全 文 ：·论著·
抱茎苦荬菜的化学成分及其抗氧化活性
赵春阳１，２姜明燕１，２（１．中国医科大学附属第一医院药学部，辽宁 沈阳１１０００１；２．中国医科大学药学院，辽宁 沈阳１１０００１）
［作者简介］　赵春阳，硕士，药师．研究方向：药品不良反应、呼吸系
统合理用药、药学统计学、中药成分在临床的合理应用．Ｅ－ｍａｉｌ：
ｉ５２ｃａｉｚｃｙ＠１６３．ｃｏｍ
　　［摘要］　目的　对菊科（Ｃｏｍｐｏｓｉｔａｅ）苦荬菜属 （Ｉｘｅｒｉｓ）植物抱茎苦荬菜正丁醇萃取层中的化学成分进行分离与鉴定。
方法　采用反复硅胶柱色谱﹑重结晶、Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０柱色谱﹑开放ＯＤＳ柱色谱、ＨＰＬＣ等方法进行分离纯化以获得单体
化合物。通过理化性质及波谱数据鉴定这些单体化合物的化学结构，利用１，１－二苯基－２－三硝基苯肼（ＤＰＰＨ）和２，２－联氮基－
双－（３－乙基苯并噻唑啉－６－磺酸）二氨盐（ＡＢＴＳ）法评价这些化合物清除自由基的活性。结果　从抱茎苦荬菜正丁醇萃取层中
分离得到５个化合物，分别鉴定为（＋）－松脂素－４－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷（１）、ｇｌｏｃｈｉｄｉｏｂｏｓｉｄｅ（２）、３，４，５－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ－１－Ｏ－β－Ｄ－
ｇｌｕｃｏｐｙ－ｒａｎｏｓｉｄｅ（３）、芒柄花苷（４）、大豆素（５）、木犀草素（６）、芹菜素（７）。利用ＤＰＰＨ和 ＡＢＴＳ法测试了这７个化合物清除
自由基的活性。结论　化合物１～５为首次从苦荬菜属植物中分离得到，化合物１、２、４～７显示了较强的自由基清除活性。
　　［关键词］　 抱茎苦荬菜；化学成分；分离；鉴定；抗氧化活性
［中图分类号］　Ｒ２８４　　　［文献标志码］　Ａ　　　［文章编号］　１００６－０１１１（２０１６）０１－００２４－０５
［ＤＯＩ］　１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６－０１１１．２０１６．０１．００７
Ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｉｘｅｒｉｓ　ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ
ＺＨＡＯ　Ｃｈｕｎｙａｎｇ１，２，ＪＩＡＮＧ　Ｍｉｎｇｙａｎ１，２（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ａｆｆｉｌｉａｔｅｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ　ｏｆ　Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，
Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｃｈｉｎａ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｓｈｅｎｙａｎｇ　１１０００１，Ｃｈｉｎａ）
［Ａｂｓｔｒａｃｔ］　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　Ｉｘｅｒｉｓ　ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｍｏｎｏｍｅｒｉｃ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉ－
ｓｏｌａｔｅｄ　ｂｙ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｎ　ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ　ｃｏｌｕｍｎ，Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０，ＯＤＳ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｃｏｌｕｍｎ　ａｎｄ　ＨＰＬＣ．Ｔｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅ　ｏｆ
ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　ｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｐｈｙｓｉｏ－ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔａｎｔｓ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ．２，２－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１－ｐｉｋｒｙｌｈｙｄｒａ－
ｚｙｌ（ＤＰＰＨ）ａｎｄ　３－ｅｔｈｙｌｂｅｎｚｔｈｉａｚｏｌｉｎｅ－６－ｓｕｌｆｏｎｉｃ　ａｃｉｄ（ＡＢＴＳ）ａｓｓａｙ　ｗｅｒｅ　ｕｓｅｄｔｏ　ｅｖａｌｕａｔｅ　ｔｈｅ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｉｓｏｌａｔｅｄ
ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｆｉｖｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　７０％ｅｔｈａｎｏｌ－ｗａｔｅｒ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ
（＋）－ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ－４－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒａｎｏｓｉｄｅ（１），ｇｌｏｃｈｉｄｉｏｂｏｓｉｄｅ（２），３，４，５－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ－１－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙ－ｒａｎｏｓｉｄｅ（３），ｏｎ－
ｏｎｉｎ（４），ｄａｉｄｚｅｉｎ（５），ｌｕｔｅｏｌｉｎ（６），ａｎｄ　ａｐｉｇｅｎｉｎ（７）．Ｍｅａｎｗｈｉｌｅ，ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ａｌ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｅｓ　ｗｅｒｅ　ｅｖａｌｕａｔｅｄ　ｂｙ
ＤＰＰＨａｎｄ　ＡＢＴＳ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　１－５　ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｔｈｉｓ　ｇｅｎｕｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ
１，２，４－７　ｅｘｈｉｂｉｔｅｄ　ｐｏｔｅｎｔ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ．
　　［Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ］　Ｉｘｅｒｉｓ　ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ；ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ；ｉｓｏｌａｔｉｏｎ；ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ；ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
　　抱茎苦荬菜（Ｉｘｅｒｉｓ　ｓｏｎｃｈｉｆｏｌｉａ）为菊科（Ｃｏｍ－
ｐｏｓｉｔａｅ）苦荬菜属（Ｉｘｅｒｉｓ）植物，又名苦碟子、满天
星等，盛产于我国东北、华北等地。《内蒙古中草药》
记载，抱茎苦荬菜味苦、辛，具清热解毒、排毒、止痛
之功效［１］。全世界苦荬菜属植物共有５０余种，主要
分布于中国、朝鲜、日本、越南以及前苏联等地。我
国共有苦荬菜属植物２０余种。自２０世纪８０年代
以来，国内外学者对抱茎苦荬菜全草的化学成分进
行了一系列的研究。发现该植物的化学成分比较复
杂，主要含黄酮类、三萜类及倍半萜内酯类化合物，
此外还含有香豆素、木脂素、甾醇、有机酸、氨基酸等
多种类型化合物［２，３］。
