全 文 :黑果花楸与 2 种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较
姚利阳,张 宇* ,张立宇,李 岩,刘俊希 (佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯 154007)
摘要 [目的]为黑果花楸相关加工产品提供理论和含量依据。[方法]以黑果花楸、蓝莓和蓝靛果为材料,采用紫外 -分光光度法测定
3种小浆果多糖及总黄酮含量,pH示差法测定花色苷含量,并进行比较分析。[结果]黑果花楸全果的花色苷、总黄酮、多糖含量均高于
蓝莓和蓝靛果,在所测 3种小浆果中最高,分别为 0. 352 0、2. 636、1. 764 mg /g。[结论]黑果花楸中花色苷、总黄酮、多糖含量较高,具有
很高的营养价值和药用价值,有待进一步开发利用。
关键词 蓝莓;蓝靛果;黑果花楸;花色苷;多糖
中图分类号 S38 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2016)01 -122 -03
Comparison of Flavonoids and Polysaccharides Contents between Aronia melanocarpa and Two Kinds of Small Berries
YAO Li-yang,ZHANG Yu* ,ZHANG Li-yu et al (Key Laboratory of Biological Medicine Preparations,Institute of Pharmacy,Jiamusi
University,Jiamusi Heilongjiang 154007)
Abstract [Objective]To provide theoretical and content basis for the related processing products of Aronia melanocarpa.[Method]With A.
melanocarpa,blueberry and Lonicera edulis as the materials,flavonoids and polysaccharides contents in the three small berries were detected
by UV-VIS spectrophotometry. Anthocyanin content was detected by pH differential method. And comparative analysis was carried out. [Re-
sult]Anthocyanin,flavonoids and polysaccharides contents in A. melanocarpa were all higher than those in blueberry and L. edulis,which
were 0. 352 0,2. 636 and 1. 764 mg /g,respectively. [Conclusion]A. melanocarpa has relatively high contents of anthocyanin,flavonoids
and polysaccharides,which is of high medicinal and nutritional values,and is worthy of further research.
Key words Blueberry;Lonicera edulis;Aronia melanocarpa;Anthocyanin;Polysaccharide
作者简介 姚利阳(1994 - ) ,男,安徽滁州人,硕士研究生,研究方向:
天然药物有效成分的分离及结构研究。* 通讯作者,教授,
硕士,硕士生导师,从事天然药物有效成分的分离及结构
研究。
收稿日期 2015-12-07
小浆果泛指体积较小、多汁的一类果树的果实,主要包
括蓝莓、蓝靛果、黑果花楸、树莓、黑加仑、蔓越橘等[1 -5],它
们具有较高的营养价值和独特的口感,深受人们的喜爱。小
浆果富含维生素和多种生物活性物质[6 -7],在预防慢性疾病
和维持人体健康方面有较好的作用。
蓝莓(Blueberry) ,又称越橘、蓝浆果,杜鹃花科(Ericace-
ae)越橘属(Vaccinium)。蓝莓果实中天然色素含量最高[8],
如原花青素、花色苷;除此之外,还含有糖类、有机酸、维生素
C、多种微量元素和食用纤维等。由于其含有多种生物活性
物质,因此具有抗肿瘤、清除体内自由基、提高免疫力等多种
生理活性功能[9 -10]。蓝靛果(Lonicera edulis) ,又称黑瞎子
果、山茄子,忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)。蓝靛
果果实营养丰富,富含糖类、有机酸、维生素和黄酮类等化合
物[11 -12],其制成的果汁含有大量的花色苷物质,具有极高的
营养价值。现代医学研究表明,蓝靛果具有清热解毒、降血
脂、降血压、改善肝脏的解毒功能,还能缓解放疗和化疗后的
不良症状[13 -14]。黑果花楸(Aronia melanocarpa) ,蔷薇科
(Rosaceae)腺肋花楸属(Aronia)。黑果花楸含有丰富的维生
素和黄酮类物质[15 -16],对高血压、心脑血管疾病具有特殊的
预防和治疗效果。
以上 3种小浆果中,蓝莓和蓝靛果在市场上的研发产品
较多,而关于黑果花楸的研发产品较少。笔者对这 3种小浆
