全 文 ：脑组织已经被实验证实[ 5] 。结果表明 , BALB/C 小
鼠用于 HCMV 先天性感染致新生鼠肝炎模型的优
点如下:(1)BALB/C 小鼠个体差异小 ,遗传背景均
一 ,基因改造技术成熟 ,且生理生化和发育与人类相
似 ,试验结果精确可靠 ,与鼠相关的细胞类型 、免疫
球蛋白 、细胞因子等试剂已商品化 ,繁殖快 ,费用和
饲养要求低 。因此具有较高的可行性 、可重复性和
经济性。(2)感染小鼠分娩新生鼠模拟了 HCMV 在
自然宿主中的一些主要先天性感染特征;使该疾病
动物模型与人类疾病具有较高的相似性 。(3)在新
生小鼠肝组织的细胞水平和分子水平上均证实有
HCMV感染存在;故该模型研究所获资料可以证实
人类HCMV的垂直传播导致肝炎 。
参考文献:
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(收稿日期:2011-02-18)
基金项目:“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103-323)和大学生创新计划
＊通讯作者
文章编号:1007-4287(2011)09-1449-04
小飞蓬总黄酮对前列腺癌 PC-3M 细胞
生长侵袭的抑制作用
郭　 1 ,吴珊珊1 ,张丽红1 ,邱心如2 ,王医术1＊ ,严铭铭3＊
(1.吉林大学 病理生物学教育部重点实验室 ,吉林 长春 130021;2.吉林大学药学院 2009 级;3.长春中医药大学)
摘要:目的　研究小飞蓬(Erigeron canadensis L)总黄酮对前列腺癌 PC-3M 细胞生长和侵袭的影响。方法　采用
CCK-8法测定小飞蓬总黄酮对人前列腺癌 PC-3M的生长抑制作用。绘制在不同药物浓度作用下的细胞生长曲线。观
察不同药物浓度作用下细胞的形态学变化。 免疫组织化学染色检测小飞蓬总黄酮对前列腺癌 PC-3M 细胞作用后
MMP-9 表达情况。结果　(1)CCK-8 显示小飞蓬总黄酮抑制 PC-3M 细胞的生长 , IC50值为 0.097 mg·mL-1;(2)通过生长
曲线观察发现 , PC-3M 细胞的细胞数随着培养天数的增加而增多 ,但随着小飞蓬总黄酮浓度的增加其细胞增殖幅度降
低 , 明显低于未加药组(P<0.05);形态学观察显示 , 细胞变长 , 死亡增多 , 胞浆内颗粒增多 , 折光性差;(3)小飞蓬组
PC-3M 细胞MMP-9 的表达弱于不加药物组(P<0.001)。结论　小飞蓬总黄酮可抑制 PC-3M细胞生长 、侵袭。
关键词:前列腺癌;小飞蓬;细胞生长
中图分类号:R737.25 文献标识码:A
The effect of Erigeron canadensis L.on prostate cancer cell　GUO Jun , WU SHAN-shan , ZHANGLi-hong , et al.(Key Laborato-
ry of Pathobiology , Ministry of Education , J ilin University , Changchun 130021 , China)
Abstract:Objective　To study the inhibitory effect of Erigeron canadensis L.on the growth and invasiveness of human prostate
cancer cell(PC-3M)in vitro.Methods　The effect s of Erigeron canadensis L.on the growth of PC-3M cells were detected by CCK-
8 kit.The PC-3Mcells treated by 5-FU were used as positive cont rol group and thePC-3Mcells without any treatment as negative con-
trol group , the PC-3Mcells treated by Erigeron canadensis L.were used as experimental groups.Meanwhile the grrwth of PC-3M cells
after treated by Erigeron canadensis L.was assessed by cell growth curve.And the morphological changes of PC-3M cells under differ-
ent concent rations of medicine were observed.Immunocytochemical staining was used to evaluate MMP-9 expression level.Results　
Eigeron Canadensis L.inhibitedthe growth of PC-3M cells and the value of IC50was 0.097 mg·L-1.After treatment , the growth of PC-
3M cells slowed , and the cells became longth , adherence decreased.Drugs after the expression of MMP9 was significantly weaker than
—1449—中国实验诊断学　2011年 9月　第 15卷　第 9期
the control group(P<0.001).Conclusion　Erigeron canadensis L.inhibit cell growth , invasion of PC3M.
