全 文 ：黔产竹节参总黄酮苷的提取与测定方法研究
张玉涛 ,赵荣飞 ,刘 和 ,张玲　(安顺学院 ,贵州安顺 561000)
摘要　[目的 ] 探讨黔产竹节参黄酮苷的提取与检测方法。 [方法] 以 80%乙醇为溶剂 ,研究了黔竹节参黄酮苷的提取方法 ,并建立了
竹节参黄酮苷的测定方法。 [结果] 黔产竹节参黄酮苷的提取率为 0.981 8%,精制黄酮苷的含量为 96.2%;采用分光光度法检测黔产
竹节参黄酮苷浓度 ,对照样品回归方程 y=-0.003 00+0.011 01x, r=0.999 30,对照样品的加标回收率为 100.36%。 [结论] 该方法操
作简便快速准确 ,能满足黔产竹节参中总黄酮苷的提取和检测的要求。
关键词　黔竹节参;黄酮苷;提取;测定
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2009)33-16371-02
StudyonExtractionandMeasurementonFlavonoidGlycosidesfromPanaxjaponicusProductioninGuizhou
ZHANGYu-taoetal　(AnshunColege, Anshun, Guizhou561000)
Abstract　[ Objective] Thestudyaimedtoresearchtheextractionandmeasurementmethodofflavonoidglycosidesfrompanaxjaponicuspro-
ductioninGuizhouprovince.[ Method] Withethanolassolvent, methodofextractingFlavonoidGlycosidesfromPanaxjaponicuswerestud-
ied, andmethodofdeterminingthecontentofFlavonoidGlycosidesinPanaxjaponicuswasestablished.[ Result] Theextractionratewas
0.981 8%andthecontentofflavonoidglycosidesinextractwas96.2%.Basedonmethodofspectrophotometry, theregressionequationof
controlsamplewasy=-0.003 00+0.011 01x, r=0.999 30.Thetherecoveryofstandardadditionofcontrolsamplewas100.36%.[ Con-
clusion] Themethodissimple, rapidandaccurate, anditcansatisfytheneedofextractionanddetectionofflavonoidglycosides.
Keywords　PanaxjaponicusproductioninGuizhou;Flavonoidglycoside;Extraction;Detection
基金项目　贵州省教育厅自然科学基金项目(2007089)。
作者简介　张玉涛(1979-),男 ,山东嘉祥人 , 在读博士 ,讲师 , 从事分
析化学方面的研究工作。
收稿日期　 2009-10-09
　　竹节参(Panaxpseudo-ginsengWal.var.japonicus)又称大
叶三七 ,为五加科人参属植物 。具有滋补强壮 、止血化淤及
消肿镇痛等药用功能 [ 1] 。近年来的研究证明 ,竹节参总黄酮
苷在未来的医学领域有着不可估量的发展前景 ,具有潜在的
研究价值。国内外许多学者已对天然药用植物中总黄酮苷
的提取和含量测量进行了大量研究 ,在天然总黄酮苷含量测
定中 ,分光光度法是较普遍的一种测定方法 ,但尚未见到关
于竹节参总黄酮苷的提取与含量测定的相关报道。因此 ,笔
者以贵州安顺地区关岭县野生竹节参为试材 ,研究了竹节参
黄酮苷的提取方法 ,同时建立了对其的测定方法 ,以期为竹
节参黄酮的开发利用提供科学依据 。
1　材料与方法
1.1　材料　竹节参样品购于关岭药材商 ,并经安顺学院化
