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中药丁香罗勒多糖含量的测定



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中药丁香罗勒多糖含量的测定
罗 轩 1 唐专辉 1 Stephen I Ekunwe2 林翠梧 1
(1.广西大学化学化工学院,广西 南宁 530004;
2.杰克逊州立大学生物系,美国 密西西比州 杰克逊 39217)

【摘 要】目的:测定丁香罗勒多糖含量,为丁香罗勒抗前列腺癌活性研究提供依据。方法:用苯酚-硫酸法测定丁香罗勒
水提取物中多糖的含量。结果:丁香罗勒多糖含量为 9.1%。结论 丁香罗勒多糖有可能为抗前列腺癌的主要成分之一,具有进
一步研究的价值。
【关键词】丁香罗勒;多糖;含量测定;抗前列腺癌
【中图分类号】R284.1 【文献标识码】A 【文章编号】1008-1151(2014)01-0052-02
Determination of Polysaccharide Content in Ocimum gratissimum L.
Abstract: Objective: The polysaccharide content of Ocimum gratissimum L. was determined to provide the data for anti-prostate
cancer research. Methods Phenol–sulfuric acid method was used to determine the content of polysaccharide in Ocimum gratissimum L.
Results: The total amount of polysaccharides in Ocimum gratissimum L. was 9.1%. Conclusion: The polysaccharides of Ocimum
gratissimum L. maybe one of components having anti-prostate cancer activity and is worth further studying.
Key words: Ocimum gratissimum L.; polysaccharide; content determination; anti-prostate cancer

丁香罗勒(Ocimum gratissimum L.)为唇形科(Lamiaceae)
罗勒属(Ocimum)植物,原产于非洲中部热带地区,现在我
国南方多省(如台湾、云南、福建、广东、广西等)都有栽
培。丁香罗勒是重要的香料、药用和食用植物。丁香罗勒油
具有抗菌[1,2]、抗真菌[3,4]、抵制疟原虫[5]等作用,是非洲民间
常用药[6]。由于丁香罗勒油具有抗菌和抗真菌作用,国内将其
用于治疗蟎虫、疥疮等皮肤病[7,8]。近几年,有研究表明,丁
香罗勒的水提取物有抑制血管再生和抗乳腺癌[9]活性。前期研
究表明其水提物都具有抑制前列腺癌细胞(PC-3)生长的作
用[10],且主要成分为多糖和蛋白质。目前,国内外对丁香罗
勒的研究都只集中于其挥发油活性和成分分析,而对于其多
糖成分的含量测定未见报道。本文研究了丁香罗勒中多糖含
量的测定,以期为其抗前列腺癌活性研究提供基础。
1 仪器与试药
冷冻干燥器(北京博医康实验仪器有限公司,FD-1A-50);
离心机(北京医用离心机厂,LG16-W);紫外光谱仪
(PerkinElmer,Lambda 35);分析天平(Mettler Toledo,
AL204);丁香罗勒由美国密西西比州杰克逊州立大学 Stephen
I.N. Ekunwe 教授提供,并经杰克逊州立大学的 Gregorio B.
Begonia 教授鉴定为丁香罗勒(Ocimum gratissimum L.);葡
萄糖(天津大茂化学试剂厂,分析纯);所用试剂均为分析研
究纯,水为蒸馏水。
2 实验部分
2.1 样品溶液的制备
丁香罗勒叶阴干后,粉碎成细粉。精确称取丁香罗勒粉
末 100 g,放入 1000 mL 圆底烧瓶中,并加入 400 mL 石油醚
(60~90 °C),脱脂 30 min。混合物过滤后,滤渣用少量石
油醚洗涤后,在通风橱挥去溶剂。滤渣转移至 1000 mL 圆底
烧瓶中,并加入 400 mL 蒸馏水,在 80~85 °C 水浴中回流
提取 2 h,重复提取三次。每次提取完后,趁热离心,再抽过
滤。合并滤液,减压浓缩至大约 150 mL。用 Sevage 法(正丁
醇–氯仿–样品 = 0.4:0.2:1)脱蛋白。重复多次,再无
沉淀。上清液加入无水乙醇至含醇量达 80%,放入 4 °C冰箱
中静置过液。之后,抽滤,沉淀用无水乙醇反复洗涤。滤渣
用冻干机干燥。精确称取以上精制多糖 200 mg,蒸馏水溶解,
定容至 100 mL,待测。
2.2 标准曲线的绘制
精密称取干燥至恒重(先在 60 °C 烘 1 h,后在 105 °C
总第 16 卷 173 期 大 众 科 技 Vol.16 No.1
2014 年 1月 Popular Science & Technology January 2014
【收稿日期】2013-12-13
【基金项目】广西大学博士启动基金项目(XBZ100817)。
【作者简介】罗轩(1980-),男,广西荔浦人,广西大学化学化工学院副教授,博士学位,硕士生导师,从事中药及天然
产物化学成分和活性研究。