　　本研究采用ＤＰＰＨ 和 ＡＢＴＳ法对抱茎苦荬菜
干燥叶的各个萃取层（乙酸乙酯层、正丁醇层和水
层）进行了抗氧化活性的测定，发现其正丁醇层活性
较高。因此，本研究对正丁醇层进行了系统的化学
成分研究。采用反复硅胶柱色谱、重结晶、Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ－２０柱色谱、开放ＯＤＳ柱色谱、ＨＰＬＣ等方法进
行分离纯化，通过理化性质及波谱数据鉴定其化学
结构。从正丁醇萃取层中分离得到７个化合物，即
（＋）－松脂素－４－Ｏ－β－Ｄ－葡萄糖苷（１）、ｇｌｏｃｈｉｄｉｏｂｏｓｉｄｅ
（２）、３，４，５－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ－１－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙ－
ｒａｎｏｓｉｄｅ（３）、芒柄花苷（４）、大豆素（５）、木犀草素
（６）、芹菜素（７）。最后，利用ＤＰＰＨ 和 ＡＢＴＳ法测
试了所分离得到的７个化合物清除自由基的活性。
４２
药学实践杂志　２０１６年１月２５日第３４卷第１期
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ　２５，２０１６
１　仪器与材料
　　Ｂｒｕｋｅｒ－ＡＲＸ－３００型核磁共振仪（瑞士Ｂｒｕｋｅｒ
公司，ＴＭＳ内标），制备型高效液相（日本 ＨＩＴＡ－
ＣＨＩ公司），质谱仪（Ａｇｉｌｅｎｔ　ＬＣ－ＭＳ联用仪），ＣＤ
光谱仪为ＢｉｏＬｏｇｉｃ公司的 ＭＯＳ　４５０型号，扫描波
长为２００～４００ｎｍ，９６孔板（Ｎｅｓｔ　Ｂｉｏｔｅｃｈ公司），微
量旋光仪（日本，Ｊａｓｃｏ公司），台式离心机（美国，
Ｔｈｅｒｍｏ　ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ公司），精密电子天平（Ｍｅｔｔｌｅｒｔｏ－
ｌｅｄｏ公司）。
　　ＡＢＴＳ（华蓝化学试剂公司），ＤＰＰＨ（Ｓｉｇｍａ
Ａｌｄｒｉｃｈ），水溶性维生素Ｅ（Ｔｒｏｌｏｘ，华蓝化学试剂
公司），磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ，Ｓｏｌａｒｂｉｏ公司），Ｓｅｐｈａ－
ｄｅｘ　ＬＨ－２０ 柱色谱 （ＹＭＣ 公司），ＯＤＳ 柱 色 谱
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司），薄层色谱和柱色谱用硅胶（青岛
海洋化工厂），甲醇（色谱纯，天津市康科德科贸有限
公司），其他试剂（分析纯，山东禹王实业有限公司）。
　　抱茎苦荬菜于２０１３年６月购于辽宁省沈阳市，
由中国医科大学附属第一医院药学部中药师曲世为
鉴定为菊科苦荬菜属植物抱茎苦荬菜（Ｉｘｅｒｉｓ　ｓｏｎ－
ｃｈｉｆｏｌｉａ）的干燥全草。
２　提取分离
　　抱茎苦荬菜干燥全草７ｋｇ，用体积分数７０％的
乙醇溶液（３０Ｌ）加热回流提取３次，将提取液减压
浓缩至４Ｌ，回收溶剂，将浓缩液分别用等体积的乙
酸乙酯、正丁醇萃取３次，减压回收溶剂，得到乙酸
乙酯层浸膏２１６．２ｇ，正丁醇层浸膏３８９．０ｇ，水层浸
膏６３３．５ｇ。选取抗氧化活性最好的正丁醇萃取层
经过硅胶柱色谱，以二氯甲烷／甲醇梯度（１００∶０～
１∶１）洗脱，所得的馏分通过Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０柱色
谱洗脱，直接重结晶处理得到化合物６（６７ｍｇ）、７
（４０ｍｇ）。样品再经反复硅胶柱色谱，以二氯甲烷／
甲醇等溶剂系统进行梯度洗脱，重结晶，Ｓｅｐｈａｄｅｘ
ＬＨ－２０柱色谱，开放ＯＤＳ柱色谱，ＨＰＬＣ等手段处
理得到化合物１（２１ｍｇ）、２（２０ｍｇ）、３（１５ｍｇ）、４
（１７ｍｇ）、５（１１ｍｇ）。
３　结构鉴定
３．１　化合物１　黄色油状（甲醇），比旋光度为正，
［α］２０Ｄ ＝ ４３．１ （ｃ０．３，ＣＨ３ ＯＨ）。在 １　Ｈ　ＮＭＲ
（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）谱中，在δ６．７～７．１之间为
６个芳香信号，３．７５（６Ｈ，Ｓ）处为２个甲氧基的氢
信号，４．８７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，１″－Ｈ）为一个糖的
端基质子信号，根据其偶合常数可知该糖为一个β－
