全 文 ：2009 年 12月第 6卷第 36期 ·药品鉴定·
CHINA MEDICAL HERALD 中国医药导报
一点红 [Emilia sonchifolia (Linn.) DC] [1]为菊科一点红
属植物 ，一年生或多年生草本 ，又名叶下红 、羊蹄草 、红
背叶 、山羊草 、野芥兰 、牛尾膝等 ，在我国南方各省均有
分布。一点红全草入药 [2]，清热凉血，活血化瘀，利尿消肿 ，
消炎解毒 。 主治上呼吸道感染 、咽喉肿痛 、口腔溃疡 、肺
炎 、急性肠炎 、细菌性痢疾 、泌尿系统感染 、睾丸炎 、乳腺
炎 、疖肿疮疡 、皮肤湿疹 、跌打扭伤 。 它还是目前市场上
畅销的妇科良药——花红冲剂的主要原料 。 近些年来 ，
一点红又成为人们喜爱的一种野菜 [3]，食味柔滑 ，口感清
爽 。
目前对一点红的研究主要集中在部分化学成分、栽培技
术等方面[4-9]，对其次生代谢产物含量的研究较少。 本文对一
点红不同营养器官中总黄酮和总酚含量进行了测定分析，为
一点红的药材质量控制及其次生代谢产物的进一步研究和
开发提供参考依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器
UV-2100 双光束紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪
器公司）；SSY-电热恒温水浴锅 （上海跃进医疗器械厂 ）；
RE52CS 旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；BS224S 电子天
平（上海天平仪器厂）。
1.2 试药
芦丁对照品（批号：100080-200707，中国药品生物制品
检定所）；没食子酸对照品（批号：110831-200302，中国药品
生物制品检定所）；一点红采自海南五指山市郊[由生命科学
系林伟教授鉴定为一点红 Emilia sonchifolia (Linn.) DC 全草，
将其洗净，分成根、茎、叶三部分，在 40℃条件下烘干至恒重，
粉碎，过 40 目筛，放在干燥器中备用。所用试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 总黄酮含量测定
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取在 120℃干燥恒重的芦丁
10 mg，加 30％乙醇适量，置水浴中加热溶解，冷却后用 30%
乙醇定容至 50 ml，摇匀备用，配制成 0.2 mg/ml 的对照品溶
一点红不同营养器官中总黄酮和总酚含量测定
张 燕 1，张洪斌 1，贺立静 1，胡海强 2
（1.琼州学院生命科学系，海南五指山 572200；2.琼州学院化学系，海南五指山 572200）
[摘要] 目的：建立一点红不同营养器官中总黄酮和总酚含量测定方法。方法：以芦丁为对照品，采用 NaNO2-Al（NO3）3-
NaOH 比色法测定了总黄酮含量；以没食子酸为对照品，采用 Folin-Ciocalteu 比色法测定了总酚含量。 结果：芦丁浓
度在 0.01～0.08 mg/ml 范围内与吸光度呈良好线性关系，平均加样回收率为 100.30%，RSD=1.72%，一点红叶、茎、根
中总黄酮含量分别为 2.54%、1.78%、1.27%；没食子酸浓度在 0.002～0.010 mg/ml 范围内与吸光度呈良好线性关系，平
均加样回收率为 99.86%，RSD=1.92%，一点红叶、茎、根中总酚含量分别为 21.28%、12.77%、8.51%。结论：这 2 种方法
灵敏，准确性强，精密度高，重复性好，可以用作一点红中总黄酮和总酚含量的测定。
[关键词] 一点红；总黄酮；总酚；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2009）12（c）-073-03
Determination of total flavonoids and total phenolics of different vegetative
organs in Emilia sonchifolia (Linn.) DC
ZHANG Yan1, ZHANG Hongbin1, HE Lijing1, HU Haiqiang2
(1.Department of Life and Science, Qiongzhou College, Wuzhishan 572200, China; 2.Department of Chemistry, Qiongzhou
College, Wuzhishan 572200, China)
