全 文 ：天山花楸不同的提取部分对心肌缺血性保护作用的筛选
张　芹 1, 2 ,李　根 1 ,唐　辉1 ,芮　鸣 1 ,李　乐 1
(1.省部共建新疆特种植物药资源教育部重点实验室 ,石河子大学药学院 ,
新疆石河子　832002;2.邢台医学高等专科学校 , 河北邢台市　054000)
收稿日期:2008 -10-10,修回日期:2008-12-13
基金项目:新疆生产建设兵团科技攻关计划医药卫生专项资金资助
项目(No2006GG52)
作者简介:张　芹(1973 -), 女 ,硕士 ,研究方向:药物分析与药效
学 , E-mail:shihezi2008@126.com;
唐　辉(1967-),女 ,教授 ,博士 ,硕士生导师 ,研究方向:
天然药物分析及新药研究 ,通讯作者 , Tel:0993-2057162
(O), E-mail:th pha@shzu.edu.cn
Screeningforanti-myocardialischemiafractions
fromextractofSorbusTianschanicaL
ZHANGQin1, 2 , LIGen1 , TANGHui1 , RuiMing1 , LILe1
(1.ColegeofPharmacy, ShiheziUniversity, KeyLaboratoryof
PhytomedicineResources＆ModemizationofTCM , ShiheziXin-
jiang　 832002, China;2.XingtaiMedicalJuniorCollege,
XingtaiHebei　054000, China)
中国图书分类号:R-332;R 282.71;R 284.2;R 322.11;R
542.202.2;R542.205.31
文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2009)02-0277-02
关键词:天山花楸;盐酸异丙肾上腺(ISO);抗心肌缺血 /缺
氧
Keywords:S.tianschanica;ISO;anti-myocardialischemiaand
hypoxiaactivities
　　蔷薇科 Rosaceae花楸属植物天山花楸 S.tianschanica, 为
维吾尔和哈萨克族民间常用药物。本研究采用系统溶剂提
取方法 , 依次以石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、正丁醇 、丙酮 、乙醇 、
水连续回流对天山花楸药材进行提取 , 使分为 7个提取部
分;然后观察了天山花楸对心肌缺血 /缺氧的作用的影响 , 旨
在为其治疗心肌缺血 /缺氧等疾病提供实验依据。
1　材料与方法
1.1　样品　天山花楸采自玛纳斯林场 ,海拔 2000 ～ 2500m,
由石河子大学药学院李鹏副教授鉴定为蔷薇科 Rosaceae花
楸属植物天山花楸 S.tianschanicaRupr。天山花楸提取物自
制(1 kg· L-1 , 本文中天山花楸各提取物组给药剂量均相当
于生药量)。
1.2　动物　昆明种小鼠体重 18 ～ 22g, ♀♂兼半 ,由石河子
大学动物实验中心提供。
1.3　小鼠异丙肾心肌急性缺血试验　小鼠随机分组 ,每组
10只 , 分别为:假模组 、模型组 、阳性药香丹注射液对照组 ,
天山花楸叶及果醇粗提液低 、高剂量组 , 叶及果水粗提液低 、
高剂量组 , 天山花楸石油醚 、氯仿 、乙酸乙酯 、正丁醇 、丙酮 、
乙醇 、水系统溶剂提取物组。
　　除阳性对照组腹腔注射香丹注射液 15 μg· g-1外 ,各组
动物均每日灌胃给药 1次 , 连续给药 14 d, 其中假模组 、模型
组给予生理盐水 0.02ml· g-1 , 低 、高剂量组分别给予 10、20
mg· g-1 , 各系统溶剂提取物组给予 25 mg· g-1。试验前禁
食不禁水 12 h, 末次给药 30 min后 , 除假造模组 , 均腹腔注
射异丙肾上腺素(ISO)15 μg· g-1 , 15 min后 , 眼眶取血 ,
3500r· min-1低温离心 10 min。取血清 , 置于 4℃冰盒 , 待
