全 文 ：＊通讯作者
文章编号：１００７－４２８７（２０１５）０６－０８７７－０３
天山花楸叶总黄酮对心肌缺血再灌注损伤大鼠
心肌酶和心肌超微结构的影响
耿玮峥１，吕铭洋２，崔新明３，俞　星４＊
（１．延边大学２０１１级临床医学系２班，吉林 延吉１３３０００；２．延边大学医学院，吉林 延吉１３３０００；
３．吉林大学基础医学院，吉林 长春１３００２１；４．延边大学医学院预防医学教研室，吉林 延吉１３３０００）
　　天山花楸（ＳｏｒｂｕｓｔｉａｎｓｃｈａｎｉｃａＬ）系蔷薇科花楸
属植物，天山花楸主含黄酮类化合物、花青素、双联
苯酚、类山梨酸苷等［１，２］。药理试验显示：天山花楸
叶总黄酮可明显改善离体心脏心肌缺血／再灌注损
伤后左心室压（ＬＶＤＰ）和最大速率（±ｄｐ／ｄｔｍａｘ），
增加冠脉流量，清除ＤＰＰＨ 自由基、羟自由基和超
氧阴离子自由基，并抑制脂质过氧化反应［３］。天山
花楸叶具有抗氧化、抗衰老、抗心脑血管疾病作
用［４］。本文采用大鼠心肌缺血再灌注损伤模型，观
察了天山花楸叶总黄酮对心肌梗死面积、心肌酶及
线粒体超微结构改变的影响，并探讨该保护作用可
能机制。
１　材料与方法
１．１　动物　健康雄性大鼠，体重２１０－２４０ｇ，由吉林
大学实验动物中心提供，动物合格证号为ＳＣＸＫ－
（吉）２０１４－０００１。
１．２　药品和试剂　天山花楸叶总黄酮由白求恩医
科大学制药厂提供，纯度质量在９３．８％以上；地奥
心血康由成都地奥制药集团有限公司生产，批号：
１４１０１３。ＬＤＨ、ＡＳＴ测定试剂盒由中生北控生物科
技股份有限公司生产，批号分别为１４０５０１、１４０２１３，
ＮＯ、ＳＯＤ、ＭＤＡ测定试剂盒由南京建成生物工程
研究 所 生 产，批 号 分 别 为 ２０１４１６、２０１４０２１１、
２０１４０３２２。
１．３　仪器　ＬＤＺ５－２型离心机，北京医用离心机厂。
ＳＳＷ 型电热恒温水槽，上海博迅实业有限公司。
７２２分光光度计，上海精密科学仪器有限公司。
ＬＫＢ－Ⅲ型超薄切片机，瑞典。ＥＯＳ８８０型半自动血
液生化分析仪由意大利生产；电子秤为沈阳龙腾电
子称量仪器有限公司产品；ＢＩ－２０００图像分析系统
由成都泰盟科技有限公司生产。
１．４　方法
１．４．１　分组和给药　将雄性大鼠随机分为假手术
组、模型组、地奥心血康５０．０ｍｇ·ｋｇ－１组及天山花
楸叶总黄酮１０．０、２０．０ｍｇ·ｋｇ－１组，每组１０只。５
组大鼠连续给药１周。
１．４．２　实验方法　大鼠用乙醚麻醉后，仰位固定于
手术台，先用手术线在开胸部位做一荷包，自左侧第
４肋间开胸，暴露心脏，结扎左冠状动脉前降支
（ＬＡＤ），将心脏送回胸腔，挤出胸腔内血液和气体，
收拢荷包关闭胸腔。假手术组仅置缝线而不结扎冠
脉，其余组缺血３０ｍｉｎ后再次开胸，剪断手术线使
血流再通，１２０ｍｉｎ后，大鼠腹主动脉取血，３　５００ｒ／
ｍｉｎ，离心８ｍｉｎ，吸取上清液，按试剂盒方法测定血
清 ＡＳＴ、ＮＯ、ＬＤＨ 含量。测血清 ＭＤＡ 含量和
ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ活性。处死大鼠，剪下心脏，用生理
盐水洗净，剪掉右心室，将心脏顺房室沟从心尖到心
基部平行均匀的将心室切成５片（厚度在０．１ｃｍ左
右）。将心肌切片放置于１％ ＴＴＣ（ｐＨ　７．４）染液
中，在３７℃恒温水浴中染色３－５ｍｉｎ。通过医学图
像分析系统将各组心肌切片以图片形式摄入电脑，
经软件系统计算心肌梗死面积。心肌组织电镜观
察，各组动物取心肌组织，经脱水、包埋、超薄切片，
染色后在透射电镜下观察并拍照。
１．５　统计学处理　实验数据采用ｔ检验法进行统
计分析，结果以均数加减标准差（ｘ—±ｓ）表示，Ｐ＜
０．０５表示有统计学意义。
２　结果
２．１　天山花楸叶总黄酮对心肌缺血大鼠血清ＡＳＴ，
ＬＤＨ、ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ的影响
模型组大鼠血清 ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ水平均明
显高于假手术组（Ｐ＜０．０１），ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ活性明
