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还阳参止咳平喘活性部位的研究



全 文 :学者对于怎样从中药中筛选和研制出适合中国国情 、易于推广应
用 、高效低毒或无毒的新的免疫抑制剂更寄予厚望。
参考文献:
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收稿日期:2006-08-24; 修订日期:2006-12-12
基金项目:国家中医药管理局青年课题(No.2000JQ13)
作者简介:倪 艳 (1965-),女(汉族),山西五寨人 ,现任山西省中医药研
究院主任药师 ,学士学位 ,主要从事中药的药效物质基础及制剂的现代化
研究.
还阳参止咳平喘活性部位的研究
倪 艳1 ,刘振权 2 ,康 永 1 ,李惠娟1
(1.山西省中医药研究院 ,山西 太原 030012; 2.北京师范大学资源学院 ,北京 100875)
摘要:目的 比较还阳参不同提取物止咳平喘作用 , 为寻找确定其止咳平喘有效部位提供实验基础。方法 制备还阳参
不同提取物 , 观察其对浓氨引起的小鼠咳嗽以及组胺乙酰胆碱引起的豚鼠哮喘的影响 。结果 还阳参石油醚提取物的 H2
-1部位对氨水刺激引起的小鼠咳嗽有明显的止咳作用;正丁醇提取物的 HD-2部位对组胺和乙酰胆碱引起的豚哮喘有
抑制作用。结论 明确了还阳参止咳平喘的物质基础 , 为还阳参止咳平喘的临床功效提供了科学依据。
关键词:还阳参; 止咳平喘; 活性部位
中图分类号:R285.5  文献标识码:A  文章编号:1008-0805(2007)03-0519-02
StudyontheActiveFractionwithRelievingCoughandAsthmafrom TibetanHawks-
beardRoot
NIYan1 , LIUZhen-quan2 , KANGYong1 , LIHui-juan1
(1.ShanxiTraditionalChineseMedicineResearchInstitute, Taiyuan, Shanxi030012, China;2.ResourceInsti-tute, BeijingNormalUniversityBeijing100875, China)
Abstract:ObjectiveTocomparetherelievingcoughandasthmaactionofdiferentextractisolatedfromTibetanhawksbeard
root, andsetupfoundationfortheexperimentwhichistosearchandascertaintherelievingcoughandasthmaactionofTibetan
hawksbeardroot.MethodsPreparedifferentextractfromTibetanhawksbeardroot, observetheimpactofthemonthemousecough
causedbydeeperammoniaandtheguineapigasthmacausedbyhistamineandacetylcholine.ResultsTheH2 -1 fractioninthepetroleumetherextractionfromTibetanhawksbeardroothadgotrelievingcoughactionagainstmousecoughcausedbydeeperam-
monia;TheHD-2 fractioninthen-butylextractionhadinhibitiononGuineapigasthmacausedbyhistamineandacetylcho-
line.ConclusionAscertainthesubstancebasisoftherelievingcoughandasthmaactionofTibetanhawksbeardroot, andsupply
scientificgistforrelievingcoughandasthmaclinicefficacyofTibetanhawksbeardroot.
