全 文 ：四 川 大 学 学 报 （医 学 版 ）
Ｊ　Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖ（Ｍｅｄ　Ｓｃｉ　Ｅｄｉ）
　２０１２；４３（２）：１７４－１７９　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
通光藤提取物对血液肿瘤细胞株增殖和凋亡的影响＊
薛红利１，２，黄学娣３，何　东１，蔺诗佳１，王　曙３，牛　挺１△
１．四川大学华西医院 血液科 血液学研究室 （成都６１００４１）；２．成都军区总医院 消化科 （成都６１００８３）；
３．四川大学华西药学院 （成都６１００４１）
　　【摘要】　目的　探讨通光藤提取物抑制人血液肿瘤细胞株增殖及诱导凋亡的作用。方法　采用 ＭＴＴ法检测
通光藤提取物，包括不同乙醇洗脱组分及Ｃ２１甾体皂苷单体化合物，作用不同浓度和时间，对人血液肿瘤Ｒａｊｉ、ＮＢ４
和Ｋ５６２细胞增殖的影响；采用流式细胞术检测通光藤Ｃ２１甾体皂苷单体化合物诱导上述细胞凋亡的作用。结果
通光藤７０％乙醇洗脱物，在较高浓度（１００μｇ／ｍＬ和２００μｇ／ｍＬ）下对３种人血液肿瘤细胞株Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞
增殖有显著的抑制作用，优于５０％和３０％乙醇洗脱物（Ｐ＜０．０５）。４个Ｃ２１甾体皂苷单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、
Ｃ、Ｉ和ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ在体外实验中均表现出对Ｒａｊｉ、ＮＢ４和Ｋ５６２细胞增殖的抑制作用；其中ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ的
作用最强，和其他３种单体化合物相比差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５），其对Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞的半数抑制浓度
分别为６４．１μｍｏｌ／Ｌ、７０．４μｍｏｌ／Ｌ和１０５．８μｍｏｌ／Ｌ。９８．４μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对Ｒａｊｉ、ＮＢ４和Ｋ５６２细胞分别
作用２４ｈ和４８ｈ，均可促进各肿瘤细胞的早期凋亡和晚期凋亡，与对照组比较凋亡率差异有统计学意义（Ｐ＜
０．０５）。结论　通光藤提取物，包括不同乙醇洗脱组分及Ｃ２１甾体皂苷单体化合物，对多种人血液肿瘤细胞株体外
有抑制细胞增殖和促进细胞凋亡的作用，其中以Ｃ２１甾体皂苷单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ的抑制作用最明显，对人
Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ增殖的抑制作用最强。
【关键词】　通光藤　Ｃ２１甾体皂苷单体化合物　血液肿瘤　增殖　凋亡
Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　Ｍａｒｓｄｅｎｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　Ｅｘｔｒａｃｔ　ｏｎ　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ　Ｎｅｏｐｌａｓｍ　Ｃｅｌ　Ｌｉｎｅ　Ｃｅｌｓ　
ＸＵＥ　Ｈｏｎｇ－ｌｉ１，２，ＨＵＡＮＧ　Ｘｕｅ－ｄｉ３，ＨＥ　Ｄｏｎｇ１，ＬＩＮ　Ｓｈｉ－ｊｉａ１，ＷＡＮＧ　Ｓｈｕ３，ＮＩＵ　Ｔｉｎｇ１△．　１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ
Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ　＆ Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｏｆ　Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ
６１００４１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　Ｍｉｌｉｔａｒｙ　Ｇｅｎｅｒａｌ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００８３，
Ｃｈｉｎａ；３．Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ　Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ｓｉｃｈｕａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｅｎｇｄｕ　６１００４１，Ｃｈｉｎａ
△Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ　ａｕｔｈｏｒ，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｉｎｇｎｉｕ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
【Ａｂｓｔｒａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ
ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ　ｎｅｏｐｌａｓｍ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　ｃｅｌｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｒａｊｉ，ＮＢ４ａｎｄ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｉｎ
ｖｉｔｒｏ　ｗｉｔｈ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｉｏｎ
ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃ２１ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｆｏｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｅｒｉｏｄｓ．Ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ
ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ　ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ　ａｓｓａｙ　ａｎｄ　ｉｔｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ｆｌｏｗ　ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ（ＦＣＭ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　
Ｆｉｒｓｔｌｙ，ｗｉｔｈ　ｈｉｇｈｅｒ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，１００μｇ／ｍＬ　ａｎｄ　２００μｇ／ｍＬ，７０％ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕａｔｅ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ
ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｊｉ，ＮＢ４ａｎｄ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ　ａｎｄ　ｔｉｍｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ，ｃｏｍｐａｒｅｄ
ｗｉｔｈ　３０％ａｎｄ　５０％ ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ（Ｐ＜０．０５）．Ｓｅｃｏｎｄｌｙ，ｆｏｕｒ　Ｃ２１
ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、Ｃ、Ｉ　ａｎｄ　ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ，ａｌｓｏ　ｉｎｈｉｂｉｔｅｄ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
Ｒａｊｉ，ＮＢ４ａｎｄ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ，ｉｎ　ａ　ｄｏｓｅ　ａｎｄ　ｔｉｍｅ　ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ｍａｎｎｅｒ，ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈａｔ　ｏｆ　ｃｏｎｔｒｏｌ
ｇｒｏｕｐ（Ｐ＜０．０５）．Ａｍｏｎｇ　ｔｈｅｍ，ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ
ｃｅｌｓ　ｕｎｄｅｒ　ａｌ　ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｔｈｒｅｅ　Ｃ２１ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（Ｐ
＜０．０５）．Ｆｕｒｔｈｅｒｍｏｒ，ｔｈｅ　ＩＣ５０ｏｆ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｃ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｊｉ，ＮＢ４ａｎｄ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　６４．１μｍｏｌ／Ｌ，
７０．４μｍｏｌ／Ｌ　ａｎｄ　１０５．８μｍｏｌ／Ｌ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｆｉｎａｌｙ，ａｆｔｅｒ　Ｒａｊｉ，ＮＢ４ａｎｄ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ　ｗｅｒｅ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　９８．４
μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　ｆｏｒ　２４ｈａｎｄ　４８ｈ，ｔｈｅ　ｅａｒｌｙ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｅｓ　ａｎｄ　ｌａｔｅ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ
ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｍａｒｋｅｄｌｙ，ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ （Ｐ＜０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ
ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｔｈａｎｏｌ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ａｎｄ　Ｃ２１ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｍａｙ
ｉｎｈｉｂｉｔ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓｏｍｅ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ　ｎｅｏｐｌａｓｍ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｉｎｄｕｃｅ　ｔｈｅｓｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｉｎ
ｖｉｔｒｏ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ，ｏｎｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｃ２１ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ
ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｎ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｅｓｅ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌｓ　ｗｈｅｎ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｏｔｈｅｒ　ｏｎｅｓ，ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ
ｏｎ　ｈｕｍａｎ　Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ　ｌｙｍｐｈｏｍａ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　Ｒａｊｉ　ｃｅｌｓ．
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　　Ｍａｒｓｄｅｎｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　　Ｃ２１ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ　　Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ
ｎｅｏｐｌａｓｍ　　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
＊ 四川省科技支撑项目（２００９ＦＺ００６０）资助
△ 通讯作者，Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｉｎｇｎｉｕ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
DOI:10.13464/j.scuxbyxb.2012.02.014
第２期 薛红利等：通光藤提取物对血液肿瘤细胞株增殖和凋亡的影响
　　传统中药通光藤为萝藦科（Ａｓｃｌｅｐｉａｄａｃｅａｅ）牛奶
菜属植物通光散〔Ｍａｒｓｄｅｎｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ （Ｒｏｘｂ．）
Ｗｉｇｈｔ　ｅｔ　Ａｒｎ．〕的干燥藤茎，别名奶浆藤、通关散、通
天散等，始载于《滇南本草》，曾收载于１９７４年版《云
南省药材标准》和１９７７年版《中国药典》，广泛分布于
我国云南、四川、贵州等地［１］。其味苦，性微寒，入肺
经，具有抗肿瘤、平喘、免疫调节和降压等药理作
用［２］。此前对通光藤抗癌研究主要集中在肝癌、胃
癌、肺癌等［３－８］。近年血液恶性肿瘤的发病率越来
越高，现代化疗药物存在较多的毒副反应，寻找高效、
低毒的新药十分必要。临床上已有采用通光藤为原
料的“消癌平注射液”治疗白血病成功的报道［９］，但缺
乏对通光藤提取物，尤其是单体化合物抗白血病、淋
巴瘤等血液肿瘤作用的深入研究。鉴于此，本课题组
前期实验采用现代制药技术制备了传统中药通光藤
的有活性的化学成分，特别是Ｃ２１甾体皂苷单体化合
物，以进行抗肿瘤药效学的基础研究［１０－１３］。本文即
报道制备的通光藤提取物体外抑制多种血液肿瘤细
胞株增殖的作用及诱导凋亡的作用。
１　材料与方法
１．１　主要试剂与仪器
通光藤提取物包括两类，一类为不同洗脱组分，
即不同浓度乙醇洗脱物（７０％乙醇通光藤提取物经
Ｄ１４１大孔吸附树脂后，用３０％、５０％、７０％乙醇分
别洗脱，真空干燥，以下简称３０％、５０％、７０％洗脱
物，前期实验自制），另一类为通光藤Ｃ２１甾体皂苷
单体化合物（从上述５０％、７０％乙醇洗脱物进一步
分 离 纯 化，获 得 ４ 个 单 体 化 合 物，分 别 为
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、Ｃ、Ｉ和 ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ，纯度大于
９９％，前期实验自制）。以上提取物均采用甲醇配置
成２０ｍｇ／ｍＬ的贮备液，－２０℃冰箱储存备用。胎
牛血清（Ｅｘｃｅｌ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．），改良型 ＲＰＭＩ　１６４０
培养基（Ｈｙｃｌｏｎｅ，Ｔｈｅｒｍｏ　Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ），四甲基偶氮
唑盐（ＭＴＴ）试剂盒（Ｓｉｇｍａ公司），流式细胞凋亡试
剂盒（ＫｅｙＧＥＮ，南京凯基 ＡｎｎｅｘｉｎⅤ－ＥＧＦＰ／ＰＩ）；
全湿 细 胞 培 养 箱 （５％ＣＯ２，Ｔｈｅｒｍｏ　Ｅｌｅｃｔｒｏｎ
Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ），倒置显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ），全波长酶标
仪（Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ　Ｓｐｅｃｔｒｕｍ），流式细胞仪及其软件系
统（ＢＤ　ＦＡＣＳＡｒｉａＴＭＣｅｌ　Ｓｏｒｔｅｒ）。
１．２　细胞培养
人血液肿瘤细胞株 Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞株
Ｒａｊｉ、急性早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４、红白血病
细胞株Ｋ５６２，由四川大学华西医院生物治疗国家重
点实验室惠赠，分别置于含１０％胎牛血清、１００Ｕ／
ｍＬ青霉素和１００Ｕ／ｍＬ链霉素的改良型 ＲＰＭＩ
１６４０培养基中，于３７℃、５％ ＣＯ２ 的全湿细胞培养
箱中常规培养。
１．３　ＭＴＴ法检测通光藤洗脱物及Ｃ２１甾体皂苷单
体化合物对人血液肿瘤细胞增殖的影响
收集对数生长期Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞，分别稀
释成１×１０５～２×１０５／ｍＬ 的单细胞悬液，以每孔
１８０μＬ接种于９６孔板内；将受试药物贮备液用双
蒸水分别稀释成２００μｇ／ｍＬ、１００μｇ／ｍＬ和５０μｇ／
ｍＬ，每孔分别加入２００μＬ，同时设等体积分数甲醇
的溶剂为阴性对照组和调零组（仅含培养基）。每个
浓度每个时间点设３个平行孔，于３７℃、５％ＣＯ２ 的
全湿细胞培养箱中分别培养２４ｈ、４８ｈ和７２ｈ后，
每孔加入 ＭＴＴ　２０μＬ，３７℃继续培养４ｈ使 ＭＴＴ
还原，再加入ＳＤＳ三联液１００μＬ，３７℃放置反应过
夜，使蓝紫色结晶溶解。用酶标仪测定每孔在５７０
ｎｍ的吸光度（Ａ）值，计算细胞增殖抑制率（ＩＲ）。
增殖抑制率（％）＝　Ｃ－Ｔ　Ｃ－Ｂ ×１００％
式中Ｔ为实验组的平均Ａ值，Ｃ为阴性对照组
的平均Ａ值，Ｂ为调零组的平均Ａ值。
将作用最强的单体化合物设定６个浓度梯度
（２４．６、４９．２、７３．８、９８．４、１２７．６、１９６．９μｍｏｌ／Ｌ）分
别作用４８ｈ，观察对Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞增殖的抑
制作用，方法同上。
１．４　流式细胞术检测通光藤Ｃ２１甾体皂苷单体化
合物对肿瘤细胞凋亡的影响
取对数生长期 Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞，按１×
１０５／ｍＬ密度以２ｍＬ／孔接种于１２孔板内，分别加
入作用最强的单体化合物９８．４μｍｏｌ／Ｌ，３７℃、５％