[Abstract] Objective: To establish the analytical methods for determinating the contents of total flavonoids and total phe -
nolics of different vegetative organs in Emilia sonchifolia (Linn.) DC. Methods: The content of total flavonoids, expressed
as rutin equivalents, was measured by using the NaNO2-Al(NO3)3-NaOH colorimetric assay, and the content of total pheno-
lics, expressed as gallic acid equivalents, was measured by using the Folin-Ciocalteu assay. Results: The good linearity
between concentrations and absorbances of rutin was found in the range of 0.01-0.08 mg/ml, the average recovery was
100.30%with a RSD of 1.72%, the contents of total flavonoids in leaves, stems and roots of Emilia sonchifolia (Linn.) DC
were 2.54%, 1.78% and 1.27%, respectively; the good linearity between concentrations and absorbances of gallic acid was
found in the range of 0.002-0.010 mg/ml, the average recovery was 99.86% with a RSD of 1.92%, the contents of total
phenolics in leaves, stems and roots of Emilia sonchifolia (Linn.) DC were 21.28%,12.77% and 8.51%, respectively. Con-
clusion: These two proposed methods are sensitive, precise, accurate and reproducible, and they are suitable for the deter -
mination of total flavonoids and total phenolics in Emilia sonchifolia (Linn.) DC.
[Key words] Emilia sonchifolia (Linn.) DC; Total flavonoids; Total phenolics; Determination
[基金项目] 海南省教育厅高等学校科研资助项目（Hjkj2009-59）。
[作者简介] 张燕（1968-），女，甘肃西和人，副教授，硕士，主要研究方向
为资源植物化学。
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2009 年 12月第 6卷第 36期·药品鉴定·
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液。
2.1.2 供试品溶液的制备 分别精确称取一点红的根、 茎、叶
粉末各 1 g，分别加 95%乙醇,在 70℃水浴上热回流 2.5、2 h，
抽滤，分别将两次滤液合并减压浓缩至浸膏，浸膏加 60℃热
水搅拌溶解，水溶液用等量石油醚萃取 3 次，石油醚层减压
浓缩，回收石油醚，水层部分再用等量正丁醇溶液萃取 3 次，
合并正丁醇萃取液减压浓缩至浸膏，分别用 30%乙醇将浸膏
溶解定容至 100 ml 量瓶中。
2.1.3 最大吸收波长确定 取芦丁对照品溶液 3 ml 置 10 ml
量瓶中， 加 30%乙醇使成 5 ml， 再精确加入 5%NaNO2溶液
0.3 ml，摇匀，放置 6 min，加 10%Al（NO3）3溶液 0.3 ml，摇匀，
静置 6 min，加 1 mol/L NaOH 溶液 4 ml，加水 0.4 ml，摇匀，
放置 15 min，随行试剂做空白，于 300～700 nm 波长范围内全
程扫描，在 510 nm 波长处有最大吸收，且空白对照无干扰。
2.1.4 标准曲线的绘制 精密吸取 0.2 mg/ml 的芦丁标准液
