全 文 ：药物分析杂志 C h in J ph a rm A n al 2 005 , 2 8 ( 9 ) 一 14 0 9 一
★ 七仑澳身★
RP
一 H P L C 法测定通光藤中 n 。 一 O 一顺芷酞基 一 1节 一 口 一 乙酞基 -
通光藤昔元 B 的含量 ’
王艳艳 , 王威” , 李红岩 , 夏雪 , 董方言
(吉林省中医药科学院新药研究中心 , 长春 1 300 2 1)
摘要 目的 :建立 RP 一 H P LC 法测定通光藤药材中 1 1a 一 o 一 顺芷酞基 一 l明 一 o 一 乙酞基 一 通光藤普元 B 的含量 。 方法 :采
用酸水解法降解通光藤 C 2 .街体营 , 以反相高效液相色谱法测定 l la 一 o 一顺芷酞基 一 1毕 一 。 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 含量 ,
色谱柱为 D i a m o n s i l O D s ( 25 0 m m x 4 . 6 m m , 5 林m ) ;柱温为 1 6 C ; 流动相为乙睛 一 水 ( 4 5 : 5 5 ) ;流速为 0 . 8 m L · m in 一 ’ ;检测波
长为 2 0 n m 。 结果 : 1 1。 一 o 一 顺芷酞基 一 1毕 一 O 一 乙酞基 一通光藤昔元 B 进样量在 1. 01 6 一 5 . 0 80 林g 范围内与峰面积积分
值呈良好的线性关系 , : 二 0 . 9 99 9 ( n = 5 ) ;平均回收率 ( n = 6) 为 98 . 8% , R s D = 1 . 9% 。 结论 :方法简便 、快速 、准确 , 为通光藤药
材的质量评价和新药开发提供科学依据 。
关键词 :通光藤 ; 1 1。 一 。 一顺芷酞基 一 1切 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B ;反相高效液相色谱法
中图分类号 : gR l 7 文献标识码 : A 文章编号 : 02 54 一 17 93 《200 8 )0 9 一 140 9 一 04
R P 一 HP L C d e t e r n l i n a it o n
B i n M晚rs de n ia
of n 。 一 口 一 it ig oyl - 1爷 一 0 一 ac ety l 一 te an c二l ge m lte n a c is s im a ( R o x b . ) W i g h t e t A r n . *
W A N G Y
a n 一 y a n , W A N G W e i
` ’ ,
L l H
o n g 一 y a n , X IA X u e , D O N G F a n g 一 y a n
( N e w D ur g R e s e acr h C
e n t e r
,
J i l i n P ro v i n e e A e a de m y of T r a id t i o n al Ch i n e s e M e d i e i n e a n d
M a t e ir a M
e
di
e a S e i e : l e e
,
Ch a n g e h u n 130 0 2 1
,
Ch i n a )
A b s t r a e t o bj e c it v e : T o e s t a b li s h a n R P 一 H P LC m e t h o d of r 卿 a l i t a t iv e a n a ly s i s o f 1 l a 一 O 一 t i g l o y l 一 l毕 一 O -
a e e ty l 一 t e n a e ig e n in B i n M o rs de n i a te n a e is s i m a
.
M
e ht o d : T h e C
2 1 s t e r o id al g l y e o s id e s w e r e d e g
r a d e d i n to a g ly e o n e s
b y a m i ld a e i d h y d
r o l y
s is a n d 1 l a 一 o 一 ti g l o y l 一 l毕 一 O 一 a e e ty l 一 t e n a e i g e n i n B w a s d e t e rm i n e d u s i n g a n H p L C
m e th o d
·
Th e D i a m o n s i l O D S e o l u m n ( 2 5 0 m m x 4
.
6 m m
,
5 卜m ) w a s u s e d w i t h th e m o b i l e p h a s e o f a e e ot n i t r i l e -
w a t e r ( 4 5 : 5 5 )
a t a fl o w ar te o f 0
.