ＣＯ２ 的全湿培养箱内培养细胞２４ｈ和４８ｈ后，离
心（１　０００ｒ／ｍｉｎ、２５０×ｇ、５ｍｉｎ），收集细胞，用预冷
的ＰＢＳ　１ｍＬ重悬后，离心（１　０００ｒ／ｍｉｎ、２５０×ｇ、５
ｍｉｎ），弃上清，按顺序加入２００μＬ　Ｂｉｎｄｉｎｇ　Ｂｕｆｆｅｒ、３
μＬ　ＡｎｎｅｘｉｎⅤ、５μＬ　ＰＩ后，于漩涡振荡器上振荡５
ｓ后，立即避光常温反应１５ｍｉｎ，上流式细胞仪检测
早期和晚期细胞凋亡率。阳性对照为１．７５μｍｏｌ／Ｌ
阿霉素组，阴性对照为细胞培养基组。
１．５　统计学方法
实验数据采用珚ｘ±ｓ表示。各数据间的比较采
用ｔ检验，Ｐ＜０．０５为差异具有统计学意义。
２　结果
２．１　通光藤洗脱物对血液肿瘤细胞增殖的影响
５７１
四川大学学报（医学版） 第４３卷
如表１所示，在较高浓度（１００μｇ／ｍＬ和２００
μｇ／ｍＬ）下，通光藤７０％洗脱物对３种人血液肿瘤
细胞株Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞增殖的抑制作用显著，
且随浓度增加和时间延长其抑制率有增加趋势，与
５０％和３０％洗脱物对应的抑制作用相比，差异具有
统计学意义（Ｐ＜０．０５）；通光藤５０％洗脱物，在高浓
度（２００μｇ／ｍＬ）下，对ＮＢ４细胞增殖呈现一定的抑
制作用，与３０％洗脱物相比差异有统计学意义（Ｐ＜
０．０５），此浓度下其对Ｒａｊｉ和Ｋ５６２细胞增殖均几乎
无抑制作用；通光藤３０％洗脱物，在５０、１００和２００
μｇ／ｍＬ浓度下，对３种细胞增殖几乎无抑制作用。
２．２　通光藤Ｃ２１甾体皂苷单体化合物对血液肿瘤
细胞增殖的影响
２．２．１　对Ｒａｊｉ细胞增殖的作用　如表２所示，通
表１　通光藤不同洗脱组分对人血液肿瘤细胞增殖的抑制作用（抑制率，％）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｅｌｕｔｉｏｎ　ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ　ｎｅｏｐｌａｓｍ　ｃｅｌｓ
（ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅ，％）
Ｒａｊｉ
２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ
ＮＢ４
２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ
Ｋ５６２
２４ｈ ４８ｈ ７２ｈ
３０％ｅｌｕａｔｅ
　５０μｇ／ｍＬ　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０
　１００μｇ／ｍＬ　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ２．１±５．３
　２００μｇ／ｍＬ　 ０　 ０．９±１３．３　 ０　 ０　 ８．９±１３．６　 ０　 ０　 ０　 ９．５±６．３
５０％ｅｌｕａｔｅ
　５０μｇ／ｍＬ　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０　 ０
　１００μｇ／ｍＬ　 ０　 ０　 ０　 ５．２±１０．１　 １９．２±７．１　 ８．７±７．６　 ０　 ０　 ０
　２００μｇ／ｍＬ　 ４．６±１１．３　 ５．１±１０．６　 １．４±８．９　 ３７．６±１３．１＃ ４３．２±９．３＃ ２４．９±１１．４＃ ５．１±１０．４　 １０．３±８．１　 １９．４±９．３
７０％ｅｌｕａｔｅ
　５０μｇ／ｍＬ　 ２２．６±７．３＊ ３０．１±１２．６＊ ３１．１±１４．３＊ ４０．１±７．１　 ４１．４±１０．３　 ５０．３±１９．３＊ １７．１±９．３　 ２５．２±１０．３　 ３０．６±１１．４
　１００μｇ／ｍＬ　 ６２．５±１３．３＊ ８７．６±１５．３＊ ９２．２±１４．１＊ ８５．１±１７．３＊ ８５．７±１６．３＊ ８６．６±１７．１＊ ７１．９±１９．１＊ ８０．１±１４．２＊ ８４．７±１７．０＊
　２００μｇ／ｍＬ　 ９２．３±１９．４＊ ９４．７±１６．５＊ ９６．４±１５．１＊ ９１．６±１０．１＊ ９５．７±１９．１＊ ９７．１±１９．３＊ ９５．２±１６．４＊ ９７．１±１８．４＊ ９９．６±１５．３＊
Ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ） ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０ ０
　　＊Ｐ＜０．０５，ｖｓ．３０％ ＆５０％ｅｌｕａｔｅ　ｇｒｏｕｐｓ；＃Ｐ＜０．０５，ｖｓ．３０％ｅｌｕａｔｅ　ｇｒｏｕｐ
光藤 Ｃ２１甾体皂苷单体化合物 ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ，
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、Ｃ在低和高浓度（１００μｇ／ｍＬ和
２００μｇ／ｍＬ）下，作用２４ｈ时，对Ｒａｊｉ细胞增殖均有
较明显的抑制作用，与ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｉ实验组和阴
性对照组比较，差异均有统计学意义（Ｐ均＜０．０５）；
作用４８ｈ和７２ｈ时，ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｃ在低和高浓
度下 同 样 有 较 明 显 的 抑 制 增 殖 的 作 用，而
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ和 ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ仅在高浓度下
有抑制细胞增殖的作用 （Ｐ 均 ＜０．０５）。其中
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｃ的抑制作用最强，优于其他实验组
及阴性对照组（Ｐ均＜０．０５）。
２．２．２　对ＮＢ４、Ｋ５６２细胞增殖的作用　如表３、表
４ 所 示，通 光 藤 Ｃ２１ 甾 体 皂 苷 单 体 化 合 物
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、Ｃ、Ｉ在高浓度（２００μｇ／ｍＬ）下，作
用不同时间（２４ｈ、４８ｈ及７２ｈ），对 ＮＢ４、Ｋ５６２细
胞增殖均有较明显的抑制作用，与阴性对照组比较，
差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５）；与对Ｒａｊｉ细胞作
用相似，单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｃ的增殖抑制作
用最强，优于其他实验组及阴性对照组（Ｐ 均＜