Ｄ－吡喃型糖。在１３Ｃ　ＮＭＲ谱（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）
谱中，δ１３５．３（１－Ｃ），１１０．３（２－Ｃ），１４９．０（３－Ｃ），
１４５．７（４－Ｃ），１１５．１（５－Ｃ），１１８．２（６－Ｃ），１３２．１
（１′－Ｃ），１１０．５（２′－Ｃ），１４９．０（３′－Ｃ），１４５．７ （４′－
Ｃ），１１５．２（５′－Ｃ），１１８．７（６′－Ｃ）为苯环上的碳信号，
图１　化合物１～７的结构图
５２
药学实践杂志　２０１６年１月２５日第３４卷第１期
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ　２５，２０１６
提示有２个苯环存在。δ８４．７（７－Ｃ），５３．５（８－Ｃ），
７１．２（９－Ｃ），８５．０（７′－Ｃ），５３．６（８′－Ｃ），７０．８（９′－
Ｃ）为６个脂肪碳信号。δ５５．６和５５．７为２个芳香
环上的甲氧基的碳信号。此外，１００．１（１″－Ｃ），７３．２
（２″－Ｃ），７６．８（３″－Ｃ），６９．６（４″－Ｃ），７７．０（５″－Ｃ），
６０．６（６″－Ｃ）为一组糖上的碳信号。由上可推测化
合物１为一个木脂素糖苷。６个脂肪碳的信号提示
可能为一个双四氢呋喃型木脂素。化合物１与文
献［４］对照数据基本一致，故鉴定为（＋）－松脂素－４－Ｏ－
β－Ｄ－葡萄糖苷 ［（＋）－ｐｉｎｏｒｅｓｉｎｏｌ－４－Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙｒ－
ａｎｏｓｉｄｅ］。
３．２　化合物２　淡黄色油状（甲醇）。在１　Ｈ　ＮＭＲ
（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）谱中：δ６．９５ （１Ｈ，ｓ，２－Ｈ），
６．７６ （２Ｈ，ｓ，２′，６′－Ｈ），６．７９ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．３Ｈｚ，５－Ｈ），６．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，６－Ｈ）为
苯环上的５个芳香质子信号。５．５１（１Ｈ，ｄ，Ｊ ＝
６．２Ｈｚ，７－Ｈ）为一个典型的苯并四氢呋喃型木脂
素７位的氢信号，偶合常数Ｊ ＝６．２Ｈｚ提示其为
反式构型。３．８４（３Ｈ，ｓ，３′－ＯＣＨ３），３．８０（３Ｈ，ｓ，
３－ＯＣＨ３）为２个甲氧基信号。２．６８（２Ｈ，ｔ，Ｊ ＝
６．９Ｈｚ，７′－Ｈ），１．９０（２Ｈ，ｐ，Ｊ ＝６．９Ｈｚ，８′－
Ｈ），３．３８（２Ｈ，ｍ，９′－Ｈ）提示存在一个丙醇结构
信号。此外，还存在１个糖端基质子信号δ４．２９
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），根据其偶合常数可知该糖为
β－Ｄ－吡喃型糖。在
１３　Ｃ　ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）谱
中，我们能看到１２个芳香碳信号，提示该化合物含
有两个苯环。δ８８．８（７－Ｃ），５５．２（８－Ｃ），６４．８（９－Ｃ），
３２．８（７′－Ｃ），３２．７（８′－Ｃ），７１．４（９′－Ｃ），为母核上的
其余６个碳信号，提示该化合物２为一个苯并二氢
呋喃 型 木 脂 素。５６．２（３′，３－ＯＣＨ３），５６．６（３′－
ＯＣＨ３）为两个甲氧基的碳信号。δ１０４．５、７８．０、
７７．８、７５．０、６９．９、６２．７为一组葡萄糖的碳信号。同
时，化合物２的ＣＤ谱在２８０ｎｍ处有负Ｃｏｔｔｏｎ效
应，结合７位Ｈ的偶合常数，确定其７，８位的绝对构
型为７Ｒ，８Ｓ。以上数据与文献［４］报道的ｇｌｏｃｈｉｄｉｏｂｏ－
ｓｉｄｅ的数据对照一致，故鉴定其为ｇｌｏｃｈｉｄｉｏｂｏｓｉｄｅ。
３．３　化合物３　白色无定型粉末（甲醇），体积分数
为 １０％ 硫 酸 显 色 剂 显 黄 色。 在 １　Ｈ　ＮＭＲ
（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ－ｄ６）谱中：δ６．３８（２Ｈ，ｓ）提示为
苯环上对称的氢，δ４．７８（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１′－
Ｈ）提示为糖的端基氢信号。δ３．７３（６Ｈ，ｓ）提示为
对称的２个 ＯＣＨ３，３．５９（３Ｈ，ｓ）为１个 ＯＣＨ３。