学与生物农学系生物讲师张来鉴定确认。供试仪器为
UV751-GD紫外可见光分光光度计(上海分析研究仪器总
厂);电子天平(METTLERTOLEDO, StandardconstructionAL,
精确至 1/10 000g);四孔水浴锅(上海医疗器械五厂);10ml
具塞试管;2 ml刻度移液管;10、25、50ml容量瓶;10、25ml烧
杯等。供试试剂为芦丁对照品(成都曼斯特生物科技有限公
司)、无水甲醇 、乙醇(95%)、无水乙醚 、乙酸乙酯 ,均为分
析纯。
1.2　方法
1.2.1　溶液的配制 。标准溶液:准确称取 0.010 2 g芦丁对
照品置于 10 ml烧杯内 ,加入少量甲醇使其溶解 ,定量移入
50ml容量瓶中 ,加甲醇至刻度 , 摇匀 ,使浓度为 0.204
mg/ml。三氯化铝溶液:准确称取无水三氯化铝 1.340 2g,立
即转入 100ml容量瓶 ,加入甲醇溶解后 ,加甲醇至刻度线 ,摇
匀 ,即得到 13.4 mg/ml三氯化铝溶液 。缓冲溶液:准确称取
1.640 7g无水醋酸钠 ,加入少量双蒸馏水溶解 ,定量移入 100
ml容量瓶 ,得 16.40 mg/ml醋酸钠溶液;准确量取 1.15ml冰
醋酸 ,双蒸馏水溶解至 100 ml。待测液:称取提取得到的总
黄酮苷样品 50mg,甲醇溶解定容于 25 ml容量瓶中 ,得到 2
mg/ml待测液。加标液:精密称取 0.011 6 mg芦丁 ,用甲醇
定容于 10.00 ml容量瓶中。
1.2.2　样品的制备。精确称取竹节参样品 ,在石钵中将其
捣碎后 ,置于 250 ml广口瓶中 ,备用。
1.2.3　总黄酮苷的提取。在总结前人研究的结果基础
上 [ 2-3] ,进行条件优化 ,具体操作为:①称取 50 g样品 ,加入
150ml80%乙醇浸泡 1 d后分离提取液 ,将样品粉末置于索
氏提取器内 ,加入适量 80%乙醇水浴加热回流 12 h,分离提
取液;②将上述乙醇提取液合并过滤后移入烧瓶中 , 65 ～ 70
℃水浴加热 ,减压(真空度约为 0.07 ～ 0.08MPa)回收溶剂至
粘稠状;③在粘稠状提取物中加入 30ml蒸馏水并水浴加热 ,
使其溶解后移入分液漏斗中 ,用 40 ml乙醚萃取水相 6 ～ 8
次 ,去除酯溶性杂质 ,再用 45ml乙酸乙酯萃取水相 6～ 8次 ,
合并乙酸乙酯萃取液 ,移入烧瓶内 , 55 ～ 70 ℃水浴加热 ,减压
(真空度约为 0.08 MPa)回收乙酸乙酯;④加入少量甲醇水
浴加热使其溶解后 ,趁热将甲醇溶液倾入 8 ～ 10倍丙酮中 ,
减压过滤得精制黄酮苷沉淀;⑤回收滤液至有沉淀析出 ,再
转移至表面皿中 ,使其自然晾干 ,合并上述两部分沉淀即得
总黄酮苷粉末。提取工艺流程如图 1所示 。
1.2.4　总黄酮苷含量的测定。目前 ,应用较多的是以三氯
化铝为显色剂 ,与醋酸 、醋酸钠构成显色体系 [ 4-5] 。笔者采
用三氯化铝—甲醇—醋酸及醋酸钠显色系统测定竹节参总
黄酮苷含量 ,得到最优化条件是:加热温度为 35 ～ 40 ℃;加
热时间以 15 min为宜;当稀释液体积为 10.0ml;三氯化铝溶
液以 3.00ml为佳;在相同条件下 ,缓冲体系以 1.00 ml(0.5
ml醋酸 、0.5 ml醋酸钠)为宜 。
1.2.4.1　标准曲线的绘制 。取 6支 10 ml具塞试管 ,按 1 ～6
编号 ,依序加入标准溶液 0、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 ml;
安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2009, 37(33):16371-16372 责任编辑　陈红红　责任校对　卢瑶
图 1　黔产竹节参总黄酮苷的提取工艺流程
Fig.1　TheextractionprocessofflavonoidglycosidefromPanax
japonicusproducedinGuizhou
在上述 6支试管内分别加入 3.00 ml三氯化铝溶液 、0.50 ml
醋酸 、0.50 ml醋酸钠缓冲溶液 ,于 40℃水浴加热 15 min后
