全 文 ：高效液相色谱 AccQ.Tag法测定野苦苣菜氨基酸成分
赵志强
(北京农业职业学院 ,北京　 102442)
　　苦苣菜 ,主要分布于我国西北 、华北 、东北等地 。
苦苣菜富含氨基酸 ,其中精氨酸 、组氨酸对浸润性肝
炎有一定疗效。近年来 ,苦苣菜的保健功能日益受
到人们的重视。
　　由于高效液相色谱 AccQ.Tag法采用柱前衍
生 ,具有衍生物稳定时间长 、准确度高 、重现性好等
优点 , 广泛用于各种类型样品的氨基酸成分分析 。
笔者选用 AccQ.Tag法对北京地区野苦苣菜氨基酸
成分进行了测定 。
1　实验部分
1.1　主要仪器与试剂
　　高效液相色谱仪:1525型 ,双泵 、7725i手动进
样器和 2487紫外检测器 ,美国 Waters公司;
　　AccQ-Tag荧光衍生试剂:6-氨基喹啉基-N-羟
基琥珀酰亚胺基甲酸酯;
　　乙腈:色谱纯;
　　水解氨基酸标准:含有 2.5 mmol/L17种标准
氨基酸 ,美国 Waters公司;
　　盐酸:6 mol/L,优级纯;
　　乙醇 、三水乙酸钠 、磷酸氢二钠:分析纯。
1.2　溶液配制
　　流动相 A液:美国 Waters公司提供贮备液 ,用
之前取 100mL贮备液加纯水 900mL混匀。
　　流动相 B液:分别量取 600 mL乙睛 , 400 mL纯
水 , 混匀 ,超声波脱气 1min备用 。
　　样品稀释液:取 710 mgNa2 HPO4 ,加超纯水至
1 000mL, 用 10%磷酸 -乙腈(体积比为 95∶5)调节
pH为 7.4,备用 。
　　样品水解液:将 1 g酚溶解于 100 mL6 mol/L
盐酸中 。
　　再干燥液:乙醇 -水 -三乙胺混合溶液 ,体积比
为 2∶2∶1。
1.3　实验方法
　　(1)样品处理
　　取整株苦苣菜切碎 , 于 105℃烘至恒重 , 然后
用研钵磨细 , 精确称取 100 mg左右样品放入 180
mm×18 mm试管中 , 加入 6 mol/L盐酸 10 mL、巯
基乙醇 20 μL、正辛醇两滴 , 混匀 , 冲氮 , 封管。于
110℃水解 24 h, 定容至 50mL, 混匀 , 用 0.45 μm
滤膜过滤 。取滤液 20 μL, 放入 6 mm×50 mm小
管 , 装入水解台 , 在 60 ～ 100 t压力下干燥 30 min,
加入 15μL再干燥液 , 混匀 , 干燥 20 ～ 30 min,待衍
生。
　　(2)样品衍生
　　用可调移液器吸取 10 μL待衍生液 ,加入硼酸
缓冲溶液 70μL,置于旋涡混匀器混匀 ,边混匀边加
入衍生剂 20μL,混匀后于室温放置 1 min,用石蜡
封口 ,置于 55℃培养箱中 10 min,取出直接进样分
析。
　　(3)标准样品处理
　　用标准样品配制一系列不同浓度的标准溶液 ,
按照样品衍生方法衍生后 ,上机测试 ,绘制标准工作
曲线 。
1.4　色谱条件
　　色谱柱:AccQ-Tag氨基酸分析柱(3.9 mm×
150 mm);柱温:37℃;紫外检测器波长:248 nm;进
样量:10 μL;洗脱程序见表 1。
表 1　流动相梯度洗脱程序
时间 /min 流速 /mL· min-1 A体积分数 /% B体积分数 /%
初始 1.0 100 0
17.0 1.0 94 6
21.0 1.0 90 10
30.0 1.0 67 33
33.0 1.0 67 33
34.0 1.0 0 100
37.0 1.0 0 100
38.0 1.0 100 0
50.0 1.0 100 0
2　结果与讨论
2.1　野苦苣菜中氨基酸组分及含量分析
　　野苦苣菜氨基酸组分用定性保留时间 ,定量用
外标法。野苦苣菜氨基酸组分色谱图见图 1,除色
氨酸被水解破坏外 ,可以分离出 17种氨基酸 。野苦
苣菜氨基酸组分及含量见表 2,其中精氨酸的含量
最高 ,占氨基酸总量的 14.95%。
　　收稿日期:2009-08-10
73赵志强:高效液相色谱 AccQ.Tag法测定野苦苣菜氨基酸成分
图 1　野苦苣菜氨基酸色谱图
表 2　野苦苣菜中氨基酸组分及含量
组分 氨基酸 保留时间 /min含量 /mg· g-1
1 天冬氨酸 (Asp) 20.017 8.56
2 丝氨酸 (Ser) 21.213 9.28
3 谷氨酸 (Glu) 22.099 11.05
4 甘氨酸 (Gly) 23.099 11.26
5 组氨酸 (His) 23.615 13.51
6 精氨酸 (Arg) 24.786 52.29
7 苏氨酸 (Thr) 25.309 24.57
8 丙氨酸 (Ala) 25.971 21.83
