免费文献传递   相关文献

鸡树条荚蒾化学成分测定分析



全 文 :鸡 树 条 荚 蒾 化 学 成 分 测 定 分 析
李攀登 李金玲 王宏伟 郑友兰*
(吉林农业大学中药材学院·吉林 长春· 130118)
田 芯 张 倩
(山东大学威海分校海洋学院·山东 威海· 264209)
王光明
(威海市立医院肿瘤医院·山东 威海· 264200)
摘 要:目的:测定鸡树条荚蒾不同部位化学成分的含量 ,为制定鸡树条荚蒾的质量标准提供科学依据。
方法:采用分光光度法对鸡树条荚蒾枝 、叶 、果实中黄酮和多糖含量进行测定分析;同时采用原子吸收分
光光度法对鸡树条荚蒾不同部位中 Fe、Cu、Zn、Mn四种微量元素进行含量测定。结果:鸡树条荚蒾不同
部位中黄酮和多糖含量以果实中的含量为最高 , Fe、Mn、Zn、Cu四种微量元素中以 Fe、Mn、Zn含量较为
丰富。结论:鸡树条荚蒾不同部位黄酮 、多糖以及四种微量元素含量差异较大 , 说明鸡树条荚蒾中化学
成分的含量与其部位具有一定的相关性 ,临床应用时应注意其入药部位。
关键词:鸡树条荚蒾;黄酮;多糖;微量元素;含量测定
DeterminingchemicalcompositionofViburnumsargentiKoehne
LIPanDeng, LIJinLing, WANGHongWei, ZHENGYouLan
(ColegeofChineseMedicinalMaterial, JilinAgriculturalUniversity, ChangChun130118)
TIANXin, ZHANGQian
(MarineColege, ShandongUniversityatWeihaiShandongWeihai264209)
WANGGuangMing
(TumourhospitalofWeihaicityhospitalShandongWeihai264200)
Abstract:TodeterminethecontentsofdiferentkindsofthechemicalconstituentsfromdiferentpartsofViburnumsar-
gentiKoehne, AndprovidesthereferencedatafortheformulationofViburnumsargentiKoehnesquality
standard.Method:Toanalyzethecontentsofflavonoids, polysaccharideand4kindsoftraceelementsfrom
diferentpartsofViburnumsargentiKoehnebythemethodofspectrophotometric.Result:thecontentsof
flavonoidsandpolysaccharideinfruitwerehigherthantheotherpartsofViburnumsargentiKoehne.and
thecontentsofFe、 MnandZnwerehigherthanthecontentofCu.Conclusion:Thediferenceofthecon-
tentsofdiferentkindsofthechemicalconstituentsinViburnumsargentiKoehne, whichderivedindiferent
parts, isobvious.Andtherehasacertainrelationbetweenthecontentsofdiferentkindsofthechemical
constituentsandtheparts.
Keyword:ViburnumsargentiKoehne;totalflavone;polysaccharide;microelement;determination
  鸡树条荚蒾(ViburnumsargentiKoehne)系忍冬科
(Caprifoliaceae)荚蒾属(Viburnum)植物 ,又名天目琼
花 [ 1] ,为落叶灌木 ,主要分布于我国北方多个省份 ,其
天然资源极为丰富 ,且蕴含量大 [ 2-3] 。目前 ,鸡树条
荚蒾常作园林用途 ,在民间作 “鸡树条”药用 ,有普遍