果中花色苷、总黄酮、多糖的含量进行测定,并进行比较分
析,以期为黑果花楸深加工产品的开发提供理论依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 原材料。蓝莓、蓝靛果购于黑龙江省伊春市,黑果花
楸购于黑龙江省黑河市,均由佳木斯大学药学院张宇教授
鉴定。
1. 1. 2 主要试剂。葡萄糖对照品、浓硫酸、乙醇、苯酚、盐
酸、三氯化铝、乙酸、乙酸钠、氯化钾,均为分析纯。
1. 1. 3 主要仪器。RE-52 A 旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器
厂;DL-5-B 低速大容量离心机,上海安亭科学仪器厂;
FA2004电子天平,上海恒平科学仪器有限公司;RHS-25 pH
计,上海仪电科学仪器股份有限公司;765紫外可见分光光度
计,上海仪电分析仪器有限公司;HH-S26S恒温水浴锅,山东
鄄城华鲁电热仪器有限公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 花色苷含量测定。
1. 2. 1. 1 缓冲液的配置。pH 1. 0 缓冲液:精密称取 1. 49 g
氯化钾,用蒸馏水定容至 100 mL,精密量取 1. 7 mL盐酸,用
蒸馏水定容至 100 mL;将 0. 2 mol /L氯化钾与 0. 2 mol /L盐
酸以 25∶ 67的比例混合,用氯化钾溶液调节 pH(1. 0 ± 0. 1)。
pH 4. 5 缓冲液:精密称取 1. 64 g 乙酸钠,用蒸馏水定容至
100 mL,用盐酸调节 pH(4. 5 ±0. 1)。
1. 2. 1. 2 花色苷的提取。分别称取 10 g 3种小浆果的冻果
样品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于 200 mL 锥形瓶中。
按料液比为 1∶ 10(m/V)加入 100 mL 1%酸化乙醇溶液。在
40 ℃的条件下,超声辅助提取 45 min 后过滤并收集滤液。
将滤渣再次置于锥形瓶中,按上述条件再提取 2 次。合并 3
次收集的滤液,置于圆底烧瓶中,45 ℃旋转蒸发浓缩得到紫
黑色黏稠粗提液。
1. 2. 1. 3 花色苷含量测定方法。该试验根据花色苷在 pH
责任编辑 李菲菲 责任校对 况玲玲安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2016,44(1):122 - 124
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.01.041
1. 0时,在 510 nm波长处有最大光吸收,而在 pH 4. 5时,花色
苷转变为无色查尔酮形式,在 510 nm波长处无吸收,所以可以
利用 pH示差法计算溶液中花色苷的含量。计算公式如下:
花色苷含量(mg /g)= A × V × n ×Mε ×m
×100
式中,A = pH1. 0 - pH4. 5;V 为提取液总体积;n 为稀释倍数;M
为矢车菊-3-葡萄糖苷(Cy-3-Glu)的相对分子质量(449) ;ε
为 Cy-3-Glu的消光系数(29 600) ;m为样品质量(g)。
1. 2. 2 总黄酮含量测定。
1. 2. 2. 1 显色试剂的配置。精密称取三氯化铝 1. 34 g,50%
乙醇溶液定容至 100 ml,配成 0. 1 mol /L的溶液。精密称取
无水乙酸钠 1. 76 g,蒸馏水溶解至 100 ml,配成 0. 2 mol /L的
溶液。精密量取 1. 15 ml冰醋酸,蒸馏水定容至 100 ml,配成
0. 2 mol /L的醋酸溶液。将配制好的醋酸钠溶液和冰醋酸溶
液按比例混合,制得 pH为 5. 2的缓冲溶液。
1. 2. 2. 2 芦丁标准曲线的绘制。精密称取芦丁 0. 02 g,用
50%乙醇溶液定容至 100 ml,制成 0. 2 mg /ml 的芦丁标准品
溶液。精密吸取芦丁标准品溶液 0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、
1. 2 ml,置于 10 ml容量瓶,加入 2. 0 ml 0. 1 mol /L的三氯化
铝溶液,pH为 5. 2的醋酸钠 -醋酸缓冲溶液 1. 0 ml,用 50%
乙醇定容至 4 ml,40 ℃水浴显色 15 min,在 510 nm波长处测
定吸光度。
1. 2. 2. 3 总黄酮的提取。分别称取 10 g 3种小浆果冻果样
品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于 200 ml锥形瓶中。按料
液比为 1∶ 10(M/V)加入 100 ml 50%乙醇溶液。在 40 ℃下,
超声波辅助提取 40 min后过滤并收集滤液。将滤渣再次置
于锥形瓶中,按上述条件再提取 2 次。合并 3 次收集的滤
液,置于圆底烧瓶中,减压浓缩得到黄酮粗提液。
1. 2. 2. 4 总黄酮含量测定方法。精密量取 1. 0 ml的黄酮粗
提液,用 50%乙醇溶液定容至 10 ml。从中吸取 1. 0 ml加入
到 10 ml容量瓶中,按“1. 2. 2. 1”项下方法进行显色,再在
510 nm波长处测定吸光度(平行 3 次)。利用芦丁标准曲线
计算总黄酮的含量。
1. 2. 3 多糖含量测定。
1. 2. 3. 1 葡萄糖标准曲线的绘制。精密称取 105 ℃干燥至
恒重的葡萄糖 10. 00 mg,置于 100 ml 容量瓶中,加蒸馏水溶
解并稀释至刻度,摇匀,配得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡
萄糖标准溶液 0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2 ml,分别置于 10
ml容量瓶中,加入蒸馏水补至 2. 0 ml,然后再加入 5%苯酚
溶液 1. 0 ml,摇匀,迅速加入浓硫酸 5. 0 ml。摇匀,沸水浴 15
min 后,在冷水中冷却至室温。在 490 nm 波长处测吸光度。
1. 2. 3. 2 多糖的提取。分别称取 10 g 3 种小浆果的冻果样
品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于 200 ml锥形瓶中。按料
液比为1∶ 8(M/V)加入80 ml蒸馏水。在90 ℃的恒温水浴锅
中提取 4 h。取出,8层纱布过滤、离心。取上清液,旋转蒸发
浓缩至原体积的 1 /8,加入乙醇,使乙醇体积分数达到 80%,
静置 24 h。离心取沉淀,依次用丙酮、乙醚和乙醇洗涤脱脂,
真空干燥,制得粗多糖。
1. 2. 3. 3 多糖含量测定方法。精密称取 5. 00 mg粗多糖,置
于 50 ml的容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀。从
中精密吸取 1. 0 ml 溶液加入到 10 ml 容量瓶中,按
“1. 2. 3. 1”项下方法进行显色后,在波长 490 nm波长处测吸
光度(平行 3次)。利用葡萄糖标准曲线计算多糖的含量。
2 结果与分析
2. 1 花色苷含量测定结果 根据“1. 2. 1”的方法测得 3 种
小浆果样品的花色苷含量见表 1。由表 1 可见,蓝莓、蓝靛
果、黑果花楸的花色苷含量依次为 0. 151 9、0. 286 6、0. 352 0
mg /g,其中黑果花楸中花色苷含量最高,蓝莓中花色苷含量
相对最少。
表 1 花色苷含量测定结果
Table 1 Detection results of anthocyanin content
样品 Sample 含量 Content ∥mg /g RSD∥%
蓝莓 Blueberry 0. 151 9 4. 02
蓝靛果 Lonicera edulis 0. 286 6 6. 09
黑果花楸 Aronia melanocarpa 0. 352 0 2. 47
2. 2 总黄酮含量测定结果
2. 2. 1 芦丁标准曲线。以芦丁的浓度为横坐标,吸光度值
为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得回归方程:A =
25. 235C +0. 070 2,R2 = 0. 993 2,线性范围为 0. 012 ~ 0. 076
mg /ml。
2. 2. 2 总黄酮含量分析比较。由表 2 可见,供试的蓝莓、蓝
靛果、黑果花楸中的总黄酮含量依次为 1. 917、1. 695、2. 636
mg /g,其中黑果花楸黄酮含量最高,蓝靛果中黄酮含量相对
较低。
表 2 总黄酮含量测定结果
Table 2 Detection results of flavonoids content
样品 Sample 含量 Content ∥mg /g RSD∥%
蓝莓 Blueberry 1. 917 1. 10
蓝靛果 Lonicera edulis 1. 695 2. 91
黑果花楸 Aronia melanocarpa 2. 636 4. 05
2. 3 多糖含量测定结果
2. 3. 1 葡萄糖标准曲线。以葡萄糖的浓度为横坐标,吸光
度值为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得回归方
程:A =7. 702 9C -0. 019 9,R2 = 0. 995 3,线性范围为 0. 02 ~
0. 12 mg /ml。
2. 3. 2 多糖含量分析比较。由表 3 可见,供试样品蓝莓、蓝
靛果、黑果花楸中多糖含量依次为 1. 315、1. 455、1. 764 mg /g,
其中黑果花楸中多糖含量相对最高,而蓝莓中多糖含量相对
最低。
表 3 多糖含量测定结果
Table 3 Detection results of polysaccharides content
样品 Sample 含量 Content ∥mg /g RSD∥%
蓝莓 Blueberry 1. 315 4. 07
蓝靛果 Lonicera edulis 1. 455 7. 03
黑果花楸 Aronia melanocarpa 1. 764 6. 23
32144 卷 1 期 姚利阳等 黑果花楸与 2 种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较
3 结论与讨论
从试验测得的花色苷、总黄酮和多糖的含量分析来看,
蓝莓、蓝靛果和黑果花楸均含有这 3 种物质,且其含量顺序
为:花色苷,黑果花楸 >蓝靛果 >蓝莓;总黄酮,黑果花楸 >
蓝莓 >蓝靛果;多糖,黑果花楸 >蓝靛果 >蓝莓。蓝莓被誉
为“浆果之王”,营养成分丰富。有研究指出,蓝莓的花青素
含量是所有的水果与蔬菜中含量最高的。而通过该试验发
现,黑果花楸中的花色苷、总黄酮及多糖的含量均高于蓝莓
和蓝靛果,具有较高的营养价值,同时还有比蓝莓更好的开
发和应用价值。
目前市场上研发的蓝莓和蓝靛果的产品较多,而关于黑
果花楸产品较少,因此该类产品具有较大的潜在经济价值。
该试验可以为黑果花楸加工商品提供理论依据和含量依据,
为黑果花楸的深加工产品的开发应用奠定基础。
参考文献
[1]聂绍荃.黑龙江植物资源志[M].哈尔滨:东北林业大学出版社,2003.
