全 文 ：第 39 卷 第 6 期
2014 年 12 月
广西大学学报:自然科学版
Journal of Guangxi University:Nat Sci Ed
Vol． 39 No． 6
Dec． 2014
收稿日期:2014-03-02;修订日期:2014-05-08
基金项目:广西科技攻关项目(桂科攻 09321054)
通讯作者:王立升(1965-)，男，黑龙江汤原人，广西大学教授，博士，博士生导师;E-mail:w_lsheng@ 163。
文章编号:1001-7445(2014)06-1366-05
一点红化学成分分离及其原儿茶酸含量测定
王立升1，陈淋敏1，张艳华2，庞 丽2
(1. 广西大学 化学化工学院，广西 南宁 530004;
2. 广西壮族自治区花红药业股份有限公司，广西 柳州 545005)
摘要:为开发利用一点红植物的药用价值，以水提醇沉法提取一点红药材，采用极性分段结合半制备高效液相
色谱法分离提取一点红水提物乙酸乙酯萃取部位，并根据理化性质和波谱数据确定其化合物结构，结果从一
点红全草药材中分离得到 5 个单体化合物，经鉴定分别为对羟基苯乙酸(1)、对羟基苯甲酸(2)、对羟基肉桂
酸(3)、原儿茶酸(4)、丁香酸(5)，除化合物 2 外的 4 个化合物均为首次从该植物中分离得到;并采用外标法
测定一点红中原儿茶酸的含量，其标准曲线在 10 ～ 100 μg 范围内线性关系良好(Ｒ2 = 0. 999 5)，该方法准确
度高、重复性好，是一种快速有效的检测一点红中原儿茶酸含量的方法。
关键词:一点红;化学成分;对羟基肉桂酸;原儿茶酸;丁香酸
中图分类号:Q946 文献标识码:A
Isolation of chemical constituents of Emilia sonchifolia and
determination of protocatechuic acid
WANG Li-sheng1，CHEN Lin-min1，ZHANG Yan-hua2，PANG Li2
(1. School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi University，Nanning 530004，China;
2. Huahong Pharmaceutical，Liuzhou 545005，China)
Abstract:For the development and utilization of the medicinal worth of Emilia sonchifolia plants，
the chemical constituents of Emilia sonchifolia were extracted with water extraction and alcohol pre-
cipitation methods． Combined with the use of sub-polar semi-preparative high performance liquid
chromatography to isolation the parts of ethyl acetate extract of Emilia sonchifolia aqueous extract and
determine the structure of a compound based on their physicochemical properties and spectral data．
Five compounds were isolated from the Emilia sonchifolia，which were identified as:4-hydroxyphe-
nylacetic acid (1)，4-hydroxybenzoic acid (2) ，4-hydroxycinnamic acid (3) ，protocatechuic acid
(4) ，and syringic acid (5)． All compounds except compound 2 were isolated from this plant for
the first time． The determination of protocatechuic acid in Emilia sonchifolia was performed using ex-