δ３．００～３．４０（４Ｈ，ｍ，２′，３′，４′，５′－Ｈ）为糖上其
余的氢信号。在１３Ｃ　ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）谱中，
δ１５４．７（１－Ｃ），１５３．８（３，５－Ｃ），１３３．１（４－Ｃ），９５．０
（１，６－Ｃ）为苯环上的６个碳信号。１０１．７（１′－Ｃ），
７８．０（５′－Ｃ），７７．６（３′－Ｃ），７４．０（２′－Ｃ），７０．８（４′－
Ｃ），６１．６（６′－Ｃ）为β－Ｄ葡萄糖的碳数据。６０．８（４－
ＯＣＨ３），５６．４（３，５－ＯＣＨ３）为３个甲氧基碳信号。
该化合物的碳氢谱数据与文献［６］报道数据基本一
致，故确定化合物３为３，４，５－ｔｒｉｍｅｔｈｏｘｙｐｈｅｎｙｌ－１－
Ｏ－β－Ｄ－ｇｌｕｃｏｐｙ－ｒａｎｏｓｉｄｅ。
３．４　化合物４　白色粉末（甲醇），体积分数为１０％
硫酸显色剂显黄色。在１　Ｈ　ＮＭＲ （３００ＭＨｚ，ＤＭ－
ＳＯ－ｄ６）谱中：δ８．４４（１Ｈ，ｓ，２－Ｈ）为异黄酮２位上
的氢信号，８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，５－Ｈ），７．２５
（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．３Ｈｚ，８－Ｈ），７．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝
８．８，２．３Ｈｚ，６－Ｈ）为一组苯环ＡＢＸ耦合系统，归
属为化合物 Ａ 环上５，６，８位上的氢信号，７．５４
（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２′，６′－Ｈ）和７．０１（２Ｈ，ｄ，Ｊ
＝８．７Ｈｚ，３′，５′－Ｈ）为一组苯环上的 ＡＡ′ＢＢ′耦合
系统上的氢信号。同时，３．７９（３Ｈ，ｓ）为一组甲氧
基信号，５．１３（ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，１″－Ｈ）为一组糖的端
基氢信号。在１３　Ｃ　ＮＭＲ （７５ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）谱中共
给出２２个碳信号，δ１７４．４ （４－Ｃ），１６１．３ （７－Ｃ），
１５９．１（４′－Ｃ），１５７．２ （９－Ｃ），１５３．１ （２－Ｃ），１３０．０
（２′，６′－Ｃ），１２７．０（５－Ｃ），１２４．１（１′－Ｃ），１１８．６（１０－
Ｃ），１１５．６（６－Ｃ），１１３．６（３′，５′－Ｃ），１０３．６ （８－Ｃ），
１００．０（１″－Ｃ），７８．１（５″－Ｃ），７７．７（３″－Ｃ），７４．１（２″－
Ｃ），７０．９（４″－Ｃ），６１．３（６″－Ｃ）。以上信号与文献［７］
报道的数据基本一致，确定化合物４为芒柄花苷
（ｏｎｏｎｉｎ）。
３．５　化合物５　白色针晶（甲醇）。在１　Ｈ　ＮＭＲ
（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）谱中：δ８．１４（１Ｈ，ｓ，２－Ｈ）为异
黄酮２位上的特征氢信号，７．９５ （１Ｈ，ｄ，Ｊ＝
８．８Ｈｚ，５－Ｈ），６．９７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．１Ｈｚ，８－Ｈ），
６．８８（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．８，２．１Ｈｚ，６－Ｈ）为一组苯环
ＡＢＸ耦合系统，并归属为化合物Ａ环上５，６，８位上
的氢信号，７．４０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２′，６′－Ｈ）和
６．８０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，３′，５′－Ｈ）为一组苯环上
的ＡＡ′ＢＢ′耦合系统上的氢信号。以上信号与文
献［８］报道的数据基本一致，确定化合物５为大豆素
（ｄａｉｄｚｅｉｎ）。
３．６　化合物６　黄色针晶（甲醇），Ｍｇ－ＨＣｌ反应阳
性，化合物６与对照品木犀草素共聚酰胺薄层板，斑
点颜色和Ｒｆ值完全一致，同样色谱条件下在ＨＰＬＣ
上的保留时间一致，故鉴定化合物６为木犀草素
（ｌｕｔｅｏｌｉｎ）。
３．７　化合物７　黄色针晶（甲醇），Ｍｇ－ＨＣｌ反应阳
