全 文 ：151※分析检测 食品科学 2009, Vol. 30, No. 06
不同采收期广西一点红总生物碱含量分析
周吴萍，李军生，韦媛媛，阎柳娟，梁 燕
(广西工学院生物与化学工程系，广西 柳州 545006)
摘 要：目的：建立一点红总生物碱的含量测定方法，测定不同采收期一点红中总生物碱含量，考察一点红原
药材质量的优劣。方法：利用单因素法考察最佳提取条件，采用紫外可见分光光度法，以苦参碱为对照品，于
414nm波长处测定生物碱含量。结果：苦参碱在0.0021～0.0294mg/ml范围内呈良好线性关系(R2=0.9997)，平均
加样回收率为97.6%，RSD为0.447%(n=6)。样品的总生物碱含量在4.31～ 3.99mg/g之间，八月为最佳采收期，
其样品中总生物碱含量最高。结论：本法测定，重复性较好，对仪器要求不高，准确可靠，可用于一点红质
量控制。
关键词：一点红；总生物碱；苦参碱；含量测定
Determination of Total Alkaloids in Emilia sonchifolia Collected at Different Harvesting Time in Guangxi
ZHOU Wu-ping，LI Jun-sheng，WEI Yuan-yuan，YAN Liu-juan，LIANG Yan
(Department of Biological and Chemical Engineering, Guangxi University of Technology, Liuzhou 545006, China)
Abstract ：Objective: To establish a method for determing total alkaloids content in Emilia sonchifolia a d then de ermine its be t
harvesting time. Methods: The optimum extraction conditions were confirmed by single factor tests, and with matrine as standard,
total alkaloids content was determined at the wavelength of 414 nm by UV-visible spectrophotometry. Results: The calibration
curve shows good linearity in the range of 0.0021 to 0.0294 mg/ml (R2=0.9997), and the average spike recovery is 97.6% with the
RSD of 0.447% (n=6). The contents of total alkaloids in chloroform extract samples of Emilia sonchifolia co lecte at diffe ent
harvesting time are 4.31 to 13.99 mg/g, and August is considered as the best harvesting time of Emilia sonchifoliawith the highest
total alkaloids content. Conclusion: The method is simple and accurate with high repeatability, and can be used for quality
analysis of Emilia sonchifolia.
Key words：Emilia sonchifolia；total alkaloids；matrine；content determination
中图分类号：R282.4 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)06-0151-04
收稿日期：2008-03-13
基金项目：广西自然科学基金项目(桂科基0575023)
作者简介：周吴萍(1979-)，女，讲师，硕士，研究方向为中草药药效成分分析与检测。E-mail：kxt_w@126.com