ternal standard method． The standard curve of protocatechuic acid showed a good linearity in the
range of 10 ～ 100 μg of concentration with Ｒ2 = 0. 999 5． The method developed in this study was
rapid，accurate and easy to be used，therefore it would be good for determination of protocatechuic
acid content in Emilia sonchifolia．
Key words:Emilia sonchifolia;chemical canstituents;4-hydroxycinnamic acid;protocatechuic
acid;syringic acid
DOI:10.13624/j.cnki.issn.1001-7445.2014.06.035
第 6 期 王立升等:一点红化学成分分离及其原儿茶酸含量测定
一点红［Emilia sonchifolia (L. )DC.］是菊科一点红属植物，主要分布于华东、中南至西南地区，是
我国南方地区经常使用的传统中草药［1］。一点红在印度科拉拉邦经常被用来治疗炎症、蚊虫叮咬、风
湿病及创伤等，在中国又常被作为一种药食两用山野蔬菜。一点红全草主要用于消炎，止痢，主治腮腺
炎、乳腺炎、小儿疳积、皮肤湿疹等症［2］，临床上可用于上呼吸道感染、口腔溃疡、肺炎、乳腺炎、肠炎、外
伤感染、急性结膜炎、急性扁桃体炎、肺炎、胆囊炎、传染性肝炎、钩端螺旋体病、菌痢、尿路感染、疮疔痈
肿、湿疹、跌打损伤等［3］。一点红作为用于治疗妇科炎症的花红片中的一味主药，具有良好的抗炎抗氧
化作用。根据目前科学研究，一点红的主要化学成分包括有黄酮类、生物碱、酚类、挥发油和矿物质以及
甾醇类等［4］。黄酮类成分主要有黄酮、二氢黄酮、黄酮醇、二氢黄酮醇、邻二酚羟基、4-羟基黄酮醇或 7，
4’-二羟基黄酮醇等［5］。一点红的地上部分则含有多种生物碱类，其中多数是由千里光次碱和千里光次
酸二者酯化形成的 12 元环的大环双酯构成其骨架结构的吡咯里西啶类生物碱［6-9］。采用乙醇提取法可
以得到一点红多酚类物质［10］，其被广泛用于药品、食品、保健品等领域。一点红具有良好的抗炎抗氧化
作用，因此，对其进行化学成分研究和含量测定有利于研究其活性来源和基础。而目前对一点红的化学
成分研究主要集中在类黄酮成分上，对一点红中植物酚酸类化学成分的分离鉴定和含量分析方面的研
究则较少，而植物酚酸类化合物具有抗病毒、抗氧化、抗癌等多种药理活性。故本研究使用极性分段结
合高效液相色谱法分离鉴定一点红中的酚酸类化学成分，并采用高效液相色谱法测定一点红中原儿茶
酸含量，为进一步开发利用一点红奠定基础。
1 材料与方法
1. 1 材料与仪器
一点红药材由广西花红药业提供。
试剂:乙腈(广东光华化学厂有限公司)和甲醇(广东光华化学厂有限公司)为色谱纯，冰醋酸(成
都科龙化工制剂厂)、乙酸乙酯、正丁醇(西陇化工股份有限公司)为分析纯，液相用水为娃哈哈纯净水
(杭州娃哈哈公司) ，原儿茶酸标准品(中检所 E －0622)。
仪器:UC －3282 型半制备高效液相色谱仪、UC －3280 型高效液相色谱仪(北京优联电工)，威玛龙
色谱工作站，UV －2550 型紫外分光光度计(日本岛津公司) ，KQ － 50B 型超声波清洗器(昆山市超声
仪器有限公司) ，EL电子天平(常州市天之平仪器设备有限公司)。
1. 2 一点红化学成分的提取与分离
将干燥的一点红全草 3 kg粉碎成细粉。水提条件:温度 100 ℃，液料比 10∶ 1，提取 2 次，提取时间
2 h，合并提取液，减压浓缩至浸膏。浸膏用 65%的乙醇溶液溶解，充分搅拌后于冰箱中静置 24 h，减压
抽滤除去不溶的杂质。浓缩，加水完全溶解后利用石油醚萃取去除脂溶性杂质。之后用乙酸乙酯反复
萃取至乙酸乙酯无色，合并乙酸乙酯萃取液并减压浓缩，得到乙酸乙酯部位深褐色浸膏 168 g。
取一定量的乙酸乙酯部位浸膏，以正相柱层析硅胶干法装柱湿法上样，固定相为 200 ～ 300 目硅胶，
流动相为 CH2Cl2∶ 乙酸乙酯系统梯度洗脱(1∶ 0 ～ 0∶ 1)，根据薄层色谱检验结果，将流分分成 4 个部位
(Ⅰ －Ⅳ)，部位Ⅱ减压浓缩至干后用氯仿反复重结晶，得到化合物 1(15. 2 mg)。部位Ⅲ经过 Sephadex
LH －20 凝胶(MeOH)过滤后得到浓缩干燥样品后用色谱级甲醇溶解，然后用 0. 45 μm 微孔滤膜过滤，