显降低（Ｐ＜０．０１），表明心肌缺血再灌注损伤模型
成立。天山花楸叶总黄酮２０．０ｍｇ／ｋｇ剂量组及地
奥心血康组可明显降低血清ＡＳＴ、ＭＤＡ的含量（Ｐ
＜０．０５），天山花楸叶总黄酮１０．０ｍｇ／ｋｇ、２０．０
ｍｇ／ｋｇ剂量组及地奥心血康组可明显降低血清
ＬＤＨ的含量（Ｐ＜０．０５），与模型组比较差异有统计
—７７８—中国实验诊断学　２０１５年６月　第１９卷　第６期
学意义。
天山花楸叶总黄酮１０．０ｍｇ／ｋｇ、２０．０ｍｇ／ｋｇ
剂量组及地奥心血康组可明显降低血清 ＭＤＡ的含
量（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），天山花楸叶总黄酮１０．０
ｍｇ／ｋｇ、２０．０ｍｇ／ｋｇ剂量组及地奥心血康组可明显
升高血清ＳＯＤ含量（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），天山花楸
叶总黄酮２０．０ｍｇ／ｋｇ剂量组及地奥心血康组可明显
升高血清ＧＳＨ－Ｐｘ的含量（Ｐ＜０．０５），与模型组比较
差异有统计学意义。结果见表１。
表１　天山花楸叶总黄酮对心肌缺血大鼠血清ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ、ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ的影响（ｘ—±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
（ｍｇ·ｋｇ－１）
ＡＳＴ（ＵＩ／Ｌ） ＬＤＨ （ＵＩ／Ｌ） ＭＤＡ（ｎｍｏｌ／Ｌ） ＳＯＤ（Ｕ／ｍＬ） ＧＳＨ－Ｐｘ（Ｕ／ｍＬ）
假手术组 ——— １５５．８７±４４．１１　 ４２３．５４±７２．９０　 ６．７６±２．８７　 ２０３．６６±４５．７３　 ３８．９１±９．３８
模型组 ——— ２９５．３７±１１０．１９▲▲ ７９２．４１±３０６．２７▲▲ １１．７７±３．４７▲▲ １４５．８７±１８．１７▲▲ ２４．３４±８．２９▲▲
地奥心血康 ５０．０　 １９５．１５±６２．７８＊ ５５１．６４±２２８．３４＊ ８．６０±２．４３＊＊ １７０．７８±１４．７５＊ ３３．６９±９．２７＊
天山花楸叶总黄酮 １０．０　 ２４５．７５±９６．０６　 ５６２．５３±１７２．９３＊ ８．１６±２．６４＊ １７４．２１±１８．９５＊ ３０．２８±８．２４
２０．０　 １９９．４６±５０．２２＊ ４８４．６７±１２４．３９＊ ７．６９±２．０５＊＊ １８４．２３±２２．５８＊＊ ３２．４９±８．５０＊
　　注：与假手术组比较▲▲Ｐ＜０．０１，与模型组比较＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１
２．２　天山花楸叶总黄酮对心肌 ＭＩＳ、ＮＯ的影响
与假手术组相比较，模型组大鼠心肌 ＭＩＳ、ＮＯ
明显升高（Ｐ＜０．０１），天山花楸叶总黄酮１０．０、２０．０
ｍｇ／ｋｇ剂量组及地奥心血康组可明显降低 ＭＩＳ（Ｐ
＜０．０５），天山花楸叶总黄酮１０．０ｍｇ／ｋｇ、２０．０ｍｇ／
ｋｇ剂量组及地奥心血康组可明显降低血清 ＮＯ的
含量（Ｐ＜０．０５，Ｐ＜０．０１），结果见表２。
２．３　天山花楸叶总黄酮对大鼠心肌组织电镜观察
假手术组：心肌细胞组织结构基本正常，心肌细
胞膜、线粒体膜完整，嵴致密，基质颗粒均匀。模型
组：线粒体肿胀，嵴溶解破坏，有空泡，肌丝排列疏
松、断裂、紊乱，核周围细胞质空化，核皱缩，核膜表
面凹凸不平等形态学改变。地奥心血康组：线粒体
基质基本完整，基质颗粒部分消失，嵴排列欠整体，
少部分断裂，肌丝结构基本完整，线粒体损伤程度明
表２　天山花楸叶总黄酮对心肌梗死面积及ＮＯ的
影响（ｘ—±ｓ，ｎ＝１０）
组别
剂量
（ｍｇ·ｋｇ－１）
ＭＩＳ（％） ＮＯ（Ｕ／ｍＬ）
假手术组 ——— ０　 ４．３７±１．８９
模型组 ——— ４０．５８±１５．３１▲▲▲ ７．５３±２．０１▲▲
地奥心血康 ５０．０　 ３１．１５±１０．１９＊ ５．４４±１．５２＊
天山花楸
叶总黄酮
１０．０　 ２７．８１±７．２０＊ ５．９８±１．１０＊
２０．０　 ２７．４８±５．５５＊ ４．８７±１．５２＊＊