一点红是广西传统中草药，为菊科植物一点红
[Emilia sonchifolia (Linn.) DC.]的干燥全草，具有清热解
毒、消炎、利尿的功效[1]。一点红主要含有生物碱类[1]、
黄酮类[2]、植物甾醇、脂肪酸[3]等化学成分，是妇科临
床常用药广西特产中成药花红片的主要原料药[4]。国内
外文献仅在其临床应用和药理作用[5-6]方面有少部分报
道，在原料药的质量控制方面未见有相关报道。由于
其具体化学活性成分尚未明确，对于原料药材的鉴定和
质量检测也只能通过经验和外观品质进行简单的验证。
生物碱类物质有抗炎抗菌药理功效，故通过测定一点红
总生物碱含量来控制原料药质量、确保成药疗效有重要
的意义。
1 材料与方法
1.1材料、试剂与仪器
广西一点红 广西花红药业；苦参碱对照品 中国
药品生物制品检定所；甲醇、无水乙醇、丙酮、氯仿
(分析纯) 市售。
UV2100型紫外可见分光光度计 尤尼柯仪器有限公
司；AL104型电子天平 梅特勒-托利多仪器有限公
司；B2200S2T型超声波发声仪 必能信上海有限公司。
1.2对照品溶液制备
精密称取苦参碱对照品0.0042g 置100ml容量瓶中，
加氯仿溶解至刻度，摇匀，即得浓度为0.0420mg/ml苦
参碱对照品贮备液。
1.3溴麝香草酚蓝显色剂的配制
取0.1mol/L的磷酸二氢钾溶液500ml，加0.1mol/L氢
2009, Vol. 30, No. 06 食品科学 ※分析检测152
氧化钠溶液422ml，蒸馏水76ml，用pH计校正为pH7.6的
缓冲液。精密称取溴麝香草酚蓝0.0625g，置500ml量
瓶中，加上述pH7.6缓冲液至刻度，摇匀即得。
1.4检测波长的选择
分别取苦参碱对照品液、一点红总生物碱样品液适
量至分液漏斗中，加入溴麝香草酚蓝显色剂10ml，密
塞，剧烈振摇2min提取，静置2h，分取氯仿层。以
未加样液的氯仿显色层作为参比在200～800nm范围内进
行光谱扫描。
1.5标准曲线制备
精密量取苦参碱对照品溶液0.0、 .5、1.0、2.0、
3.0、4.0、5.0、6.0、7.0ml，分别置10ml容量瓶中，
加入氯仿至刻度，按照上述条件显色，以第1管未加苦
参碱的氯仿层作空白对照，在414nm处测吸光度。以
苦参碱对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制
标准曲线。
1.6一点红提取条件的选择
1.6.1不同提取方式的考察
取同一批广西一点红药材粉末约2g，共4份，精
密称定，按以下4种方法提取。
索氏提取法：将一点红粗粉置索氏提取器中，加
浓氨水10滴，精密加入氯仿60ml进行提取，提取3.5h
至无色，冷却补足失重，精密吸取续滤液1ml用氯仿定
容至10ml备用。精取5ml样液至分液漏斗，加入溴麝
香草酚蓝显色剂10ml，密塞，剧烈振摇2min提取，静
置2h，分取氯仿层，以未加样液的氯仿层为空白，在
414nm处测吸光度。
冷浸法：将一点红粗粉置于250ml量瓶中，加浓氨
水10滴，精密加入氯仿60ml，静置48h，补足失重，
精密吸取续滤液1ml按上述条件显色测定。
超声提取法：将一点红粗粉置具塞锥形瓶中，加
浓氨水10滴，精密加入氯仿60ml，超声30min，冷却
补足失重，精密吸取续滤液1ml按上述条件显色测定。
回流提取：将一点红粗粉置150ml圆底烧瓶中，加
浓氨水10滴，精密加入氯仿60ml提取2h，冷却补足失
重，精密吸取续滤液1ml按上述条件显色测定。
C供×D×V总生物碱含量(mg/g) = ——————
m
式中，C供为供试品浓度，D稀释倍数，V为样品
定容体积，m为样品取样重量。
1.6.2提取溶媒的确定
取同批一点红全草粗粉约 1g，分别置100ml具塞锥
形瓶中，加入浓氨水4滴，分别精密加入氯仿、甲苯、
丙酮、乙醇、甲醇40ml，超声提取15min，冷却，补
足失重，过滤，精密吸取续滤液2ml用相应溶剂定容至
10ml备用。精取5ml样液至分液漏斗，加入溴麝香草酚
蓝显色剂10ml，密塞，剧烈振摇2min提取，静置2h，
以未加样液的溶剂为空白，在414nm处测吸光度。
1.6.3溶媒加入量的确定
称取一点红粗粉约1g，共6份，精密称定，置具
塞锥形瓶中，分别按料液比1:20，1:30，1:40，1:50，
1:60，1:70(g/ml)加入氯仿，超声提取1h，过滤，挥
干溶剂，精密加入氯仿40ml，再精密吸取2ml用氯仿定