进半制备高效液相色谱仪，浓缩保留时间相同的组分，得到化合物 2(3. 2 mg)，化合物 3(8. 7 mg) ，化合
物 4(5. 3 mg)和化合物 5(10. 1 mg)。
半制备液相色谱条件:苏州环球 C18 半制备色谱柱(250 mm × 10 mm，10 mm)，流动相:甲醇 －
0. 4%冰醋酸梯度洗脱(0 ～ 35 min;25% ～55%甲醇) ，流速 3 mL /min，检测波长 273 nm，进样量 1 μL。
1. 3 化合物结构鉴定
运用1H － NMＲ、13C － NMＲ、MS 等分析方法，并结合化合物的理化性质，对分离得到的化合物 1 ～ 5
进行结构鉴定。
1. 4 一点红中原儿茶酸含量的测定
采用 HPLC外标法对一点红中原儿茶酸含量进行测定，重复取 5 批一点红全草药材，按照“1. 2 节”
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中的方法萃取，配置成供测溶液。按照建立标准曲线的方法测定其峰面积，将所得结果代入标准曲线回
归方程，求得原儿茶酸含量。
1. 4. 1 原儿茶酸标准品溶液的配制
精密称取原儿茶酸标准品 10. 0 mg，用 50%甲醇定容至 25 mL，超声使其完全溶解，即获得 0. 4 mg /mL
的标准品溶液。取 5 mL标准品溶液定容至 200 mL，得 10 μg /mL原儿茶酸标准品溶液。
1. 4. 2 一点红药材样品溶液的配制
精密称取一点红全草粗粉 5. 00 g，加入 50 mL 50%甲醇，称重，超声波萃取 1 h，冷却后用 50%甲醇
补足失重，摇匀，使用 0. 45 μm有机微孔滤膜过滤，即得一点红药材样品溶液。
1. 4. 3 分析液相色谱条件
苏州环球 C18 分析色谱柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)，流动相:乙腈 － 0. 4%冰醋酸(5 ∶ 95) ，流速
0. 8 mL /min，检测波长 273 nm，进样量 20 μL。记录色谱图时间 10 min。
1. 4. 4 原儿茶酸标准品线性关系考察
精密量取原儿茶酸标准品溶液 2、4、6、8、10、12、14、20 μL手动进样分析，按分析色谱条件分析测定
其峰面积，以峰面积为纵坐标，原儿茶酸含量为横坐标绘制标准曲线。
1. 4. 5 一点红中原儿茶酸含量测定的方法学考察
① 稳定性试验:分别精密取“1. 4. 1 节”中配制好的样品溶液 20 mL，在 0、4、8、12、18、24 h 左右分
别进样 20 μL，测定其峰面积。
② 精密度试验:精密取“1. 4. 1 节”中配制好的样品溶液 20 μL，分别连续重复进样 6 次，测定其峰
面积。
③ 重复性试验:精密取“1. 4. 2 节”中配制的一点红测试样品 6 份，按照建立标准曲线的方法测定
其峰面积，根据回归方程计算其原儿茶酸含量。
2 结果与分析
2. 1 化合物 1 ～ 5 的结构鉴定
① 化合物 1
无色针状结晶，溶于乙醇、乙酸乙酯，三氯化铁反应呈阳性。ESI-MS m/z:152［M + H］+;1H-NMＲ
(600 MHz，CD3OD)δ:7. 085(2H，d，J = 8. 5 Hz，H-2，6)，6. 726(2H，d，J = 8. 5 Hz，H-3，5) ，3. 483
(2H，s，H-7) ;13C-NMＲ (125 MHz，CD3 OD) δ:125. 7 (s，C-1)，130. 0 (s，C-2，6) ，114. 9
(s，C-3，5) ，156. 1 (s，C-4) ，40. 1 (s，C-7) ，175. 2 (s，C-8)。以上数据与文献［11］报道的数据基本
一致，故鉴定化合物 1 为对羟基苯乙酸。
② 化合物 2
白色结晶，三氯化铁反应呈阳性。ESI-MS m/z:139［M + H］+;1H-NMＲ(600 MHz，CD3OD)δ:7. 868
(2H，d，J = 8. 8 Hz，H-2，6)，6. 807 (2H，d，J = 8. 7 Hz，H-3，5) ;13C-NMＲ (125 MHz，CD3OD)δ:
121. 6 (s，C-1)，131. 7 (s，C-2，6) ，114. 7 (s，C-3，5) ，162. 0 (s，C-4) ，168. 9 (s，C-7)。以上数据
与文献［12］报道的数据基本一致，故鉴定化合物 2 为对羟基苯甲酸。
③ 化合物 3
