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黑果花楸与2种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较



全 文 :黑果花楸与 2 种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较
姚利阳,张 宇* ,张立宇,李 岩,刘俊希 (佳木斯大学药学院,黑龙江省生物药制剂重点实验室,黑龙江佳木斯 154007)
摘要 [目的]为黑果花楸相关加工产品提供理论和含量依据。[方法]以黑果花楸、蓝莓和蓝靛果为材料,采用紫外 -分光光度法测定
3种小浆果多糖及总黄酮含量,pH示差法测定花色苷含量,并进行比较分析。[结果]黑果花楸全果的花色苷、总黄酮、多糖含量均高于
蓝莓和蓝靛果,在所测 3种小浆果中最高,分别为 0. 352 0、2. 636、1. 764 mg /g。[结论]黑果花楸中花色苷、总黄酮、多糖含量较高,具有
很高的营养价值和药用价值,有待进一步开发利用。
关键词 蓝莓;蓝靛果;黑果花楸;花色苷;多糖
中图分类号 S38 文献标识码 A 文章编号 0517 -6611(2016)01 -122 -03
Comparison of Flavonoids and Polysaccharides Contents between Aronia melanocarpa and Two Kinds of Small Berries
YAO Li-yang,ZHANG Yu* ,ZHANG Li-yu et al (Key Laboratory of Biological Medicine Preparations,Institute of Pharmacy,Jiamusi
University,Jiamusi Heilongjiang 154007)
Abstract [Objective]To provide theoretical and content basis for the related processing products of Aronia melanocarpa.[Method]With A.
melanocarpa,blueberry and Lonicera edulis as the materials,flavonoids and polysaccharides contents in the three small berries were detected
by UV-VIS spectrophotometry. Anthocyanin content was detected by pH differential method. And comparative analysis was carried out. [Re-
sult]Anthocyanin,flavonoids and polysaccharides contents in A. melanocarpa were all higher than those in blueberry and L. edulis,which
were 0. 352 0,2. 636 and 1. 764 mg /g,respectively. [Conclusion]A. melanocarpa has relatively high contents of anthocyanin,flavonoids
and polysaccharides,which is of high medicinal and nutritional values,and is worthy of further research.
Key words Blueberry;Lonicera edulis;Aronia melanocarpa;Anthocyanin;Polysaccharide
作者简介 姚利阳(1994 - ) ,男,安徽滁州人,硕士研究生,研究方向:
天然药物有效成分的分离及结构研究。* 通讯作者,教授,
硕士,硕士生导师,从事天然药物有效成分的分离及结构
