全 文 ：·796· Evaluation and analysis of drug-use in hospitals of China 2016 Vol． 16 No． 6 中国医院用药评价与分析 2016 年第 16 卷第 6 期
高效液相色谱法测定齿叶白鹃梅叶中 3种黄酮苷元的
含量
王艳秋1* ，武君颖1，李爱华2(1．沈阳市中医药学校中药教研室，辽宁 沈阳 110300;2．沈阳飞龙制药有限公
司质量管理部，辽宁 沈阳 110000)
中图分类号 Ｒ927. 2 文献标志码 A 文章编号 1672 － 2124(2016)06 － 0796 － 03
DOI 10. 14009 / j． issn． 1672-2124． 2016． 06． 028
摘 要 目的:建立齿叶白鹃梅叶中芹菜素、槲皮素和木犀草素 3 种黄酮苷元的含量测定方法。方法:采用酸水解法进行水解，对
影响酸水解的主要因素酸浓度、水解温度和水解时间进行考察;采用高效液相色谱进行含量测定，色谱柱为 Promosil C18色谱柱
(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-2%冰乙酸(V ∶ V = 20 ∶ 80)，柱温 25 ℃，进样量 10 μl，流速 1. 0 ml /min，检测波长
267 nm。结果:酸水解条件为:盐酸-甲醇浓度为 4. 0 mol /L，水解温度为 80 ℃，水解时间为 5 h;含量测定中木犀草素、槲皮素和芹
菜素的进样量分别在 0. 82 ～ 8. 20、0. 869 6 ～ 8. 696 0 和 0. 777 6 ～ 7. 776 0 μg范围内具有良好的线性关系;平均加样回收率分别为
95. 8%、97. 1%、99. 6%。含量测定方法的精密度、稳定性、重复性也均符合有关规定。结论:本研究建立的水解方法和含量测定
方法准确、可靠，可用于齿叶白鹃梅叶的质量控制。
关键词 齿叶白鹃梅;黄酮苷元;含量测定
Content Determination of Three Flavonoid Aglycones in Leaves of Exochorda serratifolia S．
Moore． By HPLC
WANG Yanqiu1，WU Junying1，Li Aihua2(1． Traditional Chinese medicine teaching and research section，
Shenyang Traditional Chinese Medicine School Shenyang，Liaoning Shenyang 110300，China;2． Dept． of
Quality Control，Shenyang Green Pharmaceutical co． LTD，Liaoning Shenyang 110000，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To establish the content determination method of apigenin，quercetin and luteolin in the leaves
of Exochorda serratifolia S． Moore． ． METHODS:Acid hydrolyzation was adopted，and the acid concentration，hydrolysis
temperature，hydrolysis time were investigated and contents of the flavonoid aglycones were determined by HPLC． The
Promosil C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)column was adopted，the mobile phase was consisted of acetonitrile-2% glacial
acetic acid(V ∶ V = 20 ∶ 80)，the column temperature was 25 at sample size of 10 μl and flow rate of 1. 0 ml /min． The
detection wavelength was set at 267 nm． ＲESULTS:The conditions of acid hydrolysis were:concentration of hydrochloric
acid at 4. 0 mol /L with temperature at 80℃，for 5 h． The calibration curves were linear in the range of 0. 82-8. 20，0. 869
6-8. 696 0 μg and 0. 777 6-7. 776 0 μg． The average recovery rates were 95. 8%，97. 1% and 99. 6%，respectively． The
precision，stability and repeatability of content determination conform to the related regulations． CONCLUSIONS:This