白色粉末，三氯化铁反应呈阳性。ESI-MS m/z:165［M + H］+;1 H-NMＲ (600 MHz，CD3 OD)δ:
6. 33 (H，d，J = 15. 9 Hz，H-8)，6. 89 (2H，d，J = 8. 6 Hz，H-3，5) ，7. 54(1H，d，J = 8. 6 Hz，H-2，6) ，
7. 60 (1H，d，J = 15. 9 Hz，H-3，5) ;13C-NMＲ (125 MHz，CD3OD)δ:127. 7 (s，C-1)，131. 4 (s，C-2，
6) ，117. 1 (s，C-3，5) ，161. 5 (s，C-4) ，146. 9 (s，C-7) ，116. 3 (s，C-8) ，171. 6 (s，C-9)。以上数
据与文献［13］报道的数据基本一致，故鉴定化合物 3 为对羟基肉桂酸。
④ 化合物 4
淡黄色结晶粉末，三氯化铁反应呈阳性。ESI-MS m /z :153［M-H］－;1H-NMＲ(600 MHz，CD3OD)
δ:7. 51(H，brs，H-2)，7. 45(1H，d，J = 8. 8 Hz，H-6) ，6. 88(1H，d，J = 8. 2 Hz，H-5)。以上数据与文献
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第 6 期 王立升等:一点红化学成分分离及其原儿茶酸含量测定
［14］报道的数据基本一致，取原儿茶酸标准品进分析液相并与化合物 4 进行比对，经过验证两者保留
时间相同，混合后进液相无其他峰出现，故验证化合物 4 为原儿茶酸。
⑤ 化合物 5
白色粉末，三氯化铁反应呈阳性。ESI-MS m/z:199［M + H］+;1H-NMＲ(600 MHz，CD3OD)δ:7. 33
(2H，s，H-2，6)，3. 88 (2H，s，H-8，9) ;13C-NMＲ (125 MHz，CD3OD)δ:121. 44 (s，C-1) ，106. 93
(s，C-2，6) ，147. 49 (s，C-3，5) ，140. 12 (s，C-4) ，169. 30 (s，C-7) ，55. 44 (s，C-8，9)。以上数据
与文献［14］报道的数据基本一致，故鉴定化合物 5 为丁香酸。
图 1 原儿茶酸标准曲线
Fig. 1 Standard curve of protocatechuic acid
2. 2 原儿茶酸标准品线性关系考察结果
如图 1 所示，以峰面积为纵坐标，原儿茶酸含量为
横坐标绘制标准曲线，获得回归方程为 y = 23. 008x －
2. 2401(Ｒ2 = 0. 9995，n = 8)。该标准曲线在 10 ～
100 μg范围内线性关系良好，可以作为一点红中原儿
茶酸含量测定的标准曲线。
2. 3 一点红中原儿茶酸含量测定的方法学考察结果
稳定性试验结果:在 24 h内原儿茶酸的平均峰面
积 ＲSD 为 1. 16%(n = 6)，表明供测试的样品在 24 h
内稳定。
精密度试验结果:重复进样结果的 ＲSD为 1. 89%
(n = 6)，表明高效液相色谱的精密度符合要求。
重复性试验结果:测定同一批次一点红药材中原儿茶酸含量，由数据求得原儿茶酸含量的 ＲSD 为
2. 42%(n = 6) ，表明该方法的重复性良好。
2. 4 一点红中原儿茶酸含量的测定结果
一点红中原儿茶酸含量的测定结果如表 1 所示，其平均含量为 35. 40 μg /g，ＲSD = 1. 94%(n = 5)。
表 1 一点红中原儿茶酸含量测定结果
Tab. 1 Protocatechuic acid content in Emilia sonchifolia
序号 峰面积 /(mAU·s) 原儿茶酸含量 /(μg·g －1) 平均含量 /(μg·g －1) ＲSD /%
1 163. 40 36. 00
2 158. 22 34. 87
3 164. 60 36. 26 35. 40 1. 94
4 157. 53 34. 72
5 159. 63 35. 17
3 讨 论
目前对一点红的化学成分的研究主要通过传统的色谱方法，如硅胶色谱、反相色谱、凝胶色谱［15］
等，本研究中采用硅胶色谱和凝胶色谱法，结合半制备高效液相色谱，从一点红中分离鉴定了 5 个化合
物。柱层析色谱结合半制备高效液相色谱是一种快速，有效的分离鉴定植物中化学成分的方法。
已有研究报道表明，原儿茶酸具有抗氧化性和良好的抗乙肝病毒活性［16］，而一点红药材的提取物
也有具有治疗乙肝和抗氧化［17］的作用，因此，研究原儿茶酸在一点红中的含量能够为探索一点红的药