测。用比色法测定血清 LDH含量 , 黄嘌呤氧化酶法测血清
SOD活力 , TAB法测定血清 MDA含量。
1.4　小鼠异丙肾急性心肌缺氧试验　小鼠按性别和体重随
机分组 ,每组 12只 ,分别为:假模组 、模型组 、阳性药地奥心
血康胶囊对照组;天山花楸叶醇与水粗提液高剂量组;天山
花楸叶乙酸乙酯 、丙酮系统溶剂提取物组。
　　各组动物均每日灌胃给药 1次 , 连续给药 14 d, 其中假
模组 、模型组给予生理盐水 10 μl· g-1 ,阳性对照组给予地
奥心血康胶囊 0.39mg· g-1 ,天山花楸叶醇水粗提液高剂量
组 20 mg· g-1 ,各系统溶剂提取物组给予 25 mg· g-1。试
验前禁食不禁水 12 h。末次给药 30 min后 , 除假模组 , 均腹
腔注射异丙肾上腺素(ISO)15 μg· g-1 , 15 min后 , 将小鼠放
入常压缺氧装置中(参见文献 3),读取 3 min内滴定管液面
上升高度 ,即为小鼠在 3 min内的耗氧量。
2　结果
2.1　小鼠异丙肾心肌急性缺血试验　模型组中 LDH含量
高于假模组 ,两者相比具有统计学意义(P<0.01), 模型组
中 MDA含量高于假模组 , 两者相比具有统计学意义(P<
0.05),模型组中 SOD活力低于假模组 , 两者相比具有统计
学意义(P<0.01),上述结果说明造模成功。而与模型组比
较 ,阳性对照药香丹注射液 、天山花楸醇粗提液高剂量组 、天
山花楸乙酸乙酯提取物可使 LDH、MDA含量减小 , SOD活力
升高(P<0.05)。
2.2　小鼠异丙肾急性心肌缺氧试验结果　模型组中 3 min
的耗氧量明显高于假造模组 , 两者相比具有统计学意义(P
<0.01),上述结果说明造模成功;阳性药地奥心血康胶囊
组 、天山花楸叶醇提液高剂量组 、天山花楸叶乙酸乙酯提取
物组 、天山花楸叶丙酮提取物组中 3 min的耗氧量明显低于
模型组(P<0.05)。
3　讨论
3.1　本实验结果显示:天山花楸粗提物可提高心肌急性缺
血小鼠的血清 SOD活力 , 降低血清中 MDA、LDH含量 , 表明
天山花楸粗提物具有保护小鼠心肌急性缺血的作用。
3.2　通过小鼠 ISO诱发的急性心肌缺血常压缺氧试验和小
鼠对 ISO诱发的急性心肌缺血试验 ,证实天山花楸具有抗心
肌缺血 /缺氧作用 , 其有效提取部位为乙酸乙酯提取物 , 经试
管反应和圆形滤纸层析的成分特征反应 , 显示此提取物中黄
酮类 、酚类反应为阳性 , 提示天山花楸抗心肌缺血 /缺氧作用
的有效成分为总黄酮类化合物。
·277·中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2009 Feb;25(2):277 ～ 8
参考文献:
[ 1] 　潘志伟 ,王秋娟 ,杨　涓 ,等.淫羊藿苷对异丙肾上腺素致大鼠
急性心肌缺血的影响 [ J] .中国药理学通报 , 2007, 23(5):622
-5.
[ 1] 　PanZW, WangQJ, YangJ, etal.EfectsofIcarinonacutemy-
ocardialischemiainducedbyisoproterenolinrats[ J] .Chin
PharmBul, 2007, 23(5):622-5.
[ 2] 　JiaYX, YangJH, PanCS, etal.Intermedin(1-53)protectsthe
heartagainstisoproterenol-inducedischemicinjuryinrats[ J] .Eur
JPharmacol, 2006, 549(1-3):117-23.
[ 3] 　董淑英 ,童旭辉 ,吴华璞 ,等.白芍总苷对小鼠整体氧耗动态观
察 [ J] .中国基层医药 , 2002, 9(6):488-9.
[ 3] 　DONGSY, TongXH, WUHP, etal.Observationoftotalgly-
cosidesofpaconyontotaloxygenconsumptioninmice[J].ChinJ
PrimaryMedPharmacy, 2002, 9(6):488-9.