冷却至室温 ,加入甲醇溶剂至 10.0ml,静置 0.5 h后 ,以 1号
空白为参比 ,在波长 305 nm处测量吸光度。对测定结果进
行相关线性分析(图 1),结果表明:线性关系良好 ,回归方程
为:y=-0.003 00+1.011 01x, r=0.999 30。
图 2　标准曲线
Fig.2　Thestandardcurve
1.2.4.2　样品的测定。取 4支 10 ml具塞试管 ,按 1 ～ 4编
号 ,在 1号试管中加入 10 ml甲醇 ,在 2 ～ 4号试管中分别加
入黄酮苷测试液 0.2 ml, 3.0 ml三氯化铝溶液 、0.50 ml醋
酸 、0.50 ml醋酸钠缓冲溶液 ,于 40 ℃水浴加热 15min后冷
却至室温 ,加入甲醇溶剂至 10.0ml,静置 0.5 h后 ,以 1号空
白为参比在波长 305nm处测量吸光度。
2　结果与分析
2.1　黔产竹节参总黄酮苷的提取效果　按照上述方法对黔
产竹节参的总黄酮苷进行提取 ,在 50.0 g竹节参样品中 ,平
均提取出 0.490 8g总黄酮苷 ,平均提取率为 0.981 8%,标准
偏差为 0.001 697, 置信区间 (P=95%)为 0.981 8 ±
0.015 25。说明该方法稳定 ,重现性好 ,可以用于竹节参总黄
酮苷的提取。
2.2　黔产竹节参总黄酮苷的检测
2.2.1　最大吸收波长的确定。由图 3可以看出 ,黔产竹节
参总黄酮苷的最大吸收波长为 295 ～ 305 nm时 ,吸光度增
大 , 305 ～ 340nm时 ,吸光度逐渐开始降低。在 305nm处 ,即
样品浓度为 2mg/ml时 ,吸光度为最大 ,达 0.083。
2.2.2　三氯化铝溶液最佳浓度的确定。由表 1可知 ,三氯
化铝的加入量对黄酮苷溶液的吸光度有较大影响。随着三
氯化铝加入量的增加 ,吸光度呈上升趋势 ,但是到一定程度
图 3　竹节参总黄酮苷最大吸收波长的确定
Fig.3　Thedeterminationofthemaximumabsorptionwave-
lengthofflavonoidfromPanaxjaponicus
　　
后 ,吸光度反而下降 。因此 ,三氯化铝的最佳加入量为 3.0
ml,即浓度为 4.02 mg/ml时 ,竹叶参黄酮苷的吸光度达
0.544。
表 1　三氯化铝溶液最佳浓度的确定
Table1　Thedeterminationoftheoptimalconcentrationofaluminum
chloride
试验号TestNo.
三氯化铝溶液浓度∥mg/mlConcentrationofaluminumchloride
三氯化铝溶液加入量∥mlAdditionofaluminumchloride
吸光度(A)Absorbency
1 2.01 1.5 0.429
2 2.68 2.0 0.446
3 3.35 2.5 0.482
4 4.02 3.0 0.544
5 4.69 3.5 0.521
6 5.30 4.0 0.513
2.2.3　黔产竹节参总黄酮苷含量的确定。用上述建立的方
法对黔产竹节参提取的精制黄酮苷样品进行检测 ,结果显
示:黄酮苷在测试液中的平均含量为 1.923%。经计算 ,精制
黄酮苷的含量达 96.2%,说明该提取方法是可行的。
3　结论与讨论
通过试验可知 ,以乙醇为溶剂提取黔产竹节参黄酮苷 ,
黄酮苷的含量可高达 96.2%,说明笔者建立的提取方法有
效 ,提取率较高 ,达 0.981 8%。误差分析表明 ,笔者建立的
提取和检测方法 ,对黔产竹节参黄酮苷是可行的 ,该方法准
确快速 ,能满足提取和检测竹节参总黄酮苷的要求。在试验
过程中 ,笔者也将 65%乙醇溶液作为提取溶剂 ,但效果不好。
这可能是由于 65%乙醇溶液和黄酮苷的极性差别较大 ,不利
于提取 ,至于其他浓度乙醇及溶剂对黔产竹节参黄酮苷的提
取效果还有待于今后的进一步研究。
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16372 　　　　　　　　　　安徽农业科学　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　2009年