全 文 ：制剂与炮制
收稿日期:2012-05-04; 修订日期:2012-09-03
基金项目:新疆维吾尔自治区科技支撑计划( No． 201133127)
作者简介:刘玉花( 1988-) ，女( 土家族) ，四川酉阳人，现为新疆医科大学
在读硕士研究生，学士学位，主要从事天然药物分析工作．
* 通讯作者简介:常军民( 1965-) ，男( 汉族) ，陕西大荔人，现任新疆医科
大学药学院教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事天然药物分析研
究工作．
天山花楸果实的提取工艺研究
刘玉花，常军民* ，王 岩，何家伟
(新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐 830054)
摘要:目的 探讨天山花楸果实的最佳提取工艺。方法 以天山花楸果实中总黄酮和总氰苷的含量为考察指标，采用正交
实验设计优选天山花楸果实的提取工艺。结果 天山花楸果实的最佳提取工艺为 15 倍溶剂量，溶剂为 40%乙醇，50 ℃条
件下回流提取两次，每次 1． 5h。结论 该提取工艺简单易行，结果可靠、稳定。
关键词:天山花楸; 黄酮; 氰苷; 提取; 正交设计
DOI标识:doi: 10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2012． 11． 065
中图分类号:R284． 2 文献标识码:B 文章编号:1008-0805( 2012) 11-2805-02
天山花楸 Sorbus tianshanica Rupr．，系蔷薇科 Rosacea花楸属
Sorbus植物，维吾尔和哈萨克族民间常以其嫩枝、叶和果实入药，
主要用于治疗肺结核、哮喘、咳嗽、胃炎、胃疼、维生素 A 和 C 缺
乏等症，并且毒性很低。据《新疆中草药手册》记载:天山花楸果
实味甘苦，性平，无毒;嫩枝和皮:味苦，性寒，无毒;清肺止咳，补
脾生津，补血补气。现已收载于《新疆自治区药品标准》1980 年
版，其规定药用部位为天山花楸的干燥果实［1 ～ 4］。据文献报道，
天山花楸包括黄酮类、氰苷类、萜类、有机酸、氨基酸、蛋白质、挥
发油、甾类及各种微量元素多种具有生物活性的物质，其中黄酮
和氰苷类化合物为天山花楸的主要有效部位［5，6］。
1 仪器与材料
1． 1 仪器 电子天平(BL － 1500 型，北京赛多利斯仪器系统有限
公司) ，电子分析天平(XS205 型，托利多 －梅特勒有限公司) ，恒
温水浴锅(TDA － 8002 型，上海精宏设备有限公司) ，旋转蒸发仪
(EYELA N － 1100 型，上海爱郎仪器有限公司) ，循环水式多用真
空泵(SHB －Ⅲ型，郑州长城科教有限公司) ，紫外分光光度计
(UV －9100 D型，北京莱伯泰科有限公司)。
1． 2 药材与试剂 天山花楸(采自新疆呼图壁林场，经新疆医科
大学药学院生药 /天药教研室帕丽达·阿不力孜教授鉴定为天山
花楸 Sorbus tianshanica Rupr．的果实 ，批号 201110 － 01) ，芦丁对
照品(中国药品生物制品检定所，批号:100080 － 200707) ，氰化
钠，氢氧化钠，氯胺 T，异烟酸，吡唑啉酮，乙醇均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 总氰苷的含量测定
2． 1． 1 氰化钠标准溶液的配制 精密称取 0． 188 4 g氰化钠溶解
于 1%氢氧化钠溶液中，并稀释至 100 ml，摇匀，精密量取 10 ml
于锥形瓶中，加入 50 ml 水和 1 ml 2%氢氧化钠，加入 0． 2 ml 试
银灵指示剂，用硝酸银标准溶液滴定，得到氰化钠储备液浓度为
1． 0065mg /ml。精密量取 5 ml氰化钠储备液于 500 ml 棕色容量
瓶中，用 0． 1%氢氧化钠溶液稀释至刻线，摇匀，避光贮存;临用
前，精密量取 10． 00 ml上述氰化钠溶液于 100 ml棕色容量瓶中，
用 0． 1%氢氧化钠稀释至刻线，摇匀，得氰化钠标准溶液［7］。