9 脯氨酸 (Pro) 26.838 20.86
10 半胱氨酸 (Cys2) 28.622 19.85
11 酪氨酸 (Tyr) 29.511 23.19
12 缬氨酸 (Val) 29.886 23.57
13 蛋氨酸 (Met) 30.351 22.68
14 赖氨酸 (Lys) 31.238 28.77
15 异亮氨酸 (Ile) 32.090 22.24
16 亮氨酸 (Leu) 32.439 18.86
17 苯丙氨酸 (Phe) 33.533 17.58
2.2　精密度与回收试验
　　以精氨酸 、脯氨酸 、赖氨酸为对象进行精密度与
回收率试验 。在样品中分别加入不同浓度(25、50、
75 mg/g)的 3种氨基酸标样 ,以外标法定量 ,平行测
定 6次 ,计算相对标准偏差和平均回收率 , 结果列
于表 3。由表 3可知 , 3种氨基酸的平均回收率为
92.4% ～ 113.2%, 测定结果的相对标准偏差为
4.8% ～ 6.7%。说明该方法精密度和准确度较高 。
表 3　回收试验结果(n=6)
氨基酸 本底值 /mg· g-1
加标量 /
mg· g-1
测得量 /
mg· g-1 平均回收率 /% RSD/%
精氨酸 52.29
25
50
100
80.16
107.20
163.35
110.8 6.7
脯氨酸 20.86
25
50
100
43.82
66.27
115.32
92.4 4.8
赖氨酸 28.77
25
50
100
58.28
85.06
136.75
113.2 4.9
3　结语
　　采用高效液相色谱柱前衍生 AccQ.Tag法分析
野苦苣菜氨基酸组分 , 方法简单 , 精密度 、准确度
较高 。用此法分析 , 衍生物稳定时间长 , 代表性
好 , 除色氨酸被水解破坏外 ,可以分离出 17种氨基
酸。野苦苣菜中富含氨基酸 ,尤其是精氨酸的含量
很高 ,这可以部分证明野苦苣菜的药用价值 。
参 考 文 献
[ 1] 　常碧影.九十年代的氨基酸分析及发展动态 [ J] .中国农业科
学 , 1994(10):3-5.
[ 2] 　陈柏林 ,郭敏.高效液相色谱 Pico-Tag法测定野蕨菜氨基酸
成分 [ J] .色谱 , 1994(7):24-26.
[ 3] 　葛冬梅 ,宗雯雯 ,韩宝平.AccQ.Tag法测定酱油中游离氨基酸
组成 [ J] .中国调味品 , 2009(1):14-15.
车内空气质量标准国内尚无　车主维权难
　　车内甲醛等污染主要来自汽车仪表盘的塑料件 、地毯 、
车顶毡 、沙发 、胶水等。由于汽车空间窄小 、密闭性好 , 有害
气体对人体的危害比房屋室内的更大 ,严重者就可能导致贫
血 、白血病甚至致癌。随着车内空气质量引发的维权纠纷日
益增多 , 2004年 ,有关部门以 《室内空气质量标准 》为依据 ,
对汽车内的空气质量进行过一次监测 , 但在接受测试的
1175辆车中 , 全部检测项目均达标的仅有 52辆 , 占 6.18%。
　　2004年 6月 , 《汽车内环境质量标准 》起草专家小组成
立 , 计划 2006年出台该标准 ,因检测技术存在难点等原因被
搁浅。 2008年 3月 1日起 , 国内首次制定的检测车内空气污
染的标准——— 《车内挥发性有机物和醛酮类物质采样测定
方法》正式实施 ,迈出了改善车内坏境的艰难一步 , 但该《方
法》并未包含如何判定车内空气污染物超标等问题 , 使消费
者在维权的过程中无据可依。日前 , 相关部门透露 , 汽车内
空气质量标准正在紧张地制定中。有消息称 ,该标准有望于
今年年底出台。 (高)
首颗土壤湿度和海洋盐度观测卫星升空
　　不久前 ,由欧洲航天局(ESA)研发的全球首颗土壤湿度
和海洋盐度观测卫星(Smos)从俄罗斯西北部的普列谢茨克
发射场顺利升空 ,俄罗斯 “轰鸣”运载火箭承担了发射任务 。
　　欧洲航天局称 , 该卫星能精确地描绘出水在陆地 、海洋
表面及大气层间的交换情况 ,至少每 3 d绘出一幅地球土壤
湿度图 ,每 30d绘出一幅海水含盐量图。科研人员可根据
这些数据研究土壤湿度和海洋盐度的变化过程及对地球天
气的影响 ,从而提高气候变化及极端自然现象预测的准确
性 ,并了解地球冰层的情况。此外 , 在中短期天气预报 、农业
以及水资源管理等方面 , 这些数据也具有重要的应用价值。
　　Smos携带了一台展开直径约为 8 m、外形类似直升机螺
旋桨的综合孔径微波成像辐射计 , 整套系统采用折叠的方式
置于火箭之中。这台名为 Miras的科学仪器能通过对地球
表面微波变化的观测确定地球土壤的湿度和海水的盐度。
(英)
74 化学分析计量 2009年 ,第 18卷 ,第 6期