的医疗价值 。鸡树条味甘 、苦 ,性平 ,入肺 、肝 、脾 、肾
四经 ,有通经活络 、活血消肿 、祛风杀虫之功效 [ 1] 。
叶 、嫩枝及果实均可入药 ,叶外用主治疮疖 、疥癣 、皮
16 人参研究 RENSHENYANJIU  2009年第 2期
肤瘙痒 [ 4] ;嫩枝主治风湿性关节炎 、腰酸腿痛 、跌打损
伤;果实有止咳的功用 ,主治急 、慢性气管炎 、咳嗽 [ 5] 。
现代药理研究表明鸡树条荚蒾果实能够治疗慢
性支气管炎 、咳嗽痰喘等症 ,且疗效较好 [ 6] ;有关资料
报道鸡树条的枝叶具有收缩子宫 ,增强子宫的紧张
度 ,有治疗子宫出血的作用 [ 7] ;果实的酊剂有利尿的
作用。目前有关鸡树条荚蒾的化学成分研究资料鲜
见报道 ,本文采用经典的比色法首次对鸡树条荚蒾的
不同部位进行了黄酮 、多糖的含量测定分析 ,并采用
原子吸收分光光度法测定了鸡树条荚蒾的不同部位
中铁 、锰 、铜 、锌四种微量元素的含量 ,为后继开发利
用鸡树条荚蒾这一潜在的民间药用植物资源提供可
参考性的科学依据。
1 材料 、仪器与试剂
药材:药材于 2008年 8月采于吉林临江 ,经吉林
农业大学园艺学院胡全德教授鉴定为鸡树条荚蒾
(ViburnumsargentiKoehne)。
仪器:LA114型电子天平(长熟市衡器厂);T6新
世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责
任公司);电子恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公
司);KQ-250DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器
有限公司);VELP凯氏定氮仪消化炉;凯式瓶;3510 /
3511型原子吸收分光光度计(上海精密科学仪器有
限公司)。
药品:芦丁对照品 ,葡萄糖 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢
氧化钠 、蒽酮 、浓硫酸 、盐酸 、乙醇 、硝酸(优级纯)、高
氯酸(优级纯)等 。
2 实验方法与结果
2.1 鸡树条荚蒾不同部位黄酮含量测定
2.1.1 芦丁标准品溶液的制备
将芦丁标准品于烘箱中 105℃恒重 6h,精密称取
10.00mg, 80%乙醇 50mL溶解后定容至 100mL容量
瓶中 ,摇匀 ,备用。
2.1.2 供试品溶液的制备
称取鸡树条荚蒾干燥嫩枝 、叶 、果的粗粉各 0.5g,
每个部位各取 3份平行样品 ,滤纸包好 ,置索式提取
器中 ,加入 100mL石油醚(60 ~ 90℃)水浴 85℃回流
提取至无色(4h),弃去石油醚 ,药渣挥干石油醚 ,再用
80%乙醇 100mL水浴 100℃回流提取 6h,冷却至室温
后转入 100mL容量瓶中 , 80%乙醇定容至刻度 , 备
用[ 8] 。
2.1.3 标准曲线的绘制
分别精密量取芦丁标准品溶液 0.0、0.5、1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0mL,分别移入 25mL容量瓶中 ,分别
加入 80%乙醇至 5mL,加入质量分数为 5%的亚硝酸
钠溶液 1.0mL, 摇匀 , 静置 6min;加入质量分数为
10%的硝酸铝溶液 1.0mL,摇匀 ,静置 6min,加入质量
分数为 4%的氢氧化钠溶液 10mL,再加体积分数为
80%的乙醇至刻度 ,摇匀 ,放置 15min。以 80%乙醇
为空白对照液 ,分别于 500nm波长处测定吸光度 。以
吸光度值(A)对质量(ρ)进行线性回归 ,得回归方程
A=0.4123ρ+0.0375(r=0.9998)。结果表明 ,芦丁
检测浓度在 0.002 ~ 0.020mg/mL(0.05 ~ 0.5mg)范
围内线形关系良好 。
2.1.4 样品测定
精密移取供试品溶液 1.0mL于 25mL容量瓶中 ,
分别加入 80%乙醇至 5mL,并按 “ 2.1.3”项下的方法
依次加入显色剂 ,以 80%乙醇为空白同法配制空白
对照液 ,于 500nm处测定吸光度值。代入回归方程 ,
计算总黄酮含量 ,结果见表 1。
表 1 鸡树条荚蒾不同部位黄酮和多糖含量测定结果
样品 黄酮含量(%) 粗多糖含量(%) 可溶性多糖含量(%) 总多糖(%)