０．０５）。而 ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ 仅在高浓度下作用２４
ｈ、４８ｈ、７２ｈ时对Ｋ５６２细胞的增殖有抑制作用（Ｐ
＜０．０５），对ＮＢ４细胞，无论浓度高低或作用时间长
短，则均无抑制作用（Ｐ＞０．０５）。
２．２．３　不同浓度ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对肿瘤细胞增殖
的作 用 　 如 表 ５ 所 示，各 浓 度 单 体 化 合 物
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｃ作用４８ｈ，对Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞
增殖均有抑制作用，并且随浓度增加，抑制率有增加
的趋势，在浓度≥４９．２μｍｏｌ／Ｌ以后，各浓度组细胞
抑制率与阴性对照组比较，差异均有统计学意义（Ｐ
＜０．０５）。单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ 对 Ｒａｊｉ、
ＮＢ４、Ｋ５６２细胞的半数抑制浓度（ＩＣ５０）分别为６４．１
μｍｏｌ／Ｌ、７０．４ μｍｏｌ／Ｌ、１０５．８ μｍｏｌ／Ｌ，提 示
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对人Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤Ｒａｊｉ细胞增
殖的抑制作用最强。
表２　通光藤甾体皂苷单体化合物对Ｒａｊｉ细胞增殖的抑制率（％，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　２　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｒａｊｉ　ｃｅｌｓ（％，ｎ＝３）
２４ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
４８ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
７２ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
Ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ　 ２９．９±１．２１＊ １５．４±１．４８＊ １０．３±２．６５＊ ５．４±４．１９＊ ５．１±４．８７＊ －４．８±３．７７
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｂ　 ５６．５±１．２１＊ １６．９±１．６２＊ ９８．２±１．０３＊，＃ ０．６±７．２６　 ７３．７±１．３７＊，＃ －１．２±６．９３
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　 ９６．１±０．９４＊，＃ ４８．５±２．０２＊，＃ ９９．１±０．６０＊，＃ ９９．０±０．２６＊，＃ ９９．２±０．３４＊，＃ ９９．０±０．３４＊，＃
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｉ　 ３．６±２．９７ －１．４±１．６２ －０．６０±１．２２ －０．４±１２．７４　 ０．３±８．４４ －０．３±５．９０
Ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ） ０ ０ ０
　　＊Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｉ　ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｇｒｏｕｐｓ
６７１
第２期 薛红利等：通光藤提取物对血液肿瘤细胞株增殖和凋亡的影响
表３　通光藤甾体皂苷单体化合物对ＮＢ４细胞增殖的抑制率（％，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　３　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ＮＢ４ｃｅｌｓ（％，ｎ＝３）
２４ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
４８ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
７２ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
Ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ　 ９．１±１４．２０　 ３．７±８．９７　 ３．９±１．３４　 １．０±４．０２ －２．６±４．９８　 １．１±１．１３
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｂ　 ４８．８±９．０７＊ ２０．３±１．１８＊ ４８．２±１．３４＊ １２．２±１．２６＊ ７５．６±１．１３＊ ４．７±１．０６＊
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　 ９９．９±０．６９＊，＃ ４８．１±１．２８＊，＃ ９９．４±０．３４＊，＃ ６５．８±０．９２＊，＃ ９９．５±０．４５＊，＃ ７２．５±０．９１＊，＃
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｉ　 ４６．４±７．７９＊ １２．１±１３．６１＊ ４０．５±３．４３＊ ３２．４±１．０＊ ３０．５±２．２６＊ ２０．６±８．０８＊
Ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ） ０ ０ ０
　　＊Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｇｒｏｕｐｓ
表４　通光藤甾体皂苷单体化合物对Ｋ５６２细胞增殖的抑制率（％，ｎ＝３）
Ｔａｂｌｅ　４　Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｓｔｅｒｏｉｄａｌ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｍｏｎｏｍｅｒ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｓｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ（％，ｎ＝３）
２４ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
４８ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