0.0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 ml 置于 6 只标号的 10 ml 容量瓶
中，各加 30%乙醇使成 5 ml。分别加入 5%NaNO2溶液 0.3 ml，
摇匀，放置 6 min，加 10%Al（NO3）3 溶液 0.3 ml，摇匀，静置
6 min，加 1mol/L NaOH溶液 4 ml，加水 0.4 ml，摇匀，放置 15 min，
于 510 nm 波长处测定吸光度。以吸光度对标样浓度作图，获
得标准曲线的回归方程：Y=14.168X+0.012 1 （r=0.999 8）。
Y表示吸光度，X表示芦丁浓度。表明芦丁含量在 0.01～0.08mg/ml
范围内，与吸光度呈良好线性关系。
2.1.5 精密度试验 精密吸取供试品溶液 1 ml，操作按“2.1.4”
项下方法进行，重复测定 5 次，RSD=0.27%，结果表明本法精
密度良好。
2.1.6 重现性试验 精密吸取同一供试品溶液 5 份， 各 2 ml，
操作按“2.1.4”项下方法进行，RSD=0.50%，结果表明本法重
现性良好。
2.1.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液 1 ml， 操作按“2.1.4”
项下方法进行， 在 0、5、10、15、20、30、40 min 时分别测定吸
光度，RSD=1.98%，结果表明样品在 40 min 内基本稳定。
2.1.8 回收率试验 取已知含量的同一样品 5 份，分别精密加
入一定量的芦丁对照品，按上述供试品溶液制备方法制备加
样回收供试品溶液。 再按“2.1.4”项下方法进行测定吸光度，
计算含量及回收率。 结果见表 1。
表 1 总黄酮加样回收率试验结果
Tab.1 The results of total flavonoids recovery test
2.1.9 样品测定 分别精密吸取一点红的根、茎、叶样液 1.0、
2.0、3.0 ml 于对应标号的量瓶中，各加 30%乙醇使成 5 ml 样
品溶液。 方法同“2.1.4”项下方法，按标准曲线测定的方法
测定样品溶液的吸光度值，然后根据回归方程求出样品溶
液中总黄酮的含量，再计算出样品中总黄酮的含量。 结果
见表 2。
表 2 一点红不同营养器官中总黄酮的含量（%）
Tab.2 The contents of total flavonoids of different vegetative organs
in Emilia sonchifolia (Linn.) DC (%)
2.2 总酚含量测定
2.2.1 福林试剂的配制 [7] 称取 20 g 钨酸钠和 5 g 钼酸钠于圆
底烧瓶中，用 140 ml蒸馏水溶解，加入 85%的磷酸溶液 10 ml
和 20 ml浓盐酸，文火回流 10 h，然后加入 3 g硫酸锂及 15 ml
双氧水，加热沸腾 15 min 至亮黄色，不得带微蓝和绿色。 冷
却，移入 250 ml 量瓶中，定容，贮于棕色瓶中。
2.2.2 对照品溶液的制备 精确称取干燥至恒重的没食子酸
对照品 5 mg， 用蒸馏水溶解并定容至 25 ml 棕色量瓶中，得
浓度为 0.2 mg/ml 对照品溶液。
2.2.3 供试品溶液的制备 分别精确称取一点红的根、 茎、叶
粉末各 2.0 g，置于 100 ml 带塞锥形瓶中，加入 90%乙醇溶液
50 ml，静置 2 h 后进行抽滤，再用少量的 90%乙醇溶液洗涤
滤渣，合并滤液置于 100 ml 棕色量瓶中，用 90%乙醇溶液定
容至刻度。
2.2.4 最大吸收波长确定 精密量取对照品溶液 1 ml， 置于
10 ml 棕色量瓶中，加入 6 ml 蒸馏水，再加 0.5 ml 福林试剂，
充分摇匀， 再加 1.5 ml 20%碳酸钠溶液， 用水定容至刻度，
75℃水浴 10 min，冷却。 随行试剂做空白，于 490～800 nm 波
长范围内全程扫描，在 765 nm 波长处有最大吸收，且空白对
照无干扰。
2.2.5 标准曲线的绘制 精密量取对照品溶液 0.0、0.1、0.2、
0.3、0.4、0.5 ml 置于 6 个 10 ml 棕色量瓶中， 各加入 6 ml 蒸
馏水，再加入 0.5 ml 福林试剂，充分摇匀，再加 1.5 ml 20%碳
酸钠溶液，用蒸馏水定容至刻度，75℃水浴 10 min，冷却。 得
没食子酸浓度分别为 0.000、0.002、0.004、0.006、0.008、0.010
mg/ml 的对照品溶液。 于 765 nm 波长处测定各吸光度。 以吸
光度对没食子酸浓度作图， 获得标准曲线的回归方程：Y=
0.115 2+0.137 7X（r=0.999 6）。 其中 Y 为吸光度，X 为没食子
