛
蓝、靛玉红峰面积，以外标法计算含量。靛蓝、靛玉红
峰含量的 ＲSD 分别为 1．20%和 1．57%，表明供试品溶
液制备方法重复性良好。
2．7 加样回收率实验 取已知靛蓝、靛玉红含量的 S6
号样品 6 份，每份约 75 mg，精密称定，分别准确加入
靛蓝、靛玉红对照品适量，按“2．2．2”项下制备供试品
溶液，按“2．1”项下色谱条件测定靛蓝、靛玉峰面积，计
算含量和回收率，结果见表 2。
表 2 靛蓝和靛玉红加样回收率实验结果
Tab．2 Ｒecovery results of indigo and indirubin
对照品
原有量 加入量 测得量
μg
回收率 平均回收率 ＲSD
%
靛蓝 0．778 7 0．608 5 1．377 2 98．36
0．792 0 0．608 5 1．388 5 98．03
0．805 5 0．608 5 1．400 5 97．78 99．00 1．30
0．776 4 0．608 5 1．390 7 100．98
0．788 8 0．608 5 1．389 2 98．67
0．760 7 0．608 5 1．370 5 100．21
靛玉红 0．730 1 0．925 2 1．623 3 96．54
0．712 4 0．925 2 1．639 9 100．25
0．730 1 0．925 2 1．642 1 98．57 98．88 1．51
0．732 5 0．925 2 1．642 2 98．32
0．743 2 0．925 2 1．657 8 98．85
0．717 9 0．925 2 1．649 9 100．73
2．8 样品含量测定 取不同来源、不同药用部位的样
品粉末各 75 mg，精密称定，按“2．2．2”项制备供试品溶
液，按“2．1”项色谱条件测定靛蓝、靛玉红峰面积，每份
样品重复测定 3次，计算含量。结果见表 3。
表 3 不同产地及不同药用部位马蓝中靛蓝与靛玉红含量
Tab． 3 Content of indigo and indirubin in
Baphicacanthus cusia from different place and medicinal parts
mg·g－1
编号 靛蓝 靛玉红
S1 2．599 5 1．131 2
S2 1．131 4 0．695 0
S3 0．021 6 0．017 4
S4 9．627 1 0．973 1
S5 0．154 2 0．096 0
S6 5．170 5 4．148 1
S7 4．739 5 1．810 4
S8 1．244 7 2．913 8
S9 0．986 0 0．237 8
S10 0．237 9 0．094 2
S11 2．164 4 0．738 4
S12 － －
S13 － －
S14 2．453 7 0．354 1
S15 0．195 8 0．016 9
“－”表示未检出
“－”means“have not been detected”
3 讨论
3．1 检测波长的选择 参照《中华人民共和国药典》
·5631·医药导报 2015年 10月第 34卷第 10期
2010年版青黛、大青叶中靛蓝、靛玉红的含量测定方
法［2］，靛蓝的检测波长为 606 nm，靛玉红的检测波长
292 nm，但靛蓝在 289 nm处有最大吸收［11］，为了便于
操作，在同一检测波长下同时测定两种成分，故选择检
测波长为 290 nm。
3．2 流动相的选择 笔者在本实验中考察了甲醇-水
系统和乙腈-水系统，结果两系统均能得到较好的峰
形，乙腈-水系统 10 min 内出峰完全，甲醇-水系统
15 min内出峰完全，从经济角度考虑，选择甲醇-水系
统更为合适。此外，比较两种比例甲醇-水系统(75∶
25)及(70∶30)，结果以甲醇:水为(75∶25)时，峰形
更好。
3．3 供试品溶液制备方法的选择 由于靛蓝、靛玉红
结构相似，可以采用适当方法同时提取。笔者比较 3
种提取方法即 N，N-二甲基甲酰胺超声提取、三氯甲烷
超声提取及三氯甲烷索氏提取器提取，结果三氯甲烷
超声提取法提取不够完全，提取时间较长，不适合作为
本文含量测定提取方法;三氯甲烷索氏提取器提取可
以有效提取靛蓝和靛玉红，但其耗时太久，操作繁琐，
亦不适合。经过考察溶剂量、提取时间等因素，并参考
文献［12］，确定 N，N-二甲基甲酰胺超声提取为最佳提
取方法。
3．4 不同药用部位中靛蓝与靛玉红的含量分析 马
蓝不同药用部位的靛蓝与靛玉红含量存在较大差异，
本文实验结果表明来自河南南阳、海南兴隆、华南植物
园及重庆的马蓝中靛蓝与靛玉红含量均为叶＞茎，广
州的马蓝根中的靛蓝与靛玉红含量几乎不能检出。依
据文献［11，13-15］，发现马蓝根中的靛蓝、靛玉红含量
均较低，且远远低于茎叶中含量;由于本实验中供试品
溶液制备的取样量均为 75 mg，对根而言相对偏低，故
来源于广州的 S12 和 S13 样品中靛蓝、靛玉红可能由
于含量低于检测限度而未能被检出。
3．5 不同产地样品中靛蓝与靛玉红的含量分析 由
于马蓝的分布范围较广，不同产地马蓝的靛蓝与靛玉
红含量不同。笔者考察马蓝 6 个来源地样品中，来自
海南兴隆(S4号样)马蓝叶中靛蓝含量最高，而来自广
西(S6号样)马蓝叶则靛玉红含量最高。不同产地马
蓝叶中靛玉红的含量均高于《中华人民共和国药典》
2010年版一部大青叶项下含量测定对靛玉红含量(不
少于 0．020%)的要求，说明我国南方将马蓝叶作为大
青叶使用有一定的科学性。此外，还对来自广东和广
西的多批球花马蓝叶进行含量测定，结果均未检出靛
蓝和靛玉红，进一步验证球花马蓝等伪品不可与马蓝
混用。
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