理活性化学成分来源及进一步开发利用一点红奠定基础。
4 结 论
本文从一点红中分离鉴定了 5 个化合物，分别为:对羟基苯乙酸、对羟基苯甲酸、对羟基肉桂酸、原
儿茶酸、丁香酸，除对羟基苯甲酸外均为首次从该植物中分离得到。
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广西大学学报:自然科学版 第 39 卷
采用 ＲP-HPLC方法测定一点红中原儿茶酸的含量，约为 35. 40 μg /g，并且验证了方法的稳定性和
重复性。实验结果表明该方法具有高效、快速、检测限低等特点，适用于一点红中原儿茶酸含量的测定。
参考文献:
［1］ 羊海军，魏蜜，崔大方 . 菊科植物一点红的资源价值及市场前景［J］． 中国野生植物资源，2009，28(6) :44-45．
［2］ 陈艺林 . 中国植物志［M］． 北京:科学出版社，1999:324．
［3］ 史新，王立升，庞赛，等 . 一点红药材中异槲皮苷的分离鉴定及指纹图谱研究［J］． 药物分析杂志，2012，32(5):
809-812．
［4］ 王伟 . 一点红总黄酮的提取和抗氧化抗炎活性研究［D］． 南宁:广西大学化学化工学院，2011．
［5］ 李秀信，王荣花，杨秀萍 . 一点红黄酮成分的分析及含量测定［J］． 西北植物学报，2003，4(1):671-673．
［6］ CHEMG D，ＲOEDEＲ E. Pyrrolizidine alkaloids from Emilia sonchifolia［J］． Planta Medica，1986(6) :484-486．
［7］ KOHLMUENZEＲ S，TOMEZYK H. Pyrrolizidine alkaloids of Emilia flammea［J］． Dissertationes Pharmaceuticae et Phar-
macologicae，1969，21(5) :433-441．
［8］ TOMASZ M，KAZIMIEＲZ G，ANNA W. Simultaneous determination of N-oxides and free bases of pyrrolizidine alkaloids
by cation-exchange solid-phase and ion-pair high-performance liquid chromatography［J］． J Chromatography A，2002，949
(1-2) :249-262．
［9］ TOMASZ M，KAＲINE N，KAZIMIEＲZ G，et al. On-line strcture characterization of pyrrolizidine alkaloids in Onosma stel-
lulatum and Emilia coccinea by liquid chromatography-ion-trap mass spectrometry［J］． J Chromatography A，2004，1056
(1-2) :91-97．
［10］韩明，叶少敏 . 山野菜一点红总多酚提取工艺的研究［J］． 广州城市职业学院学报，2008，2(1) :27-30．
［11］史辑，张芳，马鸿雁，等 . 千里光化学成分研究［J］． 中国中药杂志，2007，32(15) :1600-1602．
［12］杨涛，刘红娟，程雪梅，等 . 刺山柑茎和叶的化学成分研究［J］． 西北药学杂志，2011，26 (1) :16-18．
［13］何瑞杰，陆泰良，李晨，等 . 陕西荚蒾叶化学成分的研究［J］． 广西植物，2013，33 (6) :883-886．
［14］贾陆，郭海波，敬林林，等 . 地桃花化学成分研究 . Ⅱ. 酚酸类等化学成分［J］． 中国医药工业杂志，2009，
40(10):746-749．
［15］邹小华，赵超，龚小见，等 . 一点红化学成分研究［J］． 中国药学杂志，2012，47 (23) :1891-1894．
［16］刘厚佳，胡晋红，孙莲娜，等 . 原儿茶酸等化合物对 HBV DNA 转染人肝癌细胞株的作用［J］． 第二军医大学学
报，2001，7(1) :661-663．
［17］彭妹，庞丽，张艳华，等 . 花红片中七种中草药抗氧化活性研究［J］． 广西大学学报:自然科学版，2013，38(3) :
554-558．
(责任编辑 张晓云 裴润梅)
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