method is accurate and reliable and can be used for the quality control of leaves of Exochorda serratifolia S． Moore． ．
KEYWOＲDS Exochorda serratifolia S． Moore;Flavonoid aglycones;Content determination
* 高级讲师。研究方向:药物分析与质量研究及其相关教学。E-
mail:980292565@ qq． com
齿叶白鹃梅(Exochorda serratifolia S． Moore．)，来源于蔷
薇科绣线菊亚科白鹃梅属［1］，在辽宁凌源、喀左一带，民间多
将其嫩叶作为野菜食用，用后有预防和治疗糖尿病的功效。
研究者等对其进行化学成分的分离和结构鉴定［2-5］。药理研
究结果也证明，齿叶白鹃梅叶确有降血糖和改善小鼠耐糖量
的作用［6-8］。含量测定方面有总黄酮的含量以及黄酮单体含
量的报道［9-11］。本研究采用酸水解法对齿叶白鹃梅叶中存在
的黄酮苷进行水解，采用高效液相色谱法(high performance
liquid chromatography，HPLC)建立水解后的 3 种苷元，即芹菜
素、木犀草素和槲皮素的含量测定方法，为更好地控制齿叶白
鹃梅的质量奠定基础。
1 材料
1. 1 仪器
Agilent 1100 Series型高效液相色谱仪(包括真空脱气机、
四元泵、柱温箱、VWD、HP1100 化学工作站)(美国安捷伦科技
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有限公司);CP225D型电子天平(Sartorius，十万分之一)。
1. 2 药品与试剂
齿叶白鹃梅叶采自辽宁省朝阳市凌源县，共 3 个批次，分
别为样品 1、样品 2 和样品 3。经辽宁中医药大学王冰教授鉴
定为 Exochorda serratifolia S． Moore．;木犀草素、槲皮素、芹菜
素对照品(上海源叶生物科技有限公司，批号:20120206、
20120213、20120314);水为超纯水;甲醇、乙腈(天津科密欧试
剂有限公司，色谱纯)，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Promosil C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);流
动相:乙腈-2%冰乙酸(V ∶ V = 20 ∶ 80);柱温 25 ℃;进样量
10 μl，流速 1. 0 ml /min;检测波长 267 nm。
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取木犀草素 10. 25 mg、槲皮素 10. 87 mg、芹菜素
9. 72 mg，甲醇定容至 25 ml，摇匀，即得 3 种对照品溶液，浓度
分别为 0. 410 0、0. 434 8、0. 388 8 mg /ml，即得。
2. 3 供试品溶液的制备
2. 3. 1 水解时间的考察:取齿叶白鹃梅叶粉末 1. 0 g，共 4 份，
精密称定，水解温度为 80 ℃，盐酸浓度为 5. 0 mol /L，分别水解
3、4、5、6 h，用 HPLC检测，计算 3 种苷元的含量［12-14］。结果表
明水解 5 h和水解 6 h 时 3 种苷元的含量明显高于水解其他
水解时间，而水解 5 h和水解 6 h 时的含量差别不大，故水解
时间确定为 5 h。
2. 3. 2 水解时酸浓度的考察:取齿叶白鹃梅叶粉末 1. 0 g，共
四份，精密称定，水解温度 80 ℃，水解时间为 5 h，盐酸浓度分
别为 2. 0、3. 0、4. 0、5. 0 mol /L，用 HPLC检测，计算 3 种苷元的
含量［12-14］。结果表明盐酸浓度为 4. 0 mol /L水解效果最好。
2. 3. 3 水解温度的考察:取齿叶白鹃梅叶粉末 1. 0 g，共 4 份，
精密称定，盐酸浓度为 4. 0 mol /L，温度分别为 60、70、80、
90 ℃，水解 5 h，用 HPLC检测，计算 3 种苷元的含量［12-14］。结
果表明水解温度为 70 ℃水解效果最好。
综上所述，供试品溶液的制备方法为:精密称取齿叶白鹃梅
叶粉末 1. 0 g，精密称定，加入 4. 0 mol /L盐酸-甲醇溶液 50 ml，于
80 ℃的水浴中反应 5 h，冷却后过滤，用甲醇定容至 50 ml，过
0. 45 μm滤膜，即得。水解液和对照品溶液的色谱图见图 1。
2. 4 线性范围考察
取上述 3 种对照品溶液，分别进样 2、4、6、8、10、20 μl，经
HPLC检测后，分别以进样量为横坐标，吸收峰面积为纵坐标，
得木犀草素的回归方程为:Y = 17 010 X + 68. 714，r = 0. 999 0，
表明木犀草素在 0. 82 ～ 8. 20 μg范围内具有良好的线性关系;
槲皮素的回归方程为:Y = 26 989 X + 199. 10，r = 0. 999 1，表明
槲皮素在 0. 869 6 ～ 8. 696 0 μg 范围内具有良好的线性关系;
芹菜素的回归方程为:Y = 31 876 X + 501. 09，r = 0. 999 3，表明
芹菜素在 0. 777 6 ～ 7. 776 0 μg范围内具有良好的线性关系。
2. 5 精密度试验
取各对照品溶液，分别连续进样 6 次，以峰面积计算 ＲSD
