全 文 ：4　讨论
血虚症是临床常见病症 , 多由于生血乏源 、失血过多 、肾精亏
损 、大病等引起 [ 15] , 目前对血虚症的病理研究主要集中于临床体
征 、血细胞功能 、免疫功能 、骨髓造血功能的改变等有关方面 ,白
芍作为复方补血用药的组分比较常见 ,因此可以推测单味白芍具
有一定的补血作用。
环磷酰胺是目前应用的各种免疫抑制剂中作用最强的药物
之一 , 它可以使免疫器官萎缩 、抑制造血系统的作用。在本实验
中采用了腹腔注射环磷酰胺的造模方法 ,表 1 ～ 2结果显示 ,模型
组小鼠白细胞数 、红细胞数 、血红蛋白含量 、骨髓有核细胞数和免
疫器官脾脏 、胸腺的重量均显著低于空白组(P<0.01), 说明小
鼠血虚模型成功建立 。
从实验的结果可以看出 , 与模型组相比较 , 白芍水煎液低 、
中 、高剂量组的白细胞数 、红细胞数 、血红蛋白含量指标均有不同
程度升高 , 且差异显著(P<0.01), 特别是对白细胞数的恢复作
用明显 ,与正常组比较无显著差异。可见 , 白芍水煎液对血虚小
鼠的造血功能的改善是十分有益的。但是 , 从表中我们可以看
出 , 对于血虚小鼠中剂量白芍水煎液补血作用最佳 , 小剂量的补
血作用尚可 , 高剂量组最差。说明白芍水煎液的服用剂量并非量
越大 , 效果越好 ,只有科学用药剂量才会发挥最适的作用。
与空白组比较 , 模型组和白芍水煎液低 、中 、高剂量组及复方
阿胶浆组小鼠骨髓有核细胞数均明显下降 ,表明环磷酰胺连续给
药对骨髓造血功能有明显的抑制作用(P<0.01)。与模型组比
较 , 白芍水煎液各剂量组和复方阿胶浆组小鼠给药后 ,其骨髓有
核细胞数均明显高于模型组(P<0.01)。提示白芍水煎液对环
磷酰胺所致的小鼠骨髓有核细胞减少有明显的改善作用 ,对骨髓
的造血机能有明显的促进作用。
脾脏 、胸腺都是人体很重要的免疫器官 , 同时脾脏具有一定
的造血功能 , 当骨髓功能受损时 , 脾脏可代偿性髓外造血 [ 16] 。因
此 , 通过免疫器官重量的改变可间接了解小鼠的造血能力及免疫
功能的高低。结果表明 , 与模型组比较 ,白芍水煎液各剂量组和
复方阿胶浆组小鼠的脾脏 、胸腺的重量均高于模型组 ,其中白芍
水煎液中剂量组对于提高血虚小鼠免疫器官重量的作用最佳 ,小
剂量的补血作用尚可 , 高剂量组作用不明显。提示白芍水煎液对
小鼠的髓外造血有一定的促进作用 ,可提高免疫功能而起到扶正
固本的作用。
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收稿日期:2008-03-25;　修订日期:2008-09-20
作者简介:杨　杰(1983-),男(汉族),四川万源人 ,现为贵阳医学院药学院
硕士研究生 ,学士学位 ,主要从事天然产物成分分析及质量标准研究工作.
＊通讯作者简介:郝小燕(1955-), 女(满族),贵州贵阳人 , 现任贵阳医学
院教授 ,学士学位 ,主要从事天然产物成分分析和中药制剂工艺及质量标
准研究工作.