[2]刘坤,蒋明杉,于志清.树莓、越桔、欧李等小浆果的发展前景[J].北方
果树,2008,29(2):250 -253.
[3]王辉,王鹏云,王蜀,等.我国蓝莓的发展现状及前景[J].农业现代化
研究,2004(2):30 -33.
[4]霍俊伟,杨国慧,雎薇,等.蓝靛果忍冬种质资源研究进展[J].园艺学
报,2005,32(1):159 -164.
[5]韩文忠,马兴华.黑果腺肋花楸的生物学特性和应用价值[J].辽宁林
业科技,2005(4):40 -42.
[6]张静茹,陆致成,李江,等.我国东北高寒地区野生浆果资源研究与利
用[J].中国野生植物资源,2009(6):33 -36.
[7]王华,徐榕,李娜,等.几种小浆果生物活性物质研究进展[J].北方园
艺,2011(8):198 -203.
[8]李知敏.蓝莓花色苷的分离纯化及其初步药效学实验研究[D].重庆:
重庆大学,2006.
[9]TAVERNITI V,DANIELA F,DEL BO’C,et al. Immunomodulatory effect
of a wild blueberry anthocyanin-rich extract in human Caco-2 intestinal
cells[J]. Journal of agricultural and food chemistry,2014,62(33):8346 -
8351.
[10]SUN X,LIU N,WU Z,et al. Anti-tumor activity of a polysaccharide from
blueberry[J]. Molecules,2015,20(3):3841 -3853.
[11]李淑芹,李延冰,都昌杰.蓝靛果中黄酮类成分初探及总含量测定
[J].东北农业大学学报,1996,27(1):99 -101.
[12]SOCHOR J,JURIKOVA T,POHANKA M,et al. Evaluation of antioxidant
activity,polyphenolic compounds,amino acids and mineral elements of
representative genotypes of Lonicera edulis[J]. Molecules,2014,19(5):
6504 -6523.
[13]ZHAO H T,WANG Z Y,MA F M. Protective effect of anthocyanin from
Lonicera caerulea var. edulis on radiation-induced damage in mice[J]. In-
ternational journal of molecular sciences,2012,13(9):11773 -11782.
[14]郑永霞.花色素苷药理功效的研究进展[J].山西医药杂志,2008,37
(3):255 -257.
[15]KULLING S E,RAWEL H M. Chokeberry(Aronia melanocarpa)- A re-
view on the characteristic componentsand potential health effects[J].
Planta Med,2008,74(10):1625 -1634.
[16]OSZMIASKI J,WOJDYLO A. Aronia melanocarpa phenolics and their
antioxidant activity[J]. Europe Food Res Technol,2005,221(8):809 -
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
813.
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[13]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理
委员会.饲料中玉米赤霉烯酮的测定:GB/T19540 -200[S].北京:中
国标准出版社,2004.
[14]ZHANG W,WANG H WANG J,et al. Multiresidue determination of zer-
anol and related compoundsin bovine muscle by gas chromatography /mass
spectrome-try with immunoaffinity cleanup[J]. Journal of AOAC iterna-
tional,2006,89(6):1677 -1681.
[15]张羽.粮食中玉米赤霉烯酮检测方法的研究进展和展望[J].中国食
品安全,2015(18):69.
[16]KOKKONEN M K,JESTOI M N. A multicom-pound LC-MS/MS method
for the screening of mycotoxins in grains[J]. Food analytical methods,
2009(2):128 -140.