研究。
收稿日期 2015-12-07
小浆果泛指体积较小、多汁的一类果树的果实,主要包
括蓝莓、蓝靛果、黑果花楸、树莓、黑加仑、蔓越橘等[1 -5],它
们具有较高的营养价值和独特的口感,深受人们的喜爱。小
浆果富含维生素和多种生物活性物质[6 -7],在预防慢性疾病
和维持人体健康方面有较好的作用。
蓝莓(Blueberry) ,又称越橘、蓝浆果,杜鹃花科(Ericace-
ae)越橘属(Vaccinium)。蓝莓果实中天然色素含量最高[8],
如原花青素、花色苷;除此之外,还含有糖类、有机酸、维生素
C、多种微量元素和食用纤维等。由于其含有多种生物活性
物质,因此具有抗肿瘤、清除体内自由基、提高免疫力等多种
生理活性功能[9 -10]。蓝靛果(Lonicera edulis) ,又称黑瞎子
果、山茄子,忍冬科(Caprifoliaceae)忍冬属(Lonicera)。蓝靛
果果实营养丰富,富含糖类、有机酸、维生素和黄酮类等化合
物[11 -12],其制成的果汁含有大量的花色苷物质,具有极高的
营养价值。现代医学研究表明,蓝靛果具有清热解毒、降血
脂、降血压、改善肝脏的解毒功能,还能缓解放疗和化疗后的
不良症状[13 -14]。黑果花楸(Aronia melanocarpa) ,蔷薇科
(Rosaceae)腺肋花楸属(Aronia)。黑果花楸含有丰富的维生
素和黄酮类物质[15 -16],对高血压、心脑血管疾病具有特殊的
预防和治疗效果。
以上 3种小浆果中,蓝莓和蓝靛果在市场上的研发产品
较多,而关于黑果花楸的研发产品较少。笔者对这 3种小浆
果中花色苷、总黄酮、多糖的含量进行测定,并进行比较分
析,以期为黑果花楸深加工产品的开发提供理论依据。
1 材料与方法
1. 1 材料
1. 1. 1 原材料。蓝莓、蓝靛果购于黑龙江省伊春市,黑果花
楸购于黑龙江省黑河市,均由佳木斯大学药学院张宇教授
鉴定。
1. 1. 2 主要试剂。葡萄糖对照品、浓硫酸、乙醇、苯酚、盐
酸、三氯化铝、乙酸、乙酸钠、氯化钾,均为分析纯。
1. 1. 3 主要仪器。RE-52 A 旋转蒸发仪,上海亚荣生化仪器
厂;DL-5-B 低速大容量离心机,上海安亭科学仪器厂;
FA2004电子天平,上海恒平科学仪器有限公司;RHS-25 pH
计,上海仪电科学仪器股份有限公司;765紫外可见分光光度
计,上海仪电分析仪器有限公司;HH-S26S恒温水浴锅,山东
鄄城华鲁电热仪器有限公司。
1. 2 方法
1. 2. 1 花色苷含量测定。
1. 2. 1. 1 缓冲液的配置。pH 1. 0 缓冲液:精密称取 1. 49 g
氯化钾,用蒸馏水定容至 100 mL,精密量取 1. 7 mL盐酸,用
蒸馏水定容至 100 mL;将 0. 2 mol /L氯化钾与 0. 2 mol /L盐
酸以 25∶ 67的比例混合,用氯化钾溶液调节 pH(1. 0 ± 0. 1)。
pH 4. 5 缓冲液:精密称取 1. 64 g 乙酸钠,用蒸馏水定容至
100 mL,用盐酸调节 pH(4. 5 ±0. 1)。
1. 2. 1. 2 花色苷的提取。分别称取 10 g 3种小浆果的冻果
样品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于 200 mL 锥形瓶中。
按料液比为 1∶ 10(m/V)加入 100 mL 1%酸化乙醇溶液。在
40 ℃的条件下,超声辅助提取 45 min 后过滤并收集滤液。
将滤渣再次置于锥形瓶中,按上述条件再提取 2 次。合并 3
次收集的滤液,置于圆底烧瓶中,45 ℃旋转蒸发浓缩得到紫
黑色黏稠粗提液。
1. 2. 1. 3 花色苷含量测定方法。该试验根据花色苷在 pH
责任编辑 李菲菲 责任校对 况玲玲安徽农业科学,Journal of Anhui Agri. Sci. 2016,44(1):122 - 124
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2016.01.041
1. 0时,在 510 nm波长处有最大光吸收,而在 pH 4. 5时,花色
苷转变为无色查尔酮形式,在 510 nm波长处无吸收,所以可以