延胡索中去氢紫堇碱对照品的制备及含量测定
杨　杰 ,白　雪 ,肖海涛 ,刘昌福 ,朱　洁 , 郝小燕＊
(贵阳医学院药学院 ,贵州 贵阳　550004)
摘要:目的 研究中药延胡索中去氢紫堇碱对照品的制备及含量测定方法。方法 采用硅胶柱色谱与半制备高效液相色
谱组合分离技术 , 分离纯化去氢紫堇碱 ,采用薄层色谱法和高效液相色谱面积归一化法检测纯度 ,波谱法鉴定其结构 , 反
相高效液相色谱法测定其含量。结果 制备的化合物鉴定为去氢紫堇碱 , 纯度为 98.7%;含量测定在 0.076 3 ～ 0.457 6
μg呈良好线性关系 , r= 0.999 8, 平均回收率为 104.44 %, RSD为 2.36%(n=6)。结论 该制备方法效率高 , 所得化合
物纯度高 , 可用于大量制备。含量测定方法准确 , 简便 ,可靠 , 重复性好。
关键词:延胡索;　去氢紫堇碱;　半制备高效液相色谱法;　反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)04-1000-02
　　延胡索 CorydalisyanhusuoW.T.Wang.为罂粟科植物延胡索
的干燥块茎 , 具有活血化淤 , 利气止痛功能 , 用于各种痛症的治
疗 [ 1] 。延胡索中主要含生物碱 , 其中延胡索乙素和丑素是延胡
索镇痛的主要活性成分 [ 2] , 2005年版《中国药典》及成方制剂中
均采用延胡索乙素为对照品进行评价 [ 3 ～ 5] 。本课题组研究发现 ,
延胡索生物总碱具有较好的抑制乙酰胆碱酯酶的作用 ,其中去氢
紫堇碱是主要活性成分之一。 但国内未获得去氢紫堇碱对照品
商品 , 并且也未见采用去氢紫堇碱为对照品来评价延胡索质量的
报道。因此 , 有必要对延胡索中去氢紫堇碱进行定性鉴别和含量
测定。现将延胡索中去氢紫堇碱对照品的制备方法和含量测定
方法报道如下。
·1000·
时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4　
1　仪器与试剂
X-4型显微熔点仪(国产 ,温度计未校正);INOVA-400型
核磁共振仪 (TMS为内标);HP5973质谱仪 (电离条件为 70
eV);KQ-250B型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司);高
效薄层层析板(GF254,青岛海洋化工厂生产);甲醇 、乙腈为色谱
醇 , 其他化学试剂均为分析醇 , 水为纯净水。
延胡索药材采自浙江省东阳市 ,经贵阳中医学院陈德媛教授
鉴定为罂粟科植物延胡索 CorydalisyanhusuoW.T.Wang.的干
燥块茎。
2　方法与结果
2.1　去氢紫蓳碱粗提物的制备 取延胡索粗粉 5 kg, 用 10倍量
的 70%的乙醇回流提取两次 , 2 h/次 ,滤过 ,滤液减压回收溶剂 ,
得乙醇提取浸膏。乙醇提取浸膏加入 10%的盐酸溶液溶解 , 调
pH2 ～ 3,滤过。滤液用石油醚萃取 , 水部分用浓氨水调 pH9 ～
10,用氯仿萃取 ,氯仿部分再用水洗 , 浓缩水洗液至浸膏。将上述
所得浸膏上硅胶柱 , 用氯仿 -甲醇 -醋酸乙酯梯度洗脱 , 收集氯
仿 -甲醇 -醋酸乙酯(8∶1∶1)部分 , 低温减压回收溶剂得去氢
紫堇碱粗提物。
2.2　色谱条件
2.2.1　制备 HPLC色谱条件 XTerraPrepRP-18柱(10 μm,
150mm× 7.8 mm);柱温为室温;检测波长 345 nm;流动相为
0.01 mol· L-1碳酸氢铵溶液(用浓氨水调 pH 10.5)-乙腈(83
∶17), 流速:2.0 ml/min。
2.2.2　分析 HPLC色谱条件 DiamonsilTMC18柱 (5μm, 250 mm×4.6 mm),柱温 30℃;检测波长 345 nm;流动相为 0.03 mol/L
的磷酸二氢钾缓冲液 -乙腈(74∶26),流速 1.0 ml/min。