5 m L
·
m i n
一 ’ . T h e d e t e e t i o n w a v e le n g th w a s 2 2 0 n m a n d th e e o lu m n t e m p e ar t u r e
w a s 16 ℃ . R e s u l t s : Th e Ii n e a r r a n g e o f 1 l a 一 O 一 t i g l o y l 一 l毕 一 O 一 a e e yt l 一 t e n a e i g e n i n B w a s 1 . 0 16 一 5 . 0 8 0 林g
w i th t h e e o er l
a t i o n e o e if e i e n t 0
.
9 9 9 9 b e tw e e n th e inj
e e ti o n q u a n t i t y a n d t h e p e a k a r e a
.
T h e a v e r a g e er e o v e理 w a s
9 8
.
5 2% w it h th e R SD 。 f 1
.
9% ( n 二 6 )
.
e o n e一u s i o n : T h e m e t h o d 15 S i m p l e , e o n v e n ie n t a n d a e e u r at e , w h i e h m a y b e
p r o v id e d t h e o r e ti e a l b a s i s fo
r q u a li yt a s s e s s m e n t a n d n e w dur g d
e v e l o p m e n t o f M
.
t e n a e i s s i m a
.
K e y w o r d s :肥以 sr de n i a te n a e i s s i m a ; 1 l a 一 O 一 t i g l o y l 一 l毕 一 O 一 a e e t y l 一 t e n a e i g e n i n B : R P 一 H PL C
通光藤系萝孽科 A cs l e p iad ac ae e 牛奶菜属植物
通光散 aM sr de n i a te n a c is s i m a ( R o x b
.
) w i gh t
e t A nr
.
的干燥藤茎 ,具有清热解毒 、止咳平喘之功效 ,用于
治疗肺炎 、 支气管 炎 、 支气管哮 喘 、 疗疮肿毒等
症 [`〕 。 本品始载于 《滇南本草》 , 曾收载于 《云南省
药品标准》 ( 19 7 4 年版 )和中国药典 ( 19 7 年版 ) ,广
泛分布 于 云 南 、 贵州 、 福建 、 广东 、 广西 、 台湾 等
省 t ’ j 。 通光藤提取物对恶性肿瘤细胞有明显 的抑
制作用 , C Z 、 街体类化合物是通 光藤的主要化学成
分 , 以通光藤昔元 A ( t en ac ig en in A ) 、 通光藤昔元 B
( t
e n a e i g e n i n B )
、
17尸一 通光藤昔元 B ( 17月一 t e n a e i -
g e n i n B )
、 通光藤昔元 C ( * e n a e i g e n i n C ) 、 二氢肉珊
* 国家自然科学基金资助项 f l ( N o . 3 0 7 7 2 7 23 )
* * 通讯作者 eT l : ( 04 3 1 ) 86 8一6 2 24 ; E 一 m 缸 I: w . w , w a n 罗e i@ 2 6 3 . n e t
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 09. 002
一 14 10 一 药物分析杂志 C h i nJ P hrm aA nl a2 00 8
,
28 ( 9 )
4
.
6 m m
,
5 林m ) ;流动相 : 乙睛 一 水 ( 4 5 : 5 5 ) ;流速 :
0
.