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恒重)的葡萄糖 10.1 mg,蒸馏水溶解,转移至 250 mL 容量
瓶中,定容至刻度。分别吸取 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、
1.6、1.8 mL 葡萄糖标准溶液至 10 mL 比色管中加入蒸馏水至
2.0 mL,另吸取蒸馏水 2.0 mL 作空白对照,然后再加入 6%
苯酚溶液 1.0 mL 及浓硫酸 5.0 mL,静止 10 分钟,摇匀,室
温放置 20 分钟后,于 490 nm 测定吸光度。得到
。9,99957.0,0061.097.59 ==−= nrCA 结果表明,在 1~9
μg/mL 浓度范围内线性关系良好。
2.3 丁香罗勒多糖的含量测定
分别取 0.2、0.6、1.2 mL 样品溶液至 10 mL 比色管中加
入蒸馏水至 2.0 mL,另吸取蒸馏水 2.0 mL 作空白对照,然后
再加入 6%苯酚溶液 1.0 mL 及浓硫酸 5.0 mL,静止 10 分钟,
摇匀,室温放置 20 分钟后,于 490 nm 测定吸光度。按标准
曲线计算其浓度,取平均值后,按下式计算其含量:
%100200100]/)8[((%) ×÷××= VC多糖含量 其中 C 为根
据样品吸光度用标准曲线方程计算出的浓度,V是含量测定时
样品取用体积。
2.4 稳定性试验
取葡萄糖标准液 1.0 mL,置 10 mL 比色管中,按标准曲
线制备项下的方法,自“加入 5%苯酚溶液 1 mL”起,依法每
隔 0.5 h 测定吸光度值,连续 3 h,结果吸光度基本无变化,
葡萄糖稳定性的 RSD = 0.54%(n = 6)。葡萄糖标准液的稳定
性良好。
取样品溶液 0.5 mL,置 10 mL 比色管中,按标准曲线制
备项下的方法,自“加入 5%苯酚溶液 1 mL”起,依法每隔 0.5
h 测定吸光度值,连续 3 h,结果吸光度基本无变化,样品稳
定性的 RSD = 0.64%(n = 6)。样品溶液的稳定性良好。
2.5 精密度试验
取 6 只 10 mL 比色管,加入葡萄糖标准液 1.0 mL,按标
准曲线制备项下的方法,自“加入 5%苯酚溶液 1 mL”起,依
法重复测定吸光度(仪器自带精密度实验功能,同一样品可
测得 3个数据)。6个样品最大标准偏差 0.0003,结果表明精
密度良好。
2.6 加样回收率实验
精密吸取 0.4 和 0.6 mL 多糖样品液,分别加入等量的葡
萄糖标准溶液,蒸馏水稀释至总体积为 2.0 mL,按测定标准
曲线同样方法反应并测其吸光度值,测得回收率为 111.75%。
2.7 丁香罗勒多糖的含量计算
根据测定数据、标准曲线方程以及含量计算公式,计算
出丁香罗勒多糖含量为 9.1%。
3 讨论
本研究建立了快捷、简便、准确的丁香罗勒多糖含量测
定方法。由于多糖是中草药主要药效物质基础之一,具有抗
癌、抗炎、增强免疫力、抗疲劳等作用。丁香罗勒作为重要
的香料、药用和食用植物,未见多糖含量方面的报道。本研
究探索了苯酚–硫酸法测定丁香罗勒中多糖的含量,旨在为
深入研究该植物抗前列腺癌成分提供科学依据。

【参 考 文 献】
[1] Nakamura,C.V.; Nakamura,T.U.; Bando,E.; et al. Antibacterial
Activity of Ocimum gratisimum L. Essential oil. Memrias do Instituto
Oswaldo Cruz. 1994, 94(5):675–678.
[2] 莫小路,朱庆玲,郑宗超,等.丁香罗勒抗菌作用研究[J].现代
医药卫生,2009,25(16):2462-2463.
[3] Lemos, J.A.; Passos,X.S.;Fernandes, O.F.L.,et al. Antifungal activity
from Ocimum gratissimum L. towards Cryptococcus neoformans.
Memrias do Instituto Oswaldo Cruz. 2005, 100(1):55-58.
[4] Nakamura, C.V.; Ishida, K.; Faccin, L.C.; et al. In vitro
activity of essential oil from Ocimum gratissimum L. against
four Candida species. Research in Microbiology.
2004,155:579-586.
[5] Holetzl, F.B.; Nakamura, T.U.; Filho, B.P.D.; et al. Effect of
essential oil of Ocimum gratissimum on the Trypanosomatid
Herpetomonas samueplessoai.Acta Protozoologica. 2003,
42(2):269.
[6] Gill, L.S. Ethno medical uses of plants in Nigeria. Uniben
Press.1992.
[7] 吴涛.丁香罗勒乳膏治疗 128 例疥疮疗效观察[J].中国麻风
皮肤病杂志,2002,18(3):273.
[8] 姜燕山.丁香罗勒乳膏治疗寻常型银屑病 51 例疗效观察
[J].中国麻风皮肤病杂志,2003,25(4):229.
[9] Nangia-Makker, P.; Tait, L.; Shekhar, M.P.; et al. Inhibition
of breast tumor growth and angiogenesis by a medicinal herb:
Ocimum gratissimum. International Journal of Cancer. 2007,
121(4):884–894.
[10] Ekunwe,S.I.N.;Thomas,M.S.;Luo,X.;et al. Potential cancer-fighting
Ocimum gratissimum (OG) leaf extracts: Increased anti-proliferation
activity of partially purified fractions and their spectral fingerprints.
Ethnicity Disease.2010,20(S1):12-16.