全 文 ：HPLC法测定马蓝根 、茎 、叶中靛玉红 、靛蓝的含量
侯惠婵 1 ,梁少珍 2
(1.广州市药品检验所 ,广东广州 510160;2.广州市药品检验所一分所 ,广东广州 510160)
　　摘要　目的:建立 HPLC法测定不同地区 、不同采收期马蓝根 、茎 、叶中靛玉红 、靛蓝的含量 , 为规范种植马蓝
和重新确定南板蓝根药用部位提供基础研究资料。 方法:用 C18柱 , 以甲醇-水(75∶25)为流动相 , 在 289 nm处测
定。结果:靛玉红 、靛蓝线性范围分别为 3.875 ～ 23.25 μg/ml、 3.05 ～ 18.3 μg/ml。回收率分别为 96.9%, RSD=
3.5%, n=5(靛玉红);96.6%, RSD=2.8%, n=5(靛蓝)。结论:非花果期 、花期 、果期马蓝的根 、茎 、叶中靛玉红 、
靛蓝的含量依次递减;同一株马蓝根 、茎 、叶中靛玉红 、靛蓝的含量依次递增。
关键词　马蓝;靛玉红;靛蓝;高效液相色谱
中图分类号:R282.71　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2006)07-0681-02
基金项目:广州市荔湾区科技局项目(20051106036)
　　马蓝 Baphicacanthuscusia(Nees)Bremek为爵
床科植物 ,其根茎和根为华南地区常用的 “南板蓝
根 ”,功效清热解毒 ,凉血 ,用于瘟病发斑 ,丹毒 ,流
感 ,流脑等 ,收载于《中国药典 》;其叶在华南地区常
作为 “大青叶 ”使用。资源调查结果 ,马蓝野生资源
已近枯竭 ,只有民间零星种植 ,作为染料或自用 。药
材市场近十年难觅正品 ,商品多为其同科近缘的曲
茎马蓝 、广西马蓝等伪品 〔1〕。近三年广州市南板蓝
根市场抽检合格率为 0。本课题在资源调查基础
上 ,开展规模种植 。本文建立 HPLC法测定不同地
区 、不同采收期马蓝根 、茎 、叶中主要成分靛玉红 、靛
蓝的含量 ,为规范种植马蓝和重新确定南板蓝根药
用部位提供基础研究资料 。
1 　仪器 、试剂及样品
岛津-10ATVP高效液相色谱仪 , SPD-M10AVP,
CBM-10A检测器 , HW色谱工作站。甲醇为色谱
纯 。靛蓝 、靛玉红均由中国药品生物制品检定所提
供 。样品:1号 ,广东绿步 ,无花 、果;2号 ,广东绿步 ,
有果;3号 ,广东罗定 ,无花 、果;4号 ,广东罗定 ,有
花;5号 ,广东鼎湖 ,无花 、果;6号 ,广东高要 ,有果 。
以上样品经华南植物研究所李泽贤研究员鉴定 ,均
为马蓝 Baphicacanthuscusia(Nees)Bremek(全株)。
2 　方法与结果
2.1 　色谱条件及系统适应性　色谱柱:Kromasil-
C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm);流动相:甲醇 -水(75
∶25);柱温 40℃;流速 1.5 ml/min;检测波长 289
nm;靛玉红 、靛蓝理论塔板数均在 4000以上 ,两组
份之间及与其他峰分离度达 10以上 。
2.2 　样品供试液的制备　精密称取经五氧化二磷
干燥至恒重的样品粉末(过三号筛),根 2 g,茎 1 g,
叶 0.2g,分别置索氏提取器中 ,加氯仿提取至无色 ,
提取液至旋转蒸发器中 , 40℃蒸干溶媒 , 残渣用甲
醇-氯仿(80∶20)分次溶解并定容至 25 ml容量瓶
中 ,作为供试品溶液 。
2.3　线性关系考察　靛玉红:精密称取经五氧化
二磷干燥至恒重的靛玉红 7.75 mg、靛蓝 6.1 mg,至
100 ml容量瓶中 ,加氯仿溶解并稀释至刻度 ,摇匀 ,
精密吸取 1、2、3ml,至 10ml容量瓶中 , 1、3ml至 20
ml容量瓶中 ,加甲醇释释至刻度 ,摇匀 ,即得浓度分
别为靛玉红:3.875、7.75、11.625、15.5、23.25 μg/
ml;靛蓝:3.05、6.1、9.15、12.2、18.3 μg/ml。按 2.1
色谱条件 ,进样 20 μl,以进样量为横坐标(μg),峰
面积为纵坐标绘制标准曲线 ,其回归方程分别为:靛
玉红:y=-3390.459+27881.311x, r=0.9995;靛
蓝:y=-6009.27+6451.5x, r=0.9992。
2.4　精密度试验　取靛玉红 、靛蓝混合对照品溶
液(制备见 2.3,浓度分别为 11.625、9.15 μg/ml),
精密进样 20 μl,按 2.1色谱条件 ,连续进样 5次 ,其
峰面积 RSD分别为靛玉红;1.2%;靛蓝:1.8%。
2.5　稳定性试验　取 6号样叶粉末约 0.2 g,按
2.2制备样品供试液 ,按 2.1色谱条件 ,在 0、2、4、8、
12、24h分别精密进样 10μl,其峰面积 RSD分别为
靛玉红;1.8%;靛蓝:2.0%。
2.6　重复性试验　取 6号样叶粉末约 0.2 g,按
2.2制备样品供试液 5份 ,按 2.1色谱条件 ,分析 、
计算样品浓度 ,结果 ,靛玉红平均浓度为 0.182%,
RSD=1.9%, n=5;靛蓝平均浓度为 0.178%, RSD
=2.0%, n=5。
2.7　加样回收试验　取 6号样叶粉末约 0.1 g,精
密加入 0.18 mg靛玉红和靛蓝对照品 ,按 2.2制备
样品供试液 5份 ,按 2.1色谱条件 ,分析 、计算回收
率。结果平均回收率为 96.9%, RSD=3.5%, n=5
·681·中药材第 29卷第 7期 2006年 7月