容至10ml样液备用，取5.0ml样液按上述条件显色测定。
1.6.4提取时间的确定
称取一点红全草粗粉约1g共4份，精密称定，分
别置100ml具塞锥形瓶，加入4滴浓氨水，精密加入氯
仿50ml。分别超声提取15、30、45、60min ，冷却，
补足失重，过滤，取续滤液2.0ml用氯仿定容至10ml，
取5.0ml样液按上述条件显色测定。
2 结果与分析
2.1检测波长确定
扫描结果如图1显示，在可见光区苦参碱对照品液
和一点红样品液均在414nm处有最大吸收，故选择
414nm为测定波长。
2.2线性范围
按条件绘制标准曲线，结果表明苦参碱在0.0021～
0.0294mg/ml范围内浓度与吸光度呈良好的线性关系。得到
回归方程为Y=45.8140X+0.0531，R2= 9997(n＝8)，见图2。
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
吸
光
度
苦参碱浓度(mg/ml)
0.005.010.0150.020.0250.03.035
图2 苦参碱标准工作曲线
Fig.2 Calibration curve of matrine
图1 样品和标准品的溴麝香草酚蓝色法紫外可见光谱扫描图
Fig.1 UV-visible absorption spectrogram of matrine sample and
standard
2
1.8
1.6
1.4
1.2
1
0.8
0.6
0.4
0.2
0
样品
标准品
吸
光
度
波长(nm)
250330410490570650730
153※分析检测 食品科学 2009, Vol. 30, No. 06
样品批号 2006080320 6090420 610012 611012006120220 70110
样品总生物
13.9907.1626.1714.3075.9015.374
碱含量(mg/g)
表5 样品测定结果
Table 5 Determination results of total alkaloids samples
2.3一点红提取条件的确定
2.3.1不同提取方式的对比
提取方法 索氏提取法 冷浸提取法 超声提取法 回流提取法
样品总生物
3.744 3.124 5.542 1.169
碱含量( mg/g)
表1 不同提取方法的对比
Table 1 Comparison among extraction yields of total alkaloids by
different extraction methods
从表1结果可看出，超声法提取出的样品总生物碱
含量相对较高，回流提取法相对较低，可能是成分受
热被破坏，故选用超声法提取，操作简单，用时较短
且提取效果较好。
2.3.2提取溶媒的确定
实验过程发现丙酮、乙醇、甲醇不适合进行吡咯
烷类生物碱提取，而甲苯本身就有剧毒，不易操作，
危险性强。菊科植物中的生物碱物质大多属于吡咯烷类
生物碱，较易溶于氯仿中，故采用氯仿做为提取溶媒。
2.3.3溶媒加入量的确定
料液比(g/ml) 1:201:301:401:501:601:70
样品总生物碱含量(mg/g)5.1306.2026.2806.7516.6816.472
表2 不同溶剂加入量的对比
Table 2 Comparison among extraction yields of total alkaloids at
different chloroform amounts
超声时间(min) 15 30 45 60
样品总生物碱含量(mg/g)6.289 5.0875.0264.982
表3 不同超声提取时间的对比
Table 3 Comparison among extraction yields of total alkaloidsat
different ultrasonic extraction time
中，加入浓氨水4滴，精密加入氯仿40ml，超声提取
15min，冷却，补足失重，过滤，精密吸取续滤液2ml
用氯仿定容至10ml备用。精取5ml样液至分液漏斗，加
入溴麝香草酚蓝显色剂10ml，密塞，剧烈振摇2min提
取，静置2h，分取氯仿层，以未加样液的氯仿层为空
白，在波长414nm处测吸光度。
2.5精密度实验
吸取苦参碱对照品溶液，按显色条件显色后，于
波长414nm处测其吸光度，连续测定五次，RSD为