Key words:Prostate cancer;Erigeron Canadensis L;Cell growth
(Chin J Lab Diagn , 2011 , 15:1449)
　　前列腺癌是老年男性常见的恶性肿瘤 ,其死亡
率仅次于肺癌 。我国前列腺癌发病率较欧美国家
低 ,但随着老年人口的增加 ,有逐年增加的趋势。因
此 ,本实验研究小飞蓬总黄酮对前列腺癌 PC-3M 细
胞的抗肿瘤作用 ,观察小飞蓬总黄酮对前列腺癌生
长 、浸润的影响 ,为小飞蓬总黄酮可能应用于前列腺
癌的临床治疗提供实验基础。
1　材料与方法
1.1　材料
1.1.1　研究对象　前列腺癌PC-3M细胞 ,购于上海
中科院细胞研究所。
1.1.2　主要试剂 　CCK-8 购至 Dojindo 公司;免疫
组织化学染色试剂盒购至福州迈新生物技术公司;
MMP-9购至 BD 公司;小飞蓬总黄酮由长春中医药
大学提供 。
1.2　方法
1.2.1　细胞培养　PC-3M细胞培养于含 10%FCS的
H-DMEM 培养基中 ,于 37℃、5%CO2培养箱中孵育。
1.2.2　CCK-8试剂盒药物对 PC-3M 细胞增殖的影
响　取对数生长期 PC-3M 细胞 ,调整细胞浓度为 2
×104·mL-1 ,接种于 96孔板 ,100μL/孔。以小飞蓬
为实验组 ,按照浓度 1.28 、0.64 、0.32 、0.16 、0.08 、0.
04 mg·mL-1分成 6 组 ,每组两个复孔;5-FU 为阳性
对照组 ,按照 0.08 、0.04 、0.02 、0.01 、00.05 、0.002 5
mg·mL-1分成 6组 ,每组两个复孔;不加药组为阴性
对照组 ,设三个复孔 。37℃、5%CO2 孵育 72 h后 ,轻
轻吸掉培养基 ,每孔加入含 10 μL CCK-8的 DMEM
100μL。同时 ,另设 2个孔为空白对照 ,每孔仅加入
含10μL CCK-8的 DMEM 0.1 mL。37℃、5%CO2 孵
育2.5 h 后 ,在 Bio-red 550酶标仪上 ,在 490 nm 波
长 ,测定各孔的吸光度值(A值)。按照细胞存活率
=(加药组 A值-空白对照 A值)/(阴性对照 A 值
-空白对照 A值)×100%,分别计算出小飞蓬 、5-FU
对PC-3M细胞的细胞存活率 ,得出 IC50值。
1.2.3　绘制生长曲线　取对数生长期PC-3M细胞 ,
调整细胞浓度为 1×104·mL-1 ,接种到 2块 24 孔板
上 ,1 mL/孔 。待细胞贴壁后 ,轻轻吸掉培养基开始
加药。根据 IC50值 ,小飞蓬组设 3 个浓度组 ,分别为
低剂量组(1/2 IC50值)、中剂量组(IC50值)、高剂量组
(2×IC50值),阳性对照组 5-FU 浓度为 IC50值 ,阴性
对照组不加药(0mg·mL-1)。每个浓度设 3个复孔 ,
37℃、5%CO2孵育 。共计数 7 天 。以培养时间为横
轴 ,以平均细胞数为纵轴 ,绘制生长曲线。
1.2.4　免疫细胞化学染色　取常规制备的细胞爬
片 ,水化15 min;0.5%Triton-X100 ,作用 15 min;过氧
化物酶阻断 15 min(A 液);非免疫动物血清(B 液)
30 min;加入一抗(稀释比例为 MMP-9 1∶200),4℃过
夜;加二抗(C 液 30 min);三抗(D 液 ,30 min)后DAB
发色 ,水洗终止;苏木精复染细胞核 ,常规脱水透明 ,
中性树脂封片 。结果判定 MMP-9 以胞浆内出现棕
黄色颗粒者为阳性。每张爬片选 5个不同视野采集
图像 ,直接统计阳性细胞的灰度值 ,单位为像素 。
1.2.5　统计学处理　计量资料 x±s表示 。单变量
