全 文 ：No.9.2008
紫堇为罂粟科紫堇属植物(corydalis)的全草,紫
堇属植物在我国分布有200余种,青藏高原约有 120
种,广泛用于藏医藏药。具有清热解毒、止血镇痛、
活血散瘀、祛风利气等功效[1]。经研究发现,其含有
丰富的异喹啉类生物碱[2-3]以及其他生物碱类。紫堇
总生物碱具有多种生理活性,如扩张支气管平滑肌[4],
增加冠脉血流量[5]等,可对机体产生多种药理学作
用。因此对紫堇的研究具有重要的应用价值。对紫
堇药用的开发也具有重要意义。首次以茶多酚为对
照对紫堇的化学成分总生物碱进行体外清除活性氧
自由基及抗氧化作用研究,为山紫堇的进一步开发利
用提供资料。
1 实验部分
1.1 材料与仪器
紫堇、茶多酚:四川碧馥生物科技有限公司;
盐酸、核黄素(VB2)、氯化硝基四氮唑蓝(NBT):
ChemBase公司;番红花红(SafranineT)、蛋氨酸、2-
硫代巴比妥酸(TBA)、三氯乙酸(TCA):分析纯;实验
用水为二次蒸馏水。
7200型紫外可见分光光度计:北京瑞利分析仪
器公司;数显恒温水浴锅,S3120A超声波清洗器,
紫堇中总生物碱体外清除
活性氧自由基及抗氧化作用研究
贝玉祥,董秀华,李干鹏,高云涛 *
(云南民族大学化学与生物技术学院,昆明 650031)
摘要:利用Fenton反应产生羟自由基·OH,光照核黄素产生超氧阴离子自由基O-2·,分光光度法研究
伸筋草体外清除活性氧自由基的作用。用硫代巴比妥酸 (TBA)分光光度法研究伸筋草对·OH诱发卵磷
脂脂质过氧化损伤的抑制作用。实验结果表明,紫堇能有效清除活性氧自由基,对卵磷脂脂质过氧损
伤有显著抑制作用。
关键词:紫堇;总生物碱;活性氧自由基;抗氧化活性
中图分类号:TS201.4 文献标志码:A 文章编号:1005-9989(2008)09-0189-03
Thegeneralalkaloidofcorydalisonactiveoxygensand
itsantioxidationinvitro
BEIYu-xiang,DONGXiu-hua,LIGan-peng,GAOYun-tao*
(SchoolofChemistryandBio-Science,YunnanNationalitiesUniversity,Kunming650031)
Abstract:Scavengingefectsofcorydalisonactiveoxygenspecies·OHandO-2· generatedbyFenton
reactionandriboflavinephotosensitizationinvitrowereinvestigatedbythemeansofspectrophotometry.The
inhibition efects ofcorydalis.on the lecithin lipid peroxidation were observed by thiobarbituric acid
spectrophotometry.Theresultsshowedthatcorydaliscouldscavengeactiveoxygeneficiently.
Keywords:corydalis;generalalkaloid;activeoxygen;antioxidation
收稿日期:2008-01-30 *通讯作者
基金项目:云南省教育厅科学研究基金项目(2007B148M)。
作者简介:贝玉祥(1981—),男,河北唐山人,硕士研究生,主要从事天然药物化学的研究工作。
提取物与应用
189
DOI:10.13684/j.cnki.spkj.2008.09.075
No. 9. 2008
低温超速离心机,光照箱(自制,35cm×30cm×25cm,
光源为纯稀土节能灯两个,灯功率45 W)。
1.2实验方法
1.2.1紫堇中总生物碱提取 用盐酸将水调节 pH值
为 1~2之间,取正丁醇提取的紫堇提取液,浓缩得
浸膏120 g,充分溶解在酸性水溶液中,过滤,取澄
清滤液,用氨水将滤液的 pH值调节为 10~11之间,
用同等体积的氯仿∶正丁醇(3∶1)萃取碱液,取下层液
蒸干,反复萃取8次,共得到总生物碱18 g。
1.2.2样品紫堇中总生物碱溶液和茶多酚溶液的配制
准确称取1.2.1中总生物碱和茶多酚各0.2000 g,
用蒸馏水配制成2 mg/mL的溶液,供实验所用。
1.2.3抗氧化活性的测定
1.2.3.1超氧阴离子自由基的产生及清除活性测定