0.055%(n=5)，结果显示仪器精密度良好。
2.6重复性实验
取一点红全草粗粉约0.8g，6份，精密称定，按照
上述条件制备测定，测得一点红中总生物碱含量的RSD
为0.132%(n＝6)，结果说明方法重复性较好。
2.7稳定性实验
取样品溶液显色后于0、1、2、3、4、5h进行
吸光度测定，样品溶液吸光度的RSD为0.172%(n=6)，
结果显示样品溶液在5h内测定稳定。
2.8加样回收率实验
取已知含量的同一批一点红全草粗粉约0.4g，共7
份 (其中一份为平行空白)，分别精密加入苦参碱对照品
液(0.85mg/ml)适量，混匀蒸干，按上述条件制备测定，
结果平均加样回收率为97.6%，RSD为0.447%(n＝6)。
见表4。
样品
　 原含量 加入量 测得值 回收率 平均回收率 RSD
(mg) (mg)(mg) (%) (%) (%)
1 1.7241.363.04697.2%
2 1.7241.363.05597.9%
3 1.7241.703.37898.3% 97.6 0.447
4 1.7241.703.39597.3%
5 1.7242.043.71897.8%
6 1.7242.043.71097.3%
表4 加样回收率(n=6)
Table 4 Recovery of matrine added in total alkaloids samples
(n=6)
2.9样品测定结果
取六批不同采收期一点红全草粗粉，按最佳条件
进行制备测定，从表5结果可以看出不同采收期一点
红样品中，8月采收的药草总生物碱含量相对较高为
13.990mg/g，而9月份采收的药草含量次之，之后几个
月则逐渐减少，故一点红在八月份采收样品中总生物碱
含量较高。
从表2结果可看出，料液比在1:20～1:50(g/ml)范围
内， 总生物碱提取量逐渐增加，之后提取量并未随着溶
媒比例增加而增加，故最佳提取料液比为1:50(g/ml)，所
提取得到的生物碱含量相对较高。
2.3.4提取时间的确定
超声提取法提取时间一般不超过1h则可提取完全 ，
从表3结果可以看出，样品总生物碱在提取溶媒中溶解
速度较快，超声提取15min已可以提取完全，提取效果
较好。时间过长，提取率反而下降，可能是部分成分
不稳定容易被破坏。
2.4最佳供试品溶液制备条件
取一点红全草粗粉约 0.8g，置100ml具塞锥形瓶
2009, Vol. 30, No. 06 食品科学 ※分析检测154
3 结 论
3.1 实验过程中对样品的总生物碱提取条件进行了筛
选，确定最佳提取方法，建立一套适合的含量测定方
法，对比分析广西六批不同采收期的一点红中总生物碱
含量，一点红适宜在八月份采收，总生物碱含量较高，
药草的质量较好。
3.2中草药制剂花红片是临床治疗妇女盆腔炎、附件
炎等妇科炎症的常用药，一点红作为主要的原料药，其
具体化学成分并未明确，国内外对于其药材质量控制的
研究也未见报道，《中国药典》2005版尚未收录该品
种，故建立了酸性染料比色法测定其活性成分总生物碱
的含量。经方法学考察准确可靠、稳定可行，为企业
原料药的质量控制提供方法，可用于广西草药一点红的
质量控制。
参考文献：
[1]广西壮族自治区革命委员会卫生局. 广西本草选编: 下册[M]. 南宁:
广西人民出版社, 1974: 940-941.
[2]李秀信, 王荣花, 杨秀萍. 一点红黄酮成分的分析及含量测定[J]. 西
北植物学报, 2003, 23(4): 671-673.
[3]高建军, 程东亮.一点红化学成分的研究[J]. 中国中药杂志, 1993, 18
(2): 102-103.
[4]韦飞燕. 花红片薄层色谱鉴别研究[J]. 广西中医学院学报, 2000, 17
(1): 67; 75.
[5]SHYLESH B S, PADIKKALA J. Antioxidant and anti-inflammatory
activity of Emilia sonchifolia[J]. Fitoterapia, 1999, 70: 275-278.
[6]MUKO K N, OHIRI F C. A preliminary study on the anti-inflamimatory
properties of Emilia sonchifolialeaf extracts[J]. Fitoterapia, 2000, 71:
65-68.