全 文 ：2014年第 27卷第 10期
中国科技 核心期刊
方 药·药理研究
峨眉山峨参 Anthriscus sylvestris(L.)Hoffm
属伞形科植物，为多年生草本，其药用部位为根，
主要用治虚证。盛产于四川峨眉山的中山和高山
地区初殿附近的峨参沟、九老洞、金顶，南到云南，
北至亚洲、欧洲和北美温带地区均有分布［1］。清
人楼藜然在《峨眉记游》一书中列举峨眉山的各种
特有药物时极其赞赏。他写道：“外有峨参一种，形
如沙参而大，色较黄白，山僧常馈送人。食者颇多，
味略似参，性微凉。渍以米泔水，和肉煮服之，补
肾。”［2］Darbyshire SJ等［3］对峨参的植物生态学
进行了相关研究；国外学者对化学成分的研究，最
早的是日本学者小泽贡［4］等；国内外学者还对峨
参的药理作用进行了相关研究，证实峨参具有抗
肿瘤、抗病毒、抗氧化和杀虫等作用［5-8］。但是，长
期以来，由于没有人对峨参进行系统深入的研究，
使得峨参的应用受到很大的局限。近年来笔者致
力于峨眉山所产特色资源植物峨参的研究，先后
从峨参的化学成分、药效药理学、急性毒性、质量
标准和制剂等方面进行了系统的研究，在研究中
笔者发现，峨参不仅有益气健脾和活血化瘀的作
用，而且还有显著的体内外抗氧化作用［9-11］。本实
验旨在对峨参的有效部位总黄酮采用Fenton法
产生羟基自由基模型和邻苯三酚自氧化体系，分
别测定峨参总黄酮对羟基自由基的清除能力和超
峨参总黄酮体内外抗氧化作用的研究 *
王岳峰，马超英，熊 雄，丁昭利
西南交通大学峨眉校区，四川 峨眉山 614202
［摘 要］目的：研究峨参有效部位总黄酮清除羟基自由基和抑制超氧阴离子的作用，以及对 D- 半乳糖
致衰老模型脾脏和肾脏的影响。方法：采用 Fent on法产生羟基自由基模型和邻苯三酚自氧化体系，分别测定
峨参总黄酮对羟基自由基的清除能力和超氧阴离子的抑制能力；颈部皮下注射 D- 半乳糖造小鼠衰老模型，研
究总黄酮的体内抗氧化作用。结果：峨参总黄酮在 27. 5～800 μg/ mL浓度内，清除羟基自由基和抑制超氧阴离
子均有较好的量效关系，清除率和抑制率均随浓度的增加而增大，且最大清除率达 32. 88%，最大抑制率为
24. 87%；由 D- 半乳糖造成的小鼠衰老模型，与空白组相比，脾脏和肾脏的模型组 MDA含量均升高，SOD活性均
降低，有极显著差异(P＜0. 05)。结论：峨参总黄酮具有较好的体外抗氧化能力；同时体内抗氧化效果也很显著。
［关键词］峨参；总黄酮；抗氧化
［中图分类号］R285. 5 ［文献标识码］A ［文章编号］1004- 6852( 2014) 10- 0011- 03
Study on Antioxidative Activity of Total Flavonoids from EShen in Vitro and Vivo
WANG Yuefeng, MA Chaoying, XIONG Xiong, DING Zhaoli
Emeishan Campus of Southwest JiaoTong University, Emeishan 614202, China
Abstract Objective: To study eliminating hydroxyl radicals and inhibiting superoxide anion of total flavonoids
fromEShen［Anthriscus Sylvestris (L.).Hoffm］, and its influences on the spleen and the kidney ofD-galactose inducing
aged models. Methods: The properties of eliminating hydroxyl radicals and inhibiting superoxide anion of total
flavonoids from EShen were detected respectively by using Fenton method to establish hydroxyl radical models and
pyrogallol autoxidation system; antioxidative effect of total flavonoids in vivo was studied by subcutaneous injection of
D-galactose inducing agedmicemodel. Results: Total flavonoids from EShen exhibited better dose-effect relationship in
the range between 27.5 μg/mL and 800 μg/mL in eliminating hydroxyl radicals and inhibiting superoxide anion,
clearance rate and inhibitory rate were increased as the concentrations were raised, maximum clearance rate reached
32.88% and maximum inhibitory rate 24.87%; D-galactose inducing aged mice model was compared with blank group,
the contents of MDA were raised and the activity of SOD decreased in the model group of spleen and kidney, the
comparison showed significant difference(P＜0.05). Conclusion: Total flavonoids of EShen possess better antioxidative
ability in vitro and remarkable antioxidative ability in vivo at the same time.