性，化合物７与对照品芹菜素共聚酰胺薄层板，斑点
６２
药学实践杂志　２０１６年１月２５日第３４卷第１期
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ　２５，２０１６
颜色和Ｒｆ值完全一致，同样色谱条件下在 ＨＰＬＣ
保留 时 间 一 致，故 鉴 定 化 合 物 ７ 为 芹 菜 素
（ａｐｉｇｅｎｉｎ）。
４　抗氧化活性测试
　　研究表明抗氧化是预防衰老的重要步骤，自由
基会将细胞和组织分解，并影响代谢功能。如果人
体能够消除过多的氧化自由基，即能预防许多自由
基引起的及与老化相关的疾病。例如常见的癌症、
动脉硬化、糖尿病、心血管病、老年痴呆、关节炎等，
这些疾病的发生都被认为与自由基有一定的关
系［９］。从自然界中寻找新型的副作用小的天然抗氧
化剂，也是目前天然药物化学研究的一个热点。
　　待测样品清除ＤＰＰＨ 自由基的活性测定参照
文献［１０］进行，并稍做修改。将２．０ｍｌ　ＤＰＰＨ （１×
１０－４　ｍｏｌ／Ｌ）乙醇溶液置５ｍｌ具塞试管中，配好不
同浓度（０．０２、０．０５、０．１、０．２、０．５ｍｇ／ｍｌ）的待测样
品乙醇溶液后，每种浓度溶液加０．２ｍｌ至上述具塞
试管中，充分混合后，室温避光静置６０ｍｉｎ，于
５１７ｎｍ测定各混合液的吸光度值，吸光度值越低，
则说明该化合物清除ＤＰＰＨ自由基的活性越强。
　　待测样品清除 ＡＢＴＳ自由基的活性测定参照
文献［１１］中方法，并稍做改动。将ＡＢＴＳ溶解于ＰＢＳ
中，配制成７ｍｍｏｌ／Ｌ的ＡＢＴＳ溶液，使之与过硫化
钾（终浓度２．４５ｍｍｏｌ／ｌ）反应以生成ＡＢＴＳ·＋，室
温避光放置１６ｈ。将此 ＡＢＴＳ＋溶液用ＰＢＳ稀释，
使其在７３４ｎｍ吸光度达到（０．７０±０．０２），３０℃平
衡３０ｍｉｎ后可用于测定。将２．０ｍｌ　ＡＢＴＳ＋溶液
置５ｍｌ具塞试管中，配好不同浓度（０．０２、０．０５、
０．１、０．２、０．５ｍｇ／ｍｌ）的待测样品乙醇溶液后，每种
浓度溶液加０．２ｍｌ至上述具塞试管中，充分混合
后，静置２０ｍｉｎ，于７３４ｎｍ测定各混合液的吸光度
值，吸光度越低，说明清除 ＡＢＴＳ自由基的活性
越强。
　　化合物对ＤＰＰＨ 和ＡＢＴＳ＋的清除活性均用以
下公式计算：
　　ＤＰＰＨ／ＡＢＴＳ＋清除活性（％）＝［１－（Ｓ－ＳＢ）／
（Ｃ－ＣＢ）］×１００％
　　Ｓ、ＳＢ、Ｃ和ＣＢ分别代表样品、样品空白、对照
和空白对照的吸光度。即，Ｓ：０．２ｍｌ样品溶液＋
２０ｍｌ　ＤＰＰＨ或ＡＢＴＳ＋溶液；ＳＢ：０．２ｍｌ样品溶液
＋２．０ｍｌ　ＰＢＳ；Ｃ：０．２ｍｌ乙醇＋２．０ｍｌ　ＤＰＰＨ 或
ＡＢＴＳ＋溶液；ＣＢ：０．２ｍｌ乙醇＋２．０ｍｌ　ＰＢＳ。
　　活性结果如表１所示。在抱茎苦荬菜提取物的
不同萃取层中，正丁醇萃取层显示了较强的自由基
表１　抱茎苦荬菜提取物的各个萃取层和
单体化合物的自由基清除活性（ＩＣ５０，μｇ／ｍｌ）
样品 ＤＰＰＨ　 ＡＢＴＳ（ＩＣ５０，μｇ／ｍｌ）
乙酸乙酯层 ７４．２０±２．３４　 ６２．２１±２．３０
正丁醇层 ３２．３３±２．１５　 ２６．１６±４．１５
水层 １３１．４３±１．７５　 １４５．２０±３．４０
１　 １２９．２０±３．２２　 １２．１９±１．７４
２　 ７８．８９±１．１２　 １０．２１±２．１０
３ ＞２００　　 ５５．６１±２．５５
４　 ４４．２７±０．７５　 １４．９８±０．７１
５　 １６．２１±０．９３　 ８．５８±０．６８
６　 ２７．９０±１．４５　 ７．２９±０．９１
７　 １４．３１±０．６７　 ８．８２±０．７６
水溶性维生素Ｅ＊ １１．０６±０．５５　 ９．７２±０．１１
　　注：＊水溶性维生素Ｅ作为阳性对照药，实验结果用均数±标准
差表示，每组实验结论进行了３次平行实验
清除活性。因此，我们对正丁醇萃取层进行了系统
的化学成分研究，分离得到了７个单体化合物。在
对这７个单体化合物的抗氧化活性研究中发现，化
合物１、２、４～７均显示了较强的自由基清除活性，而
４个黄酮化合物（４～７）的活性强于２个木脂素糖苷
类化合物（１和２）。实验结果显示抱茎苦荬菜正丁
醇萃取层中所分离得到的黄酮和木脂素类化合物有
成为天然抗氧化剂的潜力。
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（下转第５１页）
７２
药学实践杂志　２０１６年１月２５日第３４卷第１期
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ　２５，２０１６