利用 pH示差法计算溶液中花色苷的含量。计算公式如下:
花色苷含量(mg /g)= A × V × n ×Mε ×m
×100
式中,A = pH1. 0 - pH4. 5;V 为提取液总体积;n 为稀释倍数;M
为矢车菊-3-葡萄糖苷(Cy-3-Glu)的相对分子质量(449) ;ε
为 Cy-3-Glu的消光系数(29 600) ;m为样品质量(g)。
1. 2. 2 总黄酮含量测定。
1. 2. 2. 1 显色试剂的配置。精密称取三氯化铝 1. 34 g,50%
乙醇溶液定容至 100 ml,配成 0. 1 mol /L的溶液。精密称取
无水乙酸钠 1. 76 g,蒸馏水溶解至 100 ml,配成 0. 2 mol /L的
溶液。精密量取 1. 15 ml冰醋酸,蒸馏水定容至 100 ml,配成
0. 2 mol /L的醋酸溶液。将配制好的醋酸钠溶液和冰醋酸溶
液按比例混合,制得 pH为 5. 2的缓冲溶液。
1. 2. 2. 2 芦丁标准曲线的绘制。精密称取芦丁 0. 02 g,用
50%乙醇溶液定容至 100 ml,制成 0. 2 mg /ml 的芦丁标准品
溶液。精密吸取芦丁标准品溶液 0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、
1. 2 ml,置于 10 ml容量瓶,加入 2. 0 ml 0. 1 mol /L的三氯化
铝溶液,pH为 5. 2的醋酸钠 -醋酸缓冲溶液 1. 0 ml,用 50%
乙醇定容至 4 ml,40 ℃水浴显色 15 min,在 510 nm波长处测
定吸光度。
1. 2. 2. 3 总黄酮的提取。分别称取 10 g 3种小浆果冻果样
品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于 200 ml锥形瓶中。按料
液比为 1∶ 10(M/V)加入 100 ml 50%乙醇溶液。在 40 ℃下,
超声波辅助提取 40 min后过滤并收集滤液。将滤渣再次置
于锥形瓶中,按上述条件再提取 2 次。合并 3 次收集的滤
液,置于圆底烧瓶中,减压浓缩得到黄酮粗提液。
1. 2. 2. 4 总黄酮含量测定方法。精密量取 1. 0 ml的黄酮粗
提液,用 50%乙醇溶液定容至 10 ml。从中吸取 1. 0 ml加入
到 10 ml容量瓶中,按“1. 2. 2. 1”项下方法进行显色,再在
510 nm波长处测定吸光度(平行 3 次)。利用芦丁标准曲线
计算总黄酮的含量。
1. 2. 3 多糖含量测定。
1. 2. 3. 1 葡萄糖标准曲线的绘制。精密称取 105 ℃干燥至
恒重的葡萄糖 10. 00 mg,置于 100 ml 容量瓶中,加蒸馏水溶
解并稀释至刻度,摇匀,配得葡萄糖标准溶液。精密吸取葡
萄糖标准溶液 0、0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2 ml,分别置于 10
ml容量瓶中,加入蒸馏水补至 2. 0 ml,然后再加入 5%苯酚
溶液 1. 0 ml,摇匀,迅速加入浓硫酸 5. 0 ml。摇匀,沸水浴 15
min 后,在冷水中冷却至室温。在 490 nm 波长处测吸光度。
1. 2. 3. 2 多糖的提取。分别称取 10 g 3 种小浆果的冻果样
品,解冻数分钟后,用研钵研碎,置于 200 ml锥形瓶中。按料
液比为1∶ 8(M/V)加入80 ml蒸馏水。在90 ℃的恒温水浴锅
中提取 4 h。取出,8层纱布过滤、离心。取上清液,旋转蒸发
浓缩至原体积的 1 /8,加入乙醇,使乙醇体积分数达到 80%,
静置 24 h。离心取沉淀,依次用丙酮、乙醚和乙醇洗涤脱脂,
真空干燥,制得粗多糖。
1. 2. 3. 3 多糖含量测定方法。精密称取 5. 00 mg粗多糖,置
于 50 ml的容量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀。从
中精密吸取 1. 0 ml 溶液加入到 10 ml 容量瓶中,按
“1. 2. 3. 1”项下方法进行显色后,在波长 490 nm波长处测吸