8 m L
·
m i n
一 ’ ;检测波长 : 2 2 0 n m ;柱温 : 1 6 ℃ ;进
样量 : 20 卜L 。 在此色谱条件下 , l la 一 O 一 顺芷酞基
一 1毕 一 o 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 色谱峰与相邻
色谱峰的分离度均大于 1 . ;5 理论塔板数按 l la -
o 一顺芷酞基 一 1毕 一 o 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 峰
计算不低于 3 00 。 对照品和样品色谱图见图 l 。
一渡几一0一A
瑚昔元 ( d ih y d or s a r e o s t i n ) 、 通光素 ( t e n a e i s s i g e n i n ) 、
ics so ge in
n 为昔元 , 昔元 l al 和 1毕 位连有乙酞基
( A e )
、丙酞基 ( P r o ) 、 2 一 甲基丁酞基 ( B u ) 、 Jl匝芷酞
基 ( T i g ) 、 苯甲酞基 ( B z ) 、 4 一 经基苯乙酞基 ( H P A ) 、
肉桂酞基 ( iC n )等酞基取代基团 , 3刀位连有糖昔
链 〔’ 〕 。 文献报道采用 H P L c 一 E sL D 法测定 6 种 通
光藤 C Z , 幽体昔含量 ,其中以 l al 一 O 一 顺芷酞基 -
1毕 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 和 l al 一 O 一 2 -
甲基丁酞基 一 1切 一 o 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 为
昔元的 C Z ; 街体昔含量最高 [’] 。 本文以 l al 一 。 一顺
芷酞基 一 1毕 一 o 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 作为指
标成分 ,建立了通光藤药材 R P 一 H P Lc 含量测定方
法 ,并测定了云南省 6 个地区药材的含量 , 为通光藤
药材的质量评价和新药开发提供科学依据 。
1 仪器与试药
日本岛津 LC 一 10 A vT P 溶剂输液泵 , LC 一 1 0 AvP
紫外检 测器 , A N A ST A R 色谱工作 站 ; 日本 岛津
2 5 5 0 U V 紫外分光光度计 ;德国赛多利斯 B 2P 1 I D 分
析天平 。 1 1a 一 o 一顺芷酞基 一 1毕 一 o 一 乙酞基 -
通光藤普元 B 对照 品 , 自制 , 经 E SI 一 M s 、 ’ H -
NM R
、 ` ,
e 一 N M R 、 HM B e 确定其结构为 一 a 一 O -
ti g l o y l 一 l毕 一 O 一 a e e t y l 一 t e n a e i g e n i n B ,高效液相色
谱峰面积归一化法测定其纯度为 9 . 2% 。 通光藤
药材分别源 自云南省昭通 、 丽江 、 宾川 、 六库 、 临沧 、
思茅地区 ,经吉林省中医中药研究院严仲凯研究员
鉴定为萝孽科牛奶菜属植物通光散 M . te an ics is m a
( oR xb
.
) W ihg t et Am
. 的干燥藤茎 。 乙睛为色谱
纯 ,美国 IF S H E R 公司 ;水为重蒸水 ;其他试剂均为
分析纯 。
2 方法与结果
2
.
1 对照品溶液的制备 精密称取 1 l a 一 O 一 顺芷
酞基 一 1切 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 对照品适
量 ,加甲醇制成 0 . 127 m g · m L 一 ’ 的溶液 。
2
.
2 供试品溶液的制备 取通光藤药材粉末 (过 3
号筛 ) 5 . 0 9 ,精密称定 ,置索氏提取器中 ,加 甲醇 2 0
m L
,加热回流提取 s h ,提取液蒸干 ,残渣加 1% 硫酸
溶液 20 m L ,置 80 ℃水浴中加热回流 4 h , 取出 , 立
即冷却 , 用 乙醚振摇提取 5 次 , 每次 20 m L , 提取液
合并 ,用碳酸钠试液 60 m L 洗涤 , 弃去碳酸钠试液洗
液 ,再用水 60 m L 洗涤 ,弃去水洗液 , 乙醚液挥干 ,残
渣加甲醇使溶解 ,转移至 10 m L 量瓶中 , 加甲醇至
刻度 ,摇匀 , 经微孔滤膜 ( 0 . 45 卜m )滤过 ,取续滤液
即得 。
2
.
3 色谱条件 色谱柱 : D ia m o n s il o D s ( 2 5 0 m m x
一
t / . i n
图 l 对照品 ( A )和宾川通光藤样品 ( B) 的 HPL C 色谱图
F ig 1 H P L C
e
h or m a t o g
r a m s o f er fe er n
o e s u b
s t a n e e ( A ) an d s t
e m o f M
.
te ,` c说 i m a for m B i n e h u a n ( B )
1
.
l la
一 口 一 顺芷酞基 一 1华 一 口 一 乙酸基 一 通光藤背元 (B 1 1a 一 o -
t igl
o y l 一 ]切 一 o 一 a e e yt l 一 t e n a e i罗 n i n B )
2
.