弊。高效液相色谱－质谱联用法和气相色谱法对仪
器的要求较高，较难实现实验室的常规监测。本方
法选用的试剂均以国产为主，成本低廉，方法操作简
便，分析周期短，灵敏度和专一性达到临床检测要
求。在所使用的条件下得到的日内和日间精密度均
较低。
　　富马酸喹硫平主要在肝脏经ＣＹＰ３Ａ４酶氧化
代谢，其在体内的代谢途径十分复杂，已确定的代谢
产物有１１种，其中７－羟喹硫平和７－羟－Ｎ－去烷基喹
硫平可能具有药理活性，但在血浆中浓度低，对富马
酸喹硫平药理活性的贡献并不大［１３，１４］。又由于在
方法建立过程中未能得到有关喹硫平代谢物的标准
品，故未做代谢物的浓度检测。
　　在本法测定条件下，笔者对本院常用的几种精
神科药物进行了保留时间的分析，结果表明，几种精
神科用药不影响富马酸喹硫平的色谱峰，另内源性
物质对富马酸喹硫平的色谱峰也无影响，因此，本方
法具有很高的特异性。
　　喹硫平血药浓度测定方法的建立对于日常监测
具有较大的意义，富马酸喹硫平有效血药浓度范围
目前仍存在争议，我院建立其血药浓度的 ＲＰ－
ＨＰＬＣ方法，对于异常浓度值进行分析，对指导临床
合理用药，发现药物不合理联用等具有重要的意义。
　　总之，本试验所建立的方法简便、准确，线性范
围宽，重现性好，灵敏度和特异性高，适用于富马酸
喹硫平血药浓度的监测，能够指导医生合理使用药
物，进行个体化给药。
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ｏｆ　ｑｕｅｔｉａｐｉｎｅ　ａｎｄ　ｔｗｏ　ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ　ｉｎ　ｈｕｍａｎ　ｐｌａｓｍａ　ｕｓｉｎｇ　ｒｅ－
ｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ　ＨＰＬＣ　ｗｉｔｈ　ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔ　ａｎｄ　ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ　ｄｅ－
ｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｊ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ａｎａ１，１９９９，２０（１－２）：２７１－２８２．
［收稿日期］　２０１４－１２－０５　［修回日期］　２０１５－０４－０１
［本文编辑］　顾文华
（上接第２７页）
［９］　Ｄｅｎｇ　Ｊ，Ｃｈｅｎｇ　Ｗ，Ｙａｎｇ　Ｇ．Ａ　ｎｏｖｅｌ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｎ－
ｄｅｘ（ＡＡＵ）ｆｏｒ　ｎａｔｕｒａｌ　ｐｒｏｄｕｃｔｓ　ｕｓｉｎｇ　ｔｈｅ　ＤＰＰＨ　ａｓｓａｙ［Ｊ］．
Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２０１１，１２５：１４３０－１４３５．
［１０］　Ｓｈａｒｍａ　ＯＰ，Ｂｈａｔ　ＴＫ．ＤＰＰＨ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ａｓｓａｙ　ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ［Ｊ］．
Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２００９，１１３：１２０２－１２０５．
［１１］　Ｗｕ　ＳＢ，Ｄａｓｔｍａｌｃｈｉ　Ｋ，Ｌｏｎｇ　Ｃ，ｅｔ　ａｌ．Ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅ　ｐｒｏｆｉｌｉｎｇ　ｏｆ
ｊａｂｏｔｉｃａｂａ（Ｍｙｒｃｉａｒｉａ　ｃａｕｌｉｆｌｏｒａ）ａｎｄ　ｏｔｈｅｒ　ｄａｒｋ－ｃｏｌｏｒｅｄ　ｆｒｕｉｔ
ｊｕｉｃｅｓ［Ｊ］．Ｊ　Ａｇｒｉｃ　Ｆｏｏｄ　Ｃｈｅｍ，２０１２，６０，７５１３－７５２５．
［收稿日期］　２０１５－０３－２２　［修回日期］　２０１５－０７－２３
［本文编辑］　顾文华
１５
药学实践杂志　２０１６年１月２５日第３４卷第１期
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ，Ｖｏｌ．３４，Ｎｏ．１，Ｊａｎｕａｒｙ　２５，２０１６