采用光照核黄素[6]的方法用 0.05 mol/L pH7.4的
PBS缓冲液为溶剂,配制 1.67×10-5mol/L核黄素,
0.01 mol/L蛋氨酸,9.2×10-5mol/L-氯化硝基四氮唑
兰(NBT)。分别取上述 3种溶液各 2.0 mL,分别加入
稀释好的不同浓度的诃子提取液(样品)和普洱茶提取
液(对照)1.0 mL,空白管以1.0 mL缓冲液代替样品溶
液。置于光照箱中光照 30 min,取出后以缓冲溶液
为参比于560 nm处测定溶液的吸光度。清除率按下
式计算:A0为空白管的吸光度,A样为样品管的吸
光度。
清除率(%)=A0-A样
A0
×100
1.2.3.2羟自由基的产生及清除活性测定[7]采用亚铁
离子催化过氧化氢产生羟自由基(Fenton反应),该反
应产生的羟自由基可使番红花红褪色。针对这一特
点来研究诃子中多酚对羟自由基的清除能力。
取0.15 mol/LpH7.4的磷酸缓冲溶液1.0 mL,40
μg/mL番红花红 1.0 mL,0.945 mmol/L EDTA-Fe(Ⅱ)
(新鲜配置)1.0 mL,不同浓度的样品溶液 0.5 mL、3%
H2O 21.0 mL(新鲜配置),混合后在 37℃水浴中反应
30 min后在 520 nm处测定吸光度 As。空白组以 0.5
mL蒸馏水代替样品测定吸光度A0,对照组以1.5 mL
蒸馏水代替 H2O2和样品测定吸光度 A,用 3.5 mL蒸
馏水代替番红花红、EDTA-Fe(Ⅱ)、H2O2、样品,1.0
mL磷酸盐缓冲溶液,调零。并按下式计算清除率:
清除率(%)=As-A0
A-A0
×100
1.2.3.3对脂质过氧化抑制活性的测定[8]取 0.5 mL
卵磷脂溶液(用200 mg卵磷脂溶解于30 mL10 mmol/
LpH 7.4 PBS,冰浴振荡),加入 pH 7.4 PBS缓冲液
1.0 mL,不同浓度的样品溶液 1 mL,2.5 mmol·
LEDTA-Fe(Ⅱ)1.0mL,混匀后于37℃水浴中反应45 min,
再加入 28%(w/v)的 TCA 2.0 mL,1%(w/v)的 TBA1.0
mL,混匀后置于100℃沸水浴中加热10 min,冷却后
在 532 nm处测定吸光度 A样,用 PBS缓冲液调零,
空白管用 PBS缓冲液代替样品测吸光度 A0。并按下
式计算抑制率:
抑制率(%)=A0-A样
A0
×100
2 结果与讨论
2.1对超氧阴离子自由基的清除作用
紫堇中总生物碱对超氧阴离子的清除作用见图
1,当清除率达到50%时紫堇中总生物碱的当量浓度
为:IC50=0.18 mg/mL,紫堇中总生物碱的当量浓度≥
0.26 mg/mL时,清除率达最大,最大清除率为
73.31%。而茶多酚的当量浓度为 IC50=0.16 mg/mL,
当茶多酚的当量浓度≥0.26 mg/mL时,最大清除率
为 79.53%,这说明紫堇中总生物碱与茶多酚对·OH
的清除作用相近。
2.2对Fenton反应产生·OH的清除作用
紫堇中总生物碱对 Fenton反应产生·OH的清除
作用见图2,当清除率达到50%时,紫堇中总生物碱
当量浓度≥40μg/mL时,清除率达最大,最大清除
率为 96.25%。而茶多酚的当量浓度≥40μg/mL时,
清除率达最大,最大清除率为 67.10%。这说明紫堇
中总生物碱对·OH的清除作用明显强于茶多酚。
2.3对脂质过氧化的抑制作用
紫堇中总生物碱对卵磷脂脂质过氧化的抑制作
用试验结果见图3,当紫堇中总生物碱的当量浓度≥
0.24 mg/mL时,抑制率达最大,其抑制率高达
60.62%,茶多酚的当量浓度≥0.24 mg/mL清除率为
图 1 紫堇中总生物碱和茶多酚对光照核黄素产生超氧
阴离子自由基的清除作用
80
60
40
20
0
0 0.1 0.2 0.3
浓度/(mg/mL)
清
除
率
/
%
茶多酚
总生物碱
清
除
率
/
%
90
80
70
60
50
40
30
20
10
0
0 5 10 15 20 25 30 35 40 45
浓度/(μg/mL)
茶多酚
总生物碱
提取物与应用
190
No. 9. 2008
64.90%。这说明紫堇中总生物碱与茶多酚对卵磷脂
脂质过氧化的抑制作用相似。
3 讨论
用光照核黄素的方法产生 ,可使氯化硝基四氮
唑蓝产生蓝色物质,该物质在560 nm处有最大吸收
峰。随着反应的进行,蓝色物质的生成就越多,加
入伸筋草提取液可使 O-2·的产生受到抑制,进而蓝
色物质的生成也受到抑制,因此,测定该波长下的