嫩枝 3.26 1.58 1.58 3.16
叶 2.66 4.05 9.06 13.11
果实 14.35 4.10 12.06 16.16
2.1.5 精密度试验
平行 5次量取标准品溶液 5.0mL,分别置 25mL
容量瓶中 ,按 “2.1.3”项下的方法依次加入显色剂 ,于
500nm处测定其吸光度值。吸光度平均值为 0.243 ,
RSD=1.72% ,表明该方法精密度良好。
2.1.6 稳定性试验
取供试品溶液 1.0mL,置 25mL容量瓶中 , 加入
80%乙醇至 5mL,按 “2.1.3”项下的方法显色 ,于 10、
20、30、35min时测定吸光度值。结果 RSD=1.76%。
表明样品显色后 35min内稳定性良好。
2.1.7 加样回收率试验
精密称取于 105℃下减压干燥至恒重的芦丁对照
17李攀登等:鸡树条荚蒾化学成分测定分析
品 326mg,置 100mL容量瓶中 ,加入体积分数为 80%
的乙醇 80mL超声使之完全溶解 ,冷却至室温 ,以
80%乙醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得浓度 3.26mg/mL的芦
丁对照品溶液 ,备用 。取鸡树条荚蒾嫩枝粗粉约 0.5
g,共 6份 ,精密称定 ,置索氏提取器中 ,分别加入浓度
为 3.26 mg/mL的芦丁对照品溶液 5mL,按 “ 2.1.2”
项下方法制备各供试品溶液 。取各供试品溶液 5mL,
再按 “2.1.3”项下的方法显色 ,于 500nm波长处测定
吸光度 ,标准曲线法定量 ,计算回收率 ,结果见表 2。
表 2 芦丁加样回收率试验
样品量 /g 样品中黄酮含量 /mg 加入量 /mg 测得量 /mg 回收率 /%
平均
回收率 /% RSD/%
0.5032 16.4043 16.30 32.5236 98.89
0.5007 16.3228 16.30 32.5089 99.30
0.5012 16.3391 16.30 32.2193 97.42
0.5013 16.3424 16.30 32.4368 98.74
0.5030 16.3978 16.30 32.6731 99.85
0.5002 16.3065 16.30 32.1767 97.36
98.59 1.20
2.2 鸡树条荚蒾不同部位多糖含量测定
2.2.1 可溶性多糖的提取
称取鸡树条荚蒾干燥嫩枝 、叶 、果的粗粉各 1.0g,
每个部位各取 3份平行样品 ,滤纸包好 ,置索式提取
器中 ,加入 100mL石油醚(60 ~ 90℃)水浴 85℃回流
提取至无色(4h),弃去石油醚 ,药渣挥干石油醚 ,再加
入 80%乙醇 30mL超声提取 3次(30℃, 80Hz),每次
30min,冷却至室温后转入 100mL容量瓶中 , 80%乙醇
定容至刻度 ,备用 [ 9] 。
2.2.2 粗多糖的提取
将 “2.2.1”中的药包挥干 ,分别加入 2%的盐酸
30mL,沸水浴中提取 3次 ,每次 30min,冷却至室温 ,
以 2%的盐酸定容至 100mL容量瓶中 ,备用[ 9] 。
2.2.3 标准曲线的绘制
精密称取干燥恒重的葡萄糖 10.40mg,加入适量
蒸馏水溶解 ,定容至 100mL容量瓶中 ,摇匀 。分别精
密量取葡萄糖标准溶液 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL
置干燥试管中 ,分别加水至 1.0mL,再分别加入蒽酮
-硫酸试剂 5mL,摇匀 , 放入 100℃沸水浴中加热
10min,冷却至室温 ,于 610nm处测定吸光度 ,求得线
性回归方程 y=2.9712x+0.0004(R2 =0.9995),表
明葡萄糖浓度在 0.0208 ~ 0.1040mg/mL(吸光度值:
0.063 ~ 0.310)时有良好的线性关系 。
2.2.4 可溶性多糖和粗多糖的测定
分别吸取稀释一定倍数的可溶性多糖和粗多糖
提取液 1mL,并吸取 80%的乙醇和 2%的盐酸各 1mL
作为相应的空白对照 ,再分别加入蒽酮 -硫酸试剂
5mL,摇匀 ,放入 100℃沸水浴中加热 10min,冷却至室
温 ,于 610nm处测定吸光度 ,结果见表 1。
2.2.5 精密度试验
精密吸取对照品溶液 1.0mL(6份),按 “2.2.3”