Keywords:Tibetanhawksbeardroot; Relievingcoughandasthma; Activefraction
  还阳参为菊科植物屠还阳参 CrepisturczaniowiiC.A.Mey.的
全草 , 别名屠还阳参 、驴打滚儿草 ,主要分布在山西 、内蒙古一带 ,
资源丰富 , 为当地民间习用草药。文献记载本品味苦 , 性微寒 ,具
有益气 、止嗽平喘 、清热降火之功效 , 用于治疗支气管炎 、肺结核
等疾病 [ 1] 。经文献检索及专利查询 , 均未发现有关还阳参的研
究报道。本 f文对还阳参止咳平喘作用的有效部位进行了较为
系统的实验研究。现报道如下 。
1 材料
1.1 药品 取还阳参药材(采自山西省雁北地区山阴县一带)
3 kg, 粉碎 , 70%乙醇提取 , 提取液滤过 , 回收乙醇至无醇味 ,加适
量水分散 ,依次用石油醚 ,醋酸乙酯 、正丁醇萃取 ,分别减压回收
溶剂 , 干燥 ,得石油醚提取物(A)、醋酸乙酯提取物(B)、正丁醇
提取物(C)及水的提取物(D)。
取 A提取物上硅胶柱 , 以石油醚-醋酸乙酯(3∶1 ~ 1∶1)梯
度洗脱及甲醇洗脱 , 得 3个部位 ,暂命名为 H2-1, H2-2, H2-3。 经
理化鉴别及薄层色谱分析 , 初步表明 H2-1主要内含三萜及甾体
类成分 。取 C提取物上大孔吸附树脂柱 , 依次用水 、不同浓度的
乙醇为洗脱剂进行洗脱 , 分得四个部位 , 暂命名为 HD-1, HD-2,
HD-3, HD-4。经理化鉴别及薄层色谱分析 , 初步表明 HD-2内含
多种苷类成分 ,主要为三萜苷类(或甾体苷类)及木脂素苷类。
浓氨水(太原化肥厂化学试剂厂 , 批号 010108);磷酸可待因
(北京中顺制药厂 , 批号 20000205);枸橼酸(北京化工厂 , 批号
930305);磷酸组胺(上海丽珠东风生物技术有限公司 , 批号
0006058);氯化乙酰胆碱(北京化学试剂公司 , 批号 00602);氨茶
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.3 时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期
碱(山西临汾民康制药厂 ,批号 000703)。
1.2 动物 小鼠(昆明种),清洁(晋动(证)字第 A00-004号),体
重 150 ~ 200 g,均由山西省中医药研究院实验动物室提供。
1.3 仪器 402-超声雾化器(上海合力医疗器械厂)。
2 方法与结果
2.1 止咳实验 采用浓氨水引咳法 [ 2] 。 取昆明种小鼠 , 雌雄各
半 , 体重 18 ~ 22g。逐个放入 4L的干燥器内 ,用超声波雾化器以
4 ml/min的容量向密闭的干燥器内通入雾化的 25%氢氧化铵 15
s,迅速转移至倒扣的漏斗下 ,用带有钟型接头的听诊器在漏斗根
部听小鼠的咳嗽潜伏期和 2 min内的咳嗽次数 ,挑选潜伏期在 90
s内的敏感小鼠随机分组 , 24 h后按相应浓度给药 1次。给药后
1 h, 按前法氨水喷雾引咳 ,观察小鼠的咳嗽潜伏期和 2 min内的
咳嗽次数 [ 3, 4] , 以 t值检验药物组和对照组统计学差异的显著性 ,
结果见表 1。结果表明 , 与蒸馏水组比较 , 还阳参石油醚提取物
(A)1.0 g/kg能减少小鼠 2 min内的咳嗽次数 , 并能延长小鼠的
咳嗽潜伏期 , 有明显的止咳作用。
表 1 还阳参不同提取部位的止咳实验结果( x±s)
组别 剂量 2min咳嗽次数 咳嗽潜伏期 t/s
蒸馏水 10ml 16.4±10.1 60.4±17.3
磷酸可待因 0.1g· kg-1 5.9±4.2* 94.5±16.0*
A 1.0g· kg-1 6.9±4.1* 77.7±16.2*
B 1.0g· kg-1 8.5±8.2 70.3±23.6
C 1.0g· kg-1 10.1±8.9 65.3±28.8
D 1.0g· kg-1 9.7±5.2 72.5±14.9
  与蒸馏水组比较 , *P<0.05;n=10
从 A提取物中进一步分离得到 3个部位 H2-1, H2-2, H3-3,
同法进行止咳实验。结果见表 2。 表明 H2-1 0.8 g/kg能明显减
少小鼠 2 min内的咳嗽次数。
表 2 还阳参石油醚提取物不同洗脱部位的止咳实验结果( x±s)
组别 剂量 2min咳嗽次数 咳嗽潜伏期 t/s
蒸馏水 10ml 19.0±6.9 49.1±11.6