2.2.3　去氢紫堇碱对照品的制备纯化 取去氢紫堇碱粗提物
1.0g, 用 10 ml甲醇超声溶解 , 过 0.45 μm滤膜 , 备用。吸取 1.0
ml样品进半制备型高效液相色谱仪 , 收集保留时间所在的组分 ,
减压回收溶剂 , 得去氢紫堇碱粉末。加乙醇适量溶解 , 重结晶 ,
即得。
2.3　样品纯度检测及结构鉴定
2.3.1　晶形确定 取少许冷冻干燥絮状物于表面皿中 , 加少量
无水乙醇溶解 , 常温下放置 3 d, 黄色柱状结晶析出。
2.3.2　薄层色谱检测 薄层板:高效薄层层析板(GF254)。 3种
展开剂系统:以氯仿 -甲醇(5∶1);氯仿 -甲醇 -醋酸乙酯(8∶
1∶1);乙醚 -环己烷 -甲醇(5∶3∶1)。点样:在同一板上 , 按
5, 10, 15, 20, 25 μl不同的浓度点样。展距 8 cm, 定位后经紫外
254nm, 碘蒸气及碘化铋钾溶液显色检视。结果在薄层色谱同一
位置处 , 均为单一斑点 ,未见杂质斑点 ,符合化学品要求。
2.3.3　紫外检测 取去紫堇碱对照品乙醇溶液经紫外光谱扫
描 , 结果表明最大吸收波长为 345 nm。因此 , 确定 345nm为测定
波长。
2.3.4　面积归一化法 精密称取去氢紫堇碱对照品 , 用流动相
制成浓度为 0.13mg· ml-1的样品溶液 , 照 “分析 HPLC色谱条
件” ,进样 10 μl,样品显示为单峰 , 用面积归一化法计算含量为
98.7%(保留时间为 min), 符合中药化学对照品含量测定用要
求 , 结果见图 1。
2.3.5　结构鉴定 去氢紫堇碱为黄色晶状柱晶(乙醇), 熔点
135℃。EI-MSm/z:366[ M] +1.1HNMR(400 MHz, CDCl3)δ:
1.97 (3H, s, CH3 -13), 3.24 (2H, t, J= 5.2 Hz, 5 -H),
3.94 (3H, s, OCH3), 3.99 (3H, s, OCH3), 4.05 (3H, s,OCH3), 4.02 (3H, s, OCH3), 5.03 (2H, t, J= 5.2 Hz, 6 -H), 6.93(1H, s, 4-H), 7.19(1H, s, 1-H), 7.87 (1H, d,
J= 9.6 Hz, 12 -H), 7.99 (1H, d, J= 9.6 Hz, 11 -H),
10.11(1H, s, 8 -H).13CNMR(100 MHz, CDCl3)δ:18.0(CH3 -13), 28.1(C-5), 56.3, 56.6, 57.0(3OCH3), 57.5 (C-6), 62.6 (OCH3), 110.8 (C-4), 113.3(C-1), 119.2 (C-
13), 120.3 (C-11), 121.6 (C-12a), 125.7(C-12), 129.4 (C
-8a), 131.9 (C-4a), 133.8 (C-13b), 136.5 (C-13a),
145.1(C-8), 145.7(C-10), 147.9 (C-2), 150.4 (C-3),
151.4(C-9)。以上波谱数据与文献报道 [ 6]的一致 , 故鉴定为
去氢紫堇碱。
2.4　延胡索药材中去氢紫堇碱的含量测定
2.4.1　色谱条件与系统适应性实验 照 “分析 HPLC色谱条件”
项 , 样品的理论塔板数均大于 8000,分离度均大于 2.7(见图 2),
说明该方法用于延胡索中样品去氢紫堇碱的含量测定可行。
2.4.2　供试品的制备 称取延胡索粗粉约 1 g, 精密称定 , 置 20
ml具塞三角瓶中 ,加入 1%的盐酸甲醇 20.00 ml, 称重 , 40 ℃超
声提取 30min,取出 , 补足减失重量 , 冷却 , 滤过 , 取续滤液 10.00
ml, 回收乙醇 ,流动相定容至 10.00 ml,过 0.45 μm滤膜 ,备用。
2.4.3　线性范围考察 精密称取去氢紫堇碱对照品 0.0153 g于