4 线性关系考察 精密称取对照品适量 ,加甲醇
制成 0 . 254 m g · m L 一 ’ 的溶液 , 精密吸取 0 . 4 , 0 . 8 ,
1
.
2
,
1
.
6
,
2
.
0 m L
,分别置 2 m L 量瓶中 , 加甲醇至刻
度 ,摇匀 。 分别精密吸取各 20 林 L 按色谱条件进样 ,
测定峰面积积分值 。 以峰面积积分值为纵坐标 , 对
照品进样量为横坐标绘制标准曲线 ,得回归方程 :
Y = 6
.
9 4 1 x I O
S X 一 2
.
2 5 1 x I O
4 r = 0
.
9 9 9 9
结果表明 l la 一 o 一 顺芷酞基 一 1华 一 O 一 乙酞
基 一 通光藤昔元 B 进样量在 1 . 01 6 一 5 . 0 80 林g 范围
内与峰面积积分值呈良好的线性关系 。
2
.
4 精密度试验 精密吸取同一 对照品溶液 20
林L ,按色谱条件连续进样 3 d , 每日连续进样 6 次 ,
测定 1 1 a 一 。 一顺芷酞基 一 l毕 一 O 一 乙酞基 一 通光
藤昔元 B 峰面积积分值 ,计算得其 日内精密度 R SD
分别为 0 . 5% , 0 . 8% , 1 . 3% ; 日间精密度 R SD 为
1
.
3%
。 精密吸取同一供试品溶液 20 林 L ,按色谱条
件连续进样 6 次 ,测定 l al 一 O 一 顺芷酞基 一 1毕 -
药物分析杂志 C h in JP h a rm A n a l 2 8 0 0, 2 8 ( 9 ) 一 1 4 1 1 一
O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 峰面积积分值 , 计算得
其日内精密度 R s D 为 1 . 0% 。
2
.
5 重复性试验 取同一批药材样品 6 份 ,按样品
测定方法进行测定 ,计算 l al 一 o 一 顺芷酞基 一 1切
一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔 元 B 的平 均含量为
0
.
24 %
,
R SD 为 1 . 5% 。
2
.
6 稳定性试验 精密吸取同一供试品溶液 ,分别
在 0 , 4 , 8 , 12 , 2 4 , 3 6 h 按样品测定方法进行测定 ,计
算 l la 一 o 一 顺芷酞基 一 l毕 一 口 一 乙酞基 一 通光藤
昔元 B 的平均含量为 0 . 24 % , R S D 为 1 . 2% , 表明供
试品溶液在 36 h 内基本稳定 。
2
.
7 加样回收率试验 取同一批药材样品 6 份 , 每
份约 2 . 5 9 ,精密加人对照品约 6 m g , 按样品测定方
法进行测定 , 计算得 l la 一 o 一 顺芷酞基 一 1毕 -
O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 平均回收率 ( n = 6) 为
9 8
.
8%
,
R SD 为 1 . 9% 。
2
.
8 样品测定 取通光藤药材样品 ,按 “ 2 . 2 ” 项下
方法制备供试品溶液 。 精密吸取供试品溶液和按
,’2 . 1” 项下方法制备的对照品溶液各 20 林 L ,按色谱
条件进样测定 ,外标一点法计算 l al 一 。 一顺芷酞基
一 1毕 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 的含量 ,结果见
表 l 。
表 1 样品测定结果 ( n = 3)
T a b l 块et r l l li an ti o n of l坛 一 O 一 it沙oyl - 】邓 一口 一 a c e t y l 一
t e n a e ig e in n B i n 用ar sr de n勿 et n a c is s im a fr o m Y u n n a n
J节号 ( N o . ) 产地 ( h a b i la t )
临沧 ( iL n c an 幻
六库 ( Li u k u )
宾川 ( B i n e h u an )
思茅 ( s im a 。 )
丽江 ( t』 i j i a n g )
昭通 ( Zh a o一o n g )
含量 ( 。 o n t e n * ) / % RS D / %
0
.
7 0
1
.
8
1
.
2
{
.