两组资料之间的比较采用 t 检验 ,多组资料之间的
比较采用单因素方差分析 , P <0.05为差异有显著
性 。采用SPSS 14.0 统计软件分析。
2　结果
2.1　小飞蓬总黄酮对 PC-3M细胞的抑制作用
本研究应用 CCK-8 法检测发现 ,小飞蓬总黄酮
对 PC-3M 细胞株的生长有抑制作用 ,细胞存活率随
小飞蓬浓度升高而降低 , IC50值为 0.097 mg·ml-1 ,5-
FU对 PC-3M细胞的 IC50值为 0.009 mg·ml-1 , P <
0.05(见表 1 、2)。
表 1　CCK-8 试剂盒检测小飞蓬总黄酮对 PC-3M
细胞生长抑制作用
小飞蓬浓度
(mg·ml-1)
光密度(OD)平均值±
标准差(n=2)
细胞存活率
(%)
1.28 0.00225±0.008 2.93
0.64 0.0315±0.0065 4.11
0.32 0.05±0.014 6.52
0.16 0.1475±0.0095 19.25
0.08 0.591±0.012 77.12
0.04 0.6535±0.0158 85.27
表 2　显示 5-FU对 PC-3M细胞的抑制作用
小飞蓬浓度
(mg·ml-1)
光密度(OD)平均值±
标准差(n=2)
细胞存活率
(%)
0.08 0.078±0.004 10.18
0.04 0.1245±0.0165 16.25
0.02 0.22±0.034 28.71
0.01 0.356±0.022 46.46
0.005 0.601±0.031 80.31
0.0025 0.6215±0.0195 81.10
—1450— Chin J Lab Diagn ,September ,2011 , Vol 15 , No.9
2.2　小飞蓬作用 PC-3M细胞的生长曲线
通过生长曲线观察发现 , PC-3M 细胞的细胞数
随着培养天数的增加而增多 ,但随着小飞蓬总黄酮
浓度的增加其细胞增殖幅度降低 ,同时小飞蓬组细
胞增多的幅度明显低于未加药组(P <0.05),药物
的浓度越高 ,细胞增长幅度越小(P <0.001),而高
浓度组细胞增殖情况与阳性对照组即5-氟尿嘧啶组
近似 ,如下图 1。
2.3　细胞形态学变化
倒置相差显微镜下观察药物作用后细胞形态改
变:对照组(0 mg·ml-1)细胞 ,呈三角形或多角形 ,粘
附性好 , 折光性强(图 2.3-A)。小飞蓬高剂量组
(0.194 mg·ml-1)细胞变长 ,死亡增多 ,胞浆内颗粒
增多 ,折光性差(图 2.3-B);小飞蓬中剂量组(0.097
mg·ml-1)细胞变长 ,死亡较多 ,粘附性减弱 ,折光性
减弱(图 2.3-C);低剂量组(0.0485 mg·ml-1)细胞呈
多角型 ,死亡较少 ,粘附性好 ,折光性较强 ,状态较好
(图 2.3-D)。5-FU 在浓度为0.009 mg·ml-1时 ,细胞
呈不规则形 ,有部分细胞死亡 ,折光性减弱(图 2)。
图 1　PC-3M细胞在药物作用下的生长情况
图 2　小飞蓬作用后 24 小时后 PC-3M细胞的状态(×200)
2.4　PC-3M细胞中 MMP-9表达情况
本研究体外实验MMP-9 免疫细胞化学染色结
果提示 ,对照组MMP-9 表达为强阳性(图 3A),高浓
度组为阴性(图 3B),中浓度(图 3C)和低浓度组(图
3D)表达阳性 ,但小飞蓬组表达弱于对照组 ,且随着
浓度的增高表达下降(P <0.001)。5-FU 组(图 3E)
较弱。见表 3。
图 3　MMP-9 在 PC-3M细胞中的表达(×200)
表3　小飞蓬总黄酮对 PC-3M细胞MMP-9的表达的影响
组别 浓度(mg·mL-1) 灰度值(IOD)