20 ml容量瓶中 , 用流动相定容 ,得去氢紫堇碱储备液。再从中取
1.00 ml置于 10 ml容量瓶中 , 用流动相定容 , 得浓度为 76.5 μg
· ml-1的对照品标准溶液。分别精密吸取对照品标准溶液 1, 2,
3, 4, 5, 6μl注入色谱仪 , 记录峰面积。以色谱峰积分面积为纵坐
标 (Y), 去氢紫堇碱的进样量为横坐标 (X), 绘制标准曲线 , 得
回归方程:Y=5 457.104 2X-17.122 1, r=0.999 8, 样品在 0.076
3 ～ 0.457 6 μg浓度范围内线性关系良好。
2.4.4　精密度实验 精密吸取同一对照品液 3 μl, 照前述色谱
条件重复进样 6次 , 测得去氢紫堇碱峰面积积分值的 RSD为
0.67%,表明测定仪器精密度良好。
2.4.5　重复性实验 取同一批样品 ,按 “供试品溶液的制备”方
法 , 平行制备供试品溶液 6份 , 按前述色谱条件进样 10 μl, 测得
去氢紫堇碱总含量平均值为 0.9713 mg· g-1 , RSD为 2.48%, 表
明测定方法重复性良好。
2.4.6　稳定性实验 将同一份供试品溶液放置 0, 2, 4, 8h后 , 照
前述色谱条件进样 10 μl, 测得去氢紫堇碱在 8 h内峰面积的
RSD为 1.79%, 表明供试品溶液在 8 h内稳定性良好。
2.4.7　回收率实验 取已知含量的样品约 0.5 g, 共 6份 , 精密
称定 , 分别加入不同量的去氢紫堇碱对照品 , 按 “供试品溶液的
制备”方法制备 ,按前述色谱条件进样 10 μl,测得去氢紫堇碱的
平均回收率为 104.44 %, RSD为 2.36 %(n= 6), 表明测定方
法准确可靠。结果见表 1。
表 1　回收率实验
编号 取样量m/g
样品中含去
氢紫堇碱量 m/mg
去氢紫堇碱
加入量 m/mg
实测含量
m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 0.502 2 0.494 3 0.519 0 1.043 4 105.78
2 0.510 7 0.502 7 0.519 0 1.042 3 103.94
3 0.500 3 0.492 5 0.519 0 1.057 1 108.78 104.44 2.36
4 0.499 8 0.492 0 0.519 0 1.027 2 103.10
5 0.502 1 0.494 2 0.519 0 1.024 4 102.13
6 0.503 6 0.495 7 0.519 0 1.030 0 102.29
　　n= 6
·1001·
LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4 时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期
图 1　对照品的色谱图
图 2　样品的色谱图
3　讨论
延胡索生物碱类大部分属于小檗碱或原小檗碱型 ,它们性质
相差较小 , 极性相近 ,前人对去氢紫堇碱的分离采用的均是常压
硅胶柱法 , 效率较低。本研究通过常规方法分离得到去氢紫堇碱
粗品 , 再用反相高效液相色谱法提纯去氢紫堇碱 , 方法简便易行 ,
产品纯度好 , 成本低 ,适合去氢紫堇碱对照品的大量制备。
目前采用反相高效液相色谱测定延胡索中去氢紫堇碱含量
文献报道很少 , 大部分是关于延胡索乙素含量的测定 ,这难以全
面反映延胡索药材的内在质量。 测定去氢紫堇碱在延胡索中的
含量 ,对于控制延胡索产品的质量具有重要的意义。
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制剂与炮制
收稿日期:2008-03-25;　修订日期:2008-12-03
作者简介:王　军(1969-),男(汉族),江苏仪征人 ,现任南京工业大学副
教授 ,博士学位 ,主要从事生物化工材料研究工作.