DOI :10.13863/j.issn1001-4454.2006.07.019
(靛玉红);96.6%, RSD=2.85, n=5(靛蓝)。
2.8 　样品测定　按 2.2制备样品供试液 ,按 2.1
色谱条件 , 靛玉红 、靛蓝对照品浓度:11.625、9.15
μg/ml,对照品进样 20 μl,样品 5 ～ 20 μl,以外标法
计算 , 1 ～ 6号样品测定结果见表 1。
　表 1 　样品含量测定结果(%)
编号 1绿步 2绿步(有果) 3罗定 4罗定(有花) 5鼎湖 6高要(有果)
根 靛玉红 0.0025 0.00013 0.005 0.00013 0.0022 0.0008
靛蓝 0.044 0.0003 0.034 0.0041 0.033 0.014
总量 0.0465 0.00043 0.039 0.00423 0.0352 0.0148
茎 靛玉红 0.0053 0.0045 0.018 0.0015 0.0145 0.0139
靛蓝 0.201 0.056 0.124 0.048 0.096 0.079
总量 0.2063 0.0605 0.142 0.0495 0.1105 0.0929
叶 靛玉红 0.048 0.030 0.273 0.020 0.201 0.182
靛蓝 0.730 0.160 0.270 0.281 0.304 0.178
总量 0.778 0.190 0.543 0.301 0.504 0.360
　表 2 　马蓝根 、茎 、叶占全株重比例
编号 1 2 3 4 5 6
根 15.2% 8.3% 16.2% 14.9% 12.5% 18.2%
茎 42.4% 75.0% 59.5% 57.4% 50.0% 67.4%
叶 42.4% 16.7% 24.3% 27.7% 37.5% 14.4%
3 　讨论
3.1 　靛玉红 、靛蓝在氯仿 、丙酮中溶解及在甲醇中
溶解稍差 ,本法是反相色谱法 ,以丙酮 、氯仿作溶剂 ,
峰形受影响 ,经比较试验 ,用甲醇-氯仿(80∶20)作溶
剂 ,效果较好 。
3.2 　本文参照 《中国药典 》2005年版大青叶中靛
玉红的含量测定方法 ,在 200 ～ 400 nm扫描 ,结果靛
玉红 、靛蓝在 289 nm处有最大吸收 ,且被测组分与
其他组分分离良好。
3.3　《中国药典》2005年版南板蓝根标准只有定
性鉴别(显微 、化学反应 、鉴别靛玉红 、靛蓝的薄层
色谱)。采用本文方法对马蓝根 、茎 、叶中靛玉红 、
靛蓝进行定量分析 ,两峰分离度达 10以上;在靛蓝
峰前方有一小峰 ,与靛蓝 、靛玉红两主峰构成马蓝的
特征图谱 ,可与伪南板蓝根图谱相区别 。本法既可
定量 ,也可作为南板蓝根专属的定性鉴别方法。
3.4　本文对马蓝根 、茎 、叶中靛玉红 、靛蓝定量结
果(总量 ,见表 2),非花果期 、花期 、果期马蓝的根
(或茎 、叶)中含量依次递减 ,验证了传统经验夏秋
二季(非花果期)采收的正确性。
3.5　马蓝为多年生草本 ,根部不发达 ,同一株马蓝
中 ,根 、茎 、叶的比例 ,茎最多(40% ～ 75%),根最少
(8% ～ 18%)(见表 2);又从表 2可知 ,同一株马蓝
中茎的含量比根高 10多倍 。 《中国药典 》南板蓝根
的药用部位为根茎和根 ,浪费了大量的地上茎。综
上所述 ,作者认为把南板蓝根的药用部位重新确定
为茎 、根较为合理。
3.6　《中国药典》2005年版大青叶标准规定大青
叶为十字花科菘蓝的叶 ,含靛玉红不少于 0.020%。
本文测定的马蓝叶含靛玉红均不少于 0.020%,均
符合大青叶含量标准;在华南地区民间 ,一直把马蓝
叶当大青叶使用 ,因此笔者认为马蓝叶有望作为大
青叶的另外一个来源。
参 考 文 献
[ 1] 侯惠婵.南板蓝根的质量考察.广东药学 , 1997, 7(2):
24.
(2006-03-23收稿)
DeterminationofIndirubinandIndigoinBaphicacanthuscusia(Nees)BremekbyHPLC
HOUHui-chan, LIANGShao-zhen
(GuangzhouInstituteforDrugControl, Guangzhou510160, China)
Abstract　Objective:ToestablishamethodforcontentdeterminationofindirubinandindigoinBaphicacanthuscusia(Nees)
Bremek.Method:HPLCwasusedwithC
18
column, methanol-water(75∶25)asmobilephaseanddetectingwavelength289nm.
Results:Therangelinearcurvewas3.875 ～ 23.25 μg/ml(indirubin), 3.05 ～ 18.3 μg/ml(indigo).Theaveragerecoverywas
96.9%, RSD=3.5%, n=5 (indirubin);96.9% RSD=2.8%, n=5 (indigo).Conclusion:Themethodisproperforthequality
controlofBaphicacanthuscusia(Nees)Bremek.
Keywords　Baphicacanthuscusia(Nees)Bremek;Indirubin;Indigo;HPLC
《中药材 》杂志为国家首批公布的可登处方药广告的专业媒体 。
·682· 中药材第 29卷第 7期 2006年 7月