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峨参多糖含量测定与抗氧化作用的研究



全 文 :2015年第 28卷第 8期
中国科技 核心期刊
峨参为伞形科峨参属植物峨参 Anthriscus
sylvestris (L.)Hoffm.,主要含有峨参内酯,具有杀
虫、抑制癌细胞增殖,抗病毒、抗癌和抗有丝分裂
的作用[1-5 ]。本文在原有研究的基础上,对其多糖
的含量进行测定, 并对峨参多糖抗氧化作用进行
研究。
1 材料与方法
1.1 实验材料峨参多糖干燥粉末(课题组自行
制备)
1.2 药品和主要试剂邻苯三酚(分析纯),成都
金线科技有限公司提供,批号:20100420;Tris(分
析纯),成都金线科技有限公司提供,批号:
20090315;蒽酮(分析纯),成都市科龙化工试剂厂
提供,批号:20101105;盐酸成都市科龙化工试剂
厂提供,批号:20100320;浓硫酸,成都市科龙化工
试剂厂提供,批号:20100320;无水葡萄糖成都市
科龙化工试剂厂提供,批号:20101020。
1.3 主要仪器及设备FA2204B型精密天平,上
海精密科学仪器有限公司提供;电子天平(61872
型),上海民桥精密科学仪器有限公司提供;HH-4
型数显恒温水浴锅,常州澳华仪器有限公司提供;
TU-1901型双光束紫外可见分光光度计,北京普
析通用仪器有限责任公司提供。
1.4 多糖的含量测定
1.4.1 原理采用硫酸-蒽酮的方法,因为多糖
在浓硫酸作用下,可以水解成单糖分子,并迅速脱
峨参多糖含量测定与抗氧化作用的研究 *
王岳峰,丁昭利
西南交通大学峨眉校区,四川 峨眉 614202
[摘要]目的:测定峨参提取物中的多糖含量并研究其抗氧化作用。方法:按照硫酸-蒽酮法,在分光光度
计620 nm处测定吸光度,按标准曲线所得回归方程计算峨参多糖的含量;同时采用邻苯三酚在碱性条件下能发
生自氧化的原理,根据抑制率=[A0-(Ax-Ai0)]/ A0×100%,计算不同浓度的峨参多糖对超氧阴离子产生的抑制
率来观察其抗氧化作用。结果:峨参提取物中多糖浓度为0.3899 mg/mL,含量为38.99%;且在0.1~1 mg/mL浓
度内,多糖对超氧阴离子的抑制率随多糖浓度的增加而增强,在0.6~1 mg/mL浓度之间,其抑制率明显增强,
最大抑制率达到31.22%。结论:峨参提取物中的多糖含量较高,且具良好的体外抗氧化活性,为把峨参多糖作为
天然抗氧化剂开发提供了科学依据。
[关键词]峨参;多糖;含量测定;抗氧化
[中图分类号]R284.2[文献标识码]A [文章编号]1004-6852(2015)08-0021-02
StudyonContentDeterminationandAntioxidantActivityofPolysaccharideinEShen
WANG Yuefeng, DING Zhaoli
Emei Branch of Xian Jiaotong University, Emei 614202, China
AbstractObjective: To study on determination and antioxidant activity of polysaccharides in EShen [An-
thriscus sylvestris (L.) Hoffm] extracts. Methods: According to the anthrone-sulfuric acid method, the contents of
polysaccharides in EShen extracts were calculated by regression equation obtained from the standard curve and the ab-
sorbance was measured under 620nm with spectrophotometer; simultaneously, with the principle of pyrogallic acid
happening auto-oxidation in alkaline situation, the inhibition rates of different concentrations of polysaccharides on su-
peroxide anion were calculated to observe its antioxidant activity in the light of inhibition rate=[A0-(Ax-Ai0)]/AO×
100%. Results: The concentrations of polysaccharides in EShen extracts were 0.389 9mg/mL and 38.99%; the inhibi-
tion rate of polysaccharides in EShen extracts on superoxide anion increased as the concentrations of polysaccharides
raised in the concentrations between 0.1 and 1 mg/mL, the inhibition rates enhanced obviously in the concentrations
between 0.6 and 1 mg/ML, maximum inhibition rate reached 31.22%. Conclusion: Polysaccharides in EShen extracts
are in high contents, which show better antioxidant activity in vitro, it would provide scientific basis for the develop-
ment of polysaccharides in EShen extracts as a natural antioxidant.