值。结果，木犀草素、槲皮素、芹菜素的 ＲSD 值均 ＜ 3. 0%，符
图 1 水解液(A)、木犀草素(B)、槲皮素(C)和
芹菜素(D)HPLC图
Fig 1 HPLC of hydrolysate(A)，luteolin(B)，quercetin
(C)and apigenin(D)
合有关规定。
2. 6 稳定性试验
取同一份供试品溶液，分别于 0、2、4、6、8、16、24 h 进样，
测定木犀草素、槲皮素、芹菜素的峰面积，ＲSD 值均 ＜ 3. 0%，
符合有关规定。
2. 7 重复性试验
取同一批样品 6 份，每份 1 g，精密称定，按供试品溶液制
备方法制备，进样，测定峰面积，计算木犀草素、槲皮素、芹菜
素的含量，平均值分别为 1. 08%、0. 91% 和 3. 25%，ＲSD 值
均 ＜ 3. 0%，符合有关规定。
2. 8 加样回收率试验
精密称取已知含量的样品 6 份，分别精密加入 3 种对照
品溶液，测定含量，并计算回收率。结果，木犀草素、槲皮素、
芹菜素的平均加样回收率分别为 95. 8%、97. 1%、99. 6%，ＲSD
值均 ＜ 3. 0%。
2. 9 样品测定结果
按上述方法测定 3 个批次齿叶白鹃梅叶中木犀草素、槲
皮素和芹菜素的含量，每个样品平行 2 例，见表 1。
表 1 齿叶白鹃梅叶中 3 种黄酮苷元的含量测定结果(%)
Tab 1 Content determination of three flavonoid aglycones
in leaves of Exochorda serratifolia S． Moore．(%)
样品编号 木犀草素含量 槲皮素含量 芹菜素含量
样品 1 1. 07 0. 93 3. 18
样品 2 1. 12 0. 94 3. 09
样品 3 1. 01 0. 95 3. 11
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3 讨论
本研究通过对齿叶白鹃梅叶酸水解条件进行考察，主要考
察了对酸水解影响较大的酸浓度、水解温度和水解时间 3 个影
响因素，以 3 种苷元的含量作为考察指标，最终确定了将齿叶
白鹃梅叶中含有的黄酮苷水解为苷元的最佳工艺为齿叶白鹃
梅叶粉末 1. 0 g，加入 4. 0 mol /L盐酸-甲醇溶液 50 ml，于 80 ℃
的水浴中反应 5 h。
本研究采用 HPLC建立了齿叶白鹃梅水解叶中木犀草素、
槲皮素和芹菜素这三种苷元的含量测定方法，确定色谱条件为
C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm)，流动相为乙腈-2%冰乙
酸(V ∶ V = 20 ∶ 80)，柱温设置在 25 ℃，检测波长设为 267 nm。
还对包括线性范围、精密度、稳定性、重复性和加样回收率在内
的方法学进行了考察，最终建立的含量测定方法可用于齿叶白
鹃梅叶的质量控制。
参考文献
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* 副主任药师。研究方向:药品的质量控制和分析。E-mail:
122502654@ qq． com
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酮苷元的含量［J］．应用化工，2014，43(5):950-954．
(收稿日期:2016-01-06)
液相色谱-质谱法快速测定小儿清解颗粒中非法添加的
氨基比林
隋 译* (鸡西市食品药品检验检测中心食保化室，黑龙江 鸡西 158100)
中图分类号 Ｒ985 文献标志码 A 文章编号 1672 － 2124(2016)06 － 0798 － 03
DOI 10. 14009 / j． issn． 1672-2124． 2016． 06． 029
摘 要 目的:建立快速准确鉴定小儿清解颗粒中非法添加氨基比林的方法。方法:用液相色谱质谱联用技术对 4种不同厂家小儿清解
颗粒中非法添加消肿止痛类化学药品氨基比林进行筛查，与氨基比林对照品的一、二级质谱图进行比较。结果:在样品质谱图中有 3家
样品的图谱与对照品有不一致的一级质谱峰与二级质谱峰，1个厂家的样品图谱有与对照品有一致的一级质谱峰与二级质谱峰。结论:
应用液相色谱-质谱法可快速准确鉴定出中药制剂中是否含有非法添加的氨基比林，并可以准确计算添加氨基比林的含量。
关键词 液相色谱-质谱法;小儿清解颗粒;氨基比林
Liquid Chromatogram and Mass-spectrography for Ｒapid Determination of Illegally Added
Amidopyrine in Pediatric Qingjie Particles
SUI Yi(Food，Supplements and Cosmetics Ｒoom，Jixi Food and Drug Testing Center，Heilongjiang Jixi
158100，China)
ABSTＲACT OBJECTIVE:To establish a rapid accurate identification method of illegally added amidopyrine in
pediatric Qingjie particles． METHODS:Illegally added acetanilide detumescence chemical drug amidopyrine from four