７２ｈ
２００μｇ／ｍＬ　 １００μｇ／ｍＬ
Ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ　 ７．０±２．１２＊ ６．０±５．９３　 ２１．８±２．００＊ １３．７±７．６３＊ １６．９±１．７５＊ １６．６±３．２２＊
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｂ　 １９．７±１．９８＊ －３．７±１．１３　 ４４．４±２．０９＊ －５．５±２．１８　 ５９．２±２．４０＊ １１．０±３．４４＊
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　 ９６．３±１．１３＊，＃ １９．８±６．０７＊，＃ ９８．８±１．００＊，＃ ４４．１±１．１８＊，＃ ９９．１±０．２２＊，＃ ８７．６±０．６０＊，＃
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｉ　 １７．７±１．６９＊ ６．１±３．５３　 ３９．１±２．６３＊ ９．６±６．９０＊ ５０．０±８．９５＊ ３６．９±５．６８＊
Ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ） ０ ０ ０
　　＊Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ；＃Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｔｈｅ　ｏｔｈｅｒ　ｇｒｏｕｐｓ
表５　不同浓度ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ作用４８ｈ对人血液肿瘤细胞增殖的影响〔抑制率（％），ｎ＝３〕
Ｔａｂｌｅ　５　Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ　ｎｅｏｐｌａｓｍ　ｃｅｌｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　ｆｏｒ　４８ｈ（％，ｎ＝３）
Ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｏｆ
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ（μｍｏｌ／Ｌ）
Ｒａｊｉ　 ＮＢ４ Ｋ５６２
１９６．９　 ９９．５±０．６１＊ ９９．４±０．８４＊ ９８．６±０．５２＊
１４７．６　 ９９．４±０．２６＊ ８９．２±２．３６＊ ８７．１±０．９５＊
９８．４　 ９９．０±０．７９＊ ６５．８±３．８９＊ ４４．６±４．２２＊
７３．８　 ６３．２±１．４９＊ ５３．７±１．３５＊ ３０．８±５．２５＊
４９．２　 ３３．１±２．６３＊ ２０．９±７．４３＊ ８．５±８．９６＊
２４．６　 ２０．６±６．６７＊ ６．４±９．０４　 ３．３±７．１５
Ｍｅｔｈａｎｏｌ（ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ） ０ ０ ０
　　＊Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ
２．３　通光藤Ｃ２１甾体皂苷单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ
Ｃ对血液肿瘤细胞凋亡的影响
结果见表６、图１～图３（早期凋亡位于象限Ｑ４－
１，晚 期 凋 亡 位 于 象 限 Ｑ２－１）。９８．４ μｍｏｌ／Ｌ
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对Ｒａｊｉ、ＮＢ４和Ｋ５６２血液肿瘤细胞
分别作用２４ｈ或４８ｈ，均可促进各肿瘤细胞的早期
凋亡和晚期凋亡，与阴性对照组比较早期和晚期凋
亡率均增加，差异有统计学意义（Ｐ＜０．０５），并且随
着ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ作用时间的延长，各细胞株晚期
凋亡率有增加趋势。
表６　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对不同血液肿瘤细胞株早期和晚期凋亡率的影响 （％）
Ｔａｂｌｅ　６　Ｅａｒｌｙ　ａｎｄ　ｌａｔｅ　ａｐｏｐｔｏｔｉｃ　ｒａｔｅｓ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｈｕｍａｎ　ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃ　ｎｅｏｐｌａｓｍ　ｃｅｌｓ　ｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ（％）
Ｒａｊｉ
Ｅａｒｌｙ　 Ｌａｔｅ
ＮＢ４
Ｅａｒｌｙ　 Ｌａｔｅ
Ｋ５６２
Ｅａｒｌｙ　 Ｌａｔｅ
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ（２４ｈ）
　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　 ２３．９±２．８＊ ６８．２±２．２＊ ８．３±０．８＊ ５．６±０．４＊ １３．１±２．１＊ １９．８±１．５＊
　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　 ２．８±０．８　 １．０±０．４　 ２．５±０．８　 ０．６±０．２　 ２．８±０．４　 ２．２±０．６
　Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　 １５．７±２．１＊ ５．８±１．０＊ ６２．７±０．８＊ ８．２±０．６＊ ２２．３±１．８＊ ６．１±０．７＊
Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ（４８ｈ）
　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　 ９．４±１．２＊ ７８．７±３．２＊ ３２．０±１．７＊ ２１．６±０．９＊ １４．６±０．９＊ ２４．１±１．５＊
　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　 ４．３±０．４　 １．７±０．４　 ２．９±０．６　 １．０±０．４　 ４．５±０．７　 １．９±０．４
　Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　 １４．７±２．６＊ ６．９±０．６＊ ５４．４±１．１＊ ３２．３±２．６＊ ２６．９±１．７＊ １７．８±１．５＊