KeywordsEShen; polysaccharide; content determination; antioxidant activity
方 药·制剂分析
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Western Journal of Traditional Chinese Medicine,2015 Vol.28 No.8
中国科技 核心期刊
水生成糠醛,之后糠醛与蒽酮缩便合成糠醛衍生
物,呈蓝绿色,颜色很稳定,在620 nm处有特征吸
收,可以测定多糖含量。
1.4.2 标准曲线制备取18支具塞试管,分成
3组。每组分别加入0.1mg/mL葡萄糖标准液0、
0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL然后加蒸馏水至1.0mL,
沿试管壁缓慢加入0.2%蒽酮-浓硫酸4.0mL,振
荡器混匀,在沸水浴中加热10分钟,冷却10分钟
后,以不加葡萄糖标准液的试管为对照,在分光光
度计上测定620nm处吸光值。
1.4.3 多糖含量测定称取峨参多糖干燥粉末
0.1000g于100 mL容量瓶中,用蒸馏水定容,制
成浓度为1mg/mL的峨参多糖溶液。移取0.5mL
峨参多糖液,按照硫酸-蒽酮法,在分光光度计上
测定620nm处测定吸光度。按标准曲线所得回归
方程计算峨参多糖的含量。
1.5 抑制超氧阴离子
1.5.1 原理采用邻苯三酚在碱性条件下能发
生自氧化的原理,
1.5.2 实验操作方法于 9 支 10 mL 具塞试管
中移取 4.5mL 50mmol/L的Tris-Acc 缓冲溶液
(pH=8.2),每支试管加入 4.2 mL 双蒸水,再分别
取1mL浓度为1.0mg/mL、0.8 g/mL、0.6mg/mL、
0.4 mg/mL、0.2 mg/mL、0.1 mg/mL、0.05 mg/mL 浓
度的峨参多糖液于第3~9支试管中,第1~2支试
管用双蒸水补足。20℃水浴20分钟后,第2~9支
试管中加入浓度为10mmol/L的邻苯三酚0.4mL,
立即摇匀,准确反应 4 分钟,立即加入 8 mol/L
HCl 0.1mL 终止反应,325nm 测吸光值。
2 结果
2.1 超氧阴离子的抑制率根据抑制率 =[A0-
(Ax-Ai0)]/A0×100%,计算不同浓度多糖对超氧
阴离子产生的抑制率。见表1。
2.2 峨参多糖的含量以回归方程 y=5.575x+
0.1191,计算峨参多糖浓度为0.3899mg/mL,含量
为38.99%。见表2。
3 讨论
葡萄糖标准曲线结果显示,所得的回归方程
为 y=5.575x+0.1191,R=0.9996,说明采用硫酸-
蒽酮法测定多糖含量,所得标准曲线线性关系良
好。多糖抑制超氧阴离子量效关系实验结果表明,
在0.1~ mg/mL浓度内,多糖对超氧阴离子的抑
制率随多糖浓度的增加而增强。0.6~1mg/mL浓度
之间,其抑制率明显增强,最大抑制率达31.22%。
人体内抗自由基损伤体系是一个复杂而完善
的机能的体系,主要包括抗氧化酶和抗氧化剂两
类[6-7]。在自由基产生过多或者自由基消除功能降
低时,自由基对身体的损伤就会显现出来[8]。这时
就需要依靠外力来帮助消除体内过量的自由基,
以防止疾病的发生。研究抗氧化作用的药物对于
预防和治疗因自由基过剩引起的疾病有重要意
义。本研究初次探索研究峨参多糖的抗氧化作用,
通过峨参多糖对超氧阴离子的抑制效果证实峨参
多糖具有良好的体外抗氧化活性。这将为今后开
发峨参多糖为天然抗氧化剂提供了科学依据。
参考文献
[1] 王凤岐,吴大真.峨眉神效验方[M].北京:科学普及出版社,
1982:42.
[2] 王志光,尹述凡.脱氧鬼臼毒素杀虫作用机理初步研究[J].
中国医药工业杂志,1992,23(2):65-68.
[3] 王岳峰,耿耘,朱利平.峨参根化学成分研究[J].安微农业
科学,2009,37(23):11001-11002.
[4] 丁昭利,王岳峰,刘苡菡.峨参提取工艺的优化研究[J].安
微农业科学.2009,37(31):15424-15425.
[5] 王岳峰,刘苡菡,耿耘,等.HPLC法测定峨参中峨参內酯[J].
中成药.2011,33(9):1565-1567.
[6] 马超英,涂显琴,牛顺子,等.峨参石油醚提取物对肺癌细胞
A549和H460的增殖的抑制作用观察[J].河北医药,2011,33
(13):1956-1926.
[7] 涂显琴,马超英,耿耘,等.峨参提取物对肺癌细胞A549和
H460的增殖抑制作用的初步观察[J].中华中医药学刊,2012,
30(1):60-62.
[8] 马向华,马超英,耿耘,等.峨参不同提取物的急性毒性实验
[C].北京:全国有毒中药的研究及其合理应用交流研讨会,
2012.
收稿日期:2014-10-25
*基金项目:四川省应用基础项目(编号:05JY029-099-1)。
作者简介:王岳峰(1957—)男,副教授。研究方向:中药学。
表 2 葡萄糖不同浓度的吸光度值
葡萄糖浓度
(mg/mL)
0 0.02 0.04 0.06 0.080.1
吸光度(A)
葡萄糖实际
吸光度(A)
0.076 0.301
0.225
0.425
0.349
0.532
0.456
0.638
0.562
0.752
0.676
表 1 多糖超氧阴离子抑制率
A0 Ax Ai0 抑制率(%)
空白组
对照组
1mg/mL
0.8mg/mL
0.6mg/mL
0.4mg/mL
0.2mg/mL
0.1mg/mL
1.97
1.457
1.628
1.74
1.781
1.85
1.896
0.102
31.22
22.54
16.85
14.77
11.27
8.93
方 药·制剂分析
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