甘草次酸聚乳酸微球的制备及其性质研究
王　军 1, 2 , 张　健 1 , 韦　萍 1 , 卢定强 1
(1.南京工业大学制药与生命科学学院 ,江苏 南京　210009;
2.江苏警官学院 ,江苏 南京　210012)
摘要:目的 研究甘草次酸聚乳酸微球的制备工艺 , 并考察其体外释药特性。方法 以自制的聚乳酸为载体 ,二氯甲烷与
乙醇(体积比 1∶1)为油相 ,聚乙烯醇为乳化剂 ,采用正交设计实验优化空白聚乳酸微球的制备工艺 , 采用溶剂挥发法制
备甘草次酸聚乳酸微球。结果 优选制备的甘草次酸聚乳酸微球形态圆整 , 大小均匀 , 表面光滑 , 载药量为 22.92%。 体
外释药结果表明 , Higuchi方程能较好地对其进行拟合。结论 制备工艺稳定可行 , 所得甘草次酸聚乳酸微球具有良好的
缓释能力。
关键词:甘草次酸;　聚乳酸;　正交设计;　微球;　体外释放
中图分类号:R283　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2009)04-1002-02
　　甘草次酸(GA)是一种天然的抗炎性药物 , 是由甘草中提取
的甘草酸经酸性水解得到的一种甘草皂苷元 ,主要用于治疗风湿
性关节炎 、气喘 、过敏性及职业性皮炎 、眼耳鼻喉科炎症及溃疡
等。近期研究发现该药物是一种对动物皮肤肿瘤增生的抑制剂 ,
将其应用于化妆品中可调节皮肤的免疫功能 ,增强皮肤的抗病能
力 , 同时还能解除化妆品及其他外界因素对皮肤的毒副作用 [ 1] 。
这说明甘草次酸对生命科学具有重要作用 ,因此研究该药物具有
重要意义。应用生物可降解材料聚乳酸制备缓释微球可以提高
药物的生物利用度 , 增强药物稳定性及临床疗效 , 达到缓释和靶
向作用 , 减少给药次数 , 减轻和消除毒副作用 [ 2 ～ 6] 。本实验以生
物降解材料聚乳酸为载体 ,制备甘草次酸聚乳酸微球 ,并对其药
剂学性质进行了研究 。
1　仪器和试剂
LEICADM1000光学显微镜(德国徕卡公司);WX型旋片式
真空泵(上海仪表供销公司);DZF-6020型真空干燥箱(上海博
讯实业有限公司);JB90 -D电动搅拌机(上海标本模型厂);
DSHZ-300多用途水浴恒温振荡器(江苏太仓市实验设备厂);
KQ2200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);
HPLC(Agilent1100series);高压泵 G1312A;紫外检测器 G1314A;
C18Hypersil(4.6mm×250mm, 5μm);TU-1901紫外分光光度计(北京谱析通仪器有限责任公司);冷冻离心机(上海离心机械研
究所);乌氏粘度计(南京大学玻璃仪器厂)。乳酸(安徽丰原格
拉特乳酸有限公司);氯化亚锡 AR(上海试四赫维化工有限公
司);二氯甲烷 AR(上海凌峰化学试剂有限公司);无水乙醇(上
海试剂一厂);甘草次酸(实验室自制);十二烷基硫酸钠(吴江市
集星化学厂);甲醇为色谱纯(上海试剂一厂);重蒸水;其他试剂
为分析纯。
2　方法与结果
2.1　聚乳酸的合成及分子量测定 将乳酸经除水处理后 , 加入
催化剂 ,控制温度 、压强 ,反应 20h左右 ,反应结束后溶解 ,提纯产
物 , 真空干燥得白色粉末状产物。通过乌氏粘度计测定聚乳酸的
特性黏度 ,由公式 [ η] =5.45 ×10-4Mw0.73计算出聚合物的粘均
分子量为 12 000。
2.2　因素水平确定 根据单因素考察结果 , 将对成球性影响较
大的搅拌速度(A)、投药比(甘草次酸与聚乳酸的质量比)(B)、
乳化剂浓度(C)以及油相中 PLA比例(D)4因素作正交分析 , 按
L9(34)正交表安排实验。通过方差分析 , 4个影响因素中 , 重要性依次为:投药比 >油相中 PLA比例 >转速 >乳化剂浓度。 通
过分析 ,确定最优工艺为:搅拌速度 400 r· min-1 ,投药比 1∶3,
乳化剂浓度 1.5%,油相中 PLA比例为 1∶25。见表 1。
·1002·
时珍国医国药 2009年第 20卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2009VOL.20NO.4