项的方法测定吸光度值 ,求得 RSD=0.92%,精密度
良好 。
2.2.6 加样回收率试验
精密称取样品果实粗粉 1.00g(6份),分别加入
葡萄糖 0.16g,按供试品溶液制备方法和葡萄糖含量
测定方法操作 ,测得葡萄糖平均回收率为 98.85%,
RSD=1.62%。
2.3 鸡树条荚蒾中 Fe、Cu、Zn、Mn的含量测定
样品置于烘箱中 60℃烘干至恒重 ,研钵研细 ,过
100目筛 ,准确称取样品粉末 2.0g置于凯式瓶中 ,用
消煮液(硝酸∶高氯酸 =5∶1)浸泡 12h,将凯式瓶置
于 VELP凯氏定氮仪消化炉上消煮 2 ~ 4h,用蒸馏水
反复润洗凯式瓶 ,定容至 50mL容量瓶中。用原子吸
收分光光度计分别进行测定 ,结果见表 3。
表 3 鸡树条荚蒾不同部位 Fe、Cu、Zn、Mn测定结果
微量元素 Fe(μg/g) Cu(μg/g) Zn(μg/ g) Mn(μg/g)
嫩枝 295.25 9.975 36.65 16.75
叶 440.5 6.675 24.475 23.35
果实 0.45 10.475 16.6 6.575
18 人参研究 RENSHENYANJIU  2009年第 2期
3 讨论
3.1 实验表明 ,鸡树条荚蒾嫩枝 、叶 、果实黄酮和多
糖含量具有明显的差异 ,果实中黄酮和多糖的含量均
为最高 ,分别为 14.35%和 16.16%,具有潜在的研究
与开发价值;且叶中多糖含量较高 ,为 13.11%,可供
做进一步研究时参考 。
3.2 本实验首先采用石油醚脱脂 ,脱色 ,后用 80%乙
醇回流提取 ,减少了色素和油脂的干扰 ,使总黄酮和
多糖的提取更加完全 ,提高了实验的准确性。
3.3 四种微量元素测定结果表明 ,嫩枝和叶中铁元
素相对含量较高。中药材的药效与其微量元素的种
类和含量有着密切关系 , 这一现象受到国内外学者
的广泛关注 [ 10] 。某些疾病的发生 、发展及治疗与微
量元素有着密切关系 , 如补充适量的 Fe可以预防缺
铁性贫血 [ 11] ;锰是生物体中叶绿素及多种酶的重要
组成元素 [ 12] ;铜是产生核糖核酸的主要物质 ,对脑和
神经功能有帮助作用;另外 , Zn/Cu较高 ,能有效调整
患者血清 Zn/Cu值较低的情况 ,从而对多种疾病有治
疗意义。
3.4 目前有关鸡树条荚蒾的各方面的研究资料鲜见
报道 ,本实验为鸡树条荚蒾的开发利用提供了科学依
据。
  *本文通讯作者
参 考 文 献
[ 1]冉先德.中华药海(下卷)(第一册)[ M] .哈尔滨:黑龙江科技出版社 , 1998:946.
[ 2]祝之友.荚蒾属植物资源调查及开发利用 [ J] .基层杂志 , 1999, 13(1):24.
[ 3]祝之友.荚蒾的临床应用与本草学研究 [ J] .时珍国药研究 , 1997, 8(1):4.
[ 4] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编 [ M] .北京:人民卫生出版社 , 1994:428 ~ 429.
[ 5]朱有昌.东北药用植物 [ M] .哈尔滨:黑龙江科技出版社 , 1989:1064.
[ 6]裴 毅 ,李彦冰 ,王 栋 ,等.鸡树条荚蒾果实中挥发油的 GC-MS分析 [ J] .中草药 , 2006, 37(9):1320 ~
1321.
[ 7]朱有昌.东北药用植物 [ M] .哈尔滨:黑龙江科技出版社 , 1989:1064.
[ 8]潘萍 ,潘金火.垂盆草中总黄酮含量的测定 [ J] .广东药学院学报 , 2007, 23(5):509 ~ 510.
[ 9]王斌 ,程昆木 ,郑友兰 ,等.不同产地朝鲜淫羊藿多糖含量测定 [ J] .人参研究 , 2007, (2):11 ~ 14.
[ 10]董顺福 ,朱志国 ,刘洁 ,等.火焰原子吸收法测定 11种中成药钾 、钠 、铬和镍的含量 [ J] .光谱学与光谱
分析 , 1999, 19(3):406 ~ 407.
[ 11]王友慧 ,叶元土 ,林仕梅 ,等.嘉陵江 8种鱼类不同组织微量元素含量分析 [ J] .动物学杂志 , 2005, 40
(5):99 ~ 103.
[ 12]王夔等.生命科学中的微量元素.(上),北京:中国计量出版社 , 1991, 28:340.
19人参研究 RENSHENYANJIU  2009年第 2期