光度(平行 3次)。利用葡萄糖标准曲线计算多糖的含量。
2 结果与分析
2. 1 花色苷含量测定结果 根据“1. 2. 1”的方法测得 3 种
小浆果样品的花色苷含量见表 1。由表 1 可见,蓝莓、蓝靛
果、黑果花楸的花色苷含量依次为 0. 151 9、0. 286 6、0. 352 0
mg /g,其中黑果花楸中花色苷含量最高,蓝莓中花色苷含量
相对最少。
表 1 花色苷含量测定结果
Table 1 Detection results of anthocyanin content
样品 Sample 含量 Content ∥mg /g RSD∥%
蓝莓 Blueberry 0. 151 9 4. 02
蓝靛果 Lonicera edulis 0. 286 6 6. 09
黑果花楸 Aronia melanocarpa 0. 352 0 2. 47
2. 2 总黄酮含量测定结果
2. 2. 1 芦丁标准曲线。以芦丁的浓度为横坐标,吸光度值
为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得回归方程:A =
25. 235C +0. 070 2,R2 = 0. 993 2,线性范围为 0. 012 ~ 0. 076
mg /ml。
2. 2. 2 总黄酮含量分析比较。由表 2 可见,供试的蓝莓、蓝
靛果、黑果花楸中的总黄酮含量依次为 1. 917、1. 695、2. 636
mg /g,其中黑果花楸黄酮含量最高,蓝靛果中黄酮含量相对
较低。
表 2 总黄酮含量测定结果
Table 2 Detection results of flavonoids content
样品 Sample 含量 Content ∥mg /g RSD∥%
蓝莓 Blueberry 1. 917 1. 10
蓝靛果 Lonicera edulis 1. 695 2. 91
黑果花楸 Aronia melanocarpa 2. 636 4. 05
2. 3 多糖含量测定结果
2. 3. 1 葡萄糖标准曲线。以葡萄糖的浓度为横坐标,吸光
度值为纵坐标,绘制标准曲线,并进行线性回归,得回归方
程:A =7. 702 9C -0. 019 9,R2 = 0. 995 3,线性范围为 0. 02 ~
0. 12 mg /ml。
2. 3. 2 多糖含量分析比较。由表 3 可见,供试样品蓝莓、蓝
靛果、黑果花楸中多糖含量依次为 1. 315、1. 455、1. 764 mg /g,
其中黑果花楸中多糖含量相对最高,而蓝莓中多糖含量相对
最低。
表 3 多糖含量测定结果
Table 3 Detection results of polysaccharides content
样品 Sample 含量 Content ∥mg /g RSD∥%
蓝莓 Blueberry 1. 315 4. 07
蓝靛果 Lonicera edulis 1. 455 7. 03
黑果花楸 Aronia melanocarpa 1. 764 6. 23
32144 卷 1 期 姚利阳等 黑果花楸与 2 种小浆果中黄酮类物质及多糖含量比较
3 结论与讨论
从试验测得的花色苷、总黄酮和多糖的含量分析来看,
蓝莓、蓝靛果和黑果花楸均含有这 3 种物质,且其含量顺序
为:花色苷,黑果花楸 >蓝靛果 >蓝莓;总黄酮,黑果花楸 >
蓝莓 >蓝靛果;多糖,黑果花楸 >蓝靛果 >蓝莓。蓝莓被誉
为“浆果之王”,营养成分丰富。有研究指出,蓝莓的花青素
含量是所有的水果与蔬菜中含量最高的。而通过该试验发
现,黑果花楸中的花色苷、总黄酮及多糖的含量均高于蓝莓
和蓝靛果,具有较高的营养价值,同时还有比蓝莓更好的开
发和应用价值。
目前市场上研发的蓝莓和蓝靛果的产品较多,而关于黑
果花楸产品较少,因此该类产品具有较大的潜在经济价值。
该试验可以为黑果花楸加工商品提供理论依据和含量依据,
为黑果花楸的深加工产品的开发应用奠定基础。
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813.
(上接第 97页)
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