　　Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ｃｅｌ　ｍｅｄｉｕｍ；Ｐｏｓｉｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ：Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（ＡＤＭ）１．７５μｍｏｌ／Ｌ．＊Ｐ＜０．０５，ｖｓ．ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ
３　讨论
现代化疗药物提高血液恶性肿瘤患者疗效的同
时，伴随不少的毒副反应，例如骨髓抑制、肝肾功损
害、神经毒性等，导致患者耐受性降低，严重者甚至
危及患者生命，从传统中药中采取现代制药技术开
７７１
四川大学学报（医学版） 第４３卷
图１　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ作用４８ｈ对Ｒａｊｉ细胞凋亡率的影响　　　图２　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ作用４８ｈ对ＮＢ４细胞凋亡率
的影响　　　图３　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ作用４８ｈ对Ｋ５６２细胞凋亡率的影响
Ｆｉｇ　１　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｒａｊｉ　ｃｅｌｓ　ａｔ　４８ｈｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　　　Ｆｉｇ　２　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ＮＢ４ｃｅｌｓ　ａｔ　４８ｈｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　９８．４μｍｏｌ／
Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　　　Ｆｉｇ　３　Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　Ｋ５６２ｃｅｌｓ　ａｔ　４８ｈｔｒｅａｔｅｄ　ｂｙ　９８．４μｍｏｌ／Ｌ　ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ
Ａ：Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ（ＡＤＭ）１．７５μｍｏｌ／Ｌ；Ｂ：Ｎｅｇａｔｉｖｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ（ｃｅｌ　ｍｅｄｉｕｍ）；Ｃ：Ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ　９８．４μｍｏｌ／Ｌ
发高效、低毒的有效成分是抗肿瘤药物研发的一项
重要任务。如前所述，传统中药通光藤是一种有前
途的抗癌中药，通光藤为原料制备的“消癌平注射
液”已有临床治疗急性白血病成功的报道，但是通光
藤的何种活性成分起到了重要的抗血液肿瘤作用尚
不清楚，特别是通光藤的活性成分Ｃ２１甾体皂苷单
体化合物有无作用未见相关报道。故本研究中，作
者采用前期制备的通光藤提取物，包括不同乙醇洗
脱组分及Ｃ２１甾体皂苷单体化合物，在体外实验中
研究它们对于人Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞株Ｒａｊｉ、急性
早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４、人红白血病细胞株
Ｋ５６２等３种肿瘤细胞增殖有无抑制作用，对肿瘤细
胞凋亡有无促进作用，期望为今后开发抗血液恶性
肿瘤新药奠定实验基础。
首先，本研究发现，中药通光藤的７０％洗脱物，
在较高浓度（１００μｇ／ｍＬ和２００μｇ／ｍＬ）下对３种人
血液肿瘤细胞株Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞增殖有显著
的抑制作用，其抑制作用随浓度增加和时间延长有
增加的趋势，明显优于５０％和３０％洗脱物，５０％洗
脱物在高浓度（２００μｇ／ｍＬ）下对白血病 ＮＢ４细胞
增殖有一定的抑制作用。因此提示通光藤抗血液肿
瘤的活性成分主要位于通光藤的７０％洗脱物中（部
分位于５０％洗脱物中），故进一步的实验对象确立
为从７０％洗脱物中分离、纯化的３种Ｃ２１甾体皂
苷单体化合物（ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、Ｃ、Ｉ），以及从５０％
洗脱 物 中 分 离、纯 化 的 １ 种 单 体 化 合 物
８７１
第２期 薛红利等：通光藤提取物对血液肿瘤细胞株增殖和凋亡的影响
（ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ）。结果发现４个Ｃ２１甾体皂苷单
体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅｓ　Ｂ、Ｃ、Ｉ和 ｍａｒｓｄｅｎｏｓｉｄｅ　Ｋ
在体外实验中均表现出对３种血液肿瘤细胞Ｒａｊｉ、
ＮＢ４和Ｋ５６２增殖的抑制作用，尤其以从７０％洗脱
物中分离、纯化的单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ的抑
制作用最强。４种单体化合物活性强弱的差异可能
是由于Ｃ２１甾体母核所连基团，在空间构型上对作
用靶点产生不同效果导致。因此下一步通关藤抗血
液肿瘤作用的机制研究和动物实验，应该重点选择
单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ，也提示今后在以通光
藤为药材的抗肿瘤药物制剂中应以ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ
作为质量控制指标，以确保药物的治疗效果。
本研 究 进 一 步 的 实 验 发 现，单 体 化 合 物
ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对Ｒａｊｉ、ＮＢ４、Ｋ５６２细胞的半数抑制
浓度分别为６４．１、７０．４和１０５．８μｍｏｌ／Ｌ，提示在３
种淋巴瘤、白血病细胞株中，ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ对人
Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤 Ｒａｊｉ细胞增殖的抑制作用最强。
众所周知，Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤属于高度侵袭性恶性淋
巴瘤，缓解率低，复发率高，长期无病生存率低，全世
界均在寻找积极有效的治疗手段［１４］，但是即使采用
Ｒ－Ｈｙｐｅｒ－ＣＶＡＤ／ＨＤ－ＭＴＸ－Ａｒａ－Ｃ新药联合强化方