磷酸可待因 0.1g· kg-1 5.4±4.8* 77.3±28.1*H2-1 0.8g· kg-1 12.5±3.9* 49.5±8.7H2-2 0.8g· kg-1 24.6±9.9 47.1±10.3H3-3 0.8g· kg-1 18.1±8.8 58.1±20.6
  与蒸馏水组比较 , *P<0.05, n=10
进一步取 H2-1 0.8, 1.6, 3.2 g/kg3个剂量组进行同样的止
咳实验 , 结果均能减少小鼠 2 min的咳嗽次数 , 具有明显的止咳
作用。结果见表 3。
表 3 不同剂量对小鼠浓氨致咳的止咳作用结果( x±s)
组别 剂量 2min咳嗽次数 咳嗽潜伏期 t/s
蒸馏水 10ml 29.3±9.2 44.8±9.0
磷酸可待因 0.1g· kg-1 8.4±3.4* 74.6±11.0*
H2 -1 0.8g· kg-1 20.2±7.7* 54.8±13.2H2 -1 1.6g· kg-1 18.3±5.5* 52.3±10.8H2 -1 3.2g· kg-1 17.5±8.2* 49.1±10.3
  与蒸馏水组比较 , *P<0.05, n=10
实验结果表明 , H
2
-1部位为还阳参止咳作用的有效部位。
2.2 平喘实验 采用药物引喘法 [ 5] 。取豚鼠 ,体重 150 ~ 200 g,
雌雄各半。逐个放入 4 L密闭的干燥器内 ,用超声雾化器以 0.5
ml/min的容量向密闭干燥器内通入雾化的 0.1%磷酸组胺和
2%氯化乙酰胆碱混合液(1∶1)10 s, 观察豚鼠喘息潜伏期。挑
选潜伏期在 2 min内的敏感豚鼠 , 随机分组。 间隔 24 h, 按相应
浓度给药 1次。给药后 1 h, 按前法重新引喘 ,观察给药后豚鼠喘
息潜伏期 ,潜伏期大于 6 min者为完全保护 [ 5] 。 以 t值检验药物
组和对照组统计学差异的显著性 , 结果见表 4。结果表明 , 与对
照组比较 ,还阳参正丁醇提取物(C)1.0 g/kg可保护组胺和乙酰
胆碱引起豚鼠哮喘。
从还阳参正丁醇提取物中分离得到 HD-1, HD-2, HD-3, HD-4
4个部位 , 同法进行平喘实验 ,结果见表 5, 表明 HD-2可延长豚
鼠的哮喘潜伏期。
进一步取 HD-2, 0.2 , 0.4, 0.8 g/kg3个剂量组进行上述实
验 , 结果 3个剂量组均有保护组胺和乙酰胆碱引起的豚鼠哮喘的
作用 , 见表 6。由此 , 可确定还阳参 HD-2部位为还阳参平喘作用
的有效部位。
表 4 还阳参不同提取部位的平喘实验结果( x±s)
组别 剂量 哮喘潜伏期 t/s
蒸馏水 10ml· kg-1 84.1±18.9
氨茶碱 0.15g· kg-1 118.1±30.5*
A 1.0g· kg-1 110.6±35.8*
B 1.0g· kg-1 97.2±26.9
C 1.0g· kg-1 123.4±30.9*
D 1.0g· kg-1 87.6±30.8
  与蒸馏水组比较 , *P<0.05, n=10
表 5 还阳参正丁醇层不同洗脱部位的平喘实验结果( x±s)
组别 剂量 哮喘潜伏期 t/s
蒸馏水 10ml· kg-1 106.1±27.4
氨茶碱 0.15g· kg-1 >360*
HD-1 0.4g· kg-1 178.3±104.8*
HD-2 0.4g· kg-1 272.7±99.9*
HD-3 0.4g· kg-1 163.2±84.7
HD-4 0.4g· kg-1 156.2±92.8
  与蒸馏水组比较 , *P<0.05, n=10
表 6 HD-2不同剂量组的平喘实验结果( x±s)
组别 剂量 哮喘潜伏期 t/s
蒸馏水 10ml· kg-1 121.1±43.1
氨茶碱 0.15g· kg-1 338.0±66.7*
HD-2 0.2g· kg-1 196.8±97.6*
HD-2 0.4g· kg-1 286.3±82.0*
HD-2 0.8g· kg-1 230.8±82.0
  与蒸馏水组比较 , *P<0.05, n=10
3 结论
通过上述实验 ,为还阳参止咳平喘的临床功效提供了科学依
据 , 同时明确了还阳参止咳平喘的物质基础。实验结果表明 , 还
阳参石油醚提取物有明显的止咳作用 ,为还阳参止咳的主要有效
部位;其正丁醇提取物具有明显的平喘作用 ,为还阳参平喘的主
要有效部位。各有效部位的活性成分分离及作用机理探讨另文
报道。
参考文献:
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时珍国医国药 2007年第 18卷第 3期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2007VOL.18NO.3