2． 1． 2 标准曲线的绘制 取 8 支 25 ml具塞比色管，分别精密量
取氰化钠标准溶液 0，0． 20，0． 50，1． 00，2． 00，3． 00，4． 00，5． 00
ml，加入 0． 1%氢氧化钠溶液至 10 ml;向比色管中加入 5ml 磷酸
盐缓冲溶液，混匀，迅速加入 0． 2 ml氯胺 T溶液，立即盖塞子，混
匀，放置 3 ～ 5 min;向各管中加入 5 ml异烟酸 －吡唑啉酮溶液(1
∶ 5) ，混匀加蒸馏水稀释至刻线，摇匀，在 30℃的水浴中放置 40
min［8］。用紫外 －可见分光光度计在波长为 638 nm下，以空白试
剂作参比，测定吸光度值，绘制标准曲线。计算得回归方程:Y =
2． 976 189X － 0． 008 292，r = 0． 999 1，CN －在浓度为 0． 008 ～ 0． 20
μg /ml呈良好的线性关系。
2． 1． 3 样品中氰苷的含量测定 取适量体积的天山花楸果实提
取液，加蒸馏水至 200 ml，置于 500 ml 圆底烧瓶中蒸馏，馏出液
用盛有 10 ml 1%氢氧化钠溶液的 100 ml 容量瓶接收至刻度;再
从中量取适量体积的馏出液，至 25 ml具塞比色管中，按“2． 1． 2”
项操作，测定吸光度，用 C = mV ×
V1
V2
计算相应的 CN －含量(m －
从标准曲线 CN －的含量，μg;V －蒸馏所取样品液的体积，ml;V1
－ 100ml;V2 － 所 取 馏 出 液 的 体 积，ml) ;再 根 据 W1 =
C3 × V
m × 457． 42
26． 02 × 1000 式［C3 －样品液中 CN
－含量(μg /ml) ;V －样品液
体积(ml) ;m －样品质量(g) ;苦杏仁苷摩尔质量为 457． 42(g /
mol) ;CN －摩尔质量为 26． 02(g /mol) ］计算样品中氰苷的含
量［7］。
2． 2 总黄酮的含量测定
2． 2． 1 最大吸收波长确定 精密称取芦丁对照品 20． 01 mg，置
100 ml容量瓶中，加 60%的乙醇定容至刻度，使之浓度为 0． 200 1
mg /ml芦丁储备液。精密量取芦丁储备液 0． 00，3． 00 ml 置 25 ml
容量瓶中显色后，进行全波长扫描，确定最大吸收波长为 508 nm。
2． 2． 2 标准曲线的绘制 分别精密量取芦丁储备液 0． 00，1． 00，
2． 00，3． 00，4． 00，5． 00，6． 00 ml于 25 ml容量瓶中显色后，以试剂
空白为参比，在 508nm处测定吸光度，绘制标准曲线。回归方程
为:Y = 12． 457 973X + 0． 001 240，r = 0． 999 8，芦丁在 0． 008 ～
0． 048 mg /ml呈良好线性关系。
2． 2． 3 样品中总黄酮的含量测定 精密量取适量体积的天山花
楸提取液于 25 ml 容量瓶中，按“2． 2． 2”项下操作，测定吸光度
值，计算样品中总黄酮的含量。
2． 3 正交实验
2． 3． 1 工艺优选指标 采用综合评分法，以总黄酮和氰苷含量的
综合评分为指标，总黄酮含量评分(A%)权重规定为 0． 6，氰苷含
量评分(B%)权重规定为 0． 4，则综合评分为:Y = 0． 4A + 0． 6B。
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2012 VOL ． 23 NO． 11 时珍国医国药 2012 年第 23 卷第 11 期
2． 3． 2 正交实验设计 以总黄酮和氰苷的含量为考察指标，采用 L9(3
4)正
交实验设计，考察提取温度、醇浓度、时间、料液比对实验结果的影响。结果
见表 1。
2． 3． 3 正交实验结果 称取山花楸果实适量，采用中药粉碎机研碎，过 20
目筛，精密称取粉末 10． 0 g，按正交设计提取 2 次，滤过，合并滤液，40℃减
压浓缩至 100 ml，测定总黄酮和氰苷的含量。结果见表 2 ～ 3。
表 1 正交因素水平表
水平
A
提取温度 T /℃
B
乙醇浓度(%)
C
提取时间 t /h
D
料液比 /(g∶ ml)
1 40 40 0． 5 1∶ 10
2 50 50 1． 0 1∶ 15