[17]ZOLLNE P. Determination of zearalenone in grains by high perfor-mance
liquid chromatography– tandem mass spectrometry after solid-phase ex-
traction with RP-18 columns or immunoaffinity columns[J]. Journal of
chromatography A,1999,12(2):167 -174.
[18]梁颖,刘邻渭,张春晖.液质联用同时检测小麦中三种镰刀菌毒素
[J].中国粮油学报,2006,21(6):160 -162.
[19]万宇平,韩黎,吴鹏,等.玉米赤霉烯酮残留检测 ELISA 试剂盒的研制
[J].江苏农业学报,2013,29(3):659 -663.
[20]邱云青,王伟,李凤琴.食品中玉米赤霉烯酮化学发光酶免疫方法建
立[J].中国公共卫生,2010,26(12):1561 -1563.
[21]ANNA Y K,SARAH D S. Development of a colloidal gold!based lateral-
flow immunoassay for the rapid simultaneous detection of zearalenone and
deoxynivalenol[J]. Anal Bioanal Chem,2007,389(7):2103 -2107.
[22]李翘,桑丽雅,陈笑笑,等.玉米赤霉烯酮胶体金快速检测试剂板的研
制[J].食品安全质量检测学报,2013,4(2):457 -462.
[23]何庆华,许杨.分子印迹技术在真菌毒素检测中的应用[J].食品科
学,2009,30(11):273 -275.
[24]柳永振,朱凤华,宁雪娇,等.饲料中玉米赤霉烯酮毒素脱毒方法研究
进展[J].中国饲料,2013(15):3 -5,15.
[25]POLAK M,GAJECKI M,KULIK T,et al. The evalution of the efficacy of
sodium carbonate as zearalenone destructor in feeding stuffs[J]. Pol J Vet
Sci,2009,12(1):103 -111.
[26]常顺华,朱连勤,朱凤华,等.酯化葡甘露糖作为霉菌毒素吸附剂的研
究[J].饲料研究,2010(5):48 -50.
[27]许静.玉米赤霉烯酮脱毒剂的筛选及脱毒机制初步研究[D].武汉:华
中农业大学,2014.
[28]李溪,王金荣,赵银丽,等.饲料中玉米赤霉烯酮脱毒技术研究[J].饲
料研究,2015(13):16 -21.
[29]NIDEIKORN V,MORGARI D P,PUJOS E,et al. Screening of fermenta-
tive bacteria for their ability to bind and biotransforn deoxynivalenol,
zearalenone and fumonisins in an in vitro simulated corn,silare model
[J]. Food additives and contaminants,2007,24(4):1 -27.
[30]TINYIRO S E,YAO W,SUN X,et al. Scavenging of zearalenone by bacil-
lus strins in vitro[J]. Res J Microbiol,2011,6(3):304 -309.
[31]TINYIRO S E,WOKADALA C,XU D,et al. Adsorption and degradation
of zearalenone by Bacillus strains[J]. Folia Microbiol,2011,56(4):321 -
327.
[32]MOKOENA M P,CHELULE P K,GQALENI N. Reduction of fumonisin
B1 and zearalenone by lactic acid bacteria in fermented maize Mcal[J]. J
Food Protetion,2005,68(10):2095 -2099.
[33]YU Y,QIU L,WU H,et al. Degration of zearalenone by the extracellular
extracts of Acinetobacler sp. SM04 liquid cultures[J]. Biodegradation,
2011,22(3):613 -622.
[34]YU Y,QIU L,WU H,et al. Oxidation of zearalenone by the extracellular
enzymes from Acinetobacler sp. SM04 into smaller estrogenic products[J].
World J Microbiol Biotechnol,2011,27(11):2675 -2681.
[35]蔡雨函,胡延春,赵黑成,等.玉米赤霉烯酮的毒性及生物降解研究进
展[J]. 动物医学进展,2012,33(5):102 -105.
[36]吴晖,冼嘉雯,刘冬梅.一株去除玉米赤霉烯酮酵母的初步研究[J].
食品工业科技,2009,30(12):215 -220.
[37]JARD G,LIBOZ T,MATHIEU F,et al. Transformation of zearalenone to
zearalenone-sulfate by Aspergillus spp[J]. World Mylotoxin J,2010,3
(2):183 -191.
[38]VARGA J,PETERI Z,TABORI K,et al. Degradation of ochratoxin A and
other mycotoxins by Rhizopus isolates[J]. Int J Food Microbiol,2005,99
(3):321 -328.
[39]程波财,史文婷,罗洁,等.玉米赤霉烯酮降解酶基因(ZEA-jjm)的克
隆、表达及活性分析[J].农业生物技术学报,2010,18(2):225 -230.
421 安徽农业科学 2016 年