{
80
法测定 l al 一 O 一 顺芷酞基 一 1毕 一 O 一 乙酞基 一 通
光藤昔元 B 的含量 。
3
.
2 本研究考察了选用 H y p er isl C 6 H S色谱柱 , 以乙
睛 一 1% 磷酸溶液 ( 20 : 8 0 ) 、 甲醇 一 1% 磷酸溶液 ( 5
: 4 5 )
、 乙睛 一水 ( 3 8 : 6 2 ) 、 乙睛 一 水 ( 4 5 : 5 5 )为流动
相系统 ;选用 D i a m o n s il O D S 色谱柱 , 以乙睛 一 水
( 3 0
: 7 0 )
、 乙睛 一 水 ( 4 5 : 5 5 ) 、 乙睛 一 水 ( 5 2 : 4 8 )为流
动相系统对 1 a1 一 O 一顺芷酞基 一 1毕 一 O 一 乙酞基
一 通光藤昔元 B 分离的影响 。 结果选用 iD a m on isl
O D S 色谱柱 , 以乙睛 一 水 ( 45 : 5 )作为流动相可获
得较好峰形和满意的分离度 。
3
.
3 本研究考察了柱温分别在 24 ℃ 、 20 ℃ 、 16 ℃
时对 1 1 a 一 o 一顺芷酞基 一 1毕 一 o 一 乙酞基 一 通光
藤昔元 B 分离的影响 ,结果表明柱温 16 ℃ 时 1 1a -
O 一顺芷酞基 一 1毕 一 o 一 乙酞基 一 通光藤普元 B 色
谱峰与相邻色谱峰的分离度均大于 1 . 5 。
3
.
4 本研究对供试品溶液制备方法进行了考察 ,
比较了水解酸浓度 、 水解温度 、 水解时间 对 1 1 a
一 O 一 顺芷酞基 一 1 2月一 O 一 乙 酞基 一 通光藤昔
元 B 含量 的影 响 , 确定水解条件为水解酸浓度
1
.
0%
,水解温度 8 0 ℃ , 水解时间 4 h ; 比较采用
石油 醚 ( 6 0 ~ 9 0 ℃ ) 、 乙醚 、 乙酸 乙醋 、 三氯甲烷 4
种提取溶剂进行通光藤 C Z , 街体昔降解产物提取
对 1 1 a 一 o 一 顺芷酞基 一 1 2月一 o 一 乙酞基 一 通光
藤昔元 B 含量的影响 , 结果 乙 醚提取 的效果优于
其他 3 种提取溶剂 。
3
.
5 本研究测定了云南省 6 个地区药材中 l al -
O 一 顺芷酞基 一 1毕 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 的
含量 ,其药材的 H PL C 色谱图基本一致 , 成分含量差
异较大 ,其中临沧地区通光藤药材中 l al 一 O 一顺芷
酞基 一 1切 一 O 一 乙酞基 一 通光藤营元 B 含量最高 ,
昭通地区含量最低 。
3
.
6 本研究首次建立了采用 R P 一 H P LC 法测定通
光藤中 1 1 。 一 O 一 顺芷酞基 一 1毕 一 O 一 乙酸基 一 通
光藤昔元 B 含量的分析方法 , 方法简便 、快速 、 准
确 ,为通光藤药材 的质量评价和新药开发提供科学
依据 。
31790644
,`、勺一0
3 讨论
3
.