花椒毒素在小肠中的吸收机制研究
王来友1 ,毕惠嫦 2 ,周洪波 3 ,王素军1
(1.广东药学院药科学院 ,广东 广州　510006;2.中山大学药学院临床药理研究所 , 广东 广州　510080;
3.广东药学院实验中心 ,广东 广州　510006)
AbsorptionmechanismofXanthotoxininsmalin-
testine
WANGLai-you1 , BIHui-chang2 , ZHOUHong-bo3 ,
WANGSu-jun1
(1.SchoolofPharmacy, GuangdongPharmaceuticalUniversity,
Guangzhou　510006, China;2.InstituteofClinicalPharmacolo-
gy, SchoolofPharmaceuticalSciences, SunYat-senUniversity,
Guangzhou　510080, China;3.ExperimentalCenter, Guang-
dongPharmaceuticalUniversity, Guangzhou　510006, China)
中国图书分类号:R-332;R 284.1;R 329.2;R 322.45;
R333.3;R452;R986
文献标识码:A 文章编号:1001-1978(2009)02-0278-02
关键词:花椒毒素;Caco-2细胞模型;肠灌流;肠吸收
Keywords:Xanthotoxin;Caco-2 celmodel;intestinalperfu-
sion;intestinalabsorption
　　花椒毒素(Xanthotoxin, Xan)是一个具有强光敏性的呋
喃香豆素类化合物。 临床上通常口服花椒毒素后结合长波
紫外光照射来治疗中重度银屑病病人 ,即补骨脂素光化学疗
法。但是口服花椒毒素后血药浓度和达峰时间个体差异较
大 , 给部分病人造成严重的不良反应或治疗的失败 [ 1] 。因
此 , 本文研究不同浓度的 Xan在 Caco-2单层细胞模型和大
鼠肠灌流模型中的吸收情况 ,并对 Xan肠吸收机制进行了探
讨 , 从而为改进补骨脂素光化学疗法提供有用信息。
1　材料与方法
1.1　仪器与试药　Waters高效液相色谱系统。 WZS-50F2
双道微量注射泵(浙江大学医疗仪器有限公司);BT00-300T
型蠕动泵(保定兰格蠕动泵有限公司);外径 0.8 mm的 PE
管(PortexLtd, 英国);22 GAIV导管(BectonDickinson, 日
本)。
　　Caco-2细胞来源于 ATCC公司 , DMEM培养基 、非必需
收稿日期:2008 -09-06,修回日期:2008-12-16
基金项目:广东药学院科研启动基金资助项目(No2006YKX08);广
东省医学科研基金(B2008080);广州市重大资金资助项
目(No2003Z2-E4071)
作者简介:王来友(1977 -),男 , 博士 ,讲师 ,研究方向:生物药剂学
与药代动力学 , Tel:020-39352123;Fax:020-39352129, E-
mail:wanglaiyou@gdpu.edu.cn
氨基酸购自 Gibco公司;胎牛血清购自杭州四季青公司;花
椒毒素自合成;甲醇(色谱纯 , Dikma);其他试剂为分析纯。
1.2　细胞培养与毒性实验　Caco-2细胞按文献方法 [ 2]培养
约 21 d后 ,细胞形成紧密的单层 , 测定其电阻验证其有效
性。并以 MTT法测定 Xan对 Caco-2细胞的毒性 , 以安全浓
度范围的 Xan进行转运实验。
1.3　Caco-2单层细胞模型双向转运实验　分别在细胞两
侧加入 1.0、5.0和 12 mg· L-1的 Xan溶液 , 置 37℃孵育 ,于
给药后每 30 min收集 B面或 A面的溶液 , 每次取样后补足
相同体积的 HBSS至 Transwel中。
1.4　大鼠在体肠灌流实验　健康♂SD大鼠(禁食 12 h),清
洁级 ,体重 250 ～ 300 g(广东省医学实验动物中心提供 , 合格
证号:SCXX2003-0002), 腹腔注射 2.25 mol· L-1乌拉坦溶液
8 μl· g-1麻醉后 , 手术过程 、药物灌流方法同参考文献 [ 3] 。
血样每 5min采集一次 , 至 60 min, 采集于肝素化 EP管中 ,
16 000 r· min-1离心 3 min后分取血浆 , 待处理和测定。
1.5　样品分析与计算　色谱柱:NucleodurC18(4.6 mm×
250 mm, 5 μm);流动相:乙腈 -水(40∶60);流速:1.0 ml·
min-1;检测波长:247 nm;进样量:20 μl。
　　样品(血浆 、肠灌流液)处理参考文献 [ 4] 。 Caco-2细胞
模型中表观渗透系数 Papp参考文献 [ 2]中公式计算。 灌流液
中酚红浓度按文献 [ 5]测定。在肠灌流模型中 ,灌流流出液中
Xan浓度参考文献 [ 3]中的公式(1)校正 , 同时参考文献 [ 3]文
中的公式(2)、(3)、(4)分别计算 Xan在大鼠小肠中的肠管
通透率 Plumen、血管通透率 Pblood以及药物在肠管中的代谢分
数(fractionmetabolized, FM)。
1.6　统计学处理　实验数据以 x±s表示 , 运用 SPSS13.0
进行方差分析 ,比较各组变量间有无差异。
2　结果
2.1　样品测定方法学结果　HBSS溶液中 Xan的标准曲线
方程为:A=114347C+11295, R2 =0.9940。血浆中 Xan标
准曲线为:A=79015C+138.25, R2 =0.9979;灌流液中 Xan
标准曲线为 A=89625C+1097.8, R2 =0.9998。所得标准曲
线线性范围均为 0.2mg· L-1 -25.0 mg· L-1。 Xan的最低
检测限均为 10 μg· L-1。 Xan的保留时间为 11.05 min。灌
流液中酚红浓度标准曲线为:Y=0.0045X+0.0042, r2 =
0.9995。本实验所采用的色谱条件下 , 花椒毒素峰形良好 ,
·278· 中国药理学通报　ChinesePharmacologicalBuletin　2009 Feb;25(2):278 ～ 9