酸浓度（mg/ml）。 结果表明没食子酸在 0.002～0.010 mg/ml 范
围内与吸光度呈良好线性关系。
2.2.6 精密度试验 精密吸取供试品溶液 1 ml，操作按“2.2.5”
项下方法进行，重复测定 5 次，RSD=0.75%，结果表明本法精
密度良好。
2.2.7 重现性试验 精密吸取同一供试品液 5 份， 各 3 ml，操
作按“2.2.5”项下方法进行，RSD=2.43%，结果表明本法重现
性良好。
2.2.8 稳定性试验 精密吸取供试品液 1 ml，操作按“2.2.5”项
下方法进行 ， 在 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 h 测定吸光度 ，
RSD=1.47%，结果表明样品溶液在 3 h 内稳定性良好。
2.2.9 回收率试验 取已知含量的同一样品 5 份， 分别精密添
加一定量的没食子酸对照品，按上述供试品溶液制备方法制
备加样回收供试品溶液。再按“2.2.5”项下方法进行测定吸光
度，计算含量及回收率。 结果见表 3。
加入芦丁对照
品的量（mg）
0.62
0.62
0.64
0.64
0.66
1
2
3
4
5
2.52
2.53
2.57
2.59
2.60
测定
次数
样品中总黄
酮含量（mg）
测得总黄酮
含量（mg）
3.15
3.14
3.20
3.24
3.27
回收率
（%）
101.61
98.39
98.44
101.56
101.52
平均值
（%）
100.30
RSD
（%）
1.72
茎（%）
1.74
1.76
1.84
1.78
2.97
1
2
3
平均值（%）
RSD（%）
2.57
2.52
2.53
2.54
1.04
样品号 叶（%） 根（%）
1.24
1.32
1.25
1.27
3.43
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表 3 总酚加样回收率试验结果
Tab.3 The results of total phenolics recovery test
2.2.10 样品测定 分别精确吸取一点红的根、茎、叶样液 1 ml
置于 10 ml 棕色量瓶中，各加入 6 ml 蒸馏水，再加入 0.5 ml
福林试剂，方法同“2.2.5”项下方法，按标准曲线测定的方法
测定样品溶液的吸光度值，然后根据回归方程求出样品溶液
中总酚的含量，再计算出样品中总酚的含量。 结果见表 4。
表 4 一点红不同营养器官中总酚的含量（%）
Tab.4 The contents of total phenolics of different vegetative organs in
Emilia sonchifolia (Linn.) DC (%)
3 讨论
以芦丁为对照品，以 NaNO2-Al（NO3）3-NaOH 为显色剂，
采用紫外可见分光光度法在 510 nm 波长处测定了一点红不
同营养器官中总黄酮的含量，由表 2 可知，一点红叶中总黄
酮含量最高为 2.54%，其次是茎（1.78%），根中最低（1.27%）。
以没食子酸为对照品， 通过 Folin-Ciocalteu 比色法，采
用紫外可见分光光度法在 765 nm 波长处测定了一点红不同
营养器官中总酚的含量，由表 4 可知，总酚含量在一点红叶
中最高为 21.28%，其次是茎（12.77%），根中最低（8.51%）。
由此可见，在一点红不同营养器官中总黄酮、总酚含量
具有显著的差异性。
实验结果表明，这两种方法都具有操作简便，效率高，精
密度高，稳定性和重现性好，测定结果可靠的优点，适用于一
点红中总黄酮、总酚的定量分析。
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的含量[J].中国当代医药,2009,16(4):78-79.
（收稿日期：2009-09-07）
加入没食子酸对
照品的量（mg）
1.45
1.45
1.45
1.45
1.45
1
2
3
4
5
8.36
8.43
8.58
8.42
8.74
测定
次数
样品中总酚
含量（mg）
测得总酚含
量（mg）
9.78
9.87
10.04
9.91
10.17
回收率
（%）
97.93
99.31
100.69
102.76
98.62
平均回
收率（%）
99.86
RSD
（%）
1.92
茎
12.46
13.18
12.67
12.77
2.90
1
2
3
平均值（%）
RSD（%）
20.86
21.78
21.20
21.28
2.19
样品号 叶 根
8.36
8.74
8.43
8.51
2.38
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