3 60 60 1． 5 1∶ 20
表 2 正交实验结果
编号
因素
A B C D
总黄酮 /
mg·g － 1
氰苷 /
mg·g － 1
总分
(%)
1 1 1 1 1 56． 8047 0． 2293 81． 8152
2 1 2 2 2 61． 8292 0． 2643 83． 0862
3 1 3 3 3 55． 0917 0． 1891 75． 7262
4 2 1 2 3 62． 6414 0． 2277 87． 0421
5 2 2 3 1 48． 8333 0． 3210 86． 1015
6 2 3 1 2 52． 5613 0． 1510 68． 2797
7 3 1 3 2 62． 0530 0． 1979 83． 2111
8 3 2 1 3 51． 8478 0． 1290 64． 9599
9 3 3 2 1 54． 8314 0． 0994 63． 6304
黄酮
(mg /g) K1 57． 9086 60． 4997 54． 7325 53． 4898
K2 54． 6787 54． 1702 59． 7673 58． 8145
K3 56． 2442 54． 1615 55． 3260 56． 5270
R 3． 2299 6． 3382 5． 0348 5． 3247
氰苷
(mg /g) K1 0． 2275 0． 2183 0． 1698 0． 2165
K2 0． 23321 0． 2381 0． 1971 0． 2044
K3 0． 14211 0． 1465 0． 2360 0． 1819
R 0． 0911 0． 0916 0． 0662 0． 0346
总分
(%) K1 80． 2092 84． 0228 71． 6849 77． 1824
K2 82． 4744 78． 0492 77． 9196 80． 8590
K3 70． 6005 69． 2121 81． 6796 75． 9094
R 12． 8739 14． 8107 9． 9947 4． 9496
n =27
表 3 总分方差分析
因素 SS V MS F P
A 761． 843 2 2 380． 921 6 267． 836 2 0． 000 0
B 1 087． 890 1 2 543． 945 0 382． 462 3 0． 000 0
C 540． 967 8 2 270． 483 9 190． 184 5 0． 000 0
D 118． 911 2 2 59． 455 6 41． 804 8 0． 000 0
误差 25． 59 99 18 1． 422 2
2． 3． 4 天山花楸果实提取次数的考察 在正交试验的基础上，对天山花楸
果实的提取次数进行考察，综合考虑最终确定提取次数为两次。结果见表 4。
表 4 提取次数考察 mg·g － 1
提取次数 总黄酮 氰苷
1 43． 30 0． 1084
2 59． 97 0． 3153
3 63． 48 0． 2132
4 66． 50 0． 2009
2． 3． 5 验证实验 为进一步考察优化工艺的稳定性及
可靠性，按最佳提取工艺重复提取了 3 次，总黄酮的含
量平均可达 54． 29 mg /g;氰苷的含量平均可达 0． 254 6
mg /g。结果见表 5。
表 5 验证实验 mg·g － 1
序号 总黄酮 氰苷
1 54． 60 0． 2568
2 56． 73 0． 2525
3 51． 54 0． 2545
平均值 54． 29 0． 2546
3 结论
本实验采用 L9(3
4)重复正交设计法，运用 Pack-
age for encyclopaedia of medical statistics(PEMS 3． 1)统
计软件对总黄酮和氰苷两个有效部位含量的综合评分
进行方差分析，优选出天山花楸果实的最佳提取工艺，
即 15 倍溶剂量，溶剂为 40%乙醇，50 ℃条件下回流提
取两次，每次 1． 5 h，并通过验证试验进一步确定该提
取工艺的可行性和稳定性。
参考文献:
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