吸光度值的变化,可反映伸筋草提取液对 O-2·的清
除能力。
根据 Fenton反应的原理,H2O2在 Fe2+存在的条
件下可生成·OH,·OH可使番红花红褪色,番红花红
在 520 nm处有最大光吸收,加入伸筋草提取液后,
可有效阻止番红花红褪色,进而反映伸筋草提取液
对·OH的清除能力。
卵磷脂可被·OH氧化损伤产生丙二醛(MDA)类似
物,硫代巴比妥酸(TBA)可与MDA类似物反应生成粉
红色物质,该物质在532 nm处有最大光吸收,加入
伸筋草提取液后,可有效抑制MDA的生成,进而反
映伸筋草的抗脂制过氧化作用。
实验表明,紫堇中总生物碱能够有效地清除O-2·
和·OH,对卵磷脂脂质过氧化损伤有显著抑制作用,
其清除活性氧自由基及抗氧化作用与公认具有强抗
氧化作用的茶多酚相近,这说明紫堇作为一种天然
抗氧化剂具有较好的应用前景,尤其是在食品抗氧
化方面。
参考文献:
[1]罗达尚,冯赤华,夏光成.青藏高原藏药资源-紫堇属植物
初探[J].中草药,1984,15(6):33-36
[2]周金云.山紫堇生物碱的化学研究[J].中草药,1992,23(4):
215-216
[3]方起程,林茂,翁庆梅,等.紫堇属植物生物碱的化学-青海
高原 4种紫堇属植物生物碱的化学研究[J].药学学报,
1981,16(10):798-800
[4]赵子厚,陈丽华.异紫堇碱对离体豚鼠回肠的收缩反应及
乙酰胆碱释放的影响[J].中草药,1984,15(4):20-22
[5]蒋燮荣,赵树仪,果淑敏,等.脱氢紫堇碱对心血管系统的
药理作用[J].药学学报,1982,17(1):61-65
[6]刘杰超,王思新,焦中高,等.苹果多酚提取物抗氧化活性
的体外试验[J].果树学报,2005,22(2):106-110
[7]王巨存,邢国胜,胡文铎,等.有机锗Ge-132对氧自由基和
由羟自由基诱导的脂质过氧化的影响[J].中国药学杂志,
1994,29(1):23-24
[8]吕晓玲,朱惠丽,姜平平,等.紫苏提取物抗氧化活性体外
实验研究[J].中国食品添加剂,2003,(5):22-25
70
60
50
40
30
20
10
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3
图3 紫堇中总生物碱与茶多酚对脂质过氧化的抑制作用
抑
制
率
/
%
浓度/(mg/mL)
茶多酚
总生物碱
食事传递
Food Info
提取物与应用
河北省生鲜牛奶购销市场管理不规范、无序竞争、争
抢奶源等问题有望从源头上得到根治。日前,河北省第十
一届人民代表大会常务委员会第四次会议通过了 《河北省
奶业条例》,自 2008年 10月 1日起施行,该 《条例》首次
将生鲜牛奶收购和乳制品加工纳入依法管理的轨道。
即将实施的 《河北省奶业条例》第四条规定: “县级
以上人民政府畜牧兽医行政主管部门是本行政区域内奶业
行政主管部门,负责组织实施本条例。”这将从根本上改变
以往奶业管理没有主管部门,相关部门都管却又都不管,
工作中常常有互相推诿、互相扯皮的现象。
为保障生鲜牛奶质量安全, 《河北省奶业条例》第
二十七条规定:从事鲜奶生产,应当有质量安全和卫生
管理制度,从业人员持有有效的健康证明,挤奶前按照
规程对牛体和挤奶器械进行清洗消毒,生鲜牛奶挤出后在
2小时内降温至 0℃至 4℃保存,不具备降温保存条件的,
应当及时交售到生鲜牛奶收购站,贮存、运输生鲜牛奶
应当使用不锈钢等不易造成生鲜牛奶污染的容器。鼓励
单位和个人依法设立具有中介性质的生鲜牛奶质量安全
检测机构,取得相应资质认证后,开展生鲜牛奶质量安
全检测活动。
为维护乳制品加工市场秩序,杜绝不规范厂家一哄而
上, 《河北省奶业条例》第三十五条设置了乳制品加工企
业的准入条件,要求有稳定的奶源基地,加工厂房 (车间)
的选址、设计符合国家有关规定,有与生产的产品和工艺
相适应的加工、卫生、包装和检测设备,有相应专业技术
人员和合格的质量检验人员,依法取得乳制品加工的有关
证照,依法进行环境影响评价,有符合环保要求的废水、
废气等污染物的治理设施等。使用复原乳作为原料生产液
态奶的,应当标注 “复原乳”,并在产品配料中如实标注复
原乳所含原料及比例。第三十九条规定了乳制品的销售事
项,并借鉴国际通行做法,在生产环节建立不安全乳制品
召回制度。 (小文)
河北省鲜奶收购和乳制品加工将有法可依
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
191