对照 0 282356.4±1145.155
高浓度 0.194 33831.66±2685.641
中浓度 0.097 195137.5±1845.23　
低浓度 0.0489 272406.7±8804.595
5-fu 0.009 47449.05±20650.89
3　讨论
在男性泌尿生殖系统恶性肿瘤中 , 前列腺癌发
病率已居第 3位 ,影响着我国>50 岁男性的生活质
量和预期寿命[ 1] 。目前 ,治疗前列腺癌的药物种类
很多 ,对于激素依赖性前列腺癌 ,目前已经取得了较
好的治疗效果 ,但是对于激素非依赖性前列腺癌 ,还
没有很好的治疗药物。激素非依赖性前列腺癌治疗
—1451—中国实验诊断学　2011年 9月　第 15卷　第 9期
药物的研究 , 是今后面临的重点和难点。小飞蓬
(Erigeron canadensis L.)为菊科飞蓬属的一年生草本
植物 ,黄酮类成分为小飞蓬抗氧化 、抗肿瘤 、抗病毒 、
治疗心脑血管疾病的主要有效部位 。而据文献报
道 ,中药小飞蓬除了具有较强的抗氧化 ,抗衰老 ,抗
突变 ,调血脂的药理作用外 ,还具有较强的抗肿瘤作
用[ 2] 。本研究即通过体外实验观察小飞蓬总黄酮对
PC-3M细胞生长侵袭的抑制作用。
本研究应用 CCK-8试剂盒测得小飞蓬总黄酮可
以抑制人前列腺癌 PC-3M 细胞生长 , IC50值为 0.097
mg·mL-1 。进一步通过绘制 PC-3M细胞生长曲线观
察到 ,小飞蓬总黄酮对 PC-3M 细胞的生长有明显剂
量依赖性抑制作用 。形态学观察发现小飞蓬作用后
PC-3M 细胞随着药物浓度的改变 ,细胞由多角型 、附
壁性好逐渐变长 ,悬浮的死细胞较多 ,胞浆内颗粒增
多 ,折光性差。上述结果 ,表明小飞蓬总黄酮可抑制
PC-3M生长 。
肿瘤转移是恶性肿瘤的重要生物学特征之一 ,
也是恶性肿瘤患者预后不良的主要因素之一。MMPs
主要通过它们的降解活性降解 ECM 和释放和/或活
化生长因子 ,而且参与肿瘤血管的生成 ,从而在肿瘤
的侵袭和转移中发挥重要作用[ 3] 。在MMPs家族中 ,
MMP9在肿瘤的血管新生 、肿瘤细胞的侵袭和转移灶
的形成等过程中扮演着尤为重要的角色[ 4 ,5] 。研究
证实 ,在许多上皮源性恶性肿瘤中 ,发现有MMP-9的
表达和(或)活性增强[ 6-8] , 本研究体外实验 MMP-9
免疫细胞化学染色结果提示 ,对照组 MMP-9 表达为
强阳性 ,而小飞蓬组 MMPs的表达呈剂量依赖性 ,提
示小飞蓬总黄酮在体外通过抑制 MMP-9 的表达 ,从
而抑制PC-3M细胞侵袭能力 。
综上所述 ,小飞蓬可以抑制 PC3M 细胞生长 ,侵
袭 ,有望成为一种治疗 PC3M 的辅助药物。
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(收稿日期:2011-01-29)
科技书刊应使用阿拉伯数字的场合
　　总的原则应是:凡可以使用阿拉伯数字 ,而且又很得体的地方 ,均应使用阿拉伯数字 。
在科技书刊中 ,主要用于以下场合。
1　公元世纪 、年代 、年 、月 、日 、时刻　如:20世纪 90年代 ,1998-02-15 ,18:06:25。
2　物理量量值必须使用阿拉伯数字　如:1m(1米),30多V(30多伏)。
3　非物理量的量词(计数单位)前面的数字　如:插了1根管子 。
4　计数的数字　如:95%,500余。
5　元件 、仪器型号 、样品编号 、标准代号及其他序号　如:第 8天 。
6　文后参考文献(古籍除外)著录中的数字 。
—1452— Chin J Lab Diagn ,September ,2011 , Vol 15 , No.9