Keywords EShen; total flavonoids; antioxidative activity
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Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2014 Vol.27 No.10
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氧阴离子的抑制能力；颈部皮下注射D-半乳糖造
小鼠衰老模型，研究总黄酮的体内抗氧化作用。
1 材料与方法
1.1材料 峨参总黄酮液(880μg/mL)，峨参总
黄酮液(2.5mg/mL)，白术水煎液(0.04 g/mL)，均
由西南交通大学生命科学与工程学院中药化学室
提供。
1.2实验动物 昆明种小白鼠90只，雌雄各半，
18～22g，清结级，购于成都达硕生物科技有限公
司，动物实验合格证号：SCXK(川)2008-24。
1.3药品和主要试剂 D-半乳糖(上海生化试
剂公司提供)；考马斯亮蓝法总蛋白定量测试盒(南
京建成生物工程研究所提供)；微量丙二醛(MDA)
测试盒(南京建成生物工程研究所提供)；超氧化
物歧化酶(SOD)试剂盒(南京建成生物工程研究所
提供)；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
1.4主要仪器及设备 TU-1901 型双光束紫外
可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公
司提供)；TGL-16C高速台式离心机(上海安亭科
学仪器厂提供)。
1.5清除自由基方法 在 7 个 25 mL 的容量瓶
中依次移取5 mL浓度为1mmol/L的硫酸亚铁溶
液和5mL浓度3mmol/L双氧水溶液，混合均匀后
用浓度3mmol/L水杨酸溶液定容至刻度。在37℃
的恒温水浴中反应15分钟后，紫外分光光度计上
于510nm的波长处测其A0值。再分别移取浓度
为880、440、220、110、55、27.5μg/mL的峨参总黄
酮液各1mL和浓度为880μg/mL的维生素C1 mL
于A0体系中，在37℃的恒温水浴中反应15分钟
后，紫外分光光度计上于510nm波长处测其AX值。
1.6抑制超氧阴离子方法 于9支10mL具塞试
管中移取4.5mL浓度为50mmol/L的Tris-Hcl缓
冲溶液(pH=8.2)，每支试管加入4.2mL双蒸水，再分
别取1mL浓度为880、440、220、110、55、27.5μg/mL的
峨参总黄酮液和1mL浓度为880μg/mL的维生素
C于第3～9支试管中，第1～2支试管用双蒸水补
足。20℃水浴20分钟后，第2～9支试管中加入浓
度为 10 mmol/L 的邻苯三酚 0.4 mL，立即摇匀，
准确反应4 分钟，立即加入浓度为 8 mol/L HCl
0.1mL终止反应，325nm测吸光值。
1.7 D-半乳糖致衰老模型方法 小鼠90只，雌
雄各半。适应5天后，随机分为6组，每组15 只，
分别为空白对照组、模型对照组、总黄酮高剂量
组、总黄酮中剂量组、总黄酮低剂量组和阳性药物
治疗组。
1. 7. 1 空白对照组 小鼠颈背部皮下注射生理盐水
0.01mL/(g·bw)，同时灌胃生理盐水0.02 mL/(g·bw)。
1. 7. 2 模型对照组 用生理盐水稀释的D-半乳
糖浓度为12mg/mL，按 1天120mg/kg，小鼠颈背
部皮肤下连续注射42天，注射量0.01mL/(g·bw)，造
成衰老模型，同时灌胃生理盐水0.02mL/(g·bw)。
1. 7. 3 阳性药物治疗组 颈背部皮下注射D-半
乳糖 0.01 mL/(g·bw)，灌胃浓度为 0.04 g/mL 浓
度的白术水煎液0.02mL/(g·bw)。
1. 7. 4 峨参总黄酮提取物治疗组 颈背部皮下
注射D-半乳糖(12 mg/mL)0.01mL/(g·bw)，分别
以高剂量62.5mg/kg、中剂量37.5mg/kg、低剂量
12.5mg/kg灌胃。每天上午9点注射给药并灌胃1
次。实验期间都饲喂普通饲料，自由摄食和饮水。
停药1天后，空腹过夜后处理小鼠取材。小鼠半个
小时之内颈椎脱臼处死，脾、肾，以冰生理盐水洗
去浮血，滤纸吸干，液氮迅速冷却，称重。于0.9%
冰冷生理盐水中进行冰浴匀浆，制成10%的组织
匀浆，于4℃3000rpm 离心10分钟，取上清液，
-20℃保存待测。参照试剂盒说明测定肾和脾组织
SOD、MDA的含量。
2 结果
2.1羟基自由基清除率 根据清除效率 =
(A0-AX)/A0×100%，计算不同浓度总黄酮溶液对羟
基自由基的清除率。结果见表1。
表1 总黄酮羟基自由基清除率
A0 Ax 清除效率 / %
维生素 C 880 μg/ mL 0. 365 0. 235 35. 62
峨黄总黄酮 880 μg/ mL 0. 368 0. 227 32. 88
440 μg/ mL 0. 369 0. 271 26. 56