　　 注：与模型组比较＊Ｐ＜０．０５，＊＊Ｐ＜０．０１；与假手术组比较▲▲
Ｐ＜０．０１，▲▲▲Ｐ＜０．００１
显减轻。天山花楸叶总黄酮１０．０ｍｇ·ｋｇ－１组：心
肌纤维排列均匀，线粒体膜结构完整，仅轻度水肿，
嵴清晰，呈凝聚状。天山花楸叶总黄酮２０．０ｍｇ·
ｋｇ－１组：细胞核结构清晰，肌丝排列完好，肌节清晰
可见线粒体结构完整，嵴呈凝聚状。见图１。
图１　天山花楸叶总黄酮对心肌缺血大鼠心肌细胞超微结构的影响（Ｂａｒ＝５００ｎｍ）
３　讨论
在缺血－再灌注损伤中，往往发生钙超载、氧自
由基生成、能量代谢障碍等，尽早恢复其血流灌注是
组织细胞存活的必要措施之一，心肌缺血超过一定
时限即可引起组织损伤和细胞死亡［５］。心肌坏死是
心肌缺血再灌注损伤的最严重结果，血清心肌酶是
判断心肌坏死程度的重要指标之一。
本实验结果表明，模型组血清 ＡＳＴ、ＬＤＨ、
ＭＤＡ释放增多，ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ活性明显降低，心肌
梗死范围增大，电镜下超微结构的观察也证实心肌
细胞的改变，观察线粒体的变化能地反映缺血－再灌
注损伤心肌细胞能量代谢的状况［６］。与模型组比
—８７８— Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，Ｊｕｎｅ，２０１５，Ｖｏｌ　１９，Ｎｏ．６
较，天山花楸叶总黄酮组血清 ＡＳＴ、ＬＤＨ、ＭＤＡ活
性下降，ＳＯＤ、ＧＳＨ－Ｐｘ活性增加，心肌梗死面积明
显缩小，心肌细胞明显改善，提示其对心肌细胞膜脂
质过氧化的损伤，心肌细胞组织结构有保护作用。
从而改善缺血心肌能量代谢和功能损伤。增强心肌
细胞的抗自由基损伤能力。
一氧化氮（ＮＯ）是一种新型氧自由基，为小分子
气体物质，主要由血管内皮细胞合成、分泌。ＮＯ对
心肌具有保护作用主要与ＮＯ可以在再灌注过程中
改善血流，抑制中性粒细胞黏附到血管内皮，以及可
清除再灌注过程中形成的过多的超氧化物有关［７］。
本实验结果证实，天山花楸叶总黄酮可明显降低大
鼠血清中ＮＯ含量，这可能是天山花楸叶总黄酮减
轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制之一。
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ｏｆ　ｒｅｐｅｒｆｕｓｉｏｎ　ｉｎｊｕｒｙ　ｉｎ　ａｃｕｔｅ　ｍｙｏｃａｒｄｉａｌ　ｉｎｆａｒｃｔｉｏｎ．Ａ　ｐｏｔｅｎｔｉａｌ
ｒｏｌｅ　ｆｏｒ　ａｄｅｎｏｓｉｎｅ　ａｓ　ａ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ　ａｇｅｎｔ［Ｊ］．Ａｍ　Ｊ　Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ，
２００４，４（３）：１５９．
（收稿日期：２０１４－０７－０８）
＊通讯作者
文章编号：１００７－４２８７（２０１５）０６－０８７９－０４
过表达ＴＲＯＰ２对细胞增殖及迁移能力的影响
崔　倪１，李　明２，倪劲松２，宋　军３＊
（１．吉林大学临床医学院，吉林 长春１３００２１；２．吉林大学第一医院二部 病理科，吉林 长春１３００４１；
３．吉林大学中日联谊医院 电诊科，吉林 长春１３００３３）
摘要：目的　探讨过表达肿瘤相关钙信号转导因子２（ＴＲＯＰ２）对细胞增殖及迁移的影响，为阐明肿瘤的发生机制
提供新的途径。方法　构建ＴＲＯＰ２真核表达载体ｐｃＤＮＡ３－ＴＲＯＰ２；采用脂质体法将ｐｃＤＮＡ３－ＴＲＯＰ２转染入人正
常肝细胞ＬＯ２中，并通过Ｇ４１８压力筛选获得稳定表达ＴＲＯＰ２的细胞株，之后通过 ＭＴＴ法检测细胞的活力，通过划
痕法检测细胞的迁移能力。结果　成功获得了过表达ＴＲＯＰ２的细胞株；进一步的研究结果显示，过表达ＴＲＯＰ２可
增强细胞的活力和迁移能力。结论　过表达ＴＲＯＰ２可促进肿瘤的发生，此结果为阐明肿瘤发生机制及肿瘤治疗提
供了新的途径。
关键词：ＴＲＯＰ２；肿瘤发生；增殖；迁移
中图分类号：Ｒ７３０．２３１ 文献标识码：Ａ
Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＲＯＰ２ｏｎ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ　ＣＵＩ　Ｎｉ１，ＬＩ　Ｍｉｎｇ２，ＮＩ　Ｊｉｎ－ｓｏｎｇ２，ｅｔ　ａｌ．（１．Ｃｏｌ－
ｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｃｌｉｎｉｃａｌ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，ｔｈｅ　Ｆｉｒｓｔ　Ｈｏｓｐｉ－
ｔａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇｃｈｕｎ１３００４１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｃａｌｃｉｕｍ　ｓｉｇｎａｌ　ｔｒａｎｓｄｕｃｅｒ２
（ＴＲＯＰ２）ｏｎ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ　ｏｆ　ＴＲＯＰ２ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｖｅｃｔｏｒ　ｐｃＤＮＡ３－ＴＲＯＰ２，
ａｎｄ　ｔｒａｎｓｆｅｃｔｅｄ　ｉｔ　ｉｎｔｏ　ｈｕｍａｎ　ｎｏｒｍａｌ　ｌｉｖｅｒ　ｃｅｌ　Ｌ０２ｗｉｔｈ　Ｇｅｎｅ　Ｔｒａｎｓ，ｔｈｅｎ　ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ｏｆ　ｓｔａｂｌｅ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＲＯＰ２ｃｅｌｓ
ｂｙ　Ｇ４１８．ｗｅ　ｆｕｒｔｈｅｒ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ＭＴＴ　ｍａｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｃｅｌ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ　ｂｙ　ｕｓｉｎｇ　ｓｃｒａｔｃｈ　ｔｅｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ
　ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄ　ＴＲＯＰ２－ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　ｓｕｃｃｅｓｓｆｕｌｙ，ｆｕｒｔｈｅｒ　ｒｅｓｕｌｔ　ｒｅｖｅａｌｅｄ　ｔｈａｔ　ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＲＯＰ２ｅｎ－
ｈａｎｃｅｄ　ｃｅｌ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ａｎｄ　ｍｏｂｉｌｉｔｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｏｖｅｒｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ　ＴＲＯＰ２ｃａｎ　ｐｒｏｍｏｔｅ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ，ｔｈｅｓｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｐｒｏ－
ｖｉｄｅｄ　ａ　ｎｅｗ　ｔａｒｇｅｔ　ｆｏｒ　ｃｌａｒｉｆｉｎｇ　ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ　ａｎｄ　ｔｕｍｏｒ　ｔｈｅｒａｐｙ
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＴＲＯＰ２；ｔｕｍｏｒｉｇｅｎｅｓｉｓ；ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ；ｍｏｂｉｌｉｔｙ
（Ｃｈｉｎ　Ｊ　Ｌａｂ　Ｄｉａｇｎ，２０１５，１９：０８７９）
—９７８—中国实验诊断学　２０１５年６月　第１９卷　第６期