案治疗的患者还是面临复发难治的问题［１５］。因此，
本课题组下一步拟将单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ针
对难治性人Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤进行动物体内实验，或
进一步开展患者临床试验。
关于中药通光藤抑制血液肿瘤细胞增殖的机
制，李东等［１６］报道，消癌平注射液抑制白血病 ＮＢ４
细胞增殖的机制是诱导ＮＢ４细胞发生Ｇ０／Ｇ１ 期阻
滞，增加Ｐ２１蛋白表达，但不改变Ｐ２７的表达，对细
胞凋亡相关蛋白质多聚 ＡＤＰ核糖聚合酶（ＰＡＲＰ）
表达无影响；能增加 ＮＢ４细胞表面抗原ＣＤ１１ｂ的
表达，诱导ＮＢ４细胞分化。另一项研究则报道，通
光藤提取物抑制白血病Ｕ９３７、ＨＬ６０细胞增殖机制
是明显降低线粒体跨膜电位（△Ⅲｍ），活化凋亡蛋
白ｃａｓｐａｓｅ３，剪切ＰＡＲＰ，诱导细胞凋亡［１７］。本研究
结果也发现，抑制肿瘤细胞增殖作用最强的通光藤
单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ，对 Ｒａｊｉ、ＮＢ４和 Ｋ５６２
血液肿瘤细胞均有促进其早期凋亡和晚期凋亡的作
用，与文献报道相符。
综上，本实验研究显示，中药通光藤的提取物，
包括不同乙醇洗脱组分及Ｃ２１甾体皂苷单体化合
物，对多种人淋巴瘤、白血病肿瘤细胞株体外有抑制
细胞增殖和促进细胞凋亡的作用，其中以Ｃ２１甾体
皂苷单体化合物ｔｅｎａｃｉｓｓｏｓｉｄｅ　Ｃ的作用最明显，对
人Ｂｕｒｋｉｔｔ’ｓ淋巴瘤细胞增殖的抑制作用也最强。
该研究对于筛选有益的传统中药抗癌成分，丰富中
药的药理理论具有重要的意义，对今后科学提取和
使用通光藤的抗血液肿瘤活性成分具有指导价值，
有待更深入的研究。
参 考 文 献
１ 中国科学院中国植物志编辑委员会．中国植物志·第６３卷１
分册．北京：科学出版社，１９７７：２４９－２５８，４４２－４６５．
２ 刑旺兴，程荣珍，陈圆昕等．通光藤的药理作用与临床应用．
中南药学，２００３；１（１）：２２９－２３１．
３ 方奕奇，孙雪梅．通关藤化学成分及抗肿瘤作用的研究进展．
中国生化药物杂志，２０１１；３２（２）：１６５－１６７．
４ 孙　珏，沈建华，朱美华等．“消癌平”对人肝癌细胞治疗作用
的试验研究．上海中医药杂志，２０００；３４（７）：１２－１４．
５ 孙　珏，沈建华，朱美华等．消癌平对人胃癌细胞治疗作用的
试验研究．上海中医药大学学报，２０００；１４（２）：４１－４３．
６ 李茂全，沈建华，胥　彬等．消癌平对ＳＧＣ－７９０１胃癌细胞的
作用及机制的实验研究．介入放射学杂志，２００１；１０（４）：２２８－
２３１．
７ 黄振倩，谭　获，王春燕等．消癌平注射液联合化疗治疗中晚
期肺癌的临床研究．临床肿瘤学杂志，２００７；１２（２）：９７－１０２．
８ Ｈｕ　ＹＪ，Ｓｈｅｎ　ＸＬ，Ｌｕ　ＨＬ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｅｎａｃｉｇｅｎｉｎ　Ｂ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ
ｒｅｖｅｒｓｅ　Ｐ－ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ－ｍｅｄｉａｔｅｄ　ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ　ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ　ｉｎ
ＨｅｐＧ２／Ｄｏｘ　ｃｅｌｓ．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，２００８；７１（６）：１０４９－１０５１．
９ 赵晓民，侯　伟，闫金玉等．消癌平注射液治疗急性白血病６
例．中国中医急症，２００７；１６（１）：１０５－１０５．
１０ 赖玉菡，王　曙．ＨＰＬＣ测定通关藤中绿原酸的含量．华西药
学杂志，２００６；２１（１）：７９－８１．
１１ Ｗａｎｇ　Ｓ，Ｌａｉ　ＹＨ，Ｔｉａｎ　Ｂ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｗｏ　ｎｅｗ　Ｃ２１ｓｔｅｒｏｉｄａｌ
ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｍａｒｓｄｅｎｉａ　ｔｅｎａｃｉｓｓｉｍａ（ＲＯＸＢ．）ＷＩＧＨＴ　ｅｔ
ＡＲＮ．Ｃｈｅｍ　Ｐｈａｒｍ　Ｂｕｌ（Ｔｏｋｙｏ），２００６；５４（５）：６９６－６９８．
１２ 刘傲镭，王　曙，何　俊等．ＨＰＬＣ－ＥＬＳＤ鉴别不同产地通光
藤的皂苷类成分．华西药学杂志，２００７；２２（３）：３２８－３２９．
１３ 何　俊，王　曙，严晓梁．不同产地的通光藤中总皂苷含量的
比较．华西药学杂志，２００８；２３（２）：２０１－２０２．
１４ Ｓｗｅｒｄｌｏｗ　ＳＨ，Ｃａｍｐｏ　Ｅ，Ｈａｒｒｉｓ　ＮＬ，ｅｔ　ａｌ．ＷＨＯ　ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｕｍｏｒｓ　ｏｆ　ｈｅｍａｔｏｐｏｉｅｔｉｃ　ａｎｄ　ｌｙｍｐｈｏｉｄ　ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｂｕｒｋｉｔｔ
ｌｙｍｐｈｏｍａ．Ｌｙｏｎ：Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ａｇｅｎｃｙ　ｆｏｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　ｏｎ
Ｃａｎｃｅｒ，２００８：２６２－２６４．
１５ Ｔｈｏｍａｓ　ＤＡ，Ｆａｄｅｒｌ　Ｓ，Ｏ’Ｂｒｉｅｎ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｈｅｍｏｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒａｐｙ
ｗｉｔｈ　ｈｙｐｅｒ－ＣＶＡＤ　ｐｌｕｓ　ｒｉｔｕｘｉｍａｂ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ　ｏｆ　ａｄｕｌｔ
Ｂｕｒｋｉｔｔ　ａｎｄ　Ｂｕｒｋｉｔｔ－ｔｙｐｅ　ｌｙｍｐｈｏｍａ　ｏｒ　ａｃｕｔｅ　ｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃ
ｌｅｕｋｅｍｉａ．Ｃａｎｃｅｒ，２００６；１０６（７）：１５６９－１５８０．
１６ 李　东，欧阳建，李翠萍等．消癌平注射液对白血病细胞ＮＢ４
作用的初步研究．中国生化药物杂志，２００７；２８（４）：２４７－２５０．
１７ 李　东，欧阳建，李翠萍等．通光藤诱导白血病细胞 Ｕ９３７、
ＨＬ６０细胞凋亡的实验研究．中国生化药物杂志，２００８；２９（１）：
３３－３７．
（２０１１－０８－１７收稿，２０１１－１１－２８修回）
编辑　余　琳
９７１