220 μg/ mL 0. 369 0. 290 21. 41
110 μg/ mL 0. 370 0. 297 19. 73
55 μg/ mL 0. 368 0. 303 17. 66
27. 5 μg/ mL 0. 369 0. 330 10. 57
2.2超氧阴离子抑制率 根据抑制率 =［A0-
(Ax-Ai0)］/ A0×100%，计算不同浓度总黄酮对超氧
阴离子产生的抑制率。结果见表2。
表2 总黄酮超氧阴离子抑制率
A0 Ax Ai0 抑制率 / %
空白组 0. 017
对照组 1. 698
维生素 C 880 μg/ mL 1. 607 5. 41
峨黄总黄酮 880 μg/ mL 1. 280 24. 87
440 μg/ mL 1. 449 14. 81
220 μg/ mL 1. 454 14. 51
110 μg/ mL 1. 559 8. 27
55 μg/ mL 1. 608 5. 35
27. 5 μg/ mL 1. 634 3. 81
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2.3 脾脏的 MDA 含量和 SOD 活性 脾脏的 MDA含量和 SOD
活性见表 3。
表 3 峨参总黄酮对脾 MDA、SOD的影响(χ±s)
组别 例数 MDA/(nmoL·mgprot-1) SOD/(U·mgprot-1)
空白对照组 15 7.44±0.29 12.86±0.58
模型对照组 15 9.37±0.38★★ 9.76±0.33★★
阳性药物治疗组 15 5.99±0.12★★☆☆ 15.67±0.52★★☆☆
高剂量组 15 5.81±0.11★★☆☆ 14.15±0.34★★☆☆
中剂量组 15 6.49±0.19★★☆☆ 13.96±0.63★★☆☆
低剂量组 15 7.30±0.18☆☆ 12.85±0.38☆☆
注：与空白对照组比较，★★表示 P＜0.01;与模型对照组比较，☆
☆表示 P＜0.01。
2.4 肾脏的MDA 含量和 SOD 活性 肾脏的 MDA含量和 SOD
活性见表 4。
表 4 峨参总黄酮对肾 MDA、SOD的影响(χ±s)
组别 例数 MDA/(nmoL·mgprot-1) SOD/(U·mgprot-1)
空白对照组 15 13.07586±0.36 13.13512±0.26
模型对照组 15 14.50345±0.33★★ 10.01884±0.18★★
阳性药物治疗组 15 11.57931±0.34★★☆☆ 16.54744±0.38★★☆☆
高剂量组 15 11.1931±0. 56★★☆☆ 14.52705±0.23★★☆☆
中剂量组 15 12.75862±0.44☆☆ 13.15589±0.29☆☆
低剂量组 15 13.02759±0.47☆☆ 12.81829±0.47☆☆
注：与空白对照组比较，★★表示 P＜0.01；与模型对照组比较，
☆☆表示 P＜0.01。
3 讨论
清除羟基自由基离子实验显示，峨参总黄酮在 27.5～
800 μg/mL浓度内，清除率随浓度的增加而增大，且最大清除
率达 32.88%，清除效果良好。在 27.5～55 μg/mL浓度范围内，
清除率明显增强。110～220 μg/mL浓度范围内，清除率无明显
增强。抑制超氧阴离子实验显示，峨参总黄酮在 27.5～
800 μg/mL浓度内，抑制超氧阴离子具有较好的量效关系，对超
氧阴离子的抑制率随浓度的增加而增强，且最大抑制率为
24.87%。在 220～440μg/mL浓度之间，抑制率无明显增强变化，
600～880 μg/mL浓度之间，抑制率显著增强。结果表明峨参总
黄酮同时具有良好的清除羟基自由基和抑制超氧阴离子的
抗自由基效果，有较好的体外抗氧化能力。
与空白组相比，模型组 MDA含量升高，SOD活性降低，有
极显著差异，表明由 D-半乳糖造成的小鼠衰老模型可行。与
空白组相比，阳性药物组和总黄酮高剂量组和中剂量组的
MDA含量降低，SOD 活性升高，有极显著差异，总黄酮低剂量
无差异，说明效果与剂量正相关。与模型组比较，阳性药物组
和峨参总黄酮高、中、低剂量组的 MDA含量降低，SOD活性升
高，都有极显著差异，说明峨参总黄酮体内抗氧化效果显著。
SOD是存在于体内很强的抗氧化酶，该酶能有效清除超
氧阴离子自由基，与动物的寿命呈正相关。衰老与机体全身
氧化应激的增强也有关，动物在衰老过程中 MDA含量会逐渐
增加［12-14］。所以 MDA含量间接反映细胞的损伤程度，是老化
的一项重要指标。检测 SOD和 MDA能清
晰反映体内抗氧化作用的效果。
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收稿日期：2014-03-17
*基金项目：四川省应用基础项目(编号 05JY029-
099-1)
作者简介：王岳峰(1957—)，男，副教授。研究方
向：中药学。
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