1 通光藤的主要化学成分为 l al 一 O 一 顺芷酞基
一 1毕 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 和 1 1a 一 o 一 2
一 甲基丁酞基 一 1毕 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B
及其单糖到六糖昔 , 由于糖链连接不同形成不同的
化学成分 , 数量较多 ,制备对照品极其困难 ;而水解
产物中主要分离得到 l al 一 O 一 顺芷酞基 一 1毕 一 O
一 乙酞基 一 通光藤昔元 B 和 1 1a 一 O 一 2 一 甲基丁酞
基 一 1毕 一 O 一 乙酞基 一 通光藤昔元 B ,后者紫外吸
收弱 ,故选择制备 l la 一 O 一 顺芷酞基 一 1毕 一 O -
乙酞基 一 通光藤昔元 B 对照品 ;通光藤药材提取物
水解转化其单糖到六糖昔为昔元 , 采用 R P 一 H P L C
参考文献
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L I H o n g 一 yan (李红岩 ) , w A N G w e i ( 王威 ) , D o N G F a n g 一 y a n p o ly o x y p re 即a n e g ly e o s id e s i n aM rs d e n i a `e n a e i s s ianz u s i n g re v e rs e d
(董方 言) . A d v a n e o s i n s t u d i e s o n e h e m i e al e o n s t i t u e n t s i n s t e m o f 一 p h a s e h igh 一 p e orf rm a n e e l iqu id e h or m a r o盯a ph y 一 e v a p o r a t i v e
aM
rs de n i a t e n a
e
is
、
i m a n d t h
e
i
r p h~
a e o l o g i e a l e fe
e t s (通光藤化学 l ig h t 一 s e a t e r i n g d e t e e t i o n . J hC or am togr A , 2 0 0 6 , 1 1 16 ( l 一 2 ) : 83
成分和药理作用研究进展 ) . hC in arT idt eH rb D r日g , (中草药 ) , (本文于 2 0 07 年 1 月 , 日收到 )
月卜 门卜 一 月卜 一月卜 一司卜 一月卜 一司卜 中 司卜 一「月卜 一闷卜 曰 月卜 一闷卜 一月卜 一 月卜 一月卜 门 . 川 月卜 一司卜 一 侧卜 月卜 一门卜
关于举办 2 0 0 8 中国药学会学术年会暨第八届中国药师周的通知 (第二轮 )
由中国药学会 、 河北省人民政府共同主办 ,河北省食品药品监督管理局 、 石 家庄市人民政府承办 ,石
药集团有限公司 、 河北省药学会协办的 20 08 中国药学会学术年会暨第八届 中国药师周定于 20 08 年 10
月 18 日至 2 0 日在河北省石 家庄市举行 ,届时将有一千 多名 药学及相关学科科技工作者参加本 次学术
盛会 。
本次大会将通过对我国医药卫生及药学科技领域发展问题 、现状和前景进行综合分析研究 , 对医院
药学 、 中药和天然药物等十六个药学分支学科进行深入交流和研讨 ,提出我国药学学科及 医药卫生领域
发展趋势 , 为创新型 国家建设和构建和谐社会贡献力量 。
大会将邀请国家领导人 、 医药卫生领域政府部 门领导 、 院士及 医药学专家等作主会场大会报告 , 并
进行六个分会场专题报告和优秀论文交流 。 大会同期举办中国 · 石 家庄 国际 医 药博览会 ,并设有中国
医药科技创新与知识产权保护论坛等卫星会场 。
一 、大会主题
推动药学发展 构建和谐社会
二 、 时间和地点
1
. 时间 : 2 0 0 8 年 10 月 1 8 一 2 0 日 。 17 日代表报到 。
2
. 地点 : 河北省石家庄市 (各会场详细报到地点 ,请见第三轮通知 )
三 、活动安排 (详细安排请浏览中国药学会网站 )
1
.
18 日主会场报告 ; 中国 · 石家庄国际 医药博览会 ;
2
.
19 日各分会场 、 卫星会场学术交流 ;
3
.
20 日上午主会场报告 ,颁发 20 08 年中国药学会科学技术 奖 、 第 n 届 中国药学会施维雅青年药
物化学奖 、 大会优秀论文奖 、 优秀药师奖 ,全 民健康科技行动科普活动启动仪式 ; 下午继续科普活动 。
四 、 报名截止时间
报名截止时间为 2 0 0 8 年 9 月 2 0 日 。
五 、 联系方式
地址 : 北京市朝阳 区建外大街四号建外 S O H O 九号楼 18 层 1 802 室
中国药学会学术部联系人 : 孙文虹 、鲁毅 ( 0 1 0 一 5 8 6 9 9 2 7 